Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 151
Текст из файла (страница 151)
СНЬ!сЬ оЕ сЬеае ауяепь со ригсЬаае са а шапег оЕ реьопа1 еЬогсе, Ьис гс ь аепяЫе Еог а!аЬогасогу со гье оп1у опе суре оЕ аррагасиа. ТЫа суре оЕ яагн1аггПхайоп гпа!геа гс еаяег со согираге сЬе геаись оЬсагпегс Ьу гПЕЕегепс гпчеас18асога апй аПоъча рагса о( Ьго)геп аррагасиаеа со Ье асачеп8ей апй гегьегс.
МЕТНО0 Россгсщ 505-ро!уасгу!апссде Се!8 с. АсьетЫе йе 81ааа р1асеа агсогй!п8 со сЬе тапиГассигег'а шасгиссюпя 2. Весегтспе йе чо1шпе оГ йе 8е1 то1й (сЫв спГоппасюп ь иаиа11у ргочЫег1 Ьу сЬе тапиГассигег). 1п ап Ег1епспеуег Г!аа)с ог й(ароааЫе р1аасЫ сиЬе, ргераге (Ье арргорпасе чо1шпе оГ ао!иИоп сои!а!и!п8 сЬе г1еягег1 сопсепсгас!оп оГ асгу1ат!йе Еог йе геао!ч)п8 8е1, ияп8 йе ча!иеа 8!неп ш ТаЫе А8-9. Мсх йе сотропепса ш йе огйег аЬосчп. Ро1угпеПхасюп сч(11 Ъе8!и аа аооп аа йе ТЕМЕ)3 Ьаа Ьееп аййей. 'чсг!(Ьоис йе!ау, асчсг! йе пах!иге гарЫ1у апй ргосеей со сЬе пехс асер.
ТЬе сопсепсгасюп оЕ апипоппип регги)Гасе йас гче гегопипепй Ь Ь!8Ьег сЬап сЬас чьей Ьу югие гпчеа08асога. ТЬЬ е!ипгпасеа сЬе пеег! со гЫ сЬе асгу!агпксе ю1ийоп оЕ й!сап!чесс оху8еп (гчЫсЬ гесагйа ро1упсепхасгоп) Ьу йе8ааяп8. 3. Роиг сЬе асгу1атЫе 80!и!!оп )псо йе Еар Ъессчееп сЬе 81ааа р1асеа. ! еаче аиГЕе!епс арасе Гог СЬе асасрйп8 Ее1 (йе 1еп8(Ь оГ йе сеесЬ оГ сЬе сотЬ р1сь 1 снап).
1)ае а РаЯеш рсрессе со сагеГ011у очег1ау йе асгу1ат!йе ао1иСюп чч!СЬ 0.!ого ЯЭ5 (Гог 8е!а сои!а!п(п8 -8ого асгу1атЫе) ог !80Ъисапо! (Гог 8е18 сопсашш8 -1098 асгу!атЫе). Р1асе йе 8е! ш а негссеа! Роясюп ас гоот сетрегасше. ТЬе очедау ргечепь оху8еп Егош йсЕЕияп8 шсо сЬе 8е) апг1 гпЬгЬгПп8 ро!упсепхайоп.
1юЬисапо) йсаао!чеа йе р!ааск о( аогпе пиш8е! аррагасиаеа. 4. АГсег ро1утеПхасюп !8 сотр!есе (30 т!писеа), роиг оГГ сЬе очег1ау апг1 счааЬ сЬе сор оГ йе 8е1 аенега1 сипеа сч!(Ь г1еюпсаей Н О со геточе апу ипро1успеггхей асгу1ат!йе. Вгасп аа гписЬ Г)исй аа роааЕЫе Ггот йе сор оГ йе 8е1, апг1 сЬеп геточе апу гетаспсп8 Н О чч!ЕЬ сЬе ей8е оГ а рарег Сосче1. 5.
Ргераге йе агас)г!п8 8е1 аа Г011осчя 1п а й!ароааЫе р1ааНс СиЬе, ргераге йе арргорПаСе чо1- шпе оГ сю1исюп сои!а!п(п8 йе йеягег1 сопсепсгаНоп оГ асгу1атЫе, ияп8 йе ча)иеа 81чеп !п $Е35-Ро!уатту!апс!с)е бе! Е1ееьорЬогез!з о)'Ртогетз А8.45 ТаЫе А8-10. Мгх йе согпропепгз сп йе оп!ет ВЬЮ п. Ро!ушепаабоп счП) Ье8!и аз зооп аз йе ТЕМЕН Ьаз Ьееп аййей.
