Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 155
Текст из файла (страница 155)
Рехсг!Ьед Ье1о|ч аге йгее 8епега! турех оГ я1чег ьта!п!08 (Мегп1 1987, 1990; М!|сЬеП е| а1. !994). ° РЬото гГече!ортеиВ П)се сопчеп6опа1 рЬого8гарЬу апд Лпого8гарЬу, паех рЬосошс епег8у со гелосе я1чег !опа то йе шесаП|с е!ешепт. Е)пГогтипасе1у, |Ье яп|рПсПу апй хреет! оГ |Ье шетЬод саппо| сошрепзасе Гог !тх 1ас)с оГ хепх!т!ч!ту, ъчЬПсЬ !х по Ьепег йап сап Ье асЫечей Ьу сопчеп|юпа) хта!п!08 лч!|Ь ейЫшш ЬгошЫе.
° Р!аилитгие лта!иищ ше(Ьойх пхе апипопшш ЬуйтохЫе |о Вепегате я1чег еПагппппе сотпр1ехея ччЬкЬ Ъ(пд со |Ье ппс1ек асЫ (уп)сне! апй Стасу 1985). ВПчег !опа аге йеп ПЬега|е|1 Гготп йе сошр!схема Ъу йесгеаяп8 |Ье сопсеп|габоп оГ апппошшп !опх чч!|Ь сПпс асЫ. ТЬе ПЬега|ей я1чег !опх аге ПпаПу гедеса со тпетаПк я1чег Ъу Готша1деЬуде. ТЬе Ъаяс ше(Ьод ехтаЪ !хЬес) Ъу !оЬапахоп ап|1 Ясоо8 (1987) |х Ьо|Ь гарЫ апд геахопаЫу хепябче (0.5-2 п8 оГ РХА|Ъапй); Вгеасег лепят!ч!ту (0.1-1 п8 Р(х(А|Ьапс)) сап Ье асЫечей ияп8 |Ье гпосПВса6опь йезспЬед Ъу Чап' апй ВеП (1996). Ночгечет, |п опт Ьапйя П !а 6(Яка( то асЬ|ече хпсЬ Ь!8Ь хепя6|6|у оп а ге80!аг Ъах|я 1п айсПт!оп, апппоп!аса1 хл)чет аа!тх аге ротепбаПу ехр)ояче ап|1 пшя Ъе Ьап61ей лч!(Ь 8геат саге.
° лчоийаттГие ага(и!ие !пчо1чев, Гог ехашр1е, Пхабоп оГ йе РХА, хепя6хабоп оГ йе Р)х(А лч!(Ь 81шата1деЬуде, ппрге8па6оп оГ йе Ве1 ог тпетпЬгапе лч!|Ь я1чег штгасе ат лчеаИу асЫк рН, апй гейпст!оп оГ Ъопп|1 й!чет !опт |о шесаПк яЬ ег Ьу аП|аПпе Готша!6еЬуйе. Мапу 6|ТГегепт чапаи|а оГ (Ь!з тесЬпщые Ьаче Ьееп рпЫ!хЬес1, Ъ|л| споет оГ |Ьеш хпГГег то а 8геатег ог 1еххег ех|еп| Ггоп| |Ье хаше ргоЫеш: Вапйх оГ РМА ага!п 8гау ог 608-уеПолч а8а!пх( а чат!аЫе Ъас)|8гоппд оГ Ъголчп!хЬ яп.Гасе ьта!п!п8 (Чай апй ВеП 1996). ТЬ!х ргоЫеш сап Ъе ппшш!тес1, аь ш йе рго|осо1 Ье1олч, Ъу сагеГпПу шоп!(ог!п8 йе Ве1 йпг!п8 с)ече1оршепт хо аа то оЬта|п |Ье 8геатехт т!!ест(ш!пат!оп Ьетлчееп арес|Вс хтаппп8 оГ(Ье РХА апй Ьас)с8гоппй ага!п- !08 оГ йе Ве1. Р!ГГегепт!а! ге|1пс6оп оГ я1чег !опт сап Ье (шргоче6 Ьу ад|Пп8 хогПшп (Ьюхп1- Гасе со |Ье аПса1ше ГоппаЫеЬу|!е хо!пг!оп (Вахлаш ет а1. 1991); (Ьюап!Гасе гешочех я!чет !опх Ггош йе Ве1 |шгГасе Ъу Готш!п8 ьо1иЫе сошр1ехех лч!(Ь я1чег аа1|я ТА|Ьеп лчог)с!п8 |чеП, |Ье попсПап|пппе хта(п!п8 сап бе|ест ЬапсЬ оГ Р(х(А сопсашш8 2-5 п8 оГ Р)х(А.
