Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 138
Текст из файла (страница 138)
( 1992). ТЬс соаоп озаее Гог огасг пыппзпа!з досз пог 0)ЕЕсг 8гсаг1у Ггогп ГЬозе ргсзеогаа Ьсгс Гог Ьппзап 8спсз. з ТЬс 68огсз !и рагспгЬсзсз заоп ГЬс Егсепспсу ы)ТЬ ззмсЬ а рагпсо!аг салоп Ь озса го зрес!!у а сспазп апгшо асЬЕ Рог ехапгр!с, оЕ ГЬс а)ашпе гсзеаосз ргезспг ш 1490 Ьшпап ргогешз, 28!о ага зрсс)0сй Ьу ССС, 41.6% Ьу ССС, сгс. Азрага8(пе Азраг!к Ас84 Сузгеше 6!п!ашк Ас)г) 6101апппе 6!усгпс Ьуз!пе Ме!Ьюшпе РЬепу1а1ап)пс Рго1гпе ААВ (42.3) 6А(У (42.8) ()6(У (40.6) 6АА (39.2) САА (24.8) А1ЛУ (33.1) АСА (12.9) ПУА (5.5) СИ) (11.1) СбгА (6.5) АС(У (22.4) АСА (25.4) ()66 (! 00) (УА(У (40.0) 6(ЛУ (16.4) 66А (9.3) ААС (57.7) ГзАС (57.2) 66С (59,4) 6А6 (60.7) СА6 (75.2) А7А Арреид!х 7: Сойот апдАтто Ао(й С А 000 РПе ООС РПе ООА 1еи 006 (.ец ОС О Яег ОСС Зег ОСА Зег 066 Зег ОАО Туг ОАС Туг ОАА 81ор (Оспге) ОА6 81Ор (АгоЬег) 060 Сув 06С Сув 06А 8(ор 066 Тгр О С А 6 И л с Е е С САО Н1в САС Н1в САА 61п СА6 6!и СОО 1еи СОС 1еи СОА 1еы С06 1еи ССО Рго ССС Рго ССА Рго СС6 Рго С60 Аг9 С6С Аг9 С6А Аг9 С66 Аг9 АОО !(е АСО ТПг АОС 1(е АСС Тпг АОА Пе АСА ТПг А06 Ме1 АС6 ТПг ААО Авп ААС Авп ААА 1 ув АА6 1 ув А60 Зег А6С Зег А6А Агд А66 Аг9 600 Ча) 60С Ча) 60А Ча) 606 Ча) 6СО А!а 6СС А!а 6СА А!а 6С6 А!а 6АО Авр 6АС Авр 6АА 6(и 6А6 61< 660 6(у 6!у 66А 61у 666 6!у 0 С А 6 Е160КЕ А7-1 ТЬе Сепе(!с Соде (о о о о о о с го о о.
Я 2пд ров!1(оп о1 сог(оп го о. 0 о С А о' 6 о о о. о С А 6 Д Атйег Мигапгл аиг( АтБет оирргеяогл А7.5 АМВЕВ МЕ)ТА)ъ|ТБ А)ъ|Ел АМВЕВ ЮРРВЕ55ОВЯ 1п аплЬег пш(апь, а сос)оп (Ьаг крее)6ез ап апипо асн1 гп а ргогеш Ы гер!асес) Ъу (Ье сЬаш-гегпипа6пд сог(оп, Т)АС. Весагье (Ьеге ь по (КЬ)А йаг гесодшгеа Е)АС, ггапа!а6оп оГ тКЬ)А сеая еа аг йе роябоп оГ йе сЬаил-гегпипадпд со<)оп, йегеЬу депега6пд ап )псотр1еге Ггадтеп( оГ йе рго(елп. ооте ягаша оГ Е со!1 сап аирргегь йе сЬалп-(егпипа6пд рЬепогуре оГ аплЪег сос1опя |ггекрес6че оГ (Ье депе |п ъчЬлсЬ йе атЬег пшга6оп ы 1осагед. ЯисЬ вага)пк саггу а тигасюп йаг сЬапдеа (Ье аег)иепсе оГ йе апг)сох)оп 1оор |п а раг6си!аг арес(ех оГ(В)ъ)А.