"чСг!сЬоис с1е1ау, ялг1 сЬе пихсиге гаргй1у апс1 ргосеей со сЬе пехс зсер. ТЬе сопсепсгайоп оу агппюпгипс регзи!Саге Ь Ьс8Ьег йап йас изей Ъу зогпе спчез08асогя ТЬсз е!пшпасез сЬе пеей со пй сЬе аегу!апссйе зо!иссоп о! йсззо!чей охузеп !счЬсеЬ гесагйз ро!упсепхаПоп) Ьу йезазяп8. 6. Роиг йе зсасРйп8 Ве1 зо!06оп гПгесс1у опто йе зиггасе ос сЬе ро!угпетсгей гезо!чш8 Ве1. 1пипетПасе1у спзегс а с!еап Тебоп согпЪ спсо йе зсасЬ!08 Ве1 зо106оп, Ьеш8 саге)и! со ачогй сгаррш8 асг ЬиЬЫез. АсЫ псоге яасрйп8 8е1 зо1исюп со 66 йе зрасез от йе сошЪ сошр1есе1у. Р1асе сЬе 8е1 ш а чегПса1 роясюп ас гоош сешрегасиге. Тейоп согпЪа зЬои!й Ье ссеапей с пСЬ Н,О апй йпей сч!СЬ ейапо! !изс Ъетоге ые. Ргерага1соп ог мапср!ез апс! Копотей Йе Се! 7.
С4т)сПе йе зсасЬ!08 8е! !з ро1угпеНгйп8, ргераге сЬе затпр1ез сп сЬе арргорпасе чо1шпе ог 1х ЯЭ5 8е1-1оагПп8 ЬиКег апй Ьеас сЬеш со 100"С Сот 3 пиписез со йепасиге сЬе ргосе!пз. Ве зиге Со йепаюге а загар!е сопгашгпз псагСсег ргоееспз о! Сспосчп псо!ееи1аг счесВЬСз. Мсхгигез оу арргорпатесу яхес! ро!урерггйез аге ачассаЫе Сгопс сопнпегсса! зоигеез. Ехсгепсесу ЬуйгорЬоЬк ргосе!пз, зисЬ аз сЬозе сопсаспсп8 пюсссрсе сгапяпетпЬгапе йоспаспз, псау ргессрссасе ог гписПпсепхе счЬеп Ьос!ес! Сот 5 пипшез ас с00'С.
То ачогй сЬезе риуас!з, Ьеас йе загар!ее Сот ! Ьоиг ас а !отчет сегпрегашге С45 — 55'С) со еууеес йепасигасюп, 8. Айег ро1ушепаасюп гз сопср1есе (30 пипшез), геспоче йе Тейоп сошЬ сагейаПу, С)зе а зс)исгс Ьосс1е со счазЬ йе ъчеПз спипегПасе1у хчссЬ йеюпсгей Н О со гегпоче апу ипро1упсеггхей асгу1аспсйе. К песеззагу, зсгас8Ьсеп йе сеей ор сЬе зсасРйп8 Ве! ъч!сЬ а Ыипс Ьуроссегппс пеесПе апасЬесс со а зупп8е. Моипс йе Ве1 ш йе е1ессгорЬогеяз аррагасиз. Айй Тпз-81усите е1ессгорЬотез!з ЬиКег со йе сор апй Ъоссош гезегчосгз.
Еепюче апу ЬиЬЫез йас Ьесоше сгарресс ас сЬе Ъоссосп ог йе Ве1 Ъессчееп сЬе 81азз р1асез. ТЬ)з сз Ьезс с1опе счссЬ а Ъепс Ьуройегпис пеесПе ассасЬес1 со а зупп8е. а !!чсРОКГА!сст Оо пос ргегип йе 8е! Ьесоге !оай!08 йе загпр!ез, япсе сЬ!з ргосес!иге чч48 йезсгоу СЬе й!зсопт!пи!Су оС йе Ьи)Сег зузтегпз. 9. Еоай ир со 15 Сс! ог еасЬ от" йе зашр1ез ш а ргейесегпппей огйег спсо йе Ьопогп ог сЬе счеПз. ТЫз сз Ьея йопе сч!сЬ а Напи1соп писто16ет зупп8е ог а ппстор!Репог ес)и!Ррей ччссЬ Ве1- 1оагПп8 Прз йас гз счазЬей счссЬ ЬиСТег ггош йе Ъопогп гезегчосг айег еасЬ зашр1е сз 1оайей. 1.оай ап е9иа! чо1шпе ос сх ЯЭ5 Ве!-1оагПп8 Ьийег шсо апу счеПз йас аге ипизей. 10.
