Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 153
Текст из файла (страница 153)
(1988), ап|1 8$0$! ( $989) ргочЫе саса1о85 оЕ рогепг)а1 с66ки16ез |п $ттцпоЫог608 апс$ с)ега)1ес$ зц88ез6опз Еог 501ч(п8 йет. 1ттипо!л!ойтц А8.53 р1асег) оп йе з!г!е ог йе це! гас!пц |Ье апог!е. ТЬе сопс)1|!опз изе6 гог ггапзгег чагу ассогг!!пц |о |Ье |1еяцп ог йе аррагагиз, ап|1 Ь гз |Ьегегоге Ьея |о го11очч йе тапиласгигег'з !пз|плсбопз а| |Ь)з з|аце. Турец ог !ч!егпЬгапе5 ТЬгее |урез ог" тегпЬгапез аге изег! гог 1плтипоЫог|1пц: т|госе11и1озе, пу1оп, апс! Ро!уч!пу!1- |1епе Виог)бе. !л!!Тегепг ргосе|пз п|ау Ь|п|1 лч1|Ь Жггегепг е!Влс!епс!ез |о йезе те|пЬгапез, апг! раг|ки1аг апг!цеп!с ер!горе!з) п|ау Ъе Ьеяег ргезегче6 ш опе сазе |Ьап апойег.
1| |з |Ьегегоге лчог|Ь|чЬ!1е лчЬегечег розяЫе |о |ея йе егглс!епсу ъч!|Ь ччЬкЬ йе ап6цеп ог ппегез| сап Ъе с!егесгес! оп чагюиз тетЬгапез, ияпц зечега1 ап6Ьо|1)ез. ° №Ггосе!!и!озе !Роге яке 0.45 )лт) геташз а згапс!агс! тегпЪгапе изе6 !ог пппшпоЫоп|пц, а!йоицЬ гпетЪгапез лч1|Ь а япа1!ег роге з!ге (0.22 )лт ог О.! )лт) аге гесоттепг)ег) гог пппшпоЫо|6пц о! япа11 рго|ешз ог М, <!4,000 !Вигпеяе !981; Е)п апг! Казатагзи 1983). ТЬе сарае!|у ол пцгосе11и1озе |о Ъ|п|1 ап|1 ге|а!и рго|е|пз гапцез ггот 80 рцlстл |о 250 |лц!сопл, с)ерепг)!пц оп йе рго|е|п. Рго|ешз Ъ|п|1 |о и!ггосеБи1озе сЬ!ейу Ъу Ьу|)горЬоЪ|с !п|егас6опз (чап Озз е| а!.
1987), а1йоицЬ Ьуг!гоцеп Ьопг!1пц Ьегччееп апипо ас!г) з!|)е сЬа!пз апс! йе пЬго цгоир ог' |Ье п|еп|Ьгапе п|ау а!зо Ье !пчо1чей 1п апу ечепс, рагба1 |1еЬу|1габоп ог" йе рго|ешз Ьу тейапо! ог за1| ш |Ье сгапзгег Ъи)гег епзигез а гпоге 1азбпц Ьопг! Ъепчееп йе ргосеш апг) йе тегпЪгапе. Ечеп зо, ргосе!пз тау Ье 1оз| Ггпу |Ье |пегпЪгапе |1иппц ргосезз1пц, раг|ки!аг1у !г Ьиггегз соп|ашшц пототс с)есегцепгз аге изей Мапу шчез6ца|огз |Ьеге!оге Вх йе рго|е!пз |о пцгосе1!и1озе тетЬгапез |о гелосе 1озз диппц ччазЬ)пц апг! шсиЪа|юп ъч!|Ь ап6Ъо|1у (е.ц., р1еазе зее бегзЬоп! ап|1 Ра!а|1е 1982).
Нолчечег, Ь 1з ипрог|ап| |о сЬес1| |Ьа| йе |геа|теп|з изей гог Вхаг!оп (ц!и|ага!|)еЬус!е, сгозз-11п)г!пц, !лЧ !ггас!!аг!оп) г!о по| безггоу йе ап6цепк ерЬоре ип|1ег згиг)у. ТЬезе |геа|теп|з сап а!зо шсгеазе |Ье ЬП61епезз ог" и!ггосе11и!озе В!|егз йас аге а11оъчег) |о г!гу аггег ггапзгег. ° Ху!оп аглй роз!г!че!у сБатцей пу!оп тетЬтапез аге |оицЬег |Ьап пи госеци 1озе апг! Ь)пг! ргосешз 68ЬВу Ьу е!ес|гояабс ш|егас6опз. ТЬе!г сарае)гу чапез ггот опе гуре ол пу1оп |о йе пех| апг! !гот опе рго|еш |о апо|Ьег Ъи| |з изиа!!у ш йе гапце о! 150 )лц/стл |о 200 )лц)стл. ТЬе аг)чапгаце ог' пу1оп апг) сЬагцес) пу!оп теп|Ъгапез очег т|госе!1и1озе !з |Ьа| йеу сап Ъе ргоЪе|1 пш!6Р1е |ипез чч1|Ь с)!|Тегепг ап6Ьо6!ез.