ТЬе аирргегьог глъ)ъА гесодпгаеа (Ье агпЬег сог(оп апг3 )пкег(к 1(х содпасе апппо ас)г) а( йе сЬа)п-сегт(па(|од сос)оп, а1!оъч(пд ргогегп ауп(Ьеяа го сопдпие. ТЬе еГГлс(епсу оГ (Ыа ргосегь Ы по( аЪю1ше. Гп а яга|п саггу(пд а а(гопд агпЪег ырргеаюг, аирргекяоп оГ ро)урерг|г)е сЬа)п гегпппабоп ппдЫ оссиг 5096 оГ (Ье липе. 1п ъчеа)г)у |шрргеыяпд хггалпя (Ье еГГлс)епсу тау Ъе 1096 ог 1еяи А11 оГ (Ье ырргегьог яга|па иаеъ( ш то1еси!аг с!отпд аге аггопд юрргегьогя 171ГГегепг ырргегьог (К)ъ)Ах (паегг с)лТГегепг алшпо асн(а аг (Ье сЬа(п-гегт!паг(пд Е)АС сос|оп.
А Геъч атЬег ялрргегьога сап а1ю юрргегь осЬге (()АА) пшгадопа Ьесагье оГ ъчоЪЫе )п йе (Ыгг3 роя6оп оГ (Ье сох)олл. Аг опе липе, 6 ъчах тапъ)а(игу Гог Ъас(епорЬаде )ъ чес(ога Со саггу атЬег гптадопа ш депеа епсогдпд спас рго(е(пя 13 ъчаа Ъебечег| (Ьа( аисЬ лпта(юпхт пщЬ( гег(исе (Ье Па1с оГ гесотЪлпапг ЬасгепорЬадеа аргеаг3(пд Ггот йе 1аЪогагогу )пго Гле!6 агга)па оГ Е. со!1, Нов(а Гог (Ьезе чесгогз саггу опе ог гъчо аггопд атЪег аирргеыога — лиРЕ апг3 лирР— йаг )паегс д|игатше апг3 Гугояпе, геарес(гче1у, аг Е)АС сох)опя ТЬеае аирргегьога аге по( (п(егсЬапдеаЫе.
опте атЪег тигасюпа лп ЬассепорЬаде Х чесгогк аге ялрргегьес1 оп1у Ьу лирЕ (е.д., РатЗ) апс) о(Ьега аге аирргегьег3 оп1у Ьу лирР (е.д., 5агп7 апг3 Еат100). ТЬе ргекепсе оГ аирргегьога л)оек пог депега1- 1у аГГес( йе дгоъч(Ь оГ (Ье ЪаслепорЬаде )ъ чес(огх (Ьаг г)о пог саггу агпЬег пшла6опя Мох( ЬасгепорЬаде 7 чу(ога сап (ЬегеГоге Ье агьауег) апд ргорадагег) оп а а(га|п оГ Е. сод аисЬ аз 1Е392 йаг сагПек лирЕ апс3 зирР. Н3$ТО313САЕ ЕООТ)ъ|ОТЕ Сопг))Попа! пв(аПопа аге а арео|а! с)аъа о1 тига()опа йа( сап оесиг |и а дгеа( чапе(у о1 депеа (п а япд|е огдапьпл. А)(ЬоидЬ (етрегагигеьепх(дче гпи(апь о1 Огоюрйда, Хеигозрога, апс1 Е.
