Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 148
Текст из файла (страница 148)
5ерагаттоп о7" 5|пе)е-ттгаидед апд Рои)т|е-ттгапдед РИАз Ьу Нудгохуарадте СЬготатоегарЬу А8.33 НУОКОХУАРАТ1ТЕ СНКОМАТОСКАРНУ Нут1гохуара(Пе (Са !РО4|тОН), йе птоти тиаЫе о( аП са|свгп рЬосрЬасеь ргес|рба1ед тгогп ат)иеоих хо)ис(оп, ъчаь ог(8(паПу дече|оред аъ а гпа1пх Еог ргосе)п сЬгопта1о8гарЬу Ьу ТЬеПие е1 а|. (1956). 5егпепха (1957), и от)дп8 |и йе Тье)(ик |аЬога1огу, апт! Ма|п апд Со|е (1957; Ма1п е1 а|. 1959) ьеепт 1о Ьаче Ьееп йе Мгтс 1о иве Ьудгохуара(Пе 1о Егас6опате пис1ек ас(дю Нои ечег, |1 ъчаь ъчог1т |п Вегпагд('ь )абога1огу (ВегпагтП 1961, 1965; Вегпагд! апд ПгпаъЬе(Е 1961 ) (Ьас |ет! (о 1Ье чд|деьргеад апт1 еиссеех(и) иве о( Ьудгохуара6(е со(игппь 1о ьерагасе ь)п8(е-ясгапдед Егопт доиЫе-ьтгапдед пис(е)с ас(да апд со 6астюпаСе соптр|ех пис(е(с ас(дс Ьу 1Ьегпта| е1ибоп ассогд(п8 со йе|г соптеп1 о( (С-ЕС) (Маг6пгюп апд ЪЧацепааг 1974).
Оипп8 йе 1960ь апд 1970я, Ьудгохуара(Пе сЬгогпасо8гарЬу Ьесагпе йе ясапдагд гпейод 1о (пчеь68асе йе геаеаоп|ас(оп )т(педеле о( О)ъ)Ас Попс гпапу д(Е(егепс тюигсеь (Вг(иеп апд КоЬпе 1966, 1 967, 1968; Впиеп ес а3. 1974), 1о сопьсгип сгапьспрдоп псарь (5аптЬгоо)т ес а|.
1972), апд 1о птеаьиге йе сору пиптЬег от' прес Ек ьет)иепсеь |п согпр3ех Вепогпеь (Се|Ь е1 а!. 1971; СаП|птоге е1 а1. 1974). Моге гесепду, Ьудгохуара(Пе Ьаъ Ьееп ихед |п 1Ье ргерага1юп о( сО(9А Еог еиЬ(гас6че с|оп|п8 (Рача 1986), аъ иеП аъ Еог а чапе(у о( птоге птеп|а| сЬогех, Еог ехагпр!е, йе (ео(абоп о( 0)4А Егопт |ои-гпе|6п8-1ептрегаитге а8агозе ()МПое апд Сотби) 1976) апд йе гегпоча| о( соп1апт|папь йопт ОНА ргерагас)опт (5гЫ1Ь 1980). Оипп8 сЬе десаде йа1 |ет! со йе дече|орптепс о( пто|еси|аг с|оп|п8, Ьут|гохуарабсе сЬгогпасо8гарЬу ъчаь (п даПу иве (п гпапу |аЬогасопеь Еог а чапе|у о( гпап|ри|асюпа |пчо1Мп8 пис1е|с ас(дх Ьой ргерагадче апд апа|у6са!. Ноъчечег, сЬеге аге поъч Ьеиег иауь со сапу оис а|гпоеа аП о( йене сас)ть, апт! Ьудгохуарайе сЬгогпаСо8гарЬу Ьаь аП Ьис д(сарреагед Егогп (Ье таапдагт1 герегсо|ге о( |аЬога1огу 1есЬп(т(иек 1.
Ресепптпе йе сопсепсгабопь оЕ ход|иго РЬохрЬасе йа1 аге орсипа! Еог е1ибоп оЕ е|п81еьсгапдед РИА (55 ЬиЕЕет) апт| доиЫе-ясгапдед РИА (Р5 ЬиЕЕет) ае дезспЬед аЪоче. 2. Ртерате 55 апд Р5 ЬиЕЕетх Ьу д|!и(|08 2 М ход|иго рЬозрЬасе (рН 6.8). 2 хс ют|шш рЬотрЬате (рН 6.8) спаде Ьу тшхтп8 ециа) чо)шпет оЕ 2 хс хттаН,РО, апт| 2 хт т(а НРОс 3. 5исрепд йе Ьудтохуарайе роъчдет (Вю-Се1 НТР) |и 0.01 М ход|иго РЬоярЬасе (рН 6.8). Арртохипасе1у 0.5 тп1 оЕ рас)сед Вю-Се1 НТР |а тет)и|сед Еог еасЬ со1шпп. Вю-Се| НТР Ьаь а сарасЬу оЕ 100 — 200 тт8 о( пас(че Ет)4А(ш( оЕ Ьед чо|игпе. 4. Ргераге 1Ье Ьут1тохуарадсе со!ишпь тп д|ьрояаЫе 3-сс р1аядс яут|08еа ах Ео!!ои ю а.