А попеПапппше я1чег яа!п!п8 !х |пас)телес! Ьу Ргоше8а аз рагс оГ йе Я1чег 5ес(пепсе Р(х(А тел!пепе!08 Ы|. ТЬе А9.6 Аррепг//х 9: Ресегс/оп 5укгетк попс!!атт!пе кса!и!па гпесЬос! оис11пес! Ье!оиг Ек ятр!е апг! !к кепяпче епоиаЬ со с!есесс а Ъапс! сопса!пша 2 — 5 пк) оЕ РЫА !п а ро1уаегу!атЫе ае!. ТЬе ргососо! счак )с)пс!1у ргочЫег! Ьу Рг. 5ие Гоггекс (Ъ'Еесог)ап С!спка! Сепесйк 5егч!се, Ме1Ьоигпе, Аиксга!са). 511чег Яа1п1пд о1 0)ь)А сп Мопе1епаЫг!пд Ро!уасгу!агп1Е1е СеЬ ТЬе чо!шпек сп йе ргососо! аге арргорпасе Еог кса!п)па а !50 х 150-ппп ро1уасгу!атЫе це1.
Ое!к оЕ йск яке аге о/сеп икес1 со апа!ухе к!па!е-ксгапс!ес! РЫА Ьу 55СР (р1еаке кее СЬарсег !3). МАТЕК1АЕЬ САС/Т1ОЫ: Р!еаке кее Аррепс//х 72 Еог арргорпаСе Ьапс!!1па оЕ таСеиа!к тагЬес/ илСЬ <1>. Асеое ас/г/ /3;4 ч/ч) <! > Рече/орег Вью!че 22.9 а оЕ койот сагЪопасе!и а йпа! чосите оЕ с 1Ссег оЕ йкй1еа Н О.
ксоге сЬе ко)шюп ас гоогп сегпрегайге асчау /гоги йгесс 1/ЕЬс Ее.и., !и а ссокес). ЕЕЬапо/ /7 094 ч/ч) ЕСЬапо//С/усего/ /7074 апг/ 77о ч/ч, гекресг/че/у) Гогта/г/еЬуг/е Г37;4 чА9 <1> ///Сг/е асЫ /0.774 чп9 <! > 5//чег тсгасе /0.2;4 сч/ч), ЕгекЬ/у ргерагег/ <1> МЕТНО0 1. АЕсег е1ессгорЬогеяк Ек сотр1есе, р1асе сЬе ае1, кс)!! ассасЬесс со опе а1акк р!асе, ш а р1акск сгау гекегчес! Еог к|1чег кса!п)па. Ро пос соисЬ сЬе кигЕасе оЕ сЬе ае1 ас апу с)те. Весаые ргеяиге оп сЬе ае) сашек ЬасЬагоипг) кса1пспа, йе чатюик юсисюпк ыеа Сог я)чег яа!и!па аге гепючеа Егогп йе р1акпс сгау чассЬ а р!репе ассасЬеа ч!а а сгар со а часииго!1пе.
2. гк)пке сЬе це! ссч)ее илсЬ с!)кс)!1ес) Н О со геспоче е1ессгорЬогеяк ЪиЕ/ег. Риг)па г)пяпа, йе ае! сч/!! Ноас Егее апг! сЬе а!акк р1асе сап сЬеп Ье геточей 3. р!х сЬе к)е! сп !096 есЬапо1 Ъу кепс)е кЬаЫпц Сог 10 пштсек оп а гос)с)па р)ас/опп. реточе йе 1090 ейапо! Ъу кпсс!оп апс! гереас йе ргосекя !Е песеыагу, сЬе ае! сап Ье )е/с Еог кечега! Ьоигк й йе кесопа ЬассЬ оЕ Соко есЬапо1.
