Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 141
Текст из файла (страница 141)
Риг(йес) рЬепо! Ьаь а ьрес(йс цган()у о! 1.07 апс( йеге(оге !огпь йе |ои ег рЛаье ъчЬеп т(хес( иа1Ь Н,О. Ноъчечег, 3Ье огйап)с апс1 ас|иеоиь рЬаьеь гпау Ье с)3(йси(1 го ьерагаге ог пъау )пнегг ънЬеп рЬепо| 'ь иьес1 го ех|гас| ргоге(п (гопь ас)иеоиь ьо|ийопь соп1ап|пй Ь|8Ь сопсеп1га1юпь о! ьо)игеь. ТЬь ргоЫет 'ь (агце)у айен(агес) ънЬеп а 50:50 пъЫиге ог рЬепо|:сЫого(опп ь пьем, Ьесаиье йе ЫкЬег с(епьйу о! сЫого(оггп (1.47) епьыеь ьерагайоп о! 3Ье гъчо рЬаьеь. Оепа|игед ргогегоь сойес| ас 1Ье |пгег(асе Ьегъчееп йе Ьчо рЬаьеь ъчЫ|е йр)с(ь рап)г)оп е(йс)епг!у |пго йе огдапсс |ауег. Ыоапъу| а|соЬо| 'ь ойеп ас)с)ед 1о 3Ье рЬепо|:сЫого(оггп тЫиге 1о гег(исе !оат)пд.
Риге рЬепо| 'ь лиррйес1 аь а ъчЫге сгуьга| П пе таль (гп р 43"Ц. Ноъченег, оп ехроьиге Со а! г апг| по| 'ь ргопе го гес(с)еп, а ргосеьь 3Ьа1 ь ассе1егагег1 Ьу айсайпйу. С~уьгай(пе рЬепо| 'ь по1 гес Ьесаиье |1 пюы Ье гес)(ьййес) а1 182'С со геточе ох|6а1юп ргос(исгь ьисЬ аь с(и(попел 1Ьа1 саиье с(оъчп о! рЬоьрЬосйеьгег Ьопс)ь ог ргогпоге сгоьь-йп(и|од о! пис(е(с ас!с(ь. ТЬе |к|иейес1 (опп о! рЬепо| ргочс|ес! Ьу тапу тапи(ас|игегь сопга|пь — 8% Н,О апс3 сап !гохеп ас — 20'С. 3)с(иейес) рЬепо|, И со(ог(еьь, сап Ье иьег3 |и пю|еси|аг с!оп)пк ъигЬоиг гедьййа оп|у оссчьюпа| Ьа1сЬеь о! 1к|иейес3 рЬепо| аге р|п|с ог уейои, апс| йеье ьЬои)с) Ье ге|есъес1 агк| йе пъапи!ас|игег, Ве(оге иье, рЬепо| гпиьг Ье ьа1игагег3 ил|3Ь Н О апс1 есрлПЬгагед илгЬ Тгь го а рН ог >7.8 1 раг63(оп(пц о! ОНА |п1о 3Ье остап(с рЬаье, и ЫсЬ оссигь а1 аскйс рН. А8.12 Аррепс((х 8: Сот|поп(у Пес( ТесЬпциел |п Мо!еси!аг С!оп(п8 СО)ЧСЕ)м)ТКАТПЧС ЛШСЕЕ1С АС10$ СА()т!О(х(: Р!еаае аее Аррепг(!х 12 (ог арргорпа1е Ьапг(!!08 о( та(епа18 таг)сег( гч((Ь <!>.
Ейапо! Ргес1рйа6оп Ргес|раа6оп |нчй ейапо1 18 |Ье атапбагд те|Ьод |о гесонег пис1ек асЫ8 1гот ас)пеон ао1и|юпя !| 18 гарЫ, чЬ(иаПу гоо1ргоог", ап|1 егТ|с(епи 5иЪпапо8гагп агпоип|а ол РХА ап|1 КХА сап Ъе с(иап6|а6не!у ргес|рпа|е|1 |нчй ейапо1, со11ес(е6 Ъу сеп|66|8а6оп, ап|1 ге6(аао!нес1 |нч|Ь|п пипи|ее. Е|Ьапо1 с)ер1есеа йе Ьу|1га|юп аЬе11 ггот пис1ек ас!сЬ апд ехроаеа пе8абче1у сЬаг8е|1 рЬоарЬа(е 8гоиря Соипгегюпа аисЬ аа Ха+ Ь(п6 |о йе сЬаг8е6 8гоира ап6 гедисе йе гери)а|не гогсеа Ье(ннееп йе ро!упис1ео|Ые сЬа!па |о йе ро(п| ннЬеге а ргес(раа|е сап готт.
