Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 144
Текст из файла (страница 144)
А8.20 Арреиг(|х 8: Соттои!у (Ьег( Тес)гтдиез и Мо!еси!аг С!отп8 Ьрес$горЬо$ошеЕгу от 0МА ог гс!ЧА Гог с)иап(!(аг!пВ (Ье агпоип( оГ Р)х)А ог КХА, геагПпВа аге га)сеп а( ччаче1еп8(Ьь оГ 260 пш апг( 280 пгп. ТЬе геасПпц аг 260 пгп аПохча са1си1аПоп оу(Ье сопсепггагюп оу пис1ек асЫ (п йе ьашр1е.
Ап ОР оу 1 соггеаропгЬ (о -50 )гВйп! Гог г(оиЫе-ь(гапг(ег( РМА, 40 )г8йп! (ог яп81е-аггапс(- ег! РХА апг( К)х)А, апг( -33 )гВйп) 1ог япВ!е-а(гапг(ег( оПВопис!ео(Ыея ТЬе га(ю Ьегччееп (Ье геайпВа аг 260 пгп апг( 280 пгп (ОР,„:ОР, „) ргоч!Пеа ап еяипасе оГ йе риП(у оу (Ье пис1е|с асЫ. Риге ргерагагюпь оу РХА апг( К)х)А Ьаче ОР,„:ОР, ча!иеа оГ 1.8 апг( 2.0, геаресПче!у. 1Т йеге Ы я8гППсапг сопгапипа((оп чч((Ь ргогеш ог рЬепо1, йе ОР,:ОР, „илП Ъе 1еаа йап (Ье ча!иеа ЕПчеп аЬоче, апг1 ассигасе г)пап(!(аг!оп оу (Ье апюипс оу пис1е!с асЫ ъчП! пог Ье роаяЪ|е. Весаиае Ь га гарЫ, ьппр1е, апг( попс(еаггисг(че, аЬаогргюп аресггоьсору Ьаь!оп8 Ъееп йе гпе(Ьог( оу сЬоке со гпеаялге йе ашоипс оу Р)х)А апг( КМА ш сопсепгга(ег1 риге |ю1шюпя Ноъчечег, аЪаогрг!оп ьресггоьсору Ы согпрагаг!че1у (паепа!г!че апд, чч!(Ь пюаг 1аЪогагогу ьрессгорЬосошегегя пис1ек асЫ сопсепггагюпь о( а( 1еааг 1 )г8йп! аге гег)и!гег( (о оЪ(аш геПаЫе ежгпагеа оу А, „.
1п агЫ|Поп, аЬьогргюп арес(гоьсору саппо( геасП1у Йа(!п8и|аЬ Ьегчгееп Р)х)А апг1 К)х(А, апг( и саппог Ъе паем гч((Ь сгиг(е ргерагагюпь оу гшс1ек асЫя Весаиае оу (Ьеае 1ипиагюпя а пшпЪег оГ а1(егпаг(че ше(Ьог(ь Ьаче Ьееп меч!аег! (о п|еагшге (Ье сопсеп(гапоп оу РМА апг! КХА (р!еаае аее ТаЫе А8-4). АВВОКРТ!ОМ ВРЕСТКОБСОРх' ОЕ (Х(Е)СЕЕ!С АС!Е)5 Рог(пеа апд руг)гп(6(пеь |и пис!е)с ас)6а аЬюгЬ ()х7 1)ВЫ. Аа деасг)Ье6 Ьу (Ье Веег4атЬег| (агч, йе агпоип( о( епег8у аЬгюгЬед а( а рагг|си|аг ччаче!еп8(Ь (ь а (ипс6оп о( йе сопсеп(га(юп о( (Ье аЬюгЫп8 гпа(епа|: ! = ! 10 '" (п(епа)(у о((гапяпбкег|!(ВЬГ |п(епягу о()пск1еп( ()ВЬ( п1о|аг ех6пс6оп сое8)с)еп( (а)ьо (сопилка аа йе пю|аг аЬюгЬ6оп сое(8с(еп0 ор6са! ра(Ь |еп8(Ь Вп сгп) сопсеп(га(юп о( аЬаогЫ п8 та(епа! (то!Е(!)(ег) е 'ь пип1епсаИу ег)иа! го йе аЬюгЬапсе о( а ( м ао!ибол |и а (-ст !(ВЬ( ра(Ь апд 'ь йеге(оге ехргехаед |л м ' ст '.