4. ссеточе сЬе ейапо1 Ьу киссюп апс1 асЫ )икс епоиаЬ 0.790 пппс асЫ со сочег сЬе ае1. Яса1се сЬе ае) кепс!у оп а гос)с!па р!ас!опп Еог б ппписек. Кеточе йе пппс асЫ Ъу кпсс/оп апг1 ппке йе це! члсЬ съго сЬапдек оЕ йкс!!1ес! Н,О. 5. АсЫ )икс епои5Ь 0.294 я1чег ппгасе со сочег сЬе ае1. 5Ьа)ге сЬе ае! иепс!у оп а гос)с)пи р1асЕопп Еог 30 гпшисек. Кшке йе ае1 апсс сЬе кса)п!па сгау сЬгее сппек ю!сЬ йкс/1!ег) Н,О. ТЬе я!чег йсгасе ко!исюп гоау Ье геыегс Ьис кса/гапа сЬеи тау Ьеоопсе ипгес/аЫе. 6.
То 100 гп! оЕ дече1орег, асЫ 125 Сс! оЕ /оста!йеЬус!е ко1исюп. ТгапкЕег йе г!ече1орег/ ЕоппаЫеЬус1е ко!ипоп со сЬе ксапипа сгау апс1 кЬа1се йе сгау кепс!у ш ап !пйгесс 1!иЬс (е.и., сочег сЬе сопса!пег чч)сЬ а!штпшп Еос!). чСЕЬеп сЬе ко!ос!оп шгпк уе11осч ог ъчЬеп а г)аг)с ргес!р!саге Ьесотек пос/сеаЫе, гер1асе йе с!ече!орег/Еогпса10еЬус!е сч)сЬ а кесопс) ЬассЬ оЕ 100 т1 оЕ йе кате ко1исюп. СопНпие со кЬа)се сЬе ае1 ш !пйгесс 1!аЬс. Мотсог йе арреагапсе оЕ Ьапдк апс! Ьас)сцгоипй 'чСЕЬеп сЬе гасю оЕ яапа! со по)ке !к ас Ьк гпахппшп, гепюче йе кесопс! ЬасеЬ оЕ с!ече1орег/Еогта1йеЬус!е. ЯаттцАЕис!етсАай А9.7 7.
А|Ы 250 гп1 оЕ 398 асепс асЫ то |Ье в|аш|пц сгау. Я|а1|е ГЬе це1 цеп|1у Еог 5 пипи|ев. В. Кетпоче йе 398 асеВс асЫ ап|1 ъчавЬ тЬе це1 ъч!|Ь 109ч е|Ьапо!. Кетпоче йе ейапо! ап|1 тЬеп в|оге йе це1 Еог 2 пипи|ев !п а ЕгевЬ Ьа|сЬ оЕ 1098 ейапо1. 9. РЬотоцгарЬ тЬе це1 Ьу сгапя!1шшпа|юп оп а ъчЬие!!цЬт Ъох ияпц Ро!агоЫ 667 Епп. ТЬе Ьев| РЬотоцгарЬв аге оЬ|а|пеВ ъчЬеп |Ье агеа агоипт! йе це! 1в сочеге|1 ъч1|Ь Ыас!с рарег. 1О. Рог 1опц-тетш в|отаце, еКЬет !|еер КЬе це! !и !098 ейапо1!798 81усего! ог т!гу К ав Ео!1оъчя а.
Ьау а ц1авв р1а|е 2 сгп 1опцег апт! ъчЫет йап йе це! асговв йе тор оЕ а Ьеа!тет. Ь. чътет а р!есе оЕ Вагап !4тгар арргохнпате!у йе ватпе в!хе ав йе ц1авв р1ате. Ьау |Ье ъчес итар оп |Ье 81авв р!ате, таЫпц саге то гепюче апу а!т ЪиЪЫев. с. Р1асе |Ье це1 ш |Ье септек оЕ |Ье р!есе оЕ цагап л'к|кар апт! |Ьеп сочег К ъчКЬ апо|Ьег р1есе оЕ рте-ъчет итар, йе ватпе яке ав йе Вгв|. Кепюче а11 ъчт1пИев ап|1 а|г ЪиЪЫев.
