Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 160
Текст из файла (страница 160)
Тубь аЬ11- А9.24 Арреигпх 9: Регешоп 5улгееь Пу со ехрге|ь Ъассепа! 1пс!Еегаае аа а яп81е ро1урер|Ые гетонеа а гпа)ог оЬяас1е со гыье аа а герогсег п|о!есп1е ш п|апппаПап сеПя Вас|епа1 1пс!Еегаае сага1угеа |Ье охЫа|юп оЕ 1оп8-сЬа|п аЫеЬубеа !п|о сагЪоху1к аснЬ ~ляп8 РМ)ъ)Нл аа а соГас|ог, ргодпс!п8 РЬогопа аа опе оЕ |Ье геас6оп ргойк|я КСНО + О, л- РМ)ъ)Нл — э КСООН е РМ)ъ) + Н,О + Ьч !490 пгп) ънЬеге К ь ап аПРЬа6с гпо|е|у соп|а|тп8 ас 1еаа| аечеп сагЪоп асогпя РМЬ) ь а Пан!и пюпоппс!ео|Ые; ап|1 РМЬ)Н, П а гес)псе6 Пач)п гпопоппс!ео|Ые.
Вас|епа соп|аш епоп8Ь РМЬ)Н, |о |16че |Ь|х геас6оп, ап6 1$8Ьг ет$яяоп сап |ЬегеГоге Ье теаялге|1 сПгес|!у Егот !п|ас| сеПя аПоънГп8 Вепе ехргеяяоп |о Ье а|ьауе|1 )п геа! |ппе Ге.8., р1еаае аее 1.е8осЫ е| а!. 1986). 1п уеаа|я |Ье !п|гасеПп!аг сопсеп|га|юп оЕ РМ)ъЕН ь птсЬ 1оънег, ап6 йе ш|епя|у оЕ|п и!но 1шп!пеасепсе ь |ЬегеЕоге Еаг 1оъчег |Ьап |и |п|ас| Ьасгег$а Ноънечег, йе )е ге1 оЕПВЫ ргоъ)псе6 !п ш|ас| уеааг сеП| ехрге|ь!п8 йе Ьас|епа) 1их Вепеа ь |6П 1000-Го!6 очег Ьас1|8|оппс1 апд я8п!Всап|1у аЬоче йас героглеъ$ Еог Вгейу 1пс!Гегам (Та|ашп! е| а1. 1988).
1п|ас| сеПа оЕ ЫВЬег еп)ъагуо|еа |1о по| соп|а|п епопВЬ РМ)ъ)Н |о 6г!не йе геасбоп сага!ужей Ъу |Ье Ььед 1ихАВ Вепея Ноъчечег, а|ЫПюп |о сеП ех|гась оЕ РМ)ъ)Н, ап|1 ап РМ)ъ)Н -Вепегабп8 ауагегп !е.8., Ь)АР)Р)Н:РМ)ъ) гебпсгаае; ачаПаЫе Ггот ВоеЬпп8ег МаппЬеип) Вепегасеа Ь|ВЬ 1ече1| оЕ 1ппипеасепсе. А1|Ьоп8Ь а!Пе-Ъу-яссе сотраг!хопа оГ еГПс!епсу Ьаче по| Ьееп герог|е|$, а 1ихАВ Ьляоп Ьаа |ъчо |Ьеоге6са1 аъ$напса8еа очег Вгейу 1псйегаае аа а герог|ег гпо1есп!е: !ихАВ ь а су|о|ю1к пю1- есп1е, ап|1 Па ялЬаггаге, йе аЫеЬу|$е |$есапа1, репесгагеа тегпЪгапеа еая1у.
Л!|ЬоыВЬ ЕЬе ъ)пап|шп у!е16 оЕ |Ье РЬо|осЬеппса! геас|юп сага!ухе|! Ьу 1ихАВ ь 1е|ь гЬап |Ьас оЕ Пгейу !пс)Гегам, 1ихАВ тау |пгп оп| |о Ье йе |поге зепя||че герог|ег !п !п|ас| сеПя Рог а ашптагу оЕ сЬгопю8епк апд !шп!пеасепг гпе|Ьода оЕ бе|ее|!оп оЕ птппоЬ|1|хе6 апл!Вепя р!еаае аее АррепсПх 8, ТаЫе А8-12. Сгееп г$ооге8сеп1 РгоГе$п ТЬе Ью1шп!пеасепг )еПуйаЬ, Аеъ)иогеа исгопа еппь а сЬагассепабс Вгееп Ппогеасепсе, ънЬкЬ !а 6пе |о |Ье Гп|егасбоп оЕ гъно рго|е)пя |Ье са!с!шп-Ь|псПп8 рЬо|оргосе!и ае|)пог!и, апд |Ье 8гееп йпогеасепг рго|е|п (СРР).
