Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 156
Текст из файла (страница 156)
!999) ог Ъе ачоЫет) Ъу гепточшВ 5'т'ВК СоЫ |гпмнп йе сеп|р1ате РХА Ьу ятапс)агд ейапо! ргес)рйаВоп. ВУВК Со!В тя яцрр1!ет( ая а !0,000х сопсепсгате 1и апЬу|1гоця с)1шетЬу1яц1ГохЫе (РМ50). ТЬе Ь!ВЬ соя| от |Ье |1уе ргес1цт)ея !тя цяе Гог гонт!пе ята!пша от" Ве1я. Нотчечег, |Ье |1уе тпау Ье соя!-етуест!че ая ап а1|егпатп е то гасВо! аЬе1шВ ог ят)чег я!а!и!пВ от Р)я(А |п тесЬпнр|ея яцсЬ ая япа1е-я!таис) сопЕогшат!оп ро1ушогрЬ!яш (55СР) апт) |1епатцПпВ ВгагВепт Ве! е1естгорЬогея(я (РССЕ). Аатогаг)!очтар)|у апт! Гтачтч А9.9 А1.)ТОКА01ОСКАРНУ АМ0 ! МАС1)ЧС Р!СС)СТЕ А9-1 Ечептв Сеатс!ид Со йе Рог|па!!ои оЕ аи Ашогайо га Ь!с !|па е Х-гау С|!ш еп|йвюп в ° Ад+ ° ° св ° ~ ° ° ° ° вдчег Ьа!||Се сгув|а|в ТЬе т)!ацгагп вЬотчв СЬаС рагбс!ев ептеппд йе аи|огаг) одгарЬ|с !|паде саиве е!ессюп ос е!ессгопв !гота в!1- чет ЬаЕЫе стувса!в. ТЬеве е!ессгоив аигасс ров!с|че!у сЬагцет) в!!чег юпв, депегат!пц ргес|риа|ев ос в!!чег а|оп|в.
е ° Ад+ в|!чег Иа!!|те сгув|а! ТЬе Пгвс аисогат)!оагарЬ |чав оЪ|а!пет) |п 18б7, |чЬеп Иерее тсе 5с.'тт!стог с1евспЬет) сЬе Ыас1|еп!пд оГ еиш1вюпв оГ я1чег сУПогЫе апг) !отПт)е Ьу игапшш пигасе апт) сагсгасе. ТЬе Ыас)теп!ии оссигге|1 ечеп |чЬеп сЬе итапиип ва!с |чав верагасет) Стоги |Ье епш1яоп Ъу вЬееь оЕ со!отед ц!авв. Ас |Ьас 6тпе, гайоасспбсу Ьад пос Ьееп 6!всочегет) апд %ерсе всгиац1ед ипвиссеввЕиПу со ехр1аш Ьь геви1|в !и сетиь оЕ 1ииипевсепсе.
Мо1еси1аг с!оп)пд дерепдв оп сесЬп)т)иев со псар ассигасе!у сЬе йвспЪшюп оГ гайоасбче асопь оп с|чо-йшепвюпа1 витЕасев. Рог сЬе 1авс 20 уеагв, аисогасПоцгарЬк !шадев оГ 5оийегп Ъ)оь, пог|Ьегп ЬуЬпйхас!опв, РЬ)А вег)иепс!пц ие!в, ап|1 ПЪтату встеепв Ьаче Ьееп йе коти оГ сЬе Йе1й 1п аисота6!оцгарЬу, а гайоасбче вресипеп еииь гайа6оп, аепегаПу !и |Ье Еопп оЕ П- рагск!ев |чЬове !шаве ь гесогг)ет) оп РЬосоигарЬк еиш1яоп. А 6!адтатп оГ йе ечепь йас оссиг т)иг!пц ехровиге оГ РЬосодгарЬ~с етпи1в!оп со тайоасс!ч!су !в вЬо|чп ш Р!вите А9-1. ТЬе епш1яопв тье6 !и аисогайодгарЬу ате виврепвюпв оЕстувса1в !ига!пв) оГ я1чег Ьа1Ые !и ие1ас!п.