сой Ьас1 Ьееп 'ьо|а(ес1 апг) сЬагас(епхег( уеагх Ье1оге, йе 643 роъчег о1 (етрегагиге-хепидче апг) апъЬег плигаоь оп|у Ьесагпе аррагеп( й (Ье еаг1у 3 960а ъчЬеп Ег(даг, Ера(е)п, апс( ГЬе(г содеадиех ьо|агес1 апс3 апа)улес) а |агде сойес|юп о1 сопс(П)опа! (е(Ьг4 ти(аг(опа о1 Ьае(ег(орЬаде Т4 (Ег)даг апс3 Е)е(аих)а 1964; Ерхле)п е( а|. 1964). ТЬе йгх( сопс)33(ооа) |е(Ьа| гпигаоЬ о1 Ьас|егюрЬаде Т4 ъчеге 'ьо!а(ес3 г(и)(е легепг)(р(гоиа)у Ьу а Са(ТесЬ дгас(иа(е агиг)еп(, Наггь Вепь(е|п, с)иппд а 1гиЫегь хеагсЬ (ог ап епйге|у г)3((егепг с)аъа о( рЬаде гпигапЬ (Ег(даг 1966). Вегпве|о, йеп а агиг)епг о1 Хеиггьрога депейся Ьас| ъчапс3егес| )ого йе Ерале(п-9(е(пЬегд |аЬога(огу опе ечеп|пд Ьор|пд ло регмас|е югпеопе (о до ъъ|(Ь Ыт го (Ье гпо|йея (пъгеас) Ье 1оиос3 Ытхе(1 р)с)ипд ЬассегюрЬаде Т4 р)ас)иез ах рагг о1 а Ьип( Гог "аоП-гй" плигапь (Ьа( сои(г) дюъч оп Е.
соЬ К(К) Ьи| по| оп Е. со(! В. Е)иг)пд ГЬе соиье о1 йе ечеп(пц, ГЬеге ъчак тисЬ г)еЬа(е аЬои( ъчЬе(Ьег ти(апгх о1 йь с|ага сои)г( ех)х(, ийй Вегпаге(п агди(пд аггопд)у (Ьаг йеу адои|д. Ерхге(п апг) 9(е(пЬегд ъчеге тоге а)ъерг)са) Ьил, аъ епсоигадегпеги (о Вегпаге(о, ргот)аег) (Ьаг апу ти(аога |ъе Во)а(ел( ъчои(г( Ье патег) а((ег ЬВ то(Ьег. ТЬе пех( г)ау, ъчЬео йе гехи((х о1 йе Ьип( ъчеге апа)укес), — 20 ти(апЬ ъч(ГЬ йе ехрес(ег) рЬепо(уре ъчеге 1оипй ТЬе ргогпЬе ъчаь )сер( Ьу Сгапа(айпд йе Сеггпап ъчогл) "Вегпа(е(п" |о(о 3(х Епдйед ег)и(ча)ео( "ап1Ьег." диЬхег)иепг ъчог)ь хЬоъчег( йас (Ье "апгргП" гпилапЬ ъчеге пол ъч4лаг йеу 1(гхг арреагес! (о Ье, я|осе йеу дгеъч |п тапу х(га(пъ о1 Е, сой К пог |уаодеп|е 1ог )..
Сепег(с тарр|пд хЬоъчег) (Ьаг аплЬег или(апЬ ъчеге ъч)де|у с)(а(пЬигег) очег йе Ьас|ег(орЬаде Т4 депогпе, апс! рЬуа)о(од(са! Сеа(х едоъчес! ГЬа( йе|г герйсагюп ъчаь Ь|ос)сес) а( гпапу с(3((егепг Яадеа (п поп реп пьяче Ьоаля ТЬе Ьоп( 1ог рагосЫа) "аой-гП" пв(апЬ Ьаг) (Ьеге1оге ипсочегег) а депега| с|ага о1 сопл)3()ооа))у |е(Ьа1, аирргехаог-хепх)1(че ти(апга (оса(ес( |и ЬаслепорЬаде депех ГЬаг ъчеге рге|йоиа|у сотр)е(е)у (пассегь)Ь|е. Ягапде)у епоидЬ, попе о1 ГЬе бгхл дгоир о1 20 ти(ап(а ъчеге р)с)ъес) Ьу Вегпяе|п.
