Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 135
Текст из файла (страница 135)
Ехопис1еаье П1 )ь попргосеьяче апд туркаиу цепегатеь рори1а6опь оГ шо1еси1еь йат Ьаче Ьееп геьестес1 то япп1аг ехтептя ТЬль ргорегсу ятпр1лцеь йе саь1с оГ )ьо1а6пц РХА тпо1еси1еь ъчЬоье 1епцтЬь Ьаче Ъееп гет(исес( Ъу йе с1еягет$ апюипт. Рог Гигйег с1етат!ь, р!еаье ьее тЬе ш(отша!(оп рапе1 оп ЕХОХ$ЛСЕЕА5Е И! ш СЬартег 13. $)5Е5 1.
Сепегаг!пц рагиаиу геьестет1 РХАь йат сап Ье пьес) аь ялЪьтгатеь Гог тЬе К1епоъч Гтацшепт (е.ц., 1п йе ртерага6оп о!' ьттапйьреслцс ргоЬеь) (!ог а япи1аг арр!ка6оп Гог ЬассепорЬаце Т4 РХА ро1ушетаье, р!еаье ьее г(ците А4-2 (р. А4.19!). 2. Сепета6пц пеьтес1 ьегь оГ т$е1е6опь оГ тЬе тегпипа1 ьес)иепсеь оГ 6оиЫе-ьтгапт)ет)1(пеаг РХАь. ТЬть геас6оп !ь иьиа1!у сагпед оШ 1п соп)иост!оп тч!тЬ пшпц Ьеап пис1еаье от пис1еаье 51 апт1 (ь ап а!тегпат!че со ияпц ВА$. 31.
Весаиье ехопис1еаье П1 чч)П т1ецгат1е РХА чч(тЬ гесеььей 3' теппип' Ьит пот тетш(п! лч(тЬ рготгисипц 3' япц1е ьтгапс)ь, К сап Ье иьес1 то стеате ипЫлгес6опа1 ьеть оГ 6е1ет!опь (Неп()со(Г 1984). Т1шь, В йе ьиЬягате тпо1еси1е сагпеь а рготтис(1пц 3' тегпппиь ат опе епт1 (е.ц., сгеатес1 Ьу с((цеьт(оп чч)тЬ РьЛ) апт) а гесеььет$3' тегпппиь ат тЬе ойег, ехопис1еаье 1П лч!П с($цеьт оп1у (п опе сигестюп (Ггош тЬе гесеыет$3' тетш(пиь). АГтег А4.48 Аррепт11х 4: Епгутез Етзетс т Мо!еси!аг С!он)пд гетпоча! оЕ сЬе гези111па япц1е-зсгаптсегс зеашепсз Езчсй пис1еазе 51 ог шипа Ьеап пис1еазе) апт1 гераи.
зч11Ь ЬассепорЬаае Т4 1ЭИА ро1ушегазе, 1Ье гсе1есет1 тпо1еси1ез сап Ье 1пзегсезс шсо ап арргорпа1е чессот Ьу Ыипс-епс! 1!пас!оп. ЕХОСз!$>СЕЕА5Е !И Астгчйут 3' Ехопис!еазе 5и!ззтгасет ТЫз епзугпе Ь асПче оп 3сЬуг!тоху! сеген! ос т!оиЫе-зсгапт!ет! 0НА изПз Ыипс ептЬ ог изТЬ ептЬ сиота!и!па апра!гетС 5' Сени!гн! апг1 гесеззег! 3' сеггп!и!. ЗсЬуг)тоху! сеггва аС и!с!тз !и г)оиЫезсгапг!ег! 0НА аге аЬо зиЬзсгасез.
ТЬе 0НА тиас сопЬПп рЬозрЬотС!езсег ЬоптЬ; сЫоезсегз аге по1 с!еачегС. Стеасстопт ' Р ,, НО ОН з' Р., МПз ' ~ ехопис!еазе П! ОН з 3' НО з' Рог ехатр)ег ССАТТ АСС ,...С СТЛ Лет СС МПзт ~ ехопис!еазе П! з' з' . р он з....ССТААТСС +'глонз 'гТонз."гСон+ 'гсон Аст!чйут 3' РЬозрЬасазе 5иЬзсгасег 0оиЫе- ог з!пПСе-зсгапгсег! 0НА зчИЬ а ЗсрЬозрЬасе сени!пиз; !п1егпа! рЬозрЬотС!езсег ЬоптЬ аге по1 с!еачетС. СгеасПопг ОН з Р з ехопис!еазе П! о -'г 2Р,.