Е|Ьапо1 ргес(раа|юп сап ТЬегегоге оп1у оссш (г" са|юпа аге ана|1аЫе ш кийк(епт с)иапт(гу |о пеи|га1|хе йе сЬаг8е оп йе ехроае6 рЬоарЬа|е геядиея ТЬе тоьг сопипоп1у наес( сабопа аге 8Ьолнп |и ТаЫе А8-1 ап6 аге АеаспЬе|1 Ье!онч. ° Аплпгоп(ипл асегате 18 (тес)иепс!у пав со гес(исе |Ье соргес(риа6оп ог" ип|нап|е|1 соп|апппапь (е.8., с(НТРа ог 0118оаассЬагЫеа) ъчгЬ пис1ек асЫя Рог ехатр1е, ||но аег!иепг(а! ргес|раа|юпа ог" РХА ш йе ргеаепсе ог" 2 м апппоппип асе|а|е гели!г ш йе геп|оча! ог')999о ог" |Ье с(МТРа ггот ргерага|юпа ог" РМА (О1|ауата ап|1 Вег8 1982). Апппопшп| асе|а|е 18 а1ао йе Ьеаг сЬоке |нЬеп пис1ек аснЬ аге ргес(раа|ед айег с(18е86оп ог" а8агоае 8е!в нч(Ь а8агаае.
ТЬе иае ог" й(а са|юп гес)исеа йе роаяЬ|16у ог' соргес|рпабоп ог 0118оаассЬагЫе с!18еаг!оп ргодис|я Ноъчечег, апипотшп асе|а|е аЬои16 по| Ъе наес) лнЬеп йе ргес)раа|ед пис1ек асЫ 18 со Ье рЬоарЬогу1а|ей япсе Ъас|егюрЬа8е Т4 ро1упис1ео|Ые Ыпаае |а (пЫЬКе6 Ьу апипопшт юпя ° И(Ь(ипг с)г(ог(Ие 18 (тес!иепбу пав |нЬеп Ь(8Ь сопсепггайопа ог' ейапо! аге гес)и(ген (ог ргес(рпа6оп (е.8., |нЬеп ргес(раабп8 КХА). 1лС1 18 чегу |ю1иЫе (п ейапо1к 801игюпа ап|1 |8 пос соргес(рпа|ес1 шЬЬ йе пис1ек асЫ.
5та!1 К)х)Аа ((КНАа ап6 55 КЫА8) аге ао!иЫе ш ао!и- тюпа ог' Ь|8Ь юпк а|геп8|Ь (ичйоиг е|Ьапо1), |нЬегеаа 1аг8е КХАа аге пос. Весаиае ог" й!а 6(ггегепсе (п ьо1иЬ(16у, ргес(риабоп (п Ь(8Ь сопсепсгагюпа ог' 1лС1 (0.8 м) сап Ье наес! |о ри6- лу 1аг8е КХАа. ° $ойипг сЫогЫе (0.2 м) 8Ьои16 Ье иаед (г" |Ье Р)х(А ьатр1е сопсаша 5Р5. ТЬе Аетег8епс геша(па |ю1иЫе ш 709о ейапо1. ° 5ойипг асетате (0.3 м, рН 5.2) 18 наес) гог тоат гоибпе ргес(рпабопа ог" РХА ап6 КХА. ТАВ(.Е АЗ-т 5аИ 5о!и6опа 5тоск 5О|ит|ом (м) Г|мА| Сомсемткатюм (М) 5Атт Апипоп(шп асс|а|с Нйшш смогЫе 5ос(шш сЫог!де 5ос((шп асе|а|е 2.0-2.5 0.8 0.2 0.3 10.0 8.0 5.0 3.0 (РН 5.2) Уп6! а ленч уеага а8о, е|Ьапо1 ргес|рпа6оп |чав гои6пе1у сагпед от а|!о|н |е|прегатге (е.8., ш а Агу-ке)тейапо! Ьа|Ь).