П (игпег) ои| йал Ье Ьас| Ьееп Яат|пд ЬВ Ьас(ег)а) ъч)ге (оо епбвяаадсайу апс| Ьас| )а|3)ег) а33 о1 (Ье Ьасгег(орЬадех( А7.6 Аррепадх 7: Сот(опт апт(Апттпо Астт(5 ТАВЕЕ А7-2 АгпЬег 5прргеааога ()ает( !п Мо!еси1аг С!оп!п8 Ам!мо АОО тКЬ)А Семе Гкоат тнн!сн 5ОРРке55ок Соиом Кесосм!хео 1М5ЕКТЕО 5ОРРКЕ55ОК 15 0ЕК!ЧЕО 5ЕППЕ 81итапппе тугояпе 81Шапипе тугояпе агоЪег (ПАС) агпЬег ((тАС) агпЬег ((тАС) агпЬег (!.тАС) апс1 осЬге (т)АА) атпЬег (()АС) апт) осЬге ((тАА) 5Иро (5И! ) 5ирЕ (5иП) 5ИРР (5ИП!) 5ирВ (5ИВ) 5ИрС (5ИС) тетУ 5)ИС тутТ Х)п(т тут 7 ЛМ1)ЧО ЛС10Ь Виу а!!рЬа0с ров!т!не Ьус)горЬОЬ!с сиагдет) ро!ат аго НС1)КЕ А7-2 Ттепп Ет!а8гат Непп т)!а8гапз 5Ьонн!п8 тЬе ге)ат!опаЬ!ра аптоп8 20 сопттпоп агп!по асЫ5.
(Кес)гатнп, пай регги!55!оп, (гого Тау(ог 19ВЬ.) ОЕ йе 20 агапе(атс( а-апппо асЫК (ТаЫе А7-3) тЬат аге (псогрогатес( )пто В рготеша, 19 Ьане йе деиега1 аттис!иге 5Ьотнп тп ЕЬе 68иге ат йе гт8ЬЕ. К „, (о гергеаеп(5 ЕЬе ят(е сЬаш оЕ ЕЬе апппо асЫ. ТЬе ттнепт)етЬ асЫ, рго!ше, га 1 теа!!у ап птппо асЫ )и тнЬтсЬ ЕЬе 5Ые сЬа(п 15 Ьопс(ес( то ЕЬе пЬгодеп атотп оЕ йе рертЫе 8тоир. Ехсерт (и 8)усше, тнЬеге тЬе ят(е сЬатп 15 а Ьут)голеи атош, йе а-сагЬоп 15 ааупииегпс апс( га а1тнауа йе Ь-15ошег.
ТЬе а-аш(по асЫ5 сап Ье аггапдес) (пто аенега1 8гоира ассогйп8 то тЬе сЬеписа1 ргорег6еа оЕ ЕЬе(г 5Ые сЬа(па (ТаЫе А7-4). ТЬе апипо асЫК сап а15о Ъе 8гоирес) ассогт)(п8 то наг!оса ойег сПтепа, (пс1ис)(п8 яге апт( Ьус)горЬйс(ту (СЬойта 1976; Куте апс1 Ооо11111е 1982; Тау!ог 1986). ТЬе ге!а6опаЬтра атпоп8 йеае 8гоир(п85 оЕ аш(по ас(с(5 сап Ье гергеаептес) ш а депп с((адгаш (Бдите А7-2), тнЬ(сЬ 55 Ъаает( оп ЕЬе пшта6опа! шатНх оЕ 19ауЬОЕЕ (1972). ТЬе ттепп с((адгатп 5Ьотна йе ге)а6опаЬтра аиюп8 20 сопииоп апппо асЫ5.
