Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 163
Текст из файла (страница 163)
(1981); (с) Куте аит! 0оо!!И!е (1982); аит! (ОГ) Роке ет а1. (1985). йеаке а!ко кее Р!8иге А7-2 (и Аррепйх 7. (Керт)псег(, чм(тЬ репиьяои, )гоги 8)сЬагг)коп апс! ИЕЬагг(коп 1989 [©К!Оччег Аеас(оп)с/Р)еиит РОЫьЬегк1,) Н,О о,е К (а) (Ь) (с) (г)) еЕЕтс!сит ипптипо8епк. Лп6Ьойск гПгсстег( а8ашкт тЬскс рсртЫек шау Ьс оГ 1отч 6тет апйот тиау геаст оп1у тчиЬ т(епатигет( рготеит. НубгорЬт1к рер(Ыек йас соптатп сЬаг8ет) тек!т(иек аге пшсЬ Ъеттег иипшпо8епк апс( а1ко Ьаче а Ь(8Ь ргоЪаЪеП(у оЕ оссирутп8 а кигЕасе!осабоп оп (Ье па6че рготетп.
Ап6рер(Ые ап6- Ьойек гайе6 а8а!пкт сопЕогшатюпаПу ПехтЫе кигГасе Ееатигек оЕ ргосетпк кисЬ ак гитик апг! (3- 1оорк аге 1йе(у то Ье оГ Ьт8Ь тиег апг( шау геаст ейю!епт1у тчиЬ тЬе пабче рготе!п. Мокс оЕ йе сошрит!и8 рас)са8ек йат аге соиииоп1у икед то апа!ухе Г))к)А кет)иепсек сопташ рго8гагик то кеагсЬ рготеш кет(иепсек Еог кпгЕасе рер(Ыек (Ьат аге 1йе!у то Ье 8оот( ап68епк. ТЬе 8оа1 оЕ (Ьеке рго8гапь ь то сЬооке а кег)иепсе оЕ 11 — 15 апиио асЫк (Ьат соиташк а ргеропт(егапсе оГ ро1аг гекЫиек апс) по пюге (Ьап Гоиг ас()асепт Ьу6горЬоЪЫ гезЫиек. 5исЬ рер(Ыек аге !йе1у со Ье ко1- ОЫе ш ас(иеоик ко(чепь апт! (ЬегеГоге еаку то соир1е то сатт(ег рготеиь. 5ечега1 кса!ек оГ ЬубгорЬоЬ!сйу апт! ЬубгорЫ!тсйу Ьаче Ьееп ргорокес) Гог аиипо асЫЕ (р1еаке кее р!8иге А9-3) ()апти 1979; Что1Еепт(еп ет а1, 1981; Куте апт( Г)ооПт(1е 1982; Коке ес а1.
1985). А1тЬои8Ь (Ьеке кса1ек аге !и 8оот( 8епега1 а8геешепс, (Ьеу тПйег кП8Ь(!у !и (Ье огс1ег оГ аиппо асЫк апт! !и (Ье ге1атйе Ьут(горЬоЪтсйу ча1иек акя8пес1 то (Ьетп. ТЬь чапаЬт1иу апкек Ьесаике йе Ьут1горЬоЪЫ(ту оГ ап аиипо асЫ гекЫие ь йе ргос1ист оГ кечега! тПЕЕегепт Гастогк, тпс1ийп8 е1естгокта6с сЬаг8е, Ьус(го8еп-Ьопт)!п8 сараЬП!ту, апт( кигЕасе агеа. 1п ат(йт!Оп, (Ье Ьу6горЬоЬкиу оЕ ап аиипо асЫ сап Ье аккеккед ехрег!шепа!у Ьу рагбтюшп8 тито ко1чепь оГ чагюгь (урез. ТЬе чабабоп ш ЬубгорЬоЪйиу кса!ек оГ апипо асЫк гейесь тЬе рагтки1аг тче!8Ь6п8к йат сПЕЕегепт (ичек68атогк Ьаче аиасЬед то (Ьеке апт! о(Ьег Еастогк. Сотпршег рго8гапь то ргейст ктгоп81у аи68ешс ятек (и рготе!пк ге!у оп Ьут(горЬОЬ!с(ту кса1ек а!опе ог ти сотпЬтпагюп тч!(Ь рго8гатик (Ьас ргейст кесопт(агу ктгистиге. ТЬе ктгоп8ект ап68епй ятек аге ргетПстес( тп ге8(опк оЕ (Ье рготей кигЕасе (Ьас аге Ьт8Ь ти сЬаг8е апд 1оъч тп ЬудторЬоЬ(сПу, Пате!у Еоипт) )и огт(егет( ктгистигек кисЬ ак Ье!йек ог кЬеетк, кисЬ ге8(опк икиа1- 1у шар то гитик апс1 1оорк (Ьат ате псЬ !и геят(иек ъч(тЬ Н-Ъопйп8 ротепба1.