ТЬ(а 18 полн 1|по|нп со Ье иппесеааагу. А| 0'С (п |Ье аЪаепсе ог" сагпег, РХА сопсепггаг(опа аа 1оън аа 20 п8)т1 ич11 (огт а ргес|рпа|е йа| сап Ье срлап6|абне1у гесочегес! Ьу сеп|66л8а|юп ш а т!сгоги8е. Нончечег, |нЬеп !о|нег сопсеп|га|юпз ол РМА ог негу япа11 (га8тепга (<100 пис!ео|Ыеа ш !еп8й) аге ргосеааед, тоге ех|епяне сеп|66л8а6оп |пау Ье песеааагу |о саиае йе ре1!е| ог пис1ек асЫ |о а|1Ьеге 68Ы1у со йе сеп|66л8е |иЬе.
Сеп|пй8а|юп а| 100,0008 (ог 20 — 30 |пши|еа а1!оша |Ье гесочегу 01 рко8га|п с)иап66еа 01 пис!ек асЫ |п |Ье аЬаепсе 01сагпег. Сопсепггаггп8 !Чис!егс АспЬ АВ.!3 'гаЕЬеп Пеа1ш8 ч ПЬ япаП апсоипся оЕ Е!)5)А, и Ь ргис1епс со яаче 1Ье есЬапо1к яирегпасап1 Егот еасЬ ясер ип61 аП оЕ сЬе Еу!я)А Ьая Ьееп гесочегег1. ТЬ!я гесеп6оп Ь еярес)аПу ппрогсапс аЕсег ргес!рПасея оЕ Еу!н)А Ьане Ъееп ч аяЬес) ччсЬ 70ого ейапо1, а сгеастепс сЬас оЕсеп 1оояепя ТЬе ргессриасея Егот сЬе и аП оЕ сЬе сиЪе. ОЕ55О!сгЕггд ОНА РгесЕрЕЕаЕе5 'с)п61 а Еесч уеагя а8о, Е!ХА ргесгрПасея гесочегег1 аЕсег есЬапо! ргес)риа6оп снеге с1пес1 ипдег часишп ЪеЕоге Ье!08 гег)!550!нег). ТЬ)я ргасске Ьая посч Ьееп аЪапбопе6 11) Ьесаияе Пея)ссасед реПеся оЕ Е1ХА 61550!не 51очг1у апг! шесПк)епбу апд !2) Ьесаияе япаП Ега8тепся оЕ с1оиЫеясгапдес! Е5ХА (<400 Ър) Ьесоте с1епасигег1 ирои Пгуш8, ргоЬаЫу ая а геяи1с оЕ 1ояя оЕ йе яса- ЬП)х)и8 яЬеП оЕ Ьоипс1 ячасег гио1еси1ея (5нагеп ес а1.
1987). ТЬеяе г)ауя, йе Ьеяс ргасске Ь со гепюче есЬапо1 Егот йе пис1ек асЫ реПес ап6 Егоги йе я!дея оЕ йе СиЬе Ьу ПепС!е аярсга6оп апс1 йеп Со ягоге йе ореп СиЬе оп СЬе ЪепсЬ Еог -15 ииписея со аПосч тоя оЕ сЬе геяс1иа1 есЬапо! со енарогасе. ТЬе 56П-11атр реПес оЕ пис!ек асЫ сап сЬеп Ье 61550!Чег) гарЫ1у апг1 сотр1есе!у сп йе арргорпасе Ьийег.
1Е песеяяагу, ТЬе ореп сиЪе сопса!и!08 йе ге6!550!нег) Е1ХА сап Ъе 1псиЬасес1 Еог 2 — 3 пиписея ас 45"С !и а Ьеас)пц Ыос14 со аПочг аиу сгасея оЕ есЬапо1 со ечарогасе. ТЬе ргес)риасес1 Еу)х)А Ь пос аП Еоипг! ас йе Ъоиогп оЕ йе сиЪе аЕсег сепспй8а6оп ш ап ап81е-Ьеас1 госог. 1п ТЬе саяе оЕ ппсгоЕи8е сиЬея, Еог ехатр!е, ас 1еаяс 40ога оЕ сЬе ргес!рПасес1 Е!)Ч)А Ь р!аясегег1 оп йе ъчаП оЕ ТЬе тЪе. То тах)тсхе гесочегу оЕ Е5ХА, ияе а р!репе 6р со гоП а Ьеас1 оЕ яо1чепс яечега1 сипея очег йе арргорпасе яе8тепс оЕ сЬе ъчаП. 1Е сЬе яагир1е оЕ 15)х)А Ь га6)пасс!Че, сЬес14 сЬас по с1есессаЫе гасПоасбчиу ге!паша ш сЬе сиЪе айег сЬе 615501че6 у!ХА Ьая Ьееп геиючед. СаггЕег5 ТАВЕЕ АВ-2 Сагпегя ТАеокксми СОмсемткат1Ом АичАмтАсея!015АОчАмтАоея Саккшк Уеая 1КМА Ь !пехрепя|че, Ъш Ь Ьая 1Ье ТПяагЬ апсаке сЬас Ь саппос Ье ояегС Еог рге- «гркаипк ппе1ек асЫя ЕЬас чоП Ье пяегС ая шЬясгасея Ы геассюпя сага!уаегс Ьу ро1у- пое!еосЫе Ыпаяе ог сеишпа! сгапяЕегаяе.