Ноччечег, пу1оп п|етЪгапез Ьаче гччо росепба1 6!заг!чапгацез. Р!гзц аз 6!зсиззес) Ъе1оьч, по ягпр1е апг! зепябче ргосес!иге |з ача|1аЫе со з|а|п рго|е!пз пптоЬ11!лес) оп пу1оп ап6 сЬагцег! пу1оп те|пЪгапез. 5есопг), Ъесаизе Ь )з г!!г"- Вси!| со Ыос)с а11 ог |Ье ипоссир)ег! я|ез оп йезе гпетЬгапез, апг!Ьоб!ез сепг) |о Ь!п6 попзрес|Вса11у |о йе Игег, гези!6пц !п а ЫцЬ Ьас)сцгоипд, езрес)аПу ччЬеп а Ь!цЫу зепябче дегесг!оп тейо|1 зисЬ аз епЬапсе|1 сЬепи1шп!пезсепсе !ЕС1.) 1з изес1.
!п тапу сазез, ех|еп|1- е6 Ыос)бпц ш зо1и6опз соп|ашшц 69Ь Ьеаиггеагеб сазеш ап<1 !98 ро1уч!пу1ругго1!г!опе 1О111езр!е ап|1 Нис)зре|Ь 199 ! ) 1з ге|)и!гес! |о асЬ|ече за!)згасгогу гея|1|я ° Ро)учту!Ыелге 7!иогЫе (РЪ'ОР) (Р!из)|а1 е| а1. 1986) 1з тесЬапкацу ягопц ап|1 тап!гезгз а з|гопц !пгеггас)а! (Ьу|1горЬоЫс) !п|егас6оп чч!|Ь рго|е)пз. Велоге ггапзлег, !г !з песеззагу |о ъчег йе ЬудгорЬоЪк зиггасе ог" йе гпегпЪгапе лч!|Ь тейапо1.
ТЬе сарасцу ог" РЧ!лр п|етЬгапез |з арргохипа|е1у е|!иа1 |о |Ьа| ог пу!оп гпетЬгапез (-170 рц рго|е)п!стл). Рго|е|пз Ъ|п|1 арргохЬпа|е1у ях!о1|) пюге 68Ы!у |о Рч'!лр теп|Ъгапез йап |о т|госе11и1озе (чап Озз е| а!. !987) апг! аге гегашег) тоге егглс)епг!у 6иппц |Ье зиЬзес!иепс г!е|есг!оп з|ерз. Ргосешз |пипоЬ|1|хе6 оп РРРР сап Ье ч)зиа11хег! члй згапг)агг) яашз зисЬ аз Ат)г!о В1ас1|, 1пс!!а 1п)с, Ропсеаи Я, ап|1 Соотазяе В611|ап| В!ие.
А8.54 Арреиг((х 8: Соттоп(у Ией Тес)гпщиез ги Мо!еси1аг С)опт8 Яа1п!щ оГ Ргоге!пя г!нг!щ!гпгпнпоЫоП!щ 5ерагагюп оГ ргоге!пя гп Пе1я апг( ггапярег го тетЬгапез сап Ье сопйгтед Ьу яга!п(п8. ТЬь !з а я(тр1е ргоседиге, Ьиг и гес)и(гез сагери1 сЬоке оГ а згаш гЬаг ь ыГПс!епбу яепс46че апг( арргорпасе Гог гЬе гуре оГ тетЪгапе. 5га!пт8 сап Ъе сагпе6 ош аг яечега1 яга8ея (п йе ипгпипоЫосг!п8 ргосебиге ая оигПпе6 Ъе!озч. ° 8га)п)п8 8е)я беуоге ггапзуег го тетЪтапея. Ргоге!пя сап Ье я!а(пег) гп ро)уасгу1атЫе Пе1я зч(гЬ сопчепгюпа1 дуея яисЬ ая Соотаяя!е ВНПгапг В1ие, деяга!пей, апс! гЬеп ггапяуеггед е!есггорЬоге6саПу го ппгосеПи1ояе ог РЧЕгр 61сегя Гог пптипоЫоггш8 (е.8., р1еаяе яее ТЬотрзоп апс( Еагзоп 1992).