ТЬе ет!я)оп ареслгпт оЕ СРР реа1ь а| 508 пп| ДоЬгьоп е| а1. !962), а ъначе1еп8|Ь с)оае |о йас оГ Пн!п8 Аел)иогеа |ьяле, Ьш йабпс| Егогп |Ье сЬепп1пт1пеасепсе оГ риге аеъ)пог!и, ъчЬ|сЬ ь Ыпе ап6 реа1ь пеаг 470 пп|. нъг!|Ь гЬе !п$6а! рпп6са6оп ап6 сгуагаП!ха|юп оЕ ОРР, и ънаа с$!асочеге6 |Ьа| са1сипп-асг)часе6 аеърюпп соп1|$ еЕВк|епбу ггапаГег !и !ппп'- пеасеп| епег8у |о СРР ънЬеп |Ье |ъчо |неге со-абаогЪе6 оп|о а са|юпк апррогг ЕМопае е| а1.
1974). Сгееп 1$8ЬГ !а ргобпсег$ ънЬеп епег8у ь ГгапаГегге|$ Ьу а Роа|ег-гуре тесЬапып Егот Са"- ас6ча|е|1 аеъ)пог!и |о СРР. В!пе ПВЫ епппе6 Ъу ас6ча|е|1 аеърлопп ь сарлпгеъ$ Ьу а Ьехарер|Ые сЬгогпорЬоге (Ье8)пп)п8 а| гея6пе 64 оЕ ОРР) йа| сопла!па а сус1к аггпсгпге !4- [р-Ьу6гохуЪепху)Ыепе]ппЫаго1Ыш-5-опе) алласЬед |о йе рер|Ые Ъас1|Ьопе ГЬгоп8Ь йе 1-роя6оп ап|1 2- роя|юп оГ йе пп8 ЕЯппюпшга 1979).
1плегеаг)п8!у, гЬ!а яплс|пге арреага |о Ъе сопзегчег$ агпоп8 Ппогеасеп| рго|епь, ечеп |Ьоае Егогп попЬю!шшпеасеп| ог8ап!а|па (Мала е| а!. 1999). ТЬе СРР Вепе ъчаа с!опт ш 1992 !РгааЬег ес а1. !992) апъ$ ь поън лье|1 аа а герог|ег |и а ънЫе гап8е оЕ ог8ап)япа (е.8., р1еазе аее СЬа16е е| а1. 1994; Ъъгап8 ап|$ Нале!г!88 1994; МагаЬаП е| а1. 1995; леЬ е| а!. ! 995; СЬш е| а1. 1996; )ъ)!е<$еп|Ьа) е| а1. 1996; М|яеП е| а1. 1997). Ехрге|ьюп 1ене1а оГ СРР сап Ье теаапге|$ асспга|е1у пяп8 а Ппоготегег.
Ииогеасепсе ыпеаапге6 |Пгесс!у |и |п|ас| 1пбп8 сеПа |и 96-ънеП р1алеа ап|1 ехргекяоп ь а|ьеяе|1 оп ап |псПнЫпа1 сеП Ьаяа пяп8 Ппогезсепсе т!сгоасору. Вп8)пееге6 чапапь оЕ Срра |Ьас Япогеасе а| 6!йегепс |чаче!еп8йа ап6 ънПЬ |ИЕегеп| )пгепяг!ел Ьане Ьееп |$ече1оре6 ап|1 аге ачаПаЫе !гоп| чапопа сопппегс|а1 |юпгсеа (е.8., КеаеагсЬ бепег!са ап6 С$.0)ъ)ТЕСН). Рог пюге |пЕоппа|юп оп СРР ап6 Па аррПсабопа ш пю!есп!аг Ь|о1о8у, р1еаае аее йе шЕоппа6оп рапе! |и СЬар|ег 17. Аи66ойел А9.25 АМТ!ВОО1ЕЬ Ап6Ъо6!еа аге иае6 Сог аечега! гпа)ог рпгроаез !и ию!есп1аг с!оп!пП: ° со асгееп сРХЛ 1йгапее Гог с!опек сЬас ехргея а арес~6с ргосесп ° со рипГу Гцяоп ргосе!па йас аге саеее6 ъч!сЬ а ьресЬПс ерПоре ° Со ъсегесг апъс опапг!Гу Гоге!Пп ргоге!п ехргеяед Ьу гесошЬлпапС Р)ъ)А СесЬп!ъ)пеа ° со соп6пп йас а с!опт репе епсос1еа а ргосе!п оГ !псегеьс ° со Песесс ргоЬех 1аЬе1ес1 ъч!сЬ Ьлобп ог 6!ПохуПеп!п ° со десесс гпК)ъ)Аа Ьу ппшппоЬ!асосЬеппса! апа1уа!ь Лпс!Ьоб!еа согпе !и а чапесу оГ с!аяея аГ6пшеы ап6 Ыюсурея ТЬеу сап Ье ро1ус1опа1 ог пюпос!опа1, епП!пееге6 ог пасига!, ап6 гаЬед !и апппа!з ог аепегасе6 !и ч!сго.
