Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 132
Текст из файла (страница 132)
ВасГепорЬацеа Т7 апт) ТЗ КХЛ ро1ушегаьеь Ьаче Ъееп с1опет) апс$ ехргеаьет$ !п Е. со6 1Рачап1оо ет а1. 1984; ТаЬог апт1 К)сЬагт)хоп 1985; Могг)х ет а1. 1986), апс1 ЬастегюрЬаце Т7 КХА ро!утпегаье Ьаь Ъееп с1опет$ апт$ ехргеяет$ ш уеаат $СЬеп ес а!. 1987). Честить саггу)пц тЬе ЬастегюрЬаце Т7 ргошотег шау йегеГоге Ье пает) со ехргеха с1опет$ цепеа Гп чтчо Гр1еаае аее роют 2 ипс1ег $)аеа Ъе1отч).
$З5Е5 1. ВуптЬеяа оГ япц1е-ттгапт)ет$ КХА Гог ите аа ЬуЪпецхаооп ргоЪея Гипстюпа1 шКХАь Гог тп ч)тго !тапа!агюп ауатепь, ог аиЪйгасеь Гог тп чаго ар!к)пц геастюпя ВасЬ оГ йе тЬгее КХА ро1ушегаьеь Ьая а ЫцЬ т)ецгее оГ ерес16сау Гог ть соцпате ргошотег. 2. ТЬе ЪастепорЬаце Т7 тгапаспр6оп ьуьтеш Ьаь Ьееп иаес) то ехргеаа с1опет1 цепеа тп Ьасгепа ГТаЪог апс1 К)сЬагйоп 1985; цтис)1ег апт$ МоГГатт 1986) апт$ ш уеаьт !СЬеп ет а1. 1987). Ттно туреа оГ ЬассегюрЬаце Т7 ехргеааюп ~учтешь Ьане Ьееп т)ене1орет) Гог Е, со)т, 1п тЬе Гтгат ануя теш, ьтаЫе 1уаоцеп~ ате еатаЫыЬет$ тн)тЬ ЬастепорЬаце ). саггушц тЬе ЬастегюрЬаце Т7 КХА ро1ушегаье цепе ипт1ег йе соптго! оГ йе Е. со!т !асУЧ5 ргошосег.
Р1аяшт)а сопса)шпц тЬе депе оГ 1птегеат ипт)ег тЬе соптго1 оГ тЬе ЬастепорЬаце Т7 рготпотег аге йеп 1птгот)исет$ тпто тЬе 1уаоцепа соптатп)пц тЬе ЬастепорЬаце Т7 КХА ро!ушегаае депе. Ас6чатюп оГ тЬе ЬастепорЬаце Т7 ргошотег ь тЬеп асЬтенет1 Ьу )аоргору)тЬю-$3-0-ца!астоят)е 1пт)ист)оп оГ йе Гас))ЧЗ ргопюсег т)г)н)пц тЬе ЪассепорЬаце Т7 КХЛ ро1ушегазе депе. 1п тЬе аесопт) зуйеш, тЬе ЪастепорЬаце Т7 ргошотег)р!аяпЫ саггу)пц тЬе депе оГ !птегеат 1а 1птгос)исес)1пто Ъастепа, апт1 тЬе ЬастегюрЬаце Т7 ргошотег га ас6чатет1 Ьу тпГес6пц тЬе Ъастепа тч)тЬ Ъастегю рЬаце ) сопта)птпц йе ЬастепорЬаце Т7 КХА ро1утпегаае депе. 1п уеаят, йе ЬастепорЬаце Т7 КХА ро1ушегаье цепе ь р1асет$ ипс)ег тЬе соптго! оГ а уеаьт ргошотег апт) атаЫу 1птгот)исет$1пто уеаат се1!ь оп ап аитопопюиа1у гер1ка6пц честог.