Нт8Ыу сЬаг8ет( ге8!Опк а)ко ОЕ(еп оссиг ат тЬе атитпо апс( сагЬоху1 тегш!п( оЕ рготе!пк, тчЬЫЬ теит) то Ъе геропк оЕ Ы8Ь Пех!ЫП(ту. Нотчечег, тЕ йе рготеш оЕ шсегект й а кесгетогу ог сгапкшептЬгапе рготеш, ог ь!осасет! (и ог8апеПек кисЬ ак питосЬопт!На ог сЫогор1акь, П ь Ьеттег пот го ике рерт!с(ек депчет1 Еготи йе тегиипа1 ге8(опк. ТЬе апипо-сегиипа1 рертЫе ь 1йе!у то Ъе рагс оЕ а я8па1 ог 1еат(ег кет)меосе йат НОП Ъе с!еаче6 Пипп8 рокигапк!а6опа! ргосекяп8. ТЬе сагЬоху-тегиипа1 ге8(оп оЕ тгапяпептЪгапе рготетпк птау Ъе!Осатет( оп (Ье сутор1аяпк ЕЫе оЕ тЬе тпешЬгапе апс( тпау оп1у Ъе ассекяЫе то ап6Ьойек аЕ(ег сеПк аге реппеаЪт1йед, Пхей ог 1узей А9.32 Аррепг((х 9: Оегесг(оп 5уггетг СШЕ)ЕЕ!МЕ5 ГОР СНОО5!МС АМ !ММЕ)МОСЕМ|С РЕРТ|ОЕ Ап )гпгпцподеп(с рер(Ые аЬоц(с) Ьаче: ° а ьег)цепсе 11-1 5 аш)по ас(г)а (оп5 ° по тоге 1Ьап ях Ьуг1горЬоЫс геь)г)цеь ° по пъоге 1Ьап (оцг ас($асепг Ьуг)горЬоЫс геыдцеь ° по сопьепъца я|(еь (ог )Ч-5)усову(аг(оп* (М-Х-5Л) ° по Ьаяс гея|г)цев $$5)цгагайеЬуг(е )а 1о Ье цасх) аь а сгоы-$)п(ъег ° по |пгегпа1 ог суь1е(пе геа(г)цеь $( гп-пъа|еапЫоЬепго|с ас)г) )Ч-Ьуг)гохуецсс)п)гп(г(е еьгег (МВ5) (а Со Ье цаег) аъ а сгоы-$)п(ъег ° а гугоя|пе гея|с)це Ьесацзе (Ье рер1)г)е сап (Ьеп еая|у Ье гаг$(о)аЬе!ег) ъч)(Ь цъ! *О()5оьассЛаг(г(е 5гонрь аг(г(ег( го ъесгегогу апг( р)арпа гпегпЬгапе ргоге(пъ сап ъЫе(г) гпе цпг)ег(у(п5 ага|по ас)г( генг)цеь (гоги )пгегасг)п5 ъъ!!Ь апг()хм((еъ апг( о|Ьег $(5апг)я Апг)Ьог))еъ 5епегагег( а5а)пя а ъупгпег)с рерг(г(е пъау |Ьеге(оге по| гесо5п(ге |Ье 5)усову(агег) гаг5ег ргоге|п ечеп гпоц5Ь |Ье )гпгпцпохеп апг)|Ье гаг5ег ъпаге агп|по ас|г( ъецнепсея ъЧЬеп гаь!п5 апг))хх)(еъ а5а|пя ъесгегогу апг) р)аяпа тетЬгапе ргоге(пи || Ь Ьея |о ачо(г( ге5(оцупа| сои|а|и сопъепть ъ)геь (ог 5)усоау)аг)оп.
(Лца11у, (Ье асуп(Ье6с рер1Ые |а соцр1ег)го а сагпег ргосегп якЬ аа 1сеуЬо!е 1иирег Ьешосуапгп (ЬгоцВЬ ап аицпо- ог сагЪоху-гегпипа1 суьге|пе геябце. Ыеа1!у, (Ьегеуоге, (Ье аес)цепсе ог йе рер(Ые аЬоц!с1 егк1 ълй а "пагцга1" суьгеше (Ьаг |а ргеаепг ш (Ье соВпаге аес)цепсе ог' йе гаг5ег ргоге(п. 1г й|а |а пог роьяые, сЬооае а рер(Ые (Ьаг Ьаа по суаге(ие аг а!1. СЬепцса1 ьуп1Ьеяа оу (Ье рер(Ые, ъч|6сЬ ргосеес(а (гпмнп (Ье сагЬоху1 гегш(пца го йе апцпо гегш(пця |а (Ьеп !и(6агес(угош ап "аг66сгаГ' суьге!ие (Ьаг Ьаь по соцпгеграгг (и (Ье па(ига! со5паге аес(цепсе.
