Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 150
Текст из файла (страница 150)
Ро!уасгу)атпЫе Ве1ь ате сошрокед оГ сЬа)пь оГ ро1ушепхед асту1ашЫе йат аге сгокк)тп1сед Ьу а Ьтрипс6опа! а8епт якЬ ак Х,Ат -шейу!епе-Ь!ь-асгу1ашЫе ГР1еаье ьее Р!Вите А8-8). ТЬе еКесбче гап8е оГ ьерагабоп оГ Ю5-ро1уасгу)ашЫе Ве!ь дерепдк оп тЬе сопсептгатюп оГ ро1уасгу1ашЫе иьед то сакс тЬе Ве1 апд оп тЬе аитоипт оГ сгокк-1)п)дп8.
Ро1ушепхат!оп оГ асгу1аи)Ые тп йе аЬьепсе оГ сгокк-1)п)дп8 а8епть Вепегасеь лксогь ьо1ибопк йас аге оГ по ргас6са1 ике. Сгокк-1!и)сь Гоппед Ггоит Ьтьасгу1аитЫе асЫ п8!д!ту апс! сепк!1е ягеп8й то йе Ве1 апс1 Гогтп рогеь тЬгоиВЬ счЬ!сЬ тЬе Я)5-ро1урертЫе сошр1ехеь шик! рака ТЬе к!хе оГ тЬеье рогеь десгеаьеь ак тЬе Ьтьасгу1атпЫе:асгу!атпЫе тасю тпсгеаьеь, геасЬ)и8 а иипиииш тчЬеп тЬе га6о ь -1:20. Моя Я)5-ро1уасгу!апис1е 8е1к аге сакс чч)тЬ а гпо)аг га6о оГ Ьтьасгу!аииде асгу1аииде оГ 1:29, ччЬкЬ Ьаь Ъееп кЬоччп ешртгка1!у то Ье сараЫе оГ геьо1лп8 ро1урертЫек тЬат дтТГег )и к!хе Ъу аь 1!6!е аь 396.
ТЬе яесдп8 ргорег6еь оГ йе Ве1 аге детегиипед Ьу тЬе яхе оГ тЬе рогеь, счЬ!сЬ ть а Гипсбоп оГ йе аЬьо)иге сопсептгатюпк оГ асгу1атпЫе апд Ььасгу1ашЫе сьед то сакс йе 8е!. ТаЫе А8-8 ьЬосчь йе 1тпеаг гап8е оГ ьерага6оп оГ рготе)пь оЬтатпед сч!тЬ Ве1ь сакс сч!тЬ сопсептга6опь оГ асгу1атпЫе тЬат гап8е Гготп 59о то ! 5%. $1ЛО-Ро!уатту!ат!у(е бе! Е1естторЬогел)г о)г Ртоге(пг А8а42 СН,=СН вЂ” С вЂ” МНг а я а н Н СН2 СН С М СН2 М С СН О О =сн, М,М» г»у~ ва ае»у)а ае — сн — сн— 2 )СН2 — СН вЂ” ) СНг— СО )СН2 — СН вЂ” )» СН2— СО нн, »нвв-вава р»~увв узап ге МН СО )СН2 — СН вЂ” )„СН2— Е!ааСЛССЕ А8-8 СЬегп!Са! 8Сгисгиге о! Ро!уасг !атпЫе )ч)опотпеть о1 асту!атпЫе ате ро!утпет)хе)С 'псо !оп8 сЬайь )п а геасиоп )п)с)асет) Ьу 1тее тат))са!я )и сЬе ртеьепсе о1 Х,ХстпесЬу)епеЬ)Насту!атп)8е, сЬеье СЬа)пз Ьесотпе стоян!)п(гет) со согтп а 8е!.