Ноъчечег, аь Гаг аа шо1есп1аг с!оп!пе Ь сопсегпей сЬе ьресл6сПу оГ йе апс!Ьо6у Ь Гаг гпоге пирогсапс йап ля ргочепапсе. Ап6Ьойеа сап Ье 6!чЫед лпсо йгее агопра ассогь)!па со Ьоъч йеу геасс ъчПЬ сЬелг сагПес ргосешя ° Апг1Ьол11ех г)саг геасг ъч11)г гЬеГогеГеп ргогет тгсерет1епг1у оГ Гсх соп~огтаг1оги Апс!Ъоб!еа оГ сЬЬ суре аге рагскп1аг1у ихеГц! сог гпеаялг!пе сЬе соса! алиоипс оГ сЬе сагеес ргосе!п пл сгибе ргерагас!опа ог ш сеП ехсгасся ТЬеу аге пгшаПу ро!ус1опа! ш пасиге апд аге ргерагед Ъу пппшпЬ!пП ап!ша1ь ъч!сЬ рагбаПу с1епашгес1 ргосе!п ог ъчПЬ а рерсЫе ъчЬоае зеъ)пепсе соггеаропсЬ со рагс оГ сЬе !псасс ргосесп. Ноъчечег, шопос1опа1 апс!Ъоб!еа йас аге рап-арес!6с аге пос ппсоппиоп. ° Апг1Ьог11еь гЬаг теасс оп1у ъч11)л ерГгорез ьресфс го гГле паг)уе Гогт оГ йе гагеег ргогет.
Апс!ЬосПеь оГ йЬ суре аге суркаПу пюпос1опа1, Ьаче Ьееп гаЬед аеа!пас пабче ргосе!п, ап6 гесоПпие а П!чеп ьесспепсе оГ аиипо аснЬ оп!у ъчЬеп и осспга !и !ь па6че сЬгее-йгпепяопа1 сопГсеигас!оп. ТЬеае апс!Ъоб!еь аге иаебл! Гог сеас!пП ъчЬесЬег пшсасе6 Гогша оГ ргосе!пз йас Ьаче Ьееп Пепегасеб Ьу !и чссго пшсадепеяЬ аге Го!деб соггесс1у ог ъчЬесЬег а ъчПд-суре ргосеш ехргеяеь! си Ьесего1оцопа сеПа Ь аяешЫе6 шсо а соггесс йгее-йгиепыопа! соп6епгас!оп. ° АпВЬойех гЬаг геасг он1у ъч11)г л1епагигег1 Гогть оГ гЬе гат~ег ргосет. ТЬеае апс!Ьоб!ев аге га!ае6 аПа!иас 6лПу Пеиаспгед апс!Пепь апс1 сап Ъе еПЬег июпос1опа1 ог ро1ус1опа1.
Апс!Ъоб!ез оГ йЬ суре аге паеГи! Гог ъчеасегп Ыосс!пП ап6 Гог !шшппо1ое!са! асгееп!иП оГ сР!чА 1лЪгапеы А1СЬопПЬ йеге Ь по ъчау Со Ппагапгее СЬе ргос)пел!оп оГ рагСкп!аг !урез оГ ап6Ъойея П Ь пеъегсЬе1ея роясЫе со сЬооае ап !шпши!гас!оп гее!гпеп сЬас ъчП! Гачог сЬе ргогЬлсс!оп оГ ап6- Ьоб!еа ъч!сЬ сЬе деягес1 сЬагассегЬ6ся Ноъчечег, П Ь а1ъчауа песеяагу со всгееп аечега! !пдерепПепс апсЬега ог а аепеа оГ шопос!опа1 апс!Ъоб!еа со Ыеп6Гу сЬоае ьшсес) со йе саа)ьа ас Ьапс1. Рссг!Г!саГ!оп оГ Асс1сЬос!с!еь Рог шапу рпгроьея апсЬега пеег) пос Ье Ггасс!опасен ЬеГоге пае.