ТЬ(а сегш|па! суьге!ие (а цаеъ$ аа а 1!и)гег го соцр1е (Ье асуп(Ьег|с рер(Ые го (Ье сагпег ргогегп. А1гегпаггче1у, пш16р!е сор(еа оуа рерЫе сап Ъе 1(п)сег(го еасЬ о(Ьег. 0(Ьег ше(Ьог(а оусоцр1ш5 рер66еа го сагпега аге ача|1аЫе Ъцг аге гаге1у цаеъ$. ТЬеае !ис!цъ(е: ° С1игага1йеЬуг1е-тег1!агег1 сгозз1(п)г(пК оу Ьаяс гегЫиез гп гЬе рергЫе аиг! а сагггегргогет. Весацве а1цгага16еЬуг(е геасга ъч|(Ь -МН, Вгоцра го гогш 5сЬ|гг'а Ъаъея рер66еа сопга|п|п5 !уяпе геяс1цеа сап Ъе ейк(епг!у сгиб-1|и)сег$ со а ргоге|п ацсЬ аз 1сеуЬо1е 1цирег Ьешосуаи|п, ъчЬоае ацгуасе (а гкЬ |и Ъаяс геаЫцея Ноъчечег,!уяпея |1 ргеаеп1 ш (Ье рер(Ые, аге Исе!у го Ье иирогсапс сопгпЬшогь го (га ап65епк(гу.
МосИу|п5 (Ьеш шау гес1цсе (Ье аиг|5еп!с!гу оГ (Ье рер(Ые апъ((ог Вепегаге ап6Ьо6|еа йаг еу(к(еп(1у гесоВп|хе (Ье гпоъ$!(1ег$ геядцеа Ъцг г(о пог шгегасг ълй 1Ье цишо6!$1ес$ соВпаге зег)цепсе ш (Ье 1аг5ег ргоге(и. ° Егае оу рергЫе-геяп аг (Ье !ттипоКеп. МочаЬюсЬеш ае11ь а ро1уше(Ьу!асгу1агпЫе/ Ке|ае15цЬг сошрояге с1епчес1 цяп5 ейу1епе 6)аш(пе. Ап65ешс рер(Ыеа сап Ье ьуи(Ьеяхед 6(гес(1у оп (Ье 1гее аицпо 5гоцр оу (Ье Ьаае геяи апъ$ гепгагп аггасЬеъ(го (Ье ацррогг Ъу а соча!епг Ъопй Айег г)ергогесбоп оуйе рер(Ые ъч|(Ь гпйцогоасегк асЫ апг$ Ьошо5еп|га6оп ог" (Ье (пог5ашс Ке|ае15цЬг, йе рер(Ые-ро1уапъЫе сопър1ех сап Ье еиш1яйе6 ъчЬЬ аг$)цчапг ап6 |и)есгег$(пго апциа15, 1гпшцп!хаг(оп ъл(Ь йе сагпег-рер(Ые сошр1ехеа ъч(11 Вепегасе а пих1цге оуапг|Ьо61еа оу чаг!оца агВи(г(еа апс1 ьрес1(1с!((ея 5огие ап6Ьог$|еа ъл!1 Ье ъ$|гесгеь$ соъчагс1 йе сагпег (ргогець ог геяи) ог (Ье сгиб-1|п)г!и5 5гоцря о(Ьегь ъч(1! геасг цбй Ьой рер(Ые ап6 сагпег.
Ноъчечег, аа !опд аа йе ауп1Ьегк ргогеш |а ас 1еааг 11 геябцеа |и!еп51Ь, а ргорогбоп оу(Ье ап6Ьо6(еа е611 Ье прес|(1с 1ог аицпо асЫ яеъ)цепсеа гЬаг аге аЬагеъ$ Ъу йе рергЫе апъ$1(а соВпаге ргогегп. Т)аца1!у, йеге |а по пеед го гепюче ап6Ьо6(еь с$|гесгес$ а5аша1 1Ье 1|п|6п5 Вгоцрь апг$ йе саги'- ег ргоге|п, япсе (Ьезе ъ)о пог (псегуеге ъч(й ап6Ъо6(еа с$!гесгес$ ада|пег (Ье гаг5ег ргоге|п. Ап)(Вийей А9.33 Ноюечег, апг)Ъойеа гЬаг сгоаягеасг хпЬ ЕЬе сагпег ргоге!и сап, !Е песеаьагу, Ье геточес) Ьу )ттипоаЪкогргюп х))Ь геяп ог Ьу иппшпоаЕПппу сЬготагоагарЬу оп ЯерЬагоае со1итпа сопса)пшВ )пипоЪ(1(хес1 сагпег ргосеш. Соп>щаЕед АпЕ1Ьойе5 Ап6Ьойеа сап Ье сощиВасес) го а и Ые чаг(егу оЕ аиЬяапсеа чч)(Ьоиг ядтйсапс егояоп оЕ ачЫПу апс1 арес)Пспу.