АЬаогЬапсе дага аге со!!ес(ег( ияп8 а ()Н прес(гогпе(ег апд аге Вепега||у героггег! аз (Ье аЬьогЬапсе А (|о8 И). ч(Ьеп Р = 1 сгп, А ь са(!е6 йе ор6са1 г!епя(у ог ОР а( а раг6си|аг и аче(еп8(Ь, ).. ОР гес Весаиае (Ье аЬюгр6оп прес(га о( РЙА апд КЙА аге п1ах|п1а! а( 260 пгп, аЬюгЬапсе да(а (ог пис|е|с || ас)6а аге а)гпоь( а!ччауь ехргеаае6 |и А ог ОР ип((я Гог 6оиЫе-а(гапдед ОНА, опе А ог ОО ипк | соггеь ропба (о а сопсеп(гагюп о( 50 )гоп!. ТЬе Веег4агпЬег( (ахч ь ча! Ы а( (еая (о ап ОР = 2 алд (Ье соосеп(габоп о( а ао!ибоп о( пис!е)с асЫ ь (Ьеге(оге еаза(!у са!си!а(ед Ьу ягпр|е (п(егро(а6оп. Гог ехал1р|е, а ьо!ибоп ччЬоае ОО = 0.66 соп(а)пь 33 68(т! о( доиЫе-а(гапде6 РМА.
гог пис!е(с ас(68 е 6есгеааеа ач 8 ьуьгеть о(а6)асеп( риг)пеь апд руг)гп)6)пеа Ьесоте ь(ас(ге6 |и а ро!упис!еог)де сЬа|п. ТЬе ча|ие о( (оге 6есгеааеь |и йе (о!!оъч(п8 генея (гее Ьаае япа!! о!)Вопис!ео((Вела а(п8!е-ь(гапде6 пис!е(с аскЬ ВоиЫе-аггапбед пис|ек ас|гЬ ь гпеапь (Ьас х)п8!е-в(гапдед пис1е|с ас)6а Ьаче а ЫВЬег аЬюгЬапсе а( 260 пгп йап доиЫе-а(саиде ас(6я ТЬия йе пю|аг ехбпсбоп сое6)с(еп( о( 6оиЫе-а(гапбе6 Р)4А а( 260 пп1 'ь 6.6, ччЬегеаь ех6пс6оп сое8)с)епг о( яп8!еаггапбе6 РМА апг1 КМА В -74. Мо(е, Ьогчечег йа(йе ехбпс(юл с о( Ьо(Ь РМА апг! РМА аге а((ес(е6 Ьу йе |пас а|геп8(Ь ап6 (Ье рН ог'(Ье ьо!и(юп (Веачеп е( а1.