з ! 3. Поше шесЬот!з оЕ ясе-зрес)Етс шита аепеяз изе йюрЬозрЬасе гсепчассчез оЕ йе дЫТРз Еог зесоптс-зсгапг! зупсЬеяз ргсшет! Ьу йе пшсацепгс рптпег. ТЬе рагепса! сепзр1асе зсгапс! сап Ъе ргеЕегепсса11у тсеагаг!ет1 ълй ехопис!еазе !П, шсгеаяпа йе Егет!пенсу оЕ пшсапсз оЪсашет1 ироп сгапзЕоппас)оп оЕ Е со!Ь япсе ехопис1еазе 1!1 ит111 пос с1еаче йюезсет ЬопгЬ (р1еазе зее йе шЕотшассоп рапе! оп 5ЕСЕСТс!з!С АслсН5Т ЪУ!10-ТУРЕ 0НА Пз! 5!ТЕ-О!РЕСТЕ0 МСЗТАСЕЧЕ- 515 тп СЬар1ег 13). АГис1еаяея А4.49 ВасЕепорЬаце ) Ехооис!еа5е (Вас|егюрЬаце Л-!птес1ед Е. со)г) ВасгегюрЬаце Л ехоппс1еаяе сага!уаея йе ргосеяя(че, ягеряч(яе ге1еаяе от 5' пюпоппс1еог|с(ея Ггош г!опЪ|е-яягапг!ег! РМА.
А1йопцЬ йе ргетеггес) япЪяГгасе 1я г|опЫе-яягапг)ег( РМА ипГЬ а геппша! 5' рЬоярЬаге (ЫВ1е ес а1. 1967), йе епкуше яч!11 а1яо ячог)с, а1Ьеа 100-(о14 1еяя е(6с|епг1у оп я)пц1е-яггапг|ес) РЯА. РопЫе-яггапг(ег( РМАя яч!|Ь пгс1ся ог царя яч(!1 пог яегче ая япЪ- яггагея. ()5Е ВасгепорЬаце Л ехоппс1еаяе ячая пяес) гог а яч|г)е чапе!у оГ рпгрояея ш ГЬе еаг1у г!ауя от шо!есп1аг с1оп!пц (Гог геч|еяч, р1еаяе яее 1!и!е 1981). Тог!ау, И гя пяег) сЫейу 1о пюгНу йе 5'-рЬоярЬасе гепшп! ог РМАя гЬаг аге со Ье пяег) ая япЬяггагея гог огЬег епгушея (е.ц., геппша! ггапягегаяе). ВАСТЕК1ОРНАСЕ Л ЕХОМБСЕЕА5Е Ас6чгяуг 5' Ехопос|еаяе 5иЫггагег РоиЫе-я!ганс)ег) РМА яч|гЬ 5 '-рЬоярЬаге геггп|п| ог ъч|гЬ ргопиг)1пц 5 ' гепп|п3. яеасяюпг Я...ССАТСССТАС ....с с т А с с с А т с ЪасгепорЬаце Л ехопос!еаяе С С А Т С С С Т„А С ....сстА + гСон ~ ясон + гтон ~ еаон А4.50 Лррепйх 41 Епгутел Гуле|! т Мо1еси!аг С!оп!п8 РКОТЕОЕТТ!С Е!ЧУУМЕЬ Рго1еглта5е К Рго1е!паее К !5 а Ь|ВЬ!у асбче пеппе ргогеаае оГ |Ье епЬ61!5!и суре (Гог геч!елея р!еаае еее 5!егеп е| а1.