АпасЬ сЬе е1ессгорЬотеяз аррагасиз со ап е1есспс росчег зирр1у (сЬе роя6че е1ессгос1е зЬои1й Ъе соппессес1 со йе Ъоссогп ЪиКег тезетчоК). АРР1у а чо!са8е ор 8 Юсш со йе 8е1. Айег сЬе йуе стоп! Ьаз пючес1 !псо йе гезо1ч!п8 8е1, иссгеазе йе чо1са8е со !5 Ъ'/сш апй пш сЬе Ве1 ип6! сЬе ЬгогпорЬепо1 Ыие геасЬез йе Ъоссош ог йе тезо1тйп8 Ве1 (-4 Ьошз). ТЬеп сшп оК йе рисует зирр1у. 11. Вепюче сЬе 81азз р1асез тгош йе е!ессгорЬогеяз аррагашз апс1 р1асе йеш оп а рарег сохче1. Е хе ап ехсга Ве1 зрасег со саге)иПу рту сЬе р1асез аратс.
Маг)с йе опепсасюп оК сЬе 8е1 Ьу сис6п8 а согпег 6огп сЬе Ъоссош ос йе 8е1 сЬас !з с1озезс со сЬе 1ейпюзс ччеП 151ос !). А ЬссРОВТАЬсТ Оо пос сш йе согпет Кого 8е!з сЬас аге со Ье изет! Сот !гппсипоЫосс!08. 12. Ас сЬ)з зса8е, йе 8е! сап Ъе 6хес1, зсашесс ъч!сЬ Соопсазяе ВНПсапс В1ие ог я1чет за1сз, Пио- го8тарЬей ог аисогайсо8гарЬей, ог изет! со еяаЫгзЬ ап ипгпипоЫос, аП аз йезспЬей оп сЬе соПосч!08 ра8ез. 5гатгид 5Р5-Ро)уасгу)ати1е бе)ь А8.47 МАТЕК1АЕй САС)Т!ОЫ: р!еаье ьее Аррепс))х 12 Еог арргорПасе Ьапс)!)пд оЕ п|агеПа1з шаг)сес) чс!ЕЬ <! >.
Соо|паьые ВпП)апг В)ие К-250 с)4есЬало)гасе!)с ас)с! зо)иВоп <! > Соп|Ь|пе 900 си! оЕ ше|Ьапо) Н,О 1500 ш) оЕ шейапо! а|Ы 400 сп! оЕ Н О) апс) 100 п|1 оЕ 8)асса! асеис асЫ, 5|ер 1 оЕ й|з ргогосо! геди)гез йе геадеи|з )Езгес) оп раде А8.42. МЕТНОЮ 1. 5ерагасе ргосешь Ьу е1ессгорЬогеяь йгоидЬ ап 5Р5-ро1уасгу)ашЫе де1 аз с)еьсг)Ьес) оп раде А8.40. 2. Ргераге сЬе яа)п)пд ю!одоп Ьу Йззо1чшд 0.25 д оЕ Сооп|аьяе ВП11|апс В1ие К-250 рег 100 ш! оЕ шесЬапоЬасеск асЫ ьо1исюп. Исег йе ьо1исюп йгоидЬ а Ъй~асшап )х)о.
1 61|ег со гешоче апу рагски1асе гпассег. 3. )пипегье йе де1 ш ас )еая 5 чо1шпеь оЕ зсашшд зо106оп ап|1 р1асе оп а з)ои4у госадпд р1асЕопп Еог а пипигпип оЕ 4 Ьоигь ас гоогп сешрегасиге, 4. Кепюче йе зсаш ап|1 ьаче )с Еог Еисиге иье. Реяа)п йе де1 Ьу юаЫпд Ь ш йе шейаподасеск асЫ ю106оп са)сЬоис йе с)уе оп а з1о|ч1у госЫпд р1асЕогш Еог 4 — 8 Ьоигь, сЬапд)пд сЬе с)еьса)шпд ю106оп сЬгее ог Еош сипез. ТЬе и|оге сЬогопцЫу сЬе це) Ь г)еьса)пес), |Ье япа!1ег сЬе агпоипс оЕ ргосеш с)есессег) Ьу ьсашшц счЬЬ Соошаьяе Вг!1!)апс В!пе. Реяа|п|иц Сог 24 Ьоил июа!1у а)!о|чь аь Рас!е аь 0.1 Ссц оЕ ргосеш со Ье г)есессес) ш а япц)е Ьапй А гпоге гарЫ гасе оЕ |1еьсаиппц сап Ъе асЬ|ече|1 Ьу |Ье Ео)!оиипц шесЬог)ь: ° Ось|а)п)пц )и Зоа п|есЬапо1, 10% асейс асЫ. !Е с)еьсаш)пц Ь рго!опце|1, йеге чА)! Ье ю|ие! оы |п йе |псепясу оЕ ьса|п|пц оЕ ргосе|п Ьапс)ь.