ТЬе сЬгеГ ас!чапса8е оГ гЫя тегЬог! ь йаг ргоге)пя гегпагп яга!пес) Пипп8 иппшпос1есесбоп, йегеЬу ргочЫ(п8 а яег оГ иггегпа1 гпаг1сепи Но1чечег, ш яогпе саяез, яга!и!п8 оГ ргосе!пя !п Пе1я арреагя го гег(исе гЬе ейк(епсу оГ е1ессгое1игюп апсУог го шсегГеге зч!гЬ Ыпб(п8 оГ апг!Ьоду. (ТЬе ияе оГ ргеяга(пег) ргоге)п таг1сегя [ЫГе ТесЬпо1оЕПея! РгочЫея а яег оГ !пгегпа1 гпаг1сегз дипп8 ргогет ггапя(ег зч)гЬоиг гЬе пеег( го ягагп гЬе епбге 8е1.) ° 8га(тпгг ргпгейпя аГгег ггапягег го тетЬгалез.
ТЬе еп6ге агеа оГ ппгосеПи!ояе апд РЧРР тегпЪгапез сап Ъе зга!пей ъчПЬ гЬе гегпочаЫе Ъиг !пяепз!6че згагп Ропссаи $ (Мш1еппап сг а1. 1982; 5аПпоч!гсЬ апс( Мопге1аго 1986). ЪЬеп пюге регтапепг ягашя аге ияег) (е.8., )псПа 1п)я [Напсос1с апг( Тзап8 19831, АгпЫо В1ас1с [ТоъчЬ!и ег а!. 1979; ЪЧПяоп 1979), соПоЫа1 ПоЫ [Моегетапя ег а1. 1985; КоЬпп8ег апг( НоЫеп 1985), ог зПчег ['г'иеп ег а1. 1982! ), П !я ияиа1- 1у песеяяагу го си! а геГегепсе 1апе Ггогп йе гпетЬгапе. ВпеГ ехрояиге го аПса1г епЬапсез зга!пш8 зч(гЬ Ъой |попа 1п1с апг( соПоЫа! По1й регЬаря Ьу гес)ис!п8 1ояя оГ ргояеш Ггогп ГЬе 61Гег с1ипп8 ячаяЫп8 (5иГЬег!апс( апг! Ясегг(ГГ 1986). ()забег йеяе соп6(г!опз, П ь еас41у роза!Ые го с[егесс а Ьапс1 сопгаиип8 ая Пгг1е ая а Гечч папо8гапь оГ ргогегп. ТЬеге (я по яагьрасгогу тегЬос) со яга(п ргосе(пя пптоЫПхе6 оп пу1оп ог сабопк пу1оп гпетЪгапея.
ТЬе ЬгПЬ с(епя(гу оГ сЬаг8е оп йеяе пгетЬгапез саияея с(уе пю!еси1ея го Ьшс) (псПясппипаге1у го ГЬе яигГасе, ргодис(п8 ЬгВЬ Ъас)с8гоипг(я гЬас оЪясиге аП Ьиг гЬе зггоп8еяг ргоге(п Ьапг(я. В!осЫщ АцепЬ ТгасП6опа1 ЫосЫп8 а8епь яисЬ ая 0,598 1оы-Гаг с1гу пиПс ог 598 Ьоч(пе яегигп а1Ъиппп (!оЬпяоп еГ а1. !984; ЭепНоПапдег апд ВеГиз 1989) аге яи!ГаЫе Гог гье зч(ГЬ сЬгогпо8епк дегесГ!оп яуягепь Ъаяед оп ЬогяегадьЬ регохЫазе. Нозчечег, гЬеяе яо1ипопя аге гьиаПу псЬ 1п геяЫиа1 аПса!ше РЬозрЬагаяе ап6 яЬои16 пог Ъе ияес1 ш с1есесгюп яупепь йаг етр1оу гЬ!я епгугпе. ТЬгя !я раг6си1аг1у ггие зч(гЬ сЬепи!штпеясепг яузгегпз, зчЬеге гЬе зепя(6ч(гу ь десеггшпес! по! Ъу йе яггеп8гЬ оГ йе епипед я8па1 Ьиг Ьу гЬе еРПс!епсу оГ яирргеясПоп оГ Ьас1с8гоипй ТЬе Ъезг Ыос1сш8 яо1игюп Гог аПсаПпе-РЬоярЬагаяе-Ъаяес1 яузгетя сои!а!пя 696 саяеш, !98 ро1уч(пу1руггоП- допе, 10 тМ ЕНОТА гп РЬоярЬаяе-Ьи((егед яаПпе (СП1еяр(е апг! НибяреГЬ 1991).