19 ег ег а1. (997). Ассига(е гпеааигетеп(а о( сопсеп(габоп сап Ье гпаде оп1у ъчЬеп |Ье рН В саге( !е6 апг! йе гоп|с а(гео8(Ь о( (Ье ьо!иг(оп ь !оиг. лиед оп Тас(п8 ра8е.) Оиапг(гаг(оп 07'35)ис(е)с АГГГБ А8.21 ТЬе ехйпсйоп сое(Г(с(еп15 Ог' пис!е!с ас)с(5 аГЕ сйе югп о( 1йе ехйпс(юп сое(Е!с!еп15 ОГ еасЬ о( 1Ье!г соп561иеп1 пис1еоск1еб. Еог )агйе гпо1еси(еб, и Ьеге й 'ь Ьой опргас1ка( апс( иплесеббагу 1о юп! Гйе сое($)с!ел(5 ог' ай Гйе пис1еойдеб, аП анегайе ех6пс1юп сое(Г(с(епс 15 ибсд, Еог йоиЫе-81гапдес( 0Ь)А, 1Ье ачегайе ехйпс(юп соеГГ!с(еп1 ь 50 (рй)гп1) ' спго Гог 5(пй)е-51гапде6 0Ь(А ог КЬ(А, (йе ачегаде соей!с(еп( В 38 (рфп() ' сп3 ', тЬебе ча1иеб гпеап 1Ьа1 1 О0 ип(1 ес)иа(5 50 рйггп! с(оиЫе-51гапс(ес(0МА ог 38 рфгп! япй)е-51гапдед 0Ь(А ог КЫА Еог япай гпо(еси)еб бисЬ аб 01(йопис1еойдеб, й 'ь Ьев (о са(си(асе ал ассига(е ехйпсйоп соей)с(еп1 Ггогп 1Ье Ьабе согпроб!1(оп.
Весаибе 1йе сопсеп1гайопб о( оййопис)еоСк1еб аге согпп3оп1у героаес( аб гпгпо)еЛ!1ег, а по)йпю)аг ех6псйоп соейк(еп1 (Е) ь сопчеп1юпайу ибес3 !и 1Ье Все-(агпйеп ес)иа1юп. Е = А (15.3) 4- С (11.9) 4- С (7.4) й Т(9.3) и(3ЕГЕ А, С, С, апй Т аге 1Ье пип3Ьег о( 6гпеб ЕаСЬ гвс100136е ь гергебЕ01ед )п 1Ье бес)иЕпсЕ Ог (йе 03(йогвс)еоГЫе. ТЬе пигпйегб (п рагепсЬебеб аге (йе п3о$аг ех13псйоп соейк(еп(8 Гог еасЬ деохупис)еоййе а( рЕ(7.0. О0260200280 Ва11об А!(ЬоийЬ |1 В ро55(Ые Го ебйгпа(е (Ье сопсеп1га6оп о( ю)ийопб ОГ гвс(ек ас(65 алд 01(йопис1001(с(еб Ьу гпеаюппй 1Ье!г айюгр1юп а1 а 5)пй)е игаче)епйсЬ (260 пгп), ГЬ(5 15 пос Вопд ргасйсе. ТЬе айюгЬапсе о(ГЬе багпр1е 5Ьои)6 Ье гпеабигес1 а1 бечега( иначе)епВГЬ5 5(псе 1йе га1ю о( аЬбогйапсе а1 260 пп! Го 1Ье айбогйапсе а( о(Ьег счаче!епй(Ь5 'ь а 8 хм( (псйса1ог о( 1Ье ригйу о( 1Ье ргерага(юп.
5(йп!Г!сап! айюгрйоп а1 230 пгп !псйса(еб соп1апйпасюп Ьу рЬепо1асе !оп, 1Ь(осуапа(еб, апй осЬег огеап(с согпроип65 (510)п)й апс) Агпйегцег 1994), ъчЬегеаб аЬюгр1юп ас Ь(ВЬег счаче1епй(Ь5 (330 пгп апс$ Ь(ВЬег) 15 ибиа11у саибед Ьу 3!ВЫ бса((еппй апс( 1псйса1еб 1Ье ргебепсе оГ рагйси(а1е п3айег. АЬюгрйоп а1 280 пгп 106)са(еб 1йе рге5епсе о( ргосе(п, Ьесаибе агоп3айс апйпо ас(65 айбогЬ 81гопй! у а1 280 пгп.