ТЬе рогоягу о1 сЬе гехи!Пп8 8е! )а г)есегш)пе)С Ьу йе !еп8сЬ о( СЬа)пм ап)С т)е8тее о1 стоймя!!п)с)п8 йас осени г)ипп8 сЬе ро!угпет)гас)оп геассюп. КеацепЬ ° Асгу1атЫе апт! Х,Ж '-тегЬу!еие-Ь!л-асгу1ат(йег Еечета) тапи(асштета аеП е!ессгорЬогеяя 8гаде асгу!атпЫе сЬас !а ггее о) сопсапппаПп8 теса1 юпя А хсос)т ю1исюп сопсашш8 29% (уч)ч) асгу1ап)Ые апс! 1% (лчlч) Х,Х'-тесЬу1епе-Ъ(яасгу!атЫе МЬои!д Ье ргерагет( (п т1еюп(хе)1 ъчагтп Н,О (со аьяьс сЬе СПхю1исюп от" йе Ъ(ьасту1аппс1е). Асгу!атпЫе апт1 Ь(ьасту1атЫе аге х!олч1у сопчегсет! г!ит!п8 асога8е со асгу1к асЫ апс) Ъьасгу!к асЫ. ТЬ(а т!еат(пасюп геасПоп (х саса1ухет1 Ъу П8Ы апт1 аПса!т. СЬес1С йас сЬе рН от" йе ю1иНоп (х 7.0 ог !еы, апс! яоте сЬе ю!иПоп )и с(ат)т Ьои1еь ас тоопл сетретаыге.
ЕгееЬ ю1исюпх МЬои!с1 Ье ргерагет! ечегу Кечч гпопйя Хосе йас ргерас)са8ес$, ргепйте)1 атос)с ьо!ибопь ате сопппегс(аПу ачаПаЫе (е.8., 1(те ТесЬпо!о8(еь). ТЬеае де! ьуасетх ргоч(т(е аП йе сотропепса ехсерс апппошшп регял!уасе апс( аге сегсаш1у сопчешепс Ьис регЬара а Ь)с ехрепяче. ° Зо)11апг )1о)1есу! ли!Таге (Я)5)г Бечега! тапитассигега ьеП арес)а! 8гассеь от Я)8 йас ате ялП)- с)епс1у риге Сот е!ессгорЬогеяя А1сЬои8Ь апу опе от сЬеае М11 8)че гертос1ис(Ые геял1сх, сЬеу аге пос шсегсЬапцеаЫе. ТЬе раиегп от пи8гасюп о) ро1урерсЫех псау СЬап8е с(шсе с1гааПса1- !у ъчЬеп опе тапитассигег'л Яго (а ьиЪлсссисет! (ог апосЬег'я Ъе гесопипепт! ехс1ияче иае от' опе Ьгапс) от" Яло. А 10% (лч)ч) атос!т ю1иПоп ьЬои18 Ье ргерагет! ш г!еюшхес! Н,О апт! зсогес! ас гоот сетрегасиге. 1т" ргосе(пх ате со Ье е!исес1 )тот сЬе 8е! тог хе)!иепс!п8, е1есСгорЬогеяя8гас1е ЯЛ8 МЬои!д Ъе СигсЬег риППет1 аа с(еьст(Ьес! Ьу Нип1сар(Пег ег а1. (1983).
— сн,— сн— СО мн СН2 нн СΠ— СН вЂ” СН— )сн,— сн — ), сн,— сн— СО СО мн, Мн СН2 МН СО )СНг — СН вЂ” )» СНг — СН— СО нн, А8.42 Арреийх 8: Соттои!у Иед ТесЬл!с)иеа т Мо!еси!аг С!оиси5 ТАВЕЕ А8-8 ЕЕ(есоче Кап8е оЕ 5ерагабоп о! 505-Ро1уасгу!апс!де Се!8 АскчсАмспе СомсемтйАтсОМ (,'о) Есмгак Камее ог 5егхкхтсом (к0) 10 — 43 12-бО 20-80 Зб — 94 57-212 15 12 !О 7.5 5.0 ХСо1аг гаио о( Ъсаасгу1аапбе:асгу1аюйе и 1;29. ° Тпа Ь|фега~ог г)се ргерага6ои оЕ геао!ч!и8 аид аеас)с(и8 деЬи )с 18 еааеппа1 йас сЬеае ЬОЕЕега Ье ргерагес1 чдсЬ Тпа Ьаае.