Ехргеааюп В асЬтечес1 Ъу штгот1исшц тпто йе уеазт се!!а а кесопт$ р1ааптЫ тЬат сопта)пт ГЬе репе оГ Гптегеьт ипс)ег тЬе сопсго! оГ йе ЪастепорЬаце Т7 рготпосег $СЬеп ет а!. 1987). А4.30 Аррепс))х 4| Етутев $73ес) гп Мо!еси!аг С!оптц ИСАБЕЬ, К!$А)АВАЕВ, А)Ь)О РНОЬРНАТАБЕБ ТАВЕЕ А4-6 Ргорег6еа 0$ ВасгепорЬаце Ро!упис1еог|Ве К!паве ЕОатчлап ЙеАствоп ЕхснА|чсе ЙЕАстюп 74ис1е!с асЫ виЬ|сга|е с$оиЫе-в!гипс!ее! ПИЛ в!пц1е-вггапс$е|$ ЙЫЛ ог $3Г4А иЫ1с ог цар о!!цопис1ео|Ые 3' с1!4МР с1оиЫе-всгао|$ес$ $3ЫЛ в!иц!е-втгаи|$ес$ К!в!А ог $ЭЫА и!с1| ог цар о1|цоиис!еогЫе с$оиЫе-всгаис$ес$ ТТГТА, 7.6 рм 5' |$ЫМР, 22 — 143 рм ЛП, Ы-Ыо рм' 7.4 — 8.0 !ТгиоС1) ЛРР, 300 рм АТР, !О им' б 4 1ииЫаао!е) РН ор|иошп 5иИЬус1гу1 ге|!и!гешепг Мц|' гецшге|иеш ЕВес| о! !оп|с всгепц|Ь по и!опиаиоп виши!а!ее! Ъу ХаС1 апс$ КС! ехсея КС! шЬ!Ь|и ои а11 вицягагев ехсерг в1пц!е-вггаи|$ес$ $3$4Л 1ХН ),5О|, 7 тм Р, 20 |им РРР 5 |иМ 1ПЬвЪ|го|в 150% |пЬ!Ьвиоп) Р, 50 тм по |и1опиаиои ро1уапиие, 2 |иМ, 300% Асича|огв 'ТЬеве а|е сопсеи||аиоив |ха| 8!не ории|а! асинау а| рН бх, по| К, в.
|К !о| АТР напев и!|Ь шЬп|а|е. Р)ч)А Пцааев сага!ухе еисми-го-епс$ )о)п)пц оу р)есеа оу РЬ)А. ТЬе Пцавев овеса п|оя ойеп |и с!опшц аге епсос)ес$ Ъу Ьас1епорЬаце Т4, а11ЬоидЬ !Ьеге $8 а 1еав чегаа61е епхуше ача)1аЫе $гош ип|пЕесгес$ Е. со)1. Вой !урев ау Пцааеа аге овес! рпгпап1у оп Р)ч)А аиЬагга!еа тч11Ь 5'-!епп)па1 рЬоя рЬаге цгоиря Й)н$А Пцахе $5 а ЬасгепорЬаце Т4 епхуше !Ьаг 15 сараЫе оу сичарог)у )о|шпц япц!е-х!гапс$- ед Й)н)А (ог Р)н)А) шо1еси)ев сои!а)пшц 5'-рЬоарЬасе апс$3'-Ьус1гоху1 !епшш. Новнечег, !Ье р6- п|агу иве оу ТЬ)в епгугпе Ьаа Ьееп ш 3' епд-1аЬеПпц оГ Й$н)А.
ТЬ!а 15 ассошрПаЬес$ ияпц 32р-1аЬе1ес$ пюпопис1еояде 3',5'-Ь)хрЬохрЬаге $р)х)р), вчЫСЬ 18 ас$6ес$ !о йе 3'-Ьудгоху1 !егпипих оу Й$х)А. ТЬе Р)н)А 1ц;ааех ихес$ |и п|о1еси1аг с1опшц ййег |и йе|г аЬ|! П|ех Со Пца!е попсапопка1 аиЬ51гагея висЬ аа Ыипг-епс$ес$ с1ир1ехея Р$5$А-Й)н)А ЬуЪгнЬ, ог япц1е-в!Таис)ес$ Р$х)АК ТЬехе апс$ ойег ргорегг)еа аге я|пипапхес1 ш ТаЫе 1-12 )п СЬар!ег 1 апс1 с$1хсиахе6 Ье!очн. Рог абс$1гюпа! )пуоппа6оп оп Р$х$А Пцааея р1еаве хее йе |пуоппа6оп рапе! оп !3!|!А Е1СА5Е5 ш СЬар!ег 1.