1991; 5!егеп апс)1епплеееп 1997) |Ьа| ы еесгеге|1 Ьу 51а6опагу сп11пгеь оГ |Ье то!6 Тпг|гас!Вит а)йит чаг. 1!тЪег (ЕЬе1!08 ег а!. 1974). ТЬе К ш 1Ье епгуте'5 пате !06!са1еа 1Ьа| |Ье рготеаее сап епрр1у |Ье тоЫ'е тога! гее)шгетепг Гог сагЪоп апе) пйго8еп Ьу Ьуе!го1уа!5 оГ 1|егабп. Ргогс!паае К сата1угеа Ьудго1уяе оГ а нчЫе ча6егу оГ рер1Ые Ьоп|Ь Ъ|л| ехЬ!Ь115 а ргеГ- егепсе Гог рер|Ые Ъопое сагЪоху-|егпппа! го агогпа|к ап6 ппсЬаг8е6 апппо асЫМ ТЬе гпа|пге епгуте сопяега оГ 279 апнпо асЫ геа!6пеа (М, = 28,930) (!апу е| а!. !986; Сапп)се! апд Саааеп 1989) апг) Ьаа 1|но Ьшйп8 ягеа Гог Сал', |ЧЬ|сЬ 1|е еоте йегапсе Ггот |Ье са|а1убс я|е.
ТЬе Са" юпе аге по| йгес|1у лоно)че6 !п са1а1уяя Ъп| |Ьеу сопгпЪпге |о еггпсгпга! е|аЬ|16у оГ |Ье епгугпе ГВе|ге1 ег а1. 1988; М011ег е1 а1. 1994). 1А|Ьеп Са" В ге|поче|1 Ггот |Ье епгуп|е, еотпе оГ |Ье са|а1у6с ас6нпу В!001 Ъесапае оГ 1оп8-гап8е аггпсгпга1 сЬапВех (Ва)ога|Ь е| а!. 1988, 1989). Весапае |Ье гея|!па1 ас6г6|у 15 епйк!еп1 |о г1е8габе тоаг рго|е|пя й8еяюп мп|Ь рго|е|паае К гк папа!!у сагу!ее! оп| |и |Ье ргеаепсе оГ ЕЕ|ТА. 1п а|ЫЬюп, рго1сшаас К геша!05 асбче |п|Ье ргееепсе оГпгеа (1 — 4 М) ап|1 е)етег8епта |Ьаг аге гоп6пе!у пае6 го 1уае гпа|пгпа!!ап се!15 Ге.8., 0.5оуо Я!8 ог !070 Тпгоп Х-!00).
Весапае ргоге!пахе К еГВсгеп11у ЙВе515 па||не рго|е|пя 11 сап гар161у шас6ча|е Тл!ч)ааеа ап|1 К!ч)ааех !п се11 !уаа|ея ъч16сЬ Гас!16а|еа |Ье !501абоп оГ Ь!8Ь-то1есп1аг-лче!8Ь| 131чА апд |п|ас| Й)ч)А (1А7!е8еге ап|1 Н!12 1971, 1972; Н|12 е| а1. 1975). Ргоге!пахе К !а рпгсЬааес! аа а 1уорЬ|!!гег! Ролчдег ап|1 ЕЬоп16 Ье йяю1чед а| а сопсеп1га|юп оГ 20 гп8йп1 ш егеп10 50 ткг Тгь-С1 (РН 8.0), 1.5 ткг са1стп| асе|а|е. ТЬе 5|ос11 50106оп еЬоп!6 Ъе йчЫее) ш1о япа11 а1!с)по!а ап|1 егоге6 а| — 20'С. Ап а1!е!001 сап Ъе 1Ьалче|1 апд геГгогеп аечега! 6гпея Ьш Й еЬоп16 1Ьеп Ье йьсагдес1. Уп1!)се гппсЬ сгп|!ег ргерага6опе оГ ргогеаее Ге.8., ргопаее), ргоге!пахе К пее6 по| Ье ее1Г-й8еетес) ЬеГоге пее. ТЬе ас6чйу оГ рго1елпаье К 15 еечега1Г016 Ь!ВЬег а1 50"С 1Ьап а|37 С.