ТЬеае аиЬагапсез шс)ис)е Ью6п, ПиогосЬготеа оЕ чагюиа со1огя ап6 епхутеа аисЬ аа аПса1ше РЬоарЬа(аае, ЬогаегайаЬ регохЫаае, апс) игеаае. Апг)Ъойез сощииагес) го йЕЕегепг аиЬагапсеа аПох яти!Сапеоиа с)егесгюп оЕ тоге )Ьап опе ап6аеп апс) Вепегасе ягопц а!В- па!а (Ьаг сап Ье ЕиггЬег агпр!!Пей (ЬгоиВЬ гЬе иае оЕ весопс(агу апг!ЬосПеа апс) ачЫ)п-сощиВасед епхутея ° В)ог)иу1агегЕ аиГ)Ьог))еа аге иаес) сЫейу го с)егесг апг)аепа Ьу епгуте-Пп)сес) )пппипоаогЬепг аааау (ВПАЛА), Еог ап6Ьос1у асгееп)па оЕ ехргеаяоп ПЬгапея апс1 Еог ыеагегп ЫосгшВ. ТЬе!аЬе1ес) ачЫ!и-Ью6п (1АВ) гесЬпиуле иаеа ап ач)йп-епхуте сощиВаге со г)егесс а Ью)!пу1а(ес) ргипагу ог аесопс)агу ап()Ъог)у.
ТЬе ЬгЫцег) ачЫш-Ьюбп (ВПАВ) аааау, аа Па пагпе ипр1(еа, иаеа ач)йп аа а Ьг)г)Ве Ьеичееп а Ъюг)пу!агег) рптагу ог аесопбагу ап6Ьоду апд а Ью6п-епгуте сощиааге. ТЬе ачЫш-Ъюбп сотр1ех (АВС) аааау 18 ЕЬе гпоя аепя6че оЕ ЕЬеае (Ьгее аааауя ТЬе Ьюг!пу1а)ес) епкуте 18 ргешсиЪасед ич)Ь ачЫш, Еогт)пВ 1агВе сотр1ехеа (Ьаг аге (Ьеп иаес) го с)егесг Ью6пу1агег) рпгпагу ог аесопс)агу ап6Ьойея В!ог!пу!агес( аесопс)агу ап6ЬосПеа аге ача)1аЫе Егогп аечега! гпапиЕасгигега (е.а., Р!егсе апс) Чесгог). ° Р)иогосЬготе-1абе!ег) пп(1Ьойез аге иае6 сЬПейу Еог )ттипоЬЬ(осЬет)пгу. ччЬегечег роаяЫе, П 18 Ъея со иае ПиогосЬготе-1аЬе1ей аЕЕгп!(у-риг)Егес), ап6-иптипоа10ЬиПпа ог ПиогосЬготеа соп)иВагес) го ачЫ)п ог аггергачгйп.
ТЬеае геацеппи юЬ)сЬ аге сопипегс)аПу ача)1- аЫе, Ьаче 1оыег ЪасЬцгоипд апг) 1еаа попарес)Пс Пиогеасепсе гЬап Пиогеасеп( апбаегшп ог пптипоа!0ЬиПп Егасгюпя ТЬе сЬорсе апюпа ПиогосЬготеа 18 иаиаПу йс(асег) Ъу )Ье гуреа оЕ Ег1(ега )Ьас аге ачаПаЫе Еог (Ье Пиогеасепсе писгоасоре. Р!иогеасеш Ьаа а !обжег ЬасЬдгоипс) (Ьап гЬос)ат)пе, Ьиг ЫеасЬеа гпоге гарЫ1у. Техаа Кес1 ет(га ягоп91у апс1 га геяагапг го РЬогоЫеасЬ~пц. РЬусоегу(Ьпп, а РЬусоЪП)ргосе)п ыЬоке Пиогексепг у)е!д !8 30 — 50 птеа Вгеагег (Ьап (Ьас оЕ Пиогеасе(п апс) гЬос)апипе, 18 иаег) ъчЬеп ехггегпе аепяг!ч)гу 18 гес)и)ге6 (01 ег а!. 1982).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