Еог гпапу уеагб, 1Ье гайо о( 1Ье аЬюгйапсе а1 280 пгп апс$280 пгп (ОО:ОО ) Ьаб Ьееп ибес$ аб а гпеабиге о( риг((у о( )ю(а!ей пис)е)с ас)65. ТЫ5 гпеГЬос( да1еб Ггогп 11гагйигй апс( СЬгьйап (1942) ею 5Ьои ес$1Ьас Гйе гас ю В а й юд )псйсасог о( соп(агЫ пайоп о( рго1е)п ргерага1 юпб Ьу пис1ек ас1435. ТЬе гечегбе 'ь по1 1гие) Весаибе 1Ье ех6псйоп соейк3еп15 о( пис)е3с ас(65 ас 260 пгп апд 280 пгп аге ю пвсЬ Вгеасег 1Ьап 1Ь81 о( ргосе!пб, ейгойсапс сол(ап3йа(юп и41Ь рго1е(п ъий по1 йгеа((у сЬапйе 1Ье ОО:О0 га1ю о( а пис!е!с аск) ю(01)оп (р)еабе бее ТаЫе АВ-5).
Ь(ис1е(с ас)65 айбогЬ ю 51гопй(у ас 280 пп! 1Ьа1 оп)у а 538036!- сапйече( ог ргосеюп соп1агп!па1юп ъч)й саибе а 5(йп!йсапс сЬапце !и 1йе га1ю о( аЬюгйапсе а1 1йе !и о юане)епй(Ь5 (Вагйигц апй СЬпбоап 1942; С185е! 1995; Ь(апсЬе51ег 1995, 1996; ЧЛИпцег е1 а3, 1997). ТАВЬЕ АВ-5 АЬаогЬапсе оГ Ыис1егс АсЫ8 апс3 Рго1е)па % % Ркотб!!9 Ь)исшс Ас!Р О026,2!00280 % % Ркотнк Ь(исснс Ас!Р О0260200280 Ряой йе ргой с!о) ча)оса (о йй гаЫе, О)аае3 (! 995) Оегйо3 ап егор(пса1 еооайоп со деясгГЬе %аЬГ Гог а гапбе оГ О!7:ОР, гаиок %)Н = Е(!1!.!6)2 — 632Ц2.!б — Я!), снйеге )2 = ОР:ОР .
Ь(оге йас екопасеа о( раасу оГ оос18с асей бают оп ОР:ОР, гайоа аге ассогасе оо17 снйео йе ргерагайопа аге Ггее оГ рЬеоо!. )насос аагогагес1 ачй рЬеоо! аЬяогйа ной а сЬагассегЬис реей а! 270ого с( ОРаОР, габ ~Г2 (5ГЫЫ8аоо Агобегй~ Г994). Ыо !Вс Ы р р бай~~а ~ ~(репо! Ь~Ы4 6 ОР а'.ОР гас(оьо! -!.2.
100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 0 5 !О !5 20 25 30 35 40 45 50 057 !.Об !.32 1.48 !.59 !.67 !.73 !.78 !.8! !.84 !.87 45 40 35 30 25 20 !5 !О 5 о 55 60 65 70 75 80 85 90 95 !оо 1.89 !.9! !.93 !.94 !.95 !.97 !.98 1.98 !.99 2.ОО А8.22 Аррепд(х 8: Соттои!у Еттед Тес!ттт)иет т Мо)еси1аг С)отт(пц г!погогпе1гсс 1.1папЯа6оп о1 ОНА !.$53пд Ыоес!)5$ 33258 Меаыппц йе сопсепСгайоп о1 0)ч)А ияпц йиогошеСгу 15 яшр!е апд птоге хепяйче йап арессгорЬосоше1гу, апд а!!отчб йе десесссоп о1 папоцгапт т!иапййеа о1 РЬ)А. ТЬе атьау сап оп!у Ье тьед со птеаыге йе сопсепсгайоп о1 РЬ)А5 итЬоае яхес ехсеед -1 )сЪ, аа НоесЬ51 33258 Ь(пда роог!у со япайег Р)х)А Егацшепся 1и (Ь(5 атьау, Р)х)А ргерагайопб о1)тпотчп апд ип)спои п сопсепсгайопб аге шсиЬасед тчтй НоесЬ51 33258 йиогосЬгоше.