Р!еаае еее ТаЫе А4-8. ТАВЕЕ А4-8 Рго|ео1у6с Епгуп|еа 5тоск 5о|отюп 5ТОКАСЕ ТЕМРЕКАТСКЕ Сопсе1чткАтюп ПЧ ЙЕАСТЮМ ЙЕАСТЮМ ВОЕЕЕК Темрекатике Ркеткеатмепт ае!Г-е!!8еаг!оп" 0.01 М ТгииС1 !РН 7.8) 0.01 М ЕОТА 0.5аУа 5!35 20 ш8йп1 !и Н,О 1 ш8йп! Ргопаае' — 20'С 37'С 0.01 м Тпа-С! !РН 7.8) 0.005 М ЕОТА 0 5оУо 505 попе гее!шее|! 20 п18!011 !и Н,О 50 РВйп! Рго1е|паае К вЂ” 20'С 37 56оС 'Ргооаае о а оихшге от аегше аоа асса рго|еааеа ио!а|ей !гош 5персошуееа дааев. а5е!1488ееиоп епшша|еа еоо1аш|оааоо п|1Ь Омаае аоо Кпаае. 5еИ||08емеа ргооаае о ргерагее! Ьу еимо1шо8 роаеаегее! ргооаае ш 10 |ом Тпа-С! !рН 75), 10 шм Нас! |о а Еоа! еооеео|гааоо о! 20 ш8|оа! аоа шеоЬа||о8 1ог 1 Ьоог а| 37"С, 5|о|а гие ае|т с08еа|ед ргооаае |о ашаП аЬЧооь а1 — 20 С |о 0880у саррее| шЬеа.
Ртотео1удс Епгутез А4.51 ОТНЕС Е)ЧХг)ГМЕй Еуьогугпеь 1.узогутез аге а Еапи1у оГ епгутез сЬас саса1уге сЬе асЫ-Ьазе Ьус1то1узгз оГ !3-(1,4) 1!п)тацез Ъепчееп )ч-асесу!ц!исозапипе апй Х-асесу1гпигатк асЫ геядиез сп сЬе ргосеоц!усап оЕ Ъассегса! се!1 сча1!з (В!а)се ес а1. 1967; РигзЬс 1985). ТЬеу ъчеге й!зсочегей Ьу А1ехапйег Непппц (1922), ъчЬо Ыепдбей ап епгупсе асс!чссу сЬас гарЫ!у 1узей юзрепяопз оЕ Ьассепа. ТЬе ргойиссз оЕ й)цезс!оп Ьу чегсеЬгасе!уюгутпез оЕ сЬе се11 ъча11з оЕ Ьассепа счете Ыепдбей !и йе 1асе 1950з, счЬкЬ аПоччей йе зсгиссиге апс1 согпроядоп оЕ йе зиЪзсгасе со Ье с1ейкес1 (Еог течсеъч, р1еазе зее !о11ез 1960).
1,уюгутез аге ъчсйе!у йсзспЬисей !и пасите апс1 аге ехргеьзей чтЬегечет йеге сз а пеес1 со 1уье Ьассепа1 се!1з, Еог ехатр1е, йиппц ге1еазе оЕ ЪассегюрЬацез 6 оси 1пЕессей се11з, оп сЬе ытГасе оГ чегсеЪгасе пшсоза, аисс си а цгеас пшпЬет оГ зесгесюпз оЕ й)ГГегепс апппа1з, ЬосЬ чегсеЪтасе апд шчегсеЪгасе. ТЬеге Ь ио зсгиссига1 япп1апсу Ьессчееп чегсеЪгасе апй ЬассепорЬаце-епсодед 1узогупсез зисЬ аз ЬассегюрЬаце Х епйо1уяп апй ЬассепорЬаце Т4 епйоасесу1птгаспЫазе. 1и пю1еси!аг с1отиц, четсеЪ|асе 1узогутиез !е.ц., ецц-счЬЬе!узогупсе) аге изей ас РН 8.0 ш согпЬспасюп чч)сЬ ЕРТА апд йесегцепсз со ВЬегасе сояиЫ апс1 р1аяиЫ РЬ)Аз Еготп сЬесг Ьассепа! Ьозсз (Сойзоп апй Чарпе)с 1973). Рог Еигйег дега!)з, р1еазе зее йе !пГоппайоп рапе! оп ЕЧ5ОгУМЕ5 сп СЬарСег 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