Р$н)А5 !Ьа! 1ас)с йе Тес)шге6 рЬохрЬасе гехЬЕиев сап Ъе ргераге6 Еог Пцаг)оп Ьу рЬоарЬогу!агюп РЫТЬ ЪассенорЬаце Т4 ро!упис1ео!КВе $с)паве. Сопчегхе1у, Р)с)лх сап Ье гепс1еге|1 геж!апг со Пцагюп Ьу епхуша6с гегпона! оГ рЬоарЬа!е геяс1иех Тгош ТЬе)г 5' гепшп1 чч)!Ь рЬоя рЬа!ахея ТЬе ргорегг)ев оу ЬассепорЬаце Т4 ро!упис!ео1ЬЕе 16паае аге аипппаг)хе6 ш ТаЫе А4- 6 апс$ с1ехспЬед ш дгеа!ег де!аП Ье1отч. ТЬе дага |и 1Ь!а !аЫе Ьаче Ьееп соПес!ес$ Егогп пишегоиа рарега риЪЪЬес$ очег йе уеагя ТЬе ча1иеа аегче ах ассига!е цшбеПпех Гог иыпц !Ье епху|пея Ьиг оргипа1 соп616опх М11 а1чнаув часу хПВЬ11у ън)ТЬ йе епхуше ргерагабоп (с1ецгее оу рипгу) апс1 йе Р$|$А ргерага6оп, ог |чЬеп саггу)пц ош а вес)иепсе оу епхуша!к геасбопх (е.ц., |$)цех!$оп, еп6-ПППпц, ап6 Пцагюп) 1п опе ппх1иг. Е!8агех Ктазех аиг) РЬогрЬасагез А4.31 ВасСег1орЬаце Т4 0МА 1.фа5е !ВасСепорЬаее Т4-!исесСес) Е.
сой) ВассепорЬаВе Т4 Р)ч)А!!Вазе, а ро!урерс!с!е ог М, = 68,000, сага)угех йе согтас!ои ог" рЬоя РЬоеВехсег ЬопсЬ Ьесччееп а<1)асепс 3'-1сус1гоху1 апсс 5'-РЬохрЬасе сегпиш ш РсчА (ЪЪе!хх ес а1. 1968). ТЬе ргорегВех ог йе епгугпеч аге хипстапгед си ТаЫе 1-12 ш СЬарсег 1. 135Е5 1. 1о!п!и8 РХА гпо1еси1ез ъчсЬ сотраВЫе соЬеяче сепгпп!. 1псепио!еси1аг 1!Вас!оп ь хс!ти1асес) Ьу 1очч соисеисгаоопх ог" а8епь, хисЬ аз ро1уесЬу1епе 81усо1, сЬас ргоиюсе йе ейксеис сисегасс!оп ог" тасгото1еси1ех !и ас)иеоих ео1иооих 1Р1еахе хее сЬе шсопиаВоп рапе1 оп СОйСОЕ1ч5!!ЧС А!чО СКОЪчО!ХС КЕАСЕ1чТ5 !и СЬаргег 1).