Кетпоче йе Ьагге! Еготп йе ьупп8е. Ь. 1Ле 1Ье ъч|де епт1 оЕ а Раесеиг ртрепе 1о риеЬ а ЪсгЬасшап СВЕС 61(ег со йе Ьопотп оЕ СЬе хупп8е. ТЬе В!сет ьЬои!д соптр!есе!у сочег сЬе Ъо11огп оЕ 1Ье ьупп8е. с. АпасЬ ап 18-ВаиВе Ьуродеппк пеед1е со сЬе аупп8е. д. !пьет( йе аут|08е СЬгоиВЬ а Иеортепе Вас)тес !и йе арратасиь аЬоъчп |и Р|циге А8-4. е. ~Ле а Раьсеит р!репе со адд епоиВЬ оЕ (Ье з1итту оЕ Ьудгохуарасде со йе яуг|п8е 1о Еопп а со!шип ъчЬозе расЕей чо1шпе |е 0.5 — 1.0 тп1. ЪтгаьЬ СЬе со1шпп ъч|1Ь аечега! чо1ишех оЕ 0.01 М вод|иго РЬоьрЬасе (рН 6.8). ТЬе со1шпп те|11 пос Ье Ьаппет1 (Е К типа дгу; с|тр1у геъче1 Ьесоге иве. Е. 5еа! 1Ье Ьоссотп оЕ 1Ье со1иптп Ьу ябс|дп8 а еша11 Иеоргепе ьторрег оп 1Ье епт1 оЕ 1Ье Ьуродеппк пеед!е. 5. 1.оат1 сЬе хашр1е сои(а|и|08 1Ье пис1ек ас|д опто 1Ье со1итпп.
ТЬе сопсепсгасюп оЕ рЬоьрЬате |п сЬе яагпр!е сЬои|д Ье 1ета йап 0.08 м. б. Кетпоче йе Иеоргепе ьсоррег, апд а11оьч йе яашр1е то Воъч 1ЬгоиВЬ сЬе со!шпп. ТЬеге тс шиаПу по пеед со соПесс апд саче сЬе 1оагПпц ЪиКег йас е!исеь бопт тЬе со|шли. 7. ЪъгаьЬ йе со1шпп ипй 3 тп1 оЕ 0.01 М ход!итп РЬоьрЬасе. А8.34 Аррепд|х 8: Соттоп!у Еггед Тес)гпй)иег т Мо!еси!аг С!оп!п8 8. 5еа1 йе Ьоиот ог' йе со1шпп чдй а Ь)еоргепе яоррег, апд адд 1 со1шпп чо1шпе оу 55 Ъийег ргеЬеагед го 60"С. 9. Айег 5 пипигея гепюче гЬе Хеоргепе агоррег апд сойесс гЬе е!пасе !п т!сгоЕц8е гиЪея Хо тоге йап 0.5 пг| аЬои1д Ье сойесгед т апу опе т)сгоуц8е ГиЬе. КереаГ 5!ерш 8 апд 9 Пчо пюге Гипея 1О.
5еа1 гЬе Ьоиот оу гЬе со1цтп чдгЬ а )чеоргепе агоррег, апд адд 1 со1ипт чо1цгпе оГ Гб Ьийег ргеЬеагед со 60 С. 11. Айег 5 пипигея гепюче йе Хеоргепе агоррег апд сойесг гЬе е!пасе !п писгоуц8е гиЬея Хо пюге ГЬап 0.5 гп1 аЬои1д Ье сойесгес1 т апу опе писгойг8е ГиЪе. КереаГ 5!ерш 10 апд 11 Гччо тоге йтея 12. АПочч йе е!иагеа со соо1 го гоот гетрегагиге. О!чА сап йеп Ье ехггасгед аа Еойоюя а. Адд ап ег!иа! чо1ите оГ ыоЬигапо! со еасЬ ог' гЬе гиЬек сои!а)п!п8 гЬе деягед пис!ек асЫа.