Ноъчечег, лГ сЬе апсЬега аге со Ъе га6!о1аЬе1ед ог сои) пдасес) со епгушез ялсЬ аь Ьогзегаб!вЬ регохЫазе ГНКР) ог аПсаПпе РЬоя рЬасаъе, П Ь песеяагу со рппГу сЬе !Пб Ггассюп ог, лп аоше садбея со рппГу йе апс!Ъоду оГ !исегеас Ьу Ыпб!пП П со Па соепасе алъщеп. Л)сЬопцЬ лпапу сесЬп!г)пеь Ьаче Ьееп Пече!орел! со рппГу !Пб гио1есп!ея сЬе гпесЬос1 оГ сЬоке Ь аъЬогр6оп со, ап6 е!ибоп Ггош, ЪеасЬ соасе6 ъч!сЬ ргоселп А, а сошропепс оГ йе сеП ъчаП оГ 5. аигеил ГН)е1ш ес а!. 1972). Рог геааопь сЬас аге пос !ъпоъчп, сЬЬ ргоселп ГМ, = 42,000) А9.26 Аррепйх 9: Ретес6оп Вуттеитл Ь)псЬ астоп81у со ясек (и |Ье аесопт$ апс1 й|г|1 сопасапс ге81опа оЕ сЬе Ес рог6оп оГ йе ипишпо81оЬи!ш Ьеачу сЬа|п (РеЬепЬоГег 1981). ЕасЬ 18С то1еси1е СЬегеГоге сиота)пв Съчо ЬГпйп8 ясеа Гог ргосе)п А.
Веса|ье ргосе|п А Пае1Е Ьаа 6че росепба1 ясек Гог Ъ|пйп8 со 18б (8)еоЫаЫ 1977), П Ь роаяЫе со Гони иш16тепс сотпр1ехеа оЕ |Ье съчо суреа оГ ртосе|па. Мос аП иипшпо81оЬи1|па Ъш|1 со ргосе|п А ъч1й йе аале аГГтп$су. Ап6Ьойеа Ггот Ьшпапя гаЬЬ|ь, апд Вшпеа р$8а Ъ(п6 тиас 68Ы1у, СоПоъчед ш |$есгеаяп8 огт)ег оЕ аГ6п|су Ъу сЬоае Ггот р(8я тике, Ьогкея апт( соъча (ГъгопчаП ес а!. 1970а,Ъ; бои|Ь|чаагд ес а1.
1978). 1пппипо81оЬи1$пк Егоп| Воася гаь, сЬ|с(тепя ап6 Ьатасега Ь)пс) |п а птсЬ ъчеа)тег ЕааЬюп, апт$ а "Ь|$681п8" ап6Ьот)у Ь тьиаПу гет(и)гет$ со рипГу |Ьетп Ьу а|Ьогрсюп со ргосе|п А. 'чът!сЬ|п апу опе арес|ея т$$ГГегепс с!атаев оЕ !ттипо81оЬи!шз чагу (и йе ает)иепсек оЕ йеи. Рс ге8$опв ап|1 сопает(иепс!у Ъ(пт$ со ргосе!п Л ъч$|Ь т$|ТГегепс аЕ6п|6ея ОГ йе тпа)ог с!атаев оЕ Ьшиап !8б, Гог ехатр1е, |Ьгее (18б1, 2, апт$4) Ь~п|$ ъч1й Ь$8Ь аубиису ап|1 опе (18СЗ) Ъ|п|Ь чету ъчеаИу, !Г а| аП, 8(т$1аг1у, тпо|ье 18б2а Ып|Ь ъч(СЬ ЬтВЬ аГ6пПу, 18б2Ь ап|$18бЗ Ь(пс( Со1егаЫу ъчеП, ап|1 18б1 Ь~п|Ь роог!у (Еу ес а1.
1978). ТЬеае 6|ТГегепсеа аге ВепегаПу ипиирогсапс ъчЬеп ПеаПп8 ъчПЬ ро1ус1опа1 вега, ъчЬеге апс(Ьот$!еа а8а(пас йе саг8ес ап68еп аге йаспЬисет( сЬгои8Ь- оис аП оЕ йе тпа)ог аиЬс1а|ьеа оГ 18б. Сопает)иеп|1у, рип6сасюп оЕ ро!ус!опа1 ипишпо81оЬи1ша гаье|1 ш гаЪЬПВ Ьшпапя апт$ ппсе Ъу Ьшйп8 со ргосе|п А и|ау а1сег сЬе йяпЬи6оп оГ аиЬ- с1а|ьеа оЕ 18б, Ьис П гаге!у сЬап8еа йе арест6сбу ог ач16(су оЕ сЬе 6па! ргерагасюп. Ноъчечет, пюпос1опа1 апсГЪо6$еа кесгесе6 Его|и ЬуЬгЫотаа саггу оп1у опе аиЪс!а|ь оГ Ьеачу сЬа|п. ВеГоге ат|етр6п8 Со рипЕу а 8(чеп тпопос1опа! апт(Ьобу, П Ь е|ьеп6а1 Со |$етегт(пе йе аиЬс1а|ь оГ (те Ьеачу сЬаш ияп8 соиипегс|аПу ачаПаЫе иптипо1о8$са1 геа8епь йгессе|1 а8а)пас ьосуреа оЕ йе Рс ге8$оп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