Ехровиге со гайа6оп ас6часев йе Ьа1Ые сгувса!в, ргос1ис!ид а 1асепс !шахе сЬас сап Ъе сопчепе6 со а сп|е ппаие Ьу г)ече! оршепс. ЕасЬ )3-раг6с1е еш)стет) Ьу сЬе ваи|р!е сопчегь а пшиЬег оГ вт)чет юпв со я1чег асоиь, счЫсЬ аге йеп тч!сЬт)гасчп Еготп сЬе сгуяа1 1асске. ТЬе геви1с!ии 1асепс !шаде ь ипяаЫе япсе тЬе асопь оГ я1чег сепг) со!ове сЬе!г сарсигес) е!ессгопв апт) со геяиие сЬе|г р1асев !и сЬе 1аике. Ас гоои| сетпрегасиге, й|в гесигп геас6ои Ьав а Ьа1Г-6тпе оГ -1 весопй Ас — 70'С, сЬе гасе оГ йе гесигп геассюп ь пшсЬ в!отчет, ап|1 сЬеге и Пи!е Еайпи оЕ |Ье!асепс !шаде. Риппц |1ече)оршепс, йе асс!часес) пис1е! оЕ яЬег асопь сага!ухе йе сопчетяоп оЕ |Ье епс|ге я!чег Ьа1Ые цта!п иио п|есаППс я!чег.
1п тповс епш1яопв, и ь песе|ьагу со асс|часе Ьесъчееп 5 ап|1 10 яЬег асопь рег стувса! |п огс)ег со оЬсаш сотпр!есе сопчегяоп оГ сЬе сгувса! т)иппа |1ече1оршепс. Сгуяа1в сч!|Ь Ее|чет ас6часе|1 я1чег а|о|ив Ьаче а!отчет сЬапсе оЕ |1ече!ортпепс, ТЬюв тпеапв сЬас сЬе шсепясу оГ йе Ппа1 !шаве ь пос ргорогсюпа1 со |Ье шсепясу оГ|Ье )псЫепс тайа6оп. Еосч 1ече)в оГ гайабоп ипП Пепегасе |1ече!орет! !шадев |Ьас аге дьргоротс!ипате!у Еа!пс. 1п РЬосоцгарЬу, |Ьтв РЬепошепоп !в )споъчп ав!очч-!псепв!су тес!Ртосиу ЕаПиге, Сопчеье1у, ехровиге со ап шсепве воигсе оГ ПаЬ| ог !5-рагс!с1ев сап васигасе аП оГ йе я1чег ЬготпЫе сгувса!в во йас сЬе еиш1яоп Ьесошев геЕгассогу со ГигсЬег гайа6оп.
ТЬе т)епв!су оЕ висЬ Ьигпс ппацев |в по 1опиег ргорогсюпа1 со |Ье !псепясу оЕ йе !псЫепс гайасюп. Рече!орет) ппадев ччЬове аЬвотЪапсе ас 545 птп ехсеетЬ !.3 оп а ш!сгот)епясошесег Ьаче васигасе|1 йе 61ш апт) саппос Ье ивет) со с)иапс!саге йе шсепясу оГ йе опд)па) воигсе оГ гайабоп. ТЬе йгее ьосорев тповс сопипоп1у гье6 Еог аисогайоагарЬу аге ь5, "Р, апт) "Р, аП оЕ|чЬ|сЬ етпи !)-рагс!с1ев. ТЬе епегд!ев оГ йеве раг6с1ев аге т)1ГЕегепс: ь5 епиь а рагбс1е чч!|Ь а тпахитштп епегау оЕ 0.1б7 Метт сЬас сап репе|гасе 61тп епш!яоп оп1у со а дерсЬ оГ 0.25 иип !вес Р!дите А9- 2).
"Р еиивяопв ате вППЬ|1у втгоидег !0.249 МеУ) ъч!СЬ а тпахипшп репе|га|юп т)ерСЬ оГ О.б пип. А)сЬоииЬ сЬГв т!ерсЬ !в виГПс!епс со аПо|ч йе синие|1 !3-рагс!с1ев со |псегасс ргог)исс!че1у чч!сЬ я!чег Аитогаг(точгар(лу аиг( Р)|сир)лог|та8|и8 А9.1! А|ЛОКАО1ОСКАРН|г АМ0 РНОЬРНОК1МАСПЧС 1пГепяГу|щ Ьсгееп5 5|гоп8 |3-рагйс1ея ялсЬ аа |Ьоье еш|ттег| Ьу йесау оГ ллр, сап рать ып||е|ессе|1 тЬгои8Ь Х-гау 61|и.