ТЬе Ыос)с!п8 яо!и6оп яЬои16 Ье Ьеагед го 65'С Гог 1 Ьоиг го (пас6чаге геяЫиа! аПса1ше РЬоярЬасаяе апд йеп яяогег) аС 4'С ш ГЬе ргеяепсе оГ 3 тМ яоспшп агЫе. Еог гесгрея, р1еаяе яее АррепсПх 1. Рго[э!пд апя! Ре4ес6оп ТЬе ап6Ъог(у гЬаг геасгя яч!гЬ йе ерпоре оГ !псегеяг сап Ъе е!йег ро1ус1опа1 ог пюпос1опа1. 1п е!гЬег саяе, П (з пог гасПо1аЪе1ес1 ог соп)и8агес! го ап епхуте Ьиг ыпеге1у сП1игед !пго ап арргорпаге Ьи((ег Гог Гоппа6оп оГ апг!Ъос(у-апг!8еп согпр!ехея, 1п 8епега1, Ъас)с8гоипг!я ш пппшпоЫогбп8 аге ипассергаЫу ЫВЬ ип!еяя гЬе ргипагу апг!Ъобу сап Ье сП!ше6 ас!еаяг 1:1000 ЕттипоЫоггт8 А8.55 ТЧЬеп епгугпабс тегЬодх оЕ дегес6оп аге саед апд ас 1еах! 1:5000 УЧЬеп сЬепп1ппппехсеп! пгейосЬ аге пхед. Айег хчахЬш8, !Ье Ьоппд ап6Ьоду Ь де!ее!ей Ьу а гасйо1аЬе1ед ог епгупге- соп)пйагед хесопдагу геайепг, УЧЬ)сЬ гесойпыех сопппоп Ееагпгех о1 ТЬе рпгпагу ап6Ъоду апс1 сагпех а героггег епгуте ог Пгопр. Весопдагу геайепгх гпс1пде: ° Кай101ой1пагей ап6Лой1ех ог 81арЬу1ососса1 Ргогет А, УЧЫсЬ нчеге паед ш йе йгх! пппшпоЫога (е.й., р1еахе хее Впгпепе !981) апд Еог а Еетч уеагх г!тегеайег.
Ноччечег, гад!01аЬе1ед хесопдагу геайепгх Лане почч Ьееп гер1асед Ьу попгасйоасбче де!естюп хухгегпх ЕпсЬ ах епЬапсес1 сЬепп1шпшхсепсе, тчЬ!сЬ аге 1е55 Ьагагдопх апд тоге хепябче. ТЬеу геташ тЬе гпох! асспгасе теТЬод Еог хепп'-грлапйа6не пппшпоЫопшй. ° Ап6ЬойЕех сопущаЕей Ео епгутея хпсЬ ах Ьогхегад)ЕЬ регохЫахе ог айса!!пе рЬохрЬасахе, 1ог тчЬ)сЬ а чапе!у о1 сЬготойеп)с, йпогехсепг, апд сЬепп1шпшехсепг ЕпЬягасех аге ачаг1аЫе.
° Ап6Ьой1ех соир1ей го ЬЕобп, ьЬгсЬ саи йеп Ьс де!ее!ей Ьу!аЬе1ед ог соп)пйагед ягергач!д)п. !тайе5 о1 гасйо1аЪе1ед геайепгх аге саргпгед оп Х-гау 61т ог рЬохрЬогппайег5, УЧЬегеа5 йе геап115 о1 сЬгогпоцеп)с апд йпогоцепк геасбопх аге Ьех! гесогдед Ъу сопчепгюпа1 рЬого8- гарЬу. ТаЫе А8-12 5Ьоччх йе арргохппасе хепяг)ч!гу чдТЬ УУЫсЬ йе Ьех! о1 ТЬехе тегЬодх сап де!ее! а хгапдагд апййеп пяпй ап6Ьосйех о1 ЫВЬ 6!ег апд хресгйспу. Рог гпоге шуоппа6оп аЬоп! йехе дегес6оп гпе!Ьодх, р1еахе 5ее Аррепсйх 9. ТАВЕЕ АВ-12 СЬгогиоВеик аий СЬепи1ииииехсеи! Ме!Ьойх о1 ЕЗе!есйои о1!ипиоЫ!Ыед Аи68еих Вея51тЗчЗту Соммемтх Еьхуме ЙЕГЕКЕЯСЕ5 Йехоепт СЬгоиюоеик НоггегасйкЬ регохЫахе ТЬе ршр!е со)ог оЕ охЫ1гей ргойисгх Еайех гарЫ!у ои ехроеиге го ПВЛЕ. 4-сЫого-1 иарЬйо1! Н,О, 1 и8 сйаиииоЬеийсйие <! >! 250 РВ МсКшпп-ВгегсЛ)с1и !1990) З,З',5,5'-геггаигегЬу1- ЬеигЫ)ие !оо РВ АПса1ше РЛохрЛагаге ииго Ыие се!гаго!шш! 5-Лгогио-4-сЫогЫийо1у! РЛогрЬаге 5гее1-Ы ие ргес)р!гаге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