АЪюгрйоп ча!иех 1ог йе ип)спотчп аашр!е аге сотпрагед тч)й йоае оЬаегчед 1ог йе )спотчп аепея апд йе сопсеп1гайоп о1 сЬе ип1споип аашр!е ь еайтпасед Ьу шсегро!айоп. НОЕСН5Т 33258 НоесЬ51 33258 ь опе о( а с)а55 о( Ь!яЬепх)т)дахо!е Яиогехселс дуеа 1Ьас Ь(пд поп(псегса1асгчесу апд и41Ь ЫЯЬ срес(йс(ту )псо Ите тп(пот рооче о( доиЫе-Ягапт3ед 0)4А. Айег Ь(пд(пц СЬе Яиогеасепт у1е1д (псгеатеа йопт 0.01 1о 0.6 (сап апд СбтоЫсеЬ 1975), апт3 Ноесйя 33258 сап 1Ьеге(оге Ье тьес( (ог Яиогогпеспс де1есПоп апд ссиапс(йсасюп о( доиЫе-асгапдед ОНА (л юсисюп.
Ноесйя 33258 Ь рте(еггед со ейкйигп ЬготЫе (ог 1Ы5 ригроте Ьесасье о( йа цгеасег аЬПйу со д)йегепс)асе доиЫе-асгапдед 06!А (гопт )СНА апд япц1ехтгапдед 0)ЧА ($.попс(епа е1 а(. 1990). Е((те птапу о1Ьег поп(псегса1асгче дуеа (МППег апд Саийег 1975), Ноесця 33258 Ыпда рге(егеп1)а$)у 1о АТ-псЬ гец(опа о( сЬе 06!А Ье)(х Ме(5Ыипз апд Наепть(ег 1974), ийЬ сЬе соцтч о( йе (псепясу о( Яиогея сепсе )псгеас!пц $п ргорогЯоп со йе АяТ соп1епт о( йе 06!А (ОахЬе(ет е1 а). 1989).
ТЬе Яиогехсепс у(еЫ о( Ноес!ь1 33258 Ь арргох)гпасе(у сйгеетоЫ (отчет и41Ь 5!пц(е-асгапдед ОНА (Нцибц апс$ Сгорр 1975). Гасса апд Нцигеа ° Ноес)ьс 33258 )п тгее ю1и1юп Ьах ап ехс(сат(оп птах) го иго а1 -356 пот апд ап ептеьюп тах(гпот а1 492 ппт. Ноъчечег, тчЬеп Ьоипд со 06!А, НоесЬ51 33258 аЬюгЬ5 гпах)гпаПу ас 365 пт апт) ет)ь тпах)гпаПу ас 458 пгп (Сеаагопе е1 а1. С 979, 1980). ° ЕЫоготпеСту ачсауа исй НоесЬ51 33258 до пос июдт аС ехтгетес о! рН апд аге айестед Ьу Ьой с)еСег- цепЬ апд аа)Ь (ттап Сапе(сег апд СЬеуахепа 1986). Ахаауа аге йеге1оге июаПу сагпед ои1 ипдег атапдагд сопд(Попа (0.2 м НаС1, 10 тм ЕОТА ас рН 7.4). Ноиечег, ьчо д(йегепс ят11 сопсепсгас(опа аге тес)и)гед со д(51!пциьЬ доиЫе-атгапдед (гопт япц(е-атгапдед 014А атх3 (СНА Д.аЬагса апд Ра)цеп 1980). ТЬе сопсептгайоп о( ОНА )п сЬе ипЕпоитт иматр)е ь еяПптасес$(готп а яапдагд ситче сопасгиссед ияпц а юс о! ге(егепсе 0$4А5 (10 — 250 пцтт!) тчЬоае Ьаае соптроя1юп и 1Ье хате ас 1Ье ип)аютчп татр(е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