То !псгеаае йе ейк|епсу лч||Ь лчЬкЬ ЫПЬ-епегйу рагйс|ез аге |1есес|е|1, ап штепа|Гу!п8 асгееп |пау Ъе р1асе|1 ЪеЫи|1 йе Х-гау 61|и. Касйоасйче рагйс|еа |Ьа| рать |ЬгоиВЬ тЬе 61ш Ы| |Ье ипепяГушй асгееп апт( саиае П |о еип| РЬотопа йа| аге сартигет! Ъу я1чег Ьаййе стра!а |и |Ье епш1яоп. ТЬе еуйс|епсу оГ |Ье !ллтепяГу!п8 асгееп ь йе|егпппей 1агйе1у Ьу |Ье |Ыс1|петь оГ |Ье РЬоарЬог!ауег. А йк(сег рЬоарЬог |ауег течи!ь ш а 'Таатег" асгееп Ьеса|ье |Ье |Ь~с(с 1аует аЪюгЪа пшге гасйайоп йап а й|п 1ауег. ТЬк)с асгееиз аге Гаяег, Ьи| Пепегате Гихл(ег (шайеа оп 6|и|, йие рпшап1у |о сййияоп оГ 68Ьт |и йе РЬоарЬот 1ауег.
Моат сопнепйопа! !итепа|Гушй асгеепа аге шал|е оГ са1сшш типйатате, лчЬ~сЬ еипь Ыие 68Ы айег сар|иге оГ )л-рагл|с!ея О|Ьег асгеепл сои|а|и гаге еагтЬз юсЬ аз 1апйаишп охуЬгогп|г(е (Ыие ПВЬт) ог йадойишп| охуаи!Г|г|е, лнЬ|сЬ еи|йа 8гееп ППЬт. Мо|1егп са1сипп типйатате асгеепа юсЬ аа 1лПЫп|п8 Р1|ь (Е)проис, Сгопех) епЬапсе |Ье ш|епя|у оГ ап аи|огасйойтарЬ~с ииа8е Ъу а Гас|от оГ -5 |чЬеп |Ье 61|и ь ехроаес( а| 1олн |ешрега|иге ( — 70"С) |о гетагг( |Ье с(есау оГ |Ье 1а|еп| ппайе (Когеп е| а!. |970; 5ъчапатгош атк1 Я|ап1| 1978). |п|епяГу|п8 астеепа ате иыиайу иге|1 |и ра|гя |ч|й т|оиЫе-а|с(ес( Х-тау 61п| апт| йе '|Р-1аЬе|е|1 аашр1е аапс!лн|сЬет| Ьетччееп йе лччо астеепа |п а 68Ьт-т!8Ьт саааелте. Сопчепйопа1 ипепяГу|п8 астеепа |1о по| ппргоче йе ейк|епсу лч(тЬ лнЬкЬ (олч-епегйу (3- рагйс|еа сап Ъе сартигет| Ьу Х-гау 6Ьп.
1| ь йегейоге а |наале оГ типе |о |ье йеае асгеепа чч(тЬ аашр!еа |Ьа| аге 1аЬе1ес( лч(|Ь ~~5, '|Р, '~С, от Н (Ьаа|геу апс1 МП1а |977; Вапйег е| а!. 1977). Но|нечет, арес!айте|| асгеепа Гог |ье чч!|Ь тЬеае ьосореа аге ачайаЫе Ггош Кос!а)с. ТЬеае асгеепа аге р1асес| Ье||чееп |Ье аашр1е апс( |Ье 6Ьп. |3-рагйс1еа йош |Ье аашр1е аге сар|пгей Ъу |Ье асгееп апс) соинегтес( |и|о рЬо|опя |чЬ~сЬ аге |Ьеп с(етестес( Ьу |Ье 61ш, аа П!па!тагес) ш 6|Вите А9-2. ТЬе яйпа! епЬапсешеп| ргоч|с(ес( Ьу Тгап5сгееп ь Вепегайу ег|и!ча!епс |о |Ье аепяйчйу оЪта)пес! тьш8 йиогоцгарЬу. РгеГ1а5Ыщ ТЬе арестга! етиьяоп оГ юи|е РЬотрЬога гет|шгез йас аи арргорпа|е1у аепя||хед 61тп Ье |ьед ог пшсЬ оГ йе 1щЬт ччй! Ье ччаатес(. Ассогг||пй!у, |Ье еГГ|с!еис!ез лчПЬ ччЬкЬ!о|н 1ече1а оГ гаг|1оасйчиу сап Ье йесессей ате !псгеааес| Ьу а Гиг|Ьег тччоГо1и Ьу ргеехрояп8 |Ье 6!ш |о а аЬогт (-1 пьес) йааЬ оГ 68Ы еш|ттег! Ьу а атгоЬозсоре ог а рЬо|ойгарЬ|с йазЬ ипй.
ТЫа ехроаиге Вепегасеа а|аЫе ра!та оГ я)нет атотпа чий|п еасЬ ы1чег Ьа!|Пе сгуа|а1 апй йегеГоте !псгеааея йе ргоЬ- аЪ|1йу |Ьа| ап |псош(п8 ратйс1е оГ гасйайоп лч|П Вепегате ап асйча|ед сгуяа1, ччЬкЬ лнй( Ье ге|1псес1 |о ал)чет и|еса1 с!ит(пй |Ье с(ече)оршу ргосеяс ТЬе с||атапсе оГ |Ье ППЬт юигсе |тоти йе 61ш т|иг(п8 ргеехроюге аЬои!и Ье с!ететш)пес( ешр|псайу аа Гойолна (Еаа)сеу апт| МП1а 1975, 1977).