АЕ(ег йе Тг(а Ьаае Ьаа Ьееп йаао!чед ш деюп(гед Н,О, ад)иас йе рН оЕ (Ье ао!исюп чдсЬ НС! аа деаспЬед сп Аррепйх 1. )Е Тг(а-С! ог Тпгта 18 иаед со ргераге Ьийепп йе сопсепсгабоп оЕ аа!с сч(11 Ье соо Ь(цЬ апс1 ро1урерсЫеа чд!1 пегасе апота1ои81у сЬгоиВЬ сЬе це1, у)е!йп8 ехсгете!у ЙЕЕиае Ьапда. ° ТЕМЕ0 ЕХ,Ы,Ы;)ч)'-ТесгатеЯу1егЬу1еиед)ат(ие)с ТЕМЕР ассе1егасеа 1Ье ро)утепгасюп оЕ асгу!атЫе апс1 Ь(аасгу!атЫе Ьу сага)уг(пц сЬе Еоппасюп оЕ Ь.ее гайса)а Егот апипоппип регаи1Еасе.
Нае йе е1ессгорЬогеяа раде ю!д Ьу аечега! тапиЕассигега. Весаиае ТЕМЕ0 счог)са оп1у аа а Егее Ьаае, ро1утепга6оп 18 )пЬ(Ь(сес1 ас 1очч рН. ° Аиииоигит регаи)Еагег Апипотши регаи1Еасе ргочЫеа йе Егее гайса18 йас с1пче ро!упсегсгасюп оЕ асгу1аспЫе апс1 Ьсаасгу!апсЫе. А апса11 агпоип( оЕ а 10ой (сч)ч) а!ос)с ю1исюп аЬои!д Ье ргерагед ш деюп(гед Н О апс1 погес1 ас 4'С. Апипопшт регаи1Еасе десотроаеа а!039!у, апд 1геаЬ ю!06опа 8Ьои!д Ье ргерагед счееИу. ° Тг!а-д)ус!ие е1есггорЬогегда ЬиЯегс ТЬса Ьийег сои!а)па 25 тх( Тгса Ьаае, 250 тЫ 8!ус)пе (е1ессгорЬогесда Вгаде) (рН 8.3), 0.1огЬ Я:б. МАТЕК!АЕ5 САНТ!ОЫс Р!еаае аее Аррепйх 12 Еог арргорпасе Ьапдйп8 о( та!ее!а)а таг)сед чч)!Ь <1>. Асгу!агпсде ю!06опь <!> Р1еаае аее ТаЫе А8-9 Гог геао1ч!п8 8е! гес(реа апд ТаЫе А8-10 Гог асас!Вп8 8е) гессреа.
Ргосет таг)сега 5!а пдагд псо1есп!аг-сче(8Ьс псаг1сел аге сопппегсса11 у ачас1аЪ(е (е.8., 11(е ТесЬпо)о8(еа апд Ргогпс8а. Ргосесп яагпр!ея 5агпр1еа со Ье геао1чей Гог ехасПР1, сап Ье рппВед ргосею ог се1! 1уаасеа. (х 505 де(-!оайпц Ьиууег 50 гпту Тги-01 (РН б.8) 100 тп с1ЬЬюсЬгепо! 29о (и)ч) 505 (е(ессгорЬогепа 8гаде) 0.1ааа ЬгогпорЬепо! Ыпе 1Оай (ч)ч) 81усего! 5соге 1х Я35 8е1-1оайп8 Ьппег 1ас(с(сс8 йсЬюсЬгеао1 ас гоосп сеспрегасше. АсЫ йсЬ(осЬге)со) Вогп а 1 м иос1с (ыс ЬеГоге 1Ье Ьо(уег ы паей ВоЕЕег5 апс! Бо!оЕ(оп5 Р!еаае аее Аррепйх ! Еог сотропеп18 оЕ 8!ос)с ао)и6опа, Ьи((ега, апд геа8еп18. 011и1е а!Ос)с ао1и6опа 1о 1Ье арргорпа!е сопсепсгабопа.