2. 1ошш8 Ыипг-епс!ес! ссоиЫе-хггапдесс Р)х)А то!еси1ех Со опе апоСЬег ог Со хупйеВс 1ш1сегя ТЫх геасВоп ь пшсЬ х!ожег йап 1!Вас!оп ог соЬеяче сегииш. Носчечег, йе гасе ог" Ыипс-епс1 ВВас!оп ь стргочед. ВгеаВу Ьу йе асЫ)с!оп оГ гпопоча1епс саВопх (150 — 200 гиМ ХаС1) апсс 1о~ч сопсепсгас!опх ог" ро1уесЬу1епе 81усо! (РЬе)СТег аис1 Хиптегтап 1983; НауааЬс ес а1. 1986). МОТЕ5 ° АС 1еахг СЬгее ййегепг аххаух аге сьес1 Со теахиге йе асВчЬу ог ЬасСепорЬа8е Т4 Р)ч)А !!Вахе.
Мохг тапигасгигегх (арагг Сгот )ч)е~ч Еи8!апс) В!о1аЬа) почч са1сЬгаге СЬе епгуте ш ЪЪеЬз ии!сх (ЪЧеьх ес а1. 1968). Опе ЪСсеЬх ипи и йе атоипс ог" епгусие йас сага!угех йе ехсЬап8е ог 1 пто!е ог "Р Сгот ругорЬохрЬасе сисо [у, !3-"Р)АТР сп 20 т!писех ас 37"С. Опе \Ъге!гь ипВ соггехропсЬ со 0.2 ипЬ ссесегт!пес! ш сЬе ехопис1еахе гех!хсапсе аххау (Мос)гкЬ апс1 ЕеЬтап 1970) апс1 Со 60 соЬеяче-епс! ип!Сх (ах с)ейпес) Ьу Ь)ечч Еп81апс) Вю!аЬх). 0.015 Ъге!хя ишС ог ЬасгегюрЬа8е Т4 Р!ч)А 1!Вахе СЬегесоге сч!11 ВВаге 5096 ог'СЬе Нтг))П гга8теига ог" ЬасСепорЬа8е Х (5 )с8) ш 30 тспигея аг 16'С.
ТЬгоиВЬоиг СЬ!в тапиа!, ЬасгепорЬа8е Т4 РХА 1!Вахе и В!чеп ш ЪЧе!хх ишь. ° ВассегюрЬаВе Т4 Р)чА 1!Вахе ь пос шЬсЬссес1 Ьу сЬе ргезепсе ог" с!)ч)ТРх апс1 ччог)сх адециасе1у !и ч)ггиа!!у а11 Ьи)уегх ихес) Сог с)18ехг!оп ос Р)чА чч)СЬ гехСпсВоп епгутея А4.32 Аррепйх 4: Епгутег сеес1 т Мо1еси!аг С1оп1пе ВАСТЕК1ОРНАСЕ Т4 ОМА ИСА5Е Ас6исуг ВВасюп о1 соЬевве 0ЫА Сепп!и! ог п1сЬ Кеассгоп: А А Т Т ССТ...а р р р сгн ...ТССТТАА 3 ''' Р р Р р Р Р Р но р р р'' С С А МВг' Ьассег!орЬаее Т4 АТР о О!пА 1!еаае АССРААТТССТ...~ ....ТССТТААССА..
Асс1ргууг 1зеас!оп о1 Ыипг епсЬ 5сгЬасгасег Н1еЬ сопсепсгабопь о1 Ыипг-епс!ос!, с!оиЫе-асгапс!ес! 0р!А сопса1п1пе 5'-рЬоарЬасе апс! 3'- Ьус!соху! Сепп!пЬ Яеасгюп: г...сСА р р р он С С Т„А...а МВг'г ~ Ьасгег!орЬаее Т4 АТР 1, 0ХА 1!еаае С С А С С т А... Ср Ср Тр Ср Ср Ар 1г, 5иЬасгаеег Асс!че оп с1опЫе-ьсгапс1ес! О!хА млсЬ согпр!егпепсагу соЬепеее сеген!и! 1Ьас Ьаае ра!г со Ьппе гоееСЬег 3 '-Ьус!соху! апс1 5 '-рЬоарЬасе сеггп1п!. 1п ас!с!!с!оп, сЬе епгугпе 'ь асс!не оп о!с!сес! О!пА апс! ас!Ые, а1ЬеВ айаг 1еаа ебс1еп11у, оп КЫА апЬьсгасеа.