Ь. Миг гЬе гюо рЬакеа Ьу чоггех)п8, апд сепгг!Ец8е йе гп!хгиге аг тахипигп ареед 1ог 20 аесопда аГ гоот ГегпрегаГиге ш а т)сгойг8е. с. Е1!асагд гЬе иррег (ог8ап!с) рЬаае. д. Кереаг йе ехггасйоп чч!гЬ 1аоЬигапо! ипй1 гЬе чо1шце оугЬе ациеоца рЬаае 1а 100-125 1г1. е. Кепюче аа1га Егогп гЬе Его Ьу сЬгогпаго8гарЬу оп, ог сепгг!Пг8агюп гЬгоцПЬ, а япай со1шпп оу 5ерЬадех С-50 ес!шПЪ| асег1 гп ТЕ (рН 8.0). й Ресочег ГЬе РХА Ьу ргес!рйайоп чдГЬ 2 чо!шпеа оГ ейапо! аг 0"С. 1ЧОТЕ ° 1п пю!еси)аг с!оп!п8, пис1егс ас!да угас!!опасед Ъу Ьудгохуарайге аге ияаайу гад!о!аЬе1ед, апд йе гиЪеа сои!а!и!п8 гЬе деа!гед йасйопк сап Ъе еая!у Ыепййед Ьу Сегеп1соч соипйп8 т а 1щц!д астййагюп соипгег. вчгайтепсаг|оп о) Е)Хк( А8.35 РссАСМЕ|ъ|ТАТЮ|ъ3 ОГ 03ъ|А АЕ)ТОМАТЕР БНЕАВ1(ъ(С Риппй сЬе |асс Ееъч уеагх, а тесйок( Еог Ьук(гов(упаш(с 5ЬеаппВ |о|с)айу Ьахев( оп сЬе исе о( ЫВЬ-рег(огшапсе Пг(и|в| сЬгогпасой арЬу (НР$.С) апг( сайес) сЬе "ро)пс-5)п(в" йоъч суяегп, Ьас Ьесопзе |псгеас|пй(у геувпег( апк(, 6пайу, аивотавес! (Ое(пег ег а!.
1996) ТЬогяепсоп ег а!. 1998). |и СЬе ро)пг-5(п(к хусвет, ап НР|.С ритр ь ихев3 со арр|у ргесаиге Со йе РНА хавпр!е, йегеЬу Гогс|пй |с сЬгоийЬ сиЫпй о(чеку хгпа!3 к))агпесег. |и сЬе аивотаСек3 ргосе55 )впоъчп ас Нуг|го5Ьеаг (согпгпегс(айу ачайаЫе Ггопв Сепе МасЫпех), а хагпр|е о( РНА ь гереавевйу рассек( СЬгоийЬ а япай Ьо1е ипвй СЬе савпр|е Ь Егайшепвек( Со ргос(исвх оЕ а сеиа(п 5)хе. ТЬе йпа| яхе с)|свг|ЬОС|оп Ь с(егеггп|пес( Ьу ЬоСЬ йе йоъч гаве о( СЬе хагпр1е апг( йе яхе о( йе ореп|пй, рагатевегх йаг аге сопггойег) апк) топ|вогекс Ьу йе аивовпагес| сухСевп.
АС апу фчеп 5егйпй, РС4А Ггайшепвс 1агйег йап а сепа(п 1епйсЬ аге Ьго(веп, ийвегеас айогсег Егайшепь аге ипайессес( Ьу расхайе сйгоийЬ йе орепвпй. ТЬе гехи!йпй айеагед ргок(ись сЬеге(оге Ьаче а пятоъч яхе 6!5(г(Ьис(оп: Тур|саПу 908 о( сЬе 5Ьеагевс РЬ)А Гайс чййвп а Ьчо(о(вс яхе гапйе оЕ СЬе СагйеС !епйСЬ. 1С Ь геаюпаЫе Со ехресг СЬаг ПЬгапес сопсвплсвев( Ггопь йесе РЕСА Егайгпепсс аге ййе|у со Ье о( ЫВЬег в|пай!у йап сЬохе впав(е ис)пй опе о( йе "о!с$(ахЫопес(" шаух. ТЬеу вМП сегда)п(у сопса|п с!опех оЕ пюге ипйопи яхе, апк| ро55)Ыу тау Ье пюге сотргеЬепсье вп (Ье|г еочегайе оЕ йе йепоше.
Ноъчечег, ПЬгапес сопссгиссес) Ггогп аопвсасес| ог Ьук)гос(упагп!сайу 5Ьеагек( РНА, а(сйоийЫгпрег|есс, аге сепа)п! у ъчог|ваЫе. Регвессюп|яс ъч)31 Еее1 йас йе гпасЫпе Ь песеххаву; ргай пайхь ъчй) йпк| |С гпеге|у к(ех|гаЫе. ТАВЕЕ А8-б Нув|годупавп|с 5ЬеаПпй Мевйов)5 С)сев| Со Егайгпепв РНА МЕТНОР РЕО5 Агхп Со!45 В е е е а е вч с е 5 йев)шкев «е)аввчйу 1агйе апюипь оЕ РЕ(А (1Π— |00 88); Гкайшеисв оГ Р)4А сйв|НЬисек! очек а Ьгоакс гапйе оЕ яхев; ои1у а яаай Ггассюи оГ сЬе Ггайпвепсх аге оГ а 1епйсЬ ви|саЫе Гог с!оп|ай апк( вейиеис|пй; гев)шгев 3|Пас!оп оЕ Р)4А ЬеЕоге сопвсайоп аивс еад-гераи айекъчагй Р34А шау Ье в(авиайекс Ьу Ьувскоху! кавс|са15 Пеаегасевс «(аксай сачйайои (МсКее ев а!.