БЕ)$-Ро(уасгу(агп!г(е Се! Е)ее!гор)(огех!5 о('Ргогетх А8АЗ ТАВЕЕ АВ-9 5о1пнопа (ог Ргераг)п8 Йеао1ипд Се15 (ог Тг)5-8!ус)пе 505-Ро1уасгу1атЫе Се) Е)ес1горЬоге515 ЧОЕОме (ш!) Ое СОмРОмемт5 ЙеОО1кеО тО СА5т Се15 Ое 1мо(САтеп ЧО(пме5 Амо СОмсемткАт1Ом5 (г Сомгомемг5 Се( Чошме ~ 5 пг! 30 гп! 40 гп! 50 гп! 10 гп! 15 гп! 20 гп1 25 гп! Мобгйед Оооо 1(аг)оп ась Еаае (1988). ТАВЕЕ А8-10 5о1пнопа !ог Ргераг1п8 5% 5!ас)()п8 Се)5 (ог Тг)5-8!ус)пе 505-ро)уасгу1ашЫе Се) Е1ес!горЬоге515 ЧО(пме (гп1) ОГ СОмРОмемт5 Йе()пеаео тО СА5т Се(5 Ог 1мо(сАтео ЧОТОме5 ()Сомгомемга Сп Чоюме <о 1 гп! 2 гп! 3 гп1 4 гп1 5 гп! 6 гп! 8 гп! 10 гп! Мойвед (гога Наг1оп алд 1.апе (1988).
6% во! НО 30% асгу!ашЫе ппх <1> 1.5 м Тпа (рН 8.8) 10% 505 10% апппопшш регап!!а(е <! > ТЕМЕР <! > 8% во! Н,О ЗОо7о асгу)ашЫе ппх <! > 1.5 М Тпа (рН 8.8) 10% 505 10% апппопшгп регао)Гаге <1> ТЕМЕР <! > )оовб 8,1 Нон 30% асгу!ашЫе ппх <1> 1.5 М Тпа (рН 8 8) 10% 5Р5 10% апипопшгп регап!!а(е <! > ТЕМЕР <!> 12% ве! н,о 30% асгу!ашЫе ппх <! > 1.5 м Тпа (рН 8.8) 10% 5Р5 10% апппопшп( регап!Таге <! > ТЕМЕР <!> 15% ве) Н,О 3096 асгу!ашЫе ппх <1> 1.5 М Тг(а (рН 8.8) Р3% 505 10% ашпаоп)шп регап!Таге <1> ТЕМЕР <!> Н,О 30% асгу!аписе ппх <1> 1.0 м Тпа (рН 6.8) 10% 5Р5 10% апппопшш регап!!а(е <1> ТЕМЕР <1> 2.6 1.0 13 0.05 0.05 0.004 2.3 1.3 1.3 0.05 0.05 0.003 1.9 1.7 1.3 0.05 0.05 0.002 1.6 2.0 1.3 0.05 0.05 0.002 1.1 2.5 1.3 0.05 0.05 0.002 0.68 0.17 0.13 0.01 0.01 0.001 5.3 2.0 2.5 0.1 0.1 0.008 4.6 2.7 2.5 0.1 0.1 0.006 4.0 3.3 2.5 0.1 0,1 0.004 33 4.0 2.5 0.1 0.1 0.004 2.3 5.0 2.5 0.1 0.1 0.004 1.4 033 0.25 0.02 0.02 0.002 7.9 3.0 3.8 0.15 0.15 0.012 6,9 4.0 3.8 0.15 0.15 0.009 5.9 5.0 3.8 0.15 0.15 0.006 4.9 6.0 3.8 0.15 0.15 0.006 3.4 7.5 3.8 0.15 0.15 0.006 2.1 0.5 038 0.03 0.03 0.003 10.6 4.0 5.0 0.2 0.2 0.016 9.3 53 5.0 0.2 0.2 0.012 7.9 6.7 5.0 0.2 0.2 