й Р1асе це1 врасегв, -! скп й|с!с оп |Ье цагап члттар агоиптЕ |Ье Еоиг ет!цев оЕ йе це1. 13ве а веНев оЕ Ьи!1доц с1!Рв |о с1агпр йе це1 врасегв со тЬе ц!авв р!асе. е. А1!оъч йе це! то с!гу Еог 24-48 Ьоигв, ипП1 |Ье Вагап !4тгар Еее1в сг!вр. Я'ВК ОУЕ8 ТЬе 5'т'ВК |!уев аге ипвупнпетгк суапше сотпроипс!в, с!ече!орел! Ъу Мо1еси!аг РгоЬев, йа| Ьаче воте ат!чаптацев ав Яашв Еог ЕЛ!ъ!А апт! К!чА очег РЬепап|ЬНтцпе с!уев висЬ ав е|Ь~сцшп ЪготпЫе. ТЬе 1пЕогшат1оп аЪоит 5"т'ВК Вуев |и |Ье вс!епПВс !!тека|иге !в врагве.
Ноъчечег, |Ье ЪЧеЪ 5!те оЕ йе тпапиЕаскигег !Ьттр:!/чтлчъчргоЬев.сот) Ьав пшсЬ ивеЕи! !пЕоттпатюп, ъчЬЫЬ |в яппгпаг!хет! Ъе1оъч. Рог Еиг|Ьег т!ета!1в оп |Ье ат!чаптацев ап|1 ые оЕ 5'л'ВК т!уев, р!саве вее СЬартег 5, Рго|осо1 2. ТЬгее 5'т'ВК |1уев аге ивеВ |п |по!еси1аг с!оп!пц: 5"т'ВК бгееп 1 апт! П апт! 5УВК бо1д. А11 йгее с!уев аге еввепПа11у попйиогевсепт !п Егее во1иПоп Ъит, ироп Ъ|пгПпц со пис1е|с аснЬ, Жар!ау цгеа|1у епЬапсес! Виогевсепсе апт! а Ь~цЬ с!иаптшп у!е1д. 5'т'ВК Сгееп 1, Еог ехатр!е, Ьав а л!пап|иго у|еЫ оЕ 0.8 ироп Ъ|пгцпц со т!оиЫе-в!таит!ек! 13!4А, ъчЬегеав 5'т'ВК Со!д Ьав а л!иаптшп у!е10 оЕ 0.7 апц 1000-Ео1д епЬапсеп|епт оЕ Виогевсепсе !Тшпа ет а1. !999Ь Весаые йе 5'т'ВК |1уев цепегате втгопц яцпа1в ъч|й чеку 1и|1е Ьас1|цтоипц ап|1 Ьаче а Ь!цЬ аЕЕлп!ту Еог пис1е|с асиЬ, йеу сап Ье ые|1 ш 1оъч сопсеп|гатюпв апт! аге тпоге вепя|п е |Ьап сопчепПопа1 вта!пв ялсЬ ав е|Ь~гцшп ЬгогпЫе.
5УВК Сгееп 1 ап|1 П, Ьо|чечек, Ьаче вопле 1евв с1ев!гаЫе сЬагастеНвПся ° ТЬеве |!уев аге пот ор|ипаПу вт!гпи1атет! Ъу втапт!агт! тгапя!1шпша|огв |Ьас епит 1Лк гасцатюп ат 300 шп. ТЬе яцпа1 вттепцтЬ ипргочев ъчЬеп !Пшп!паПоп ат 254 птп !в иве|1, Ьик ас тЬлв ъчаче1епцй, |1атаце Со ЕЛЬ!А В |пахипа1. ° Вой |1уев репе|тате ацагове це1в в1оъч1у. Рояе1естгорЬогеПс вта|шпц сап са1ке 2 Ьоигв ог тпоге ъчЬеп |Ье це1в аге тЫс!т ог сопка!и а Ь18Ь сопсепкгатюп оЕ ацагове. ° ТЬе |!уев аге пот рагВси1аг1у РЬотовтаЫе. ° 5ХВК Сгееп 1 В оп1у в118Ь|1у пюге вепяПче йап ей|сПшп ЪготЫе ш т!етест1пц япц!е-в|кап|Ее|! ЕЛ!ъ!А |и ацагове це1в. Рот |Ьеве геавопв, 5 т'ВК Сгееп 1 ап|1 П аге пот сопипоп1у ивет! то яа|п ЕИъ!А ш ацагове це1в.