|977). 5опкайоп Решвайег (1983) С(еЬи)|как|оп Ваху аавс Оп|с)в; кейи|кев оп1у сшай ашоииь ос Р)4А (0.5 — 5 88) аивс 1акйе чо1шпев ос Р)4А ъо1ииои; по ркесекепсе Сог АТ-ПсЬ геййпи; яке оЕ Екайшепсв еая!у сопскойекс Ьу а1сеппй сЬе ргехсиге оЕ сЬе йав Ыоъч|ий йкоийЬ сЬе пеЪи1ыег; Екайшеасв оЕ Р)4А вс)хвк|Ьисев( очек а пагкоъч каийе оЕ яхев (700-|ЗЗО Ьр); кеци|кев 1|йайоп оЕ РХА Ьесоге иеЬи1|хайоп апй епйгераи айекъчагк(. Вов1епсесеЬ ес а1.
(1994Ь Неайеи (!997) Свгси1айоп йкоийЬ ап НР!.С ригпр йейшгев ехрепяче аррагасив, 1вйавюп оГ РЕСА ЬеЕоге юпкасюп, апвс | — 100 ввй оЕ Р)ъ)А; Егайшеиь оГ РХА «3)вск|Ьисев( очег а паггочк гаийе оЕ яках йас саи Ье ак(|иссек! Ъу сйапй|пй сЬе йоъч гасе; спи-геравг оЕ Гкайшеивв ЬеЕоге с|ошай иос песеяагу. СЬеар, еаву, аий кецшгев оп!у хвпа11 акпоипь оЕ Р)ъ)А; Ьоъчечек, вЬе Екайшепсв аге а!Ьс1е |акйег (1.5 — 2.0 свЬ) сЬаи кейи)гев( Еог вЬосйип вейиепс|ийв геци|гев 1|Пас|оп оГ Р)ъ)А Ьесоге с)еаь айе апкс еайгера|г айеквчагв1. ОеЕпег ес а!.
(!996); ТЬоьсеивоа ес а1. (1998) Гсачсйвоп (1959, ! 960 Ь 5сйксесег ев а|. (1990) Раяайе сЬгоийЬ |Ье оп6се оЕ а 28- йаийе Ьуровсекпв|с аеей!е ТЬе Екайшепсас|оп оГ Е))ъ)А ь оусевс а песесаагу яер ргесегйпй ПЬгагу сопссгисс|оп ог сиЬс1оп|пй Еог Е)вх)А хев!пепе|ой. Егайшепсас|оп ь суркайу асЬ|ечег3 Ъу рЬуяса1 ок епхупсас|с шеСЬос353 (Ье гпохг еопипоп!у иаес1 оГ СЬехе аге с1ессПЪес1 |и ТаЫе А8-6. А!йоийЬ еасЬ арргоасЬ ь геасопаЫу хигсе55Еи! Гог йепекаПпй а гапйе оГ Егайгпепсх Егогп а 1агйе сопййиоих хейшепс оЕ Т)Ь)А, еасЬ Ьас вь рагйси|аг 1нпйайопс.
Весаиае сЬеу аге пк1ерепк1епс оГ хев!иепсе согпрояйоп, рЬух|са1 гпейог35 Гог 5Ьеалпй Е))ъ)А суркайу гехи1с ш гпоге ип|Еокш апг3 гапг(огп гйсгирйоп оГ йе сагйес 1Э)ъ(А йап епхукпаПс шесЬов!5. 1п рагПси1аг, шесЬог35 шчо(ч|пй Ьус|гос|упашк 5ЬеаНпй г|ие со рЬуяса1 ссгеаа |пг!исег3 Ъу хопкайоп ок пеЬийгаПоп ргос|исе сойесйопх оЕ арргорНасе!у гапв!ош !гайтепся ТЬе чапесу |п 1епйсЬ5 оЕ сЬесе Егайшепсх ва с|шве 1агйе, Ьоъчеъег, апг3 сЬе|к ихе иялаПу гег(и|гех а хиЬхег)иепс яхе се1есПоп хсер со пакгоъч сЬе капуе оЕ Екайшепсх сЬас аге ассерсаЫе Еог с!оп!пй ог сег)иепс|пй.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