° 1|еьсашшц |п йе поги|а! г)еьса)п)пц ЬпЕЕег ас ЬсцЬег се|прегаспгеь 145"С). ° 1пс!п|дпц а Ее|а цгашь оЕ ап апюп ехсЬапце геяп ог а р|есе оЕ ьропце |п йе погша! г)еьсашшц ЬиЕЕег. ТЬеье аЬьогЬ йе яаш аь и 1еасЬеь йош |Ье це1. ° Ось|а)п)пц е! ессгорЬогеиса1!у |п арра гаспьеь |Ьас аге ьо!д сопииегс|аПу Еог йи рп грозе. 5. АЕсег с)езсашшд, йоге |Ье де1ь )п Н,О )п а зеа1ес) р1аьдс Ьад. Се)ь шау Ье ь|оге|1 ш|)едпде!у ъч)йопс апу |Виипшюп )и сЬе шсепясу оЕ ьсаш|пц; Ьосчечег, Вхе|1 ро1уасгу!аи|Ые це1ь ьсоге|1 )и Н О чд!! яче!1 аи|1 гпау |Вяоп |Ьаипц ьсогаце.
То ачоЫ йЬ ргоЬ1егп, |саге цхсд це1ь ш Н О сопса)п|пц 20аго 81усего1. 5са)пес) це1ь ьЬои14 пос Ье ьсогег) ш г)еьсаш|пц ЬпЕЕег, Ьесаиье йе ьсашег) ргосе|п Ьапг)ычп!1 Еас)е. 6. То гпа)се а реппапепс гесопЬ е)йег рЬосодгарЬ йе зсашес) де! (р1еазе ьее СЬарсег 5, Ргососо1 2) ог с)гу йе де1 аь с)езсг)Ъес) оп р. А8.50. Яа!п1щ ЯЭЬ-Ро!уасгу!ап)141е Се!5 ЪМЕ1ь Я!чег ЬаЪ А пшпЬег оЕ шесЬос)з Ьаче Ъееп с)ече1орес) со ьса|п ро1урерсЫеь сч)сЬ я1чег ьа!сь аЕсег ьерагаВоп Ъу 5Р5-ро!уасгу1ашЫе де! е1ессгорЬогеяь. 1п ечегу сазе, йе ргосеьь ге1|еь оп с))ЕЕегепс)а! гес)исВоп оЕ я1чег юпь сЬас аге Ъоипс) со йе я|1е сЬашь оЕ апипо асЫь (5сч)схег ес а1. 1979; ОаИеу ес а1. 1980; ОсЬь ес а1.
1981; 5апппопз ес а1. 1981; Мегг)1 ес а!. 1984). ТЬезе гпесЬос)з Еа!1 )псо Ссчо ша)ог с1аззеьс сЬоье сЬас иье апипошаса1 я1чег ю1исюпь апс) йоье йас иье я!чег пдгасе. А)сЬоидЬ Ьой суреь оЕ ьсашшд аге -100 — 1000-1оЫ пюге ьепядче сЬап яа|п)пд ъч)сЬ Соошаьяе ВИП|апс В!ие К-250 ап|1 аге сараЫе оЕ |1есесдпд аь 1пс1е аз 0.1-1.0 пд оЕ ро1урерсЫе !п а япд1е Ьапд, зс)чег шсгасе ьо106опь аге еаяег со ргераге ап|1, Ъу сопсгаьс со апипошаса1 я1чег ьа!пц с)о АВ.48 Аррепадх 8: Ситтип!у Е)зег( ТесЬп!г)иез гп Мо!еси!аг С!оптд пос депегасе росеп6а!1у ехр1ояче Ъу-ргог(исса.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