!Рог а гпоге согпр1есе с!пасс!рс!оп о1 ылЬ- асгасеь, кое ЕпВ1ег апс! В!сЬагс!аоп 1982.) Е!8аяел Ктазел апт! Р)гоар)таганцев А4.33 со6 0)ЧА Ь1Да8е Е. СОП 01ЧА Е1САВЕ Асбч)тут 08абоп о! соЬеа!че О!т!А геггп!п! ог п!с!са 5иЬ|ггагет Лсиче оп с)оиЫе-ьггапдес! РЬ!Л тч!гЬ сигар!етепса~у соЬеяче геггп!п! ТЬас Ьаье ра!г го Ьпп8 го8егЬег 3'-Ьудгоху! апт) 5 '-рЬоьрЬасе теггп!п!. !о аг)с)!Воп, гЬе епгугпе !а асиче оп п!с!сег! О!9Л. В!ипт теппаи! сап Ье !!8атес! !п ГЬе ргеьепсе о! сготчс)!п8 геа8епта.
!Геасбопт ААТТС Ст...а чггаанн р р р оп ..АСС ....тссттлл сс М8тт ~ Е со!! ЛТР 4 Рг!Л 1!8аье т ... А С С А А Т Т С С Т... т ...т с с т т л л с с л Е. соЕ РЬ)А 1!Вазе сага!угеа гЬе Гоппабоп ог" рЬоьрЬот)1еагег ЬопсЬ ш г!оиЫе-а!таис)ег! Р)т)А сои!а!п)п8 сотир!егиепгагу ргоггис)!пц 5' ог 3' гегпиш (Рапааеп)со ег а1. 1977, 1978). ТЬе геасбоп гес)и!ген НАР+ аа а соуасгог. 1п!г!а! агит)!еь !ийсагет) йаг йга епхугпе ъчои1д пос 1!Васе Ыипсепс)ес! г!оиЫе-а!таис)ес! РХА, Ьт аиЬаес)иепг атис!!еа гечеа1ег! йаг Ыипг-епг! 1!Ваг!оп сап Ье асЫенег! ш йе ргеьепсе ог' ро!уегЬу1епе 8!усо! ог Еко!1, сотроиигЬ гЬаг асс аа чо!шпе ехс1ийега !р1еазе аее йе !иуогтат!оп рапе! оп СОй0Ей5!йС Лй0 С8ОТй/О!!9С 8ЕЛСЕ!9Т5 тп СЬартег 1).
ТЫа е)тест!че1у !псгеаяея йе сопсепггаггоп ор РХА гегтиш1 апг) епхуте (г.!ттегтап апс1 РЬеНег 1983). Е. со1! РХА 1!Вахе Ьаа Ьееп иаег! !и сР1МА с1ошп8 тегЬог!а Ьааег! оп гер1асетепг аупГЬеяа, аь г!еасг!Ъет) Ьу ОЬауата апс! Вег8 (1982), Ъесаиае ог" )та шаЫ1Ьу Со !ош аг!)асепт КХА апс1 РЬ)А яе8теига йаг апае т)иг!п8 йе аупгЬеа!а оГ йе аесопс) а!таис) ог" с!ЭЬ)А. 1г !а пот, Ьочтечег, тч!с!е!у иаес) !и оГЬег гпо1еси!аг с1оп!п8 ргосет!игеь, япсе ЬасГепорЬа8е Т4 РЬ)А 1!Ваае !а сараЫе оГ ейк)епт1у )ошш8 Ыипс еп<Ь ш йе аЪьепсе оГ чо1ите ехс1иг)ега Е. соЬ Р)чА 1!Вазе т!оеа поГ 1!Вате К)ч)А. А4.34 Аррепг?!х 4: Ептутет ?75ег? т Мо?еси?аг С?оп!пе Вас?епор!таее Т4 йЧА ?.фазе ?Вас?ег!орЬаде Т4-?п?ес1ет? Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