Суатетпе 15 5Ьоънп )и тъно 1оса6опа: ТЬе гет(исет( Еогш, су56пе (СН), сопташа а ро1ат(хаЫе 5-Н Ьопс( апт( 15 йегеЕоге яип)аг ш аогие тнауа то аеПпе (тнЬ(сЬ сагпеа ап О-Н Ьопб). ТЬе охЫ(хет( Еогш, суатетпе (С5-5), сопташа по ро1ат(хаЫе Ьопс( апс1 15 йеге(оге тиоге Ьус1горЬоЬ(с тп па!иге. Апг!Но Аси!5 А7.7 ТАВЕЕ А7-3 Могпепс1а!Пге о1 !Ье 20 5!апг!агг! а-Аш1по АсгВВ Ммемомвс Рок Тнкее-1еттек Втмаое Оме"ееттек 5УмВОТ Оме.сеттек ВумВОТ АмгмО Ас10 ТАВЕЕ А7-4 РгоРег!!еа о1 1 а-Агп1по Ас!г!5 МА!Оп РВОРект1е5 Ое 51ое СнАРН5 АМ1НО АС1О5 Мо вЫе сЬа!и А11РЬабс Нус!соху! Вгопр АсЫк Вгопр АшЫе Вгопр Ваяс 8гопр 1шЫаао1е Вгопр Агопгаос Вгопр 5п11пг-сопгашшо С!у А! а, Ча!, Теп, 1! е, Рго 5ег, ТЬг Авр, С1п Авп, С!и Ьув, Аго Нь РЬе, Туг, Тгр Мег, Сув ТАВЕЕ А7-5 Мо!аг Сопеегвюпа !ог Рго!е1пв МОЕЕСОЕАК ЧЧЕ1СНТ ОЕ 13ммОО1мео РВОте1м МО1АВ СОмсемткАт1Ом ое Ркотлм 5осстюм Сомтммвмс 1 пвВупт! АРРКОХ1МАТЕ !МСМВЕК ОЕ ЙЕ51ОНЕ5 МОеесоее5 Ое РВОте1м па 1 гп! ое А 5оготюм Сомтавмвмс 1 птВугп! МОее5 Ое РВОте1м 1м 1 гп! от А Воготюм Сомтавмвмс 1 пгВ7гп! 10-1 м 1.25Х10 вм 166 х10 ЕМ 2.5Х1О в М 5.0 х 10 ' м 10-4 м 10" в б Х 10'в 7.5 х 1О' 100,000 80,000 9!7 1.25 х 10-в 1.66 Х 10-в 2.50 х 10-в 5О х 10-1 734 10'в 60,000 550 12Ь х!0'в 3 х 10'в б х 10'в 40,000 367 20,000 183 10 г 10,000 92 А1ашпе Аго!и!пе Аврага81пе Аврагбс асЫ Сувге1пе С!пгашк асЫ С1шапппе С!усгпе Н!51!0!па 1во!епсше Еепс1пе Еув!пе МегЬЫп!пе РЬепу1а!ап1пе Рго!гпс 5еппе ТЬгеоп!пе ТгургорЬап Тугояпе Ча1!пе А!а Аго Авп Авр Сув С!п С1п С1у НЬ Ве 1.еп Еув Мег РЬе Рго бег ТЬг Тгр Туг Ча! А К м !3 С Е 62 С Н 1 Е К М Р Р 5 Т УЧ У Ч А!ап1пе АКЬбп1пе Аврагао!Ме АврагОк Супе! пе С1ПВгаппс ()-гаш!пе С!ус!ее НВКЫше 1во!епс!пе Еепс1пе Ьегоге Ь МегЬ!опше Репу!а1апше Рго!ше беппе ТЬгеошпе ТЪЧургорЬап ТУгов1пе Ча!впе А7.8 Аррепйх 7: Содопя апААпппоАпй о я — о — 8 у о ! о — е Ь .й — о — 8 о ! ь 8 +т — о — о ь Ь +е — о — 8 ! у о ! о о о м ее М ~Л о +е — о — о о о* о — л х < х о„ыи О Й ее й х Х Ю $ Ю Х О О ь Ю о й Ю Ю 3' $ Ю й $ Ю .о 1 о о о о Б о о о о о > о и о < о с Е < о Э Э о.