ТЬе сеппспс оЕ уеаяс КС4А аге ехсеПепс шЬ- ягагея Еог 1Ьеяе епаушея апгС гнои!о сошресе ч11Ь 1Ье сеишш сопггсЬосегС Ъу 1Ье 1агке1 пос!ек аеЫ. С!усокеп Ь ыпаку пяегС ая а еагиег чЬеп ппе1еге ае!дя аге ргес1рссасегС ч!1Ь 0.5 я апппопшш асесасе апгС Ьоргорапо!. С1усокеп Ь пос а ппе!е1е ае1с1 апгС сЬегеЕоге г1оея пог согпресе ЧПСЬ СЬе СагкеС пос!ек аекЬ ш яоЬяегргепс епаушаеге геаеСюпя.
Номенег, и сап гпсегЕеге чПЬ гпсегассюпя Ьесчееп Е1ХА апгС рго1апя ЕСа81аггС апг1 Еигапяя 1990). Сапеаг ро1уасгу!агпЫе Ь ап еЕПегепс пешга! сагиег Еог ргеегриаипк ргсокгаго апгоппь оЕ пос!его ае!гЬ чигЬ ейапо1 апг! ргосеспя ънЬЬ асегопе 15сгаыя апс! Чаг- яЬаня!гу 1984; Саа!аггС апгС 51гапяя 1990). 10-20 Сгкугп1 Уеая СКХА С!усокеп 50 Сгкйп! Ыпеаг ро1уасгу!аппг1е 10-20 Сгкйп! Сагпегя !ог соргес!риапь) аге Епегс яиЬясапсея сЬас аге ияег1 со гтргоче сЬе гесочегу оЕ япаП сргап66ея оЕ иис1ек аскЬ г!ипп8 есЬапо! ргессрПабоп.
1пяо!иЫе ш ейапо1к яо106опя, сагпегя Еопп а ргес)риасе сЬас сгаря йе саг8ес пис1ек аскЬ. Е)ипп8 сепспЕи8ас)оп, сагпегя Пепегасе а ч)51Ые реПес 1Ьас ЕасПЬасея ЬапППпц оЕ йе саг8ес пис1есс аскЬ. ТЬ15 и!ау Ье сЬесг гиа)ог ни сие: Ая ТПясияяе6 аЪоче, есЬапо1 ргес)рЬасюп — ечеп оЕ яиаП апсоипся оЕ пис1ек аснЬ )и ТП1ше 501исюп — Ь гетаг1саЫу ейк!епс. Сагпегя с1о Псбе, ойег йап ргочЫе чЬиа1 с1иея со сЬе 1оса6оп оЕ сЬе Саг8ег пис1ек асЫ. ТЬгее япЬяСапсея аге сопииоп1у ияес) ая сагпегя: уеаяС С!(!Я)А, 81усо8еп, апг) Ппеаг ро1уасгу!атЫе. ТЬесг ас1чапСа8ея ап6 с1ЬагЬ апга8ея аге 1икес1 )и ТаЪ|е А8-2. А8.14 Аррепг((х 8г Соттоп1у (Егес( ТесЬпщиег гп Мо1еси1аг С!оп(п8 Н15ТОК1САЕ ЕООТМОТЕ ЕЕЬапо( ргесзрзсасюп ргес(агам гпо(еси(аг с!оп!п8 Ьу — 50 уеагя И ъчах Езгсс иьег) ас а гпегЬсх) со сопсепггазе Ью(08!саИу асПче пис1е!с аос) Ьу).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