Ноъчечет, 5'т'ВК Сгееп П с!етеств КХА ш |гепатит!пц ацагове цеЬ ъч!|Ь В чеЕоЫ цгеасег вепяВчКу йап ей|гцшп ЪгогпЫе ап|1 |1оев пот !псегЕеге ъчКЬ погйегп тгапвЕег. ТЬе т!уе |в |ЬегеЕоге ивеЕи1 ъчЬеп апа!ух!пц т!иапт1т!ев оЕ К!ъ!А |Ьас ате соо япа11 то Ье т!етестес! Ьу е|Ь!гцшп Ьгоп|Ые. 5'т'ВК А9.8 Аррепт)тх 9: Ретесттоп Буятетя Сгееп 1, оп йе ойег Ьапс(, |я цяет) сЬ)ейу со т!цап!)ту РНА !и яо!цт!оп, тог ехашр!е, !и геа1 Вгпе ро!утпегаяе сЬа|п геасВопя (р1еаяе яее йе рапе1 оп КЕАс т таяЕ РСК тп СЬартег 8, Рготосо! ! 5).
ЯУВК Со!й тчЬ|сЬ Ьая сотпе опто |Ье шаг1|ет июге гесепт!у, )я йе Ьеят от |Ье Я'ВК т(уея. 1| 1я гептил июге яепя(ттче |Ьап ейЫшп| ЬгошЫе, апт) Ья т(упаш(с гапке |я дгеатег. ()п!1Ке 5'т'ВК Сгееп 1 апт! 11, 5'т'ВК Со!4 репетгатея ае1я т!цкИу апт( сап тЬегетоге Ье цяе|1 то ята!п РХА апт( КЫА Ъой |п сопчеп|юпа! пецтга1 ро1уасгу!агпЫе апс) аВагояе де!я апд (и ВеВ сои!а|и!пВ т!епатцгаптя яцсЬ ая цгеа, 81уоха1, апт) Еогша!йеЬут)е. Весацяе 5'т'ВК Со!8 тпоят ргоЬаЫу Ъ!пт)я со |Ье Ьас)|Ьопе от сЬагаес) рЬоярЬате гея)т(цея, йе е1естгорЬогетк гпоЪ|!Ьу от РХА яташес) тч(тЬ йе с(уе шпаг)сед!у гетагт)ес), апс) йе Ъапт(я от Р)Я(А аге яошетппея сцгчей рог й|я геаяоп, ВеЬ аге ята!пег( тч(тЬ 5'т'ВК СоЫ айег е1естгорЬогея)я |я соп|р1ете. ТЬе 1ече! от" Ьас)сВгоцпт( Вцогеясепсе |я яо 1отч йат по т)еята!п(иВ !я гет)ц!гет).
ЪЪеп ехс)тес) Ьу я|апс1аЫ тгапя)1!цш!пат!оп а| 300 итп, пцс!ек асЫя ята)пег( тч!|Ь ЯУВК Со!4 Вепегате Ьг!аЬ| ВоЫ йцогеясепс я!дпа1я |Ьас сап Ье сартцгес( оп сопчепВопа! Ыас)т аттт! ячЬ)те Ро!агоЫ В1и| (туре 667) ог оп сЬагает) соцр!е меч!се (СОР)-Ъаяет! тшаВе с)есест!оп яуятетпя. ТЬе ята!пет) пцс!ек асЫя сап Ье сгапятеггет) сВгес|1у со п|ешЬгапея Еог погйегп ог 5оцтЬегп ЬуЬгЫ)хат!оп (Тшпа ет а1. 1999). А1|ЬоцаЬ |папу епхушаВс геастюпя аге по| !иЬ|Ь!тет) Ьу 5'т'ВК Со1й ро!ушегаяе сЬаш геасВопя аге яепя)т)че то Ь!аЬ сопсептгатюпя от |Ье т(уе. 1пЬ|Ь~|юп сап, Ьочтечег, Ье ге1!ечег) Ьу ат!)цят)пВ йе сопсептгатюп от" МВт+ (Тцша ет а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