МоСе |Ьа| ргейааЫп8 ь по| гесотп|пепт|ес( Гог ЫВЬ-лепят!н(ту Г|1ша ялсЬ аа В|оМах (Кот(а(с). РгейааЫий тЬеае 61иь !пс(псеа ЫКЬ )ече!а оГ Ьас)сйгоипс1. 1. Сочег йе аттоЬоасоре ог йааЬ иш| |чПЬ ап огапйе 61|ег (Кос1а1|, Югаттеп 21 ог 22А). ТЬь 61- сег тес(осев йе а|повис оГ |пс|йеп| Ыие 68Ьт, со |чЫсЬ Х-гау 6!ш ь чету влепят!не. 2. ЪЧог(г!п8 |и со|а1 т|ат(гпеь, р1асе |Ье 66и регрепсйси1аг |о йе ППЬт юшсе ап|1 а| 1еаат 50 стп алнау |тоти 1|.
ТЫз ргечепь тлпечеп |Пшшиайоп. Сочег йе 61ги лч)тЬ а ййияп8 асгееи. 1Г а аштаЫе асгееи ь по| ачайаЪ|е, тье а р|есе оГЪчЬатшап Ь(о. 1 61|ег рарег. А9.12 Аррепгбх 9| Регест(оп $уктеиь 3. Ехроке а кеНек оЕ секс ЕПиь то йе ПВИ коигсе Еог т((ЕЕегепс 1еп8|Ьк оЕ 6тпе аи|$ |Ьеп т(ече!ор |Ье 61иь. Си| |Ье 61пып|о р|есек |Ьа| чч(П 6| иеат!у |иго йе сичеие ЬоЫег оЕ а крес|горЬотои|е|ег. Меак иге |Ье аЬкогЬапсе ат 545 пти оЕ |Ье ехрокет(61пь а8а(пк| а Ыап)с сопкьт(п8 оЕ 6!тп |Ьа| ччак ио| ргеехрокей СЬооке аи ехрокиге типе йас саикек |Ье аЪкогЬапсе |о |псгеаке Ьу 065.
РгейакЬе|$61ти Ьак апо|Ьег ат(чапта8е: ТЬе |п|епя|у оЕ йе ипа8е оп |Ье 61ти Ъесошек ргорог6опа! |о |Ье ашоии| оЕ гасПоас6чПу |п |Ье кашр1е (1.ак)сеу $980). ТЬе |псепыту оЕ аитогай- о8гарЬ(с (ша8ек оп ргеехроке|$61п| саи |ЬетеЕоге Ье т)иапт(тагес( Ьу ш(сгот(епятошетгу ап|$ Ъе оке|1 |о тиеаялге |Ье атпоип| оЕ тат(!паст(ч(ту (и йе от(8(па! кашр)е. Ву сои|так|, йе я1чет ЬаПт(е стук|а!к (и 61ш |Ьа| ь по| ртеехроке|1 |о ППЫ аге по| ЕиПу ас6часе|$ ап|$ йегеЕоге текропт((и а к18шо(т(а1 ЕакЬ~оп то !псгеаяп8 а|поиптк оЕ гасПоас6|6|у (1ак1|еу апт( МП!к 1975, $977). ТЫк ге!а- 6опкЫР сап сошр1|са|е т)иапг(тат(ои оЕ аитогасПо8гарЬгс ииа8ек.
ТЬе Ьея |урек оЕ 61пь, Еот аП турек оЕ аиготасПо8гарЬу ехсерт Пиого8гарЬу, аге Кот)а)с Х-Ошат-К ап|$ Рщ( КХ. Ъйзеи ргеехроке|1, |Ьеке 61пь у(е1|$ ипа8ек лчЬоке аЪкогЪапсек аге ргорогтюпа( со йе (п|епя|у оЕ йе кошсе оЕ тасПоас6чиу очег а гап8е оЕ 0.15 — 1.0. Нолчечег, сгие 1шеаг текроикек ате оп! у оЬ|а(пе|$ ччЬеп ($) йе Ьас1|8гоии|1 аЬкогЬаисе оЕ йе 61ш ат 545 итп и га(кес( |о ап ОР оЕ 0.10 — 0.20 ап|$ (2) |Ье ртекепя6х|и8 ПакЬ ь ЪПеЕ (- ! пьес).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