0.008 6.6 8.0 5.0 0.2 0.2 0.008 4.6 10.0 5,0 0.2 0.2 0.008 2.7 0.67 0.5 0.04 0.04 0.004 13.2 5.0 6.3 0.25 0.25 0.02 11.5 6.7 6.3 0.25 0.25 0.015 9.9 8.3 63 0.25 0.25 0.01 8.2 10.0 6.3 0.25 0.25 0.01 5.7 12.5 6.3 0.25 0.25 0.01 3.4 0.83 0.63 0.05 0.05 0.005 15.9 6.0 7.5 0.3 0.3 0.024 13.9 8.0 73 0.3 0.3 0.018 11.9 10.0 7.5 0.3 0.3 0.012 9.9 12.0 7,5 0.3 0.3 0.012 6.9 15.0 7.5 0.3 О.З 0.012 4.1 1.0 0.75 0.06 0.06 0.006 21.2 8.0 10.0 0.4 0.4 0.032 183 10.7 10.0 0.4 0.4 0.024 15.9 13,3 10.0 0.4 0.4 0.016 13.2 16.0 10.0 0.4 0.4 0.016 9.2 20.0 10.0 0.4 0.4 0.016 5.5 1.3 1.0 0.08 0.08 0.008 26.5 10.0 12.5 0.5 0.5 0.04 23.2 13.3 12.5 03 03 0.03 19.8 16.7 12.5 0.5 0.5 0.02 163 20.0 123 0.5 03 0.02 11.5 25.0 12.5 0.5 0.5 0.02 6.8 1.7 1.25 0.1 0.1 0.01 А8.44 Аррепа5х 8: Соттоп!у Е(аегЕ ТегЬп(г)иег гп Мо1еги!аг С!опт8 ! х Тг!5-8!уе!пе е!еесгорЬогеяа ЬиГЕег 25 гпм Тпа 250 гпм 81уеше (е!ессгорЬогеяа 8гайе) (рН 8.3) 0.)ая (гч)ч) 5(35 ргераге а 5х а!ос)г оЕ е!есьорЬогеяа Ьи(уег Ьу гПяо1чгп8 15.1 8 оЕ Тпа Ьаае апй 94 8 оЕ 81ус(пе ш 900 ш1 оЕ йеюшхей Н О.
ТЬеп айй 50 ш1 оЕ а 109о (чуч) а!ос)г ао1ийоп осе!ессгорЬогеаса-8гайе Ю5 апй ай)иас йе чо1шпе со 1000 гп! ъ!ЕЬ Н,О. прес!а! Ессссссрсссеп$ Роснег аирр!у А йеч|ее сараЫе оЕ юрр!уш8 ир Со 500 гг апй 200 гпА Ь пеейей. ъегс!еа! е)еесгорЬогеа!а аррагасиа ТЬе гье о( гПасопйпиоиа Ьийег ауяепга гег)шгеа Я35-ро1уасгу!аш!йе е1ессгорЬогеаса со Ье сагпей оис сп чегПса! 8е! а, А1йоиПЬ сЬе Ьаяс йея8п оЕ йе е1ессгорЬогеяа сап1га апй р!асеа Ьаа сЬап8ег1 1Пс!е япсе 5сигПег (1973) спсгойисей йе ауасеп1, шапу япаП ипргочепсепь 1гаче Ьееп спсогрогасей шсо сЬе аррагашаеа. 5сапйагй чегска! аа счеП аа пипг8е! чегска! е1ессгорЬогеяа ауасегпа Еог аерагасгоп апй Ыосйп8 оЕ ргосе!па аге погч ю!й Ъу пгапу псапиЕассигега (е 8., 18(е ТесЬпо!о8!еа).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
