Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 128
Текст из файла (страница 128)
'О и - »о ,„л ) о). о < а„ ш О -»О с ш »Е „"!-о СО < О Е ш к )» < оо) »» .0 О»аа У~У а г 0 ~Е 0 ~~0 О» а.? , 0 с ОХ о т '-,т « к<к аХа ,» .О .ЕО,Б а оЕо Е.. Е ОО "О о »» с с о » ОО о.с » о.с с .о Е ш а !» .а О О < к е а ' а о а 'с — .а .О 'Е с о » о !О ш ЪС с»-о с с о 'Е О2О ш Е .а 4 с » »с с -о »О. а а„, .о с» о аа»О с!О с ш» Я5 д » ) ОО о < м р ) о < ЮЬ О, О. о ! с о О О' с с 'ШО с ш » .О О О О Е Е .о .О О о с с Е .О И с М О Е ШО а о с 2к » о с л »й .О с ОО О о С ш» С О о Е а.о .с » Е с с О О ао ш» с с О О Е О О. Е .
л ш» .с О. о .Б О. О с с о О. Е с О О. О О О "О ~й О .Й .й Е Е о О .а о 4 ао а '»» ш »О о о о с» .с ШО о .О О= ш » о Б )с с Е с Ю~ А4.12 АррелаПх 4| Епгутез (7зес( т Мо1еси1аг С!о|бич 0(х(А Ро!угпега5е 1 (Но!оепкугпе) (Е. со(1) (35Е5 1. 1аЬе1(иц оЕ Р!з(А Ъу шс1с ггапз1а|юп (р1еазе зее р(аиге А4-1). ОЕ аП |Ье ро!утпегазез, оп1у Е соП Р!з)А ро!ушегазе 1 сап саггу ош сЬ(з геас|юп, япсе 1| а1опе Ьаз а 5' — зЗ' ехопис1еазе ас6чЬу |Ьаг саи гегпоче пис1ео|Ыез Егош |Ье РЬ(А зсгапс( аЬеас( оЕ |Ье ас(чапе!иц епгуше. 2.
ТЬе Ьо!оепгуше тчаз они(паПу изей Еог зуп|Ьеяз оЕ |Ье зесопс( зггапс( оЕ сР!т(А (и сРХА с!ои(пд (ЕЕзгга6ас((з е| а!. 1976), Ьиг и Ьаз япсе Ъееп зирегзес(ед Ьу гечегзе сгапзспргазе апс! йе К!епотч Егацшепг о( Е. соП РХА ро1ушегазе 1, тч)6сЬ с1о по| Ьаче 5'-+3' ехопис1еазе асбч(г(ез. ТЬе 5' — т3' ехопис!еазе оЕ Е. со!| РХА ро!ушегазе 1 с(ецгас(ез о1(аопис1еог(с(ез |Ьа| шау зегче аз рпи|егз Еог |Ье зупйеяз оЕ |Ье зесопс( зггапс( оЕ сРХА.
3. Епб-!аЪе!шд оЕ Р!з)А гпо1еси1ез ъч(гЬ ргоггис((пи 3' |аПз. ТЬ(з геас6оп тчог)сз |и |тчо зсааез. р(гзс, |Ье 3' — э5' ехопис!еазе ас6чйу ге|почет ргосгис((иП 3' саПз Егош |Ье Р!з(А апс( сгеа|ез а гесеззес( 3' |егпипия ТЬеп, ш |Ье ргезепсе оЕ Ь!КЬ сопсепсга|юпз оЕ опе гасПо1аЬе1ед ргесигзог, ехопис1ео1у|к с(ецга6аг(оп (з Ьа1апсес1 Ъу (псогрога6оп оЕ с(ХТРз а| |Ье 3' сеппшия ТЬ|з геас6оп, тчЬ|сЬ сопяз|з оЕ сус1ез оЕ гешоча! апс( гер!асегпепс оЕ |Ье 3'-|егиипа! иис1ео|Ыез Егош гесеззес( ог Ыипг-епбес( РХА, (з зоше|ииез саПед ап ехсЬапие ог гер1асешеп| геасбоп.
11 й|з гуре оЕ геасбоп (з изет( Еог |Ье епс(-!аЪеПпц, Ьасгег!орЬаае Т4 Р!4А ро1уи|егазе |з йе епгуи|е оЕ сЬоке. А)|ЬоиаЬ Ъой Е. со1| Р!з)А ро!ушегазе 1 апс1 Ъас|епорЬаае Т4 РХА ро1ушегазе сап саггу ои| |Ь(з суре оЕ геас6оп, |Ье ЪассепорЬаце епгуше сагпез а июге ро|еп| 3' — |5' ехопис(еазе асбг6|у, 1п гпапу сазез, а з(пц!е Ьийег сап Ье изет( Ьой Еог с!еачауе оЕ РЬ)А тч(гЬ а гез|пс6оп епгуше апс( !ог йе зиЬзесрлепс сиса-1аЪе!(иа. Нотчечег, пог аП гезгпсгюп епгу|иез тчог)с (и Ьийегз изей Еог РЬЗА ро1ушегазе геас|юпз, апд П Ь ас(ч(заЫе го сапу оиг рПог геас6оиз тч(гЬ |Ье раг6си1аг Ьа|сЬ оЕ епгуше оп Ьапс1. 11 йе гез|пс|юп епгу|ие с1оез ио| тчог1с ш |Ье Р!з)А ро!уи|егазе Ьийег, Ь ъчП! Ье песеззагу |о саггу оиг |Ье гезсгк|юи епгутпе с((аезг(оп апс( епс(-!аЪе1(па (и гтчо зерагаге згерз.
Еи гЬ(з сазе, с1еаче |Ье РЫА (и йе арргорпа|е геяпс|юп епгутие ЬиЕЕег, геи|от е |Ье геяпс6оп епгуи|е Ьу ехггас6оп тч(гЬ рЬепоЬсЫогоЕопи, ргес|рйа|е йе Р)з(А тч(|Ь е|Ьапо1, с((ззо1че и (и ТЕ, апс( асЫ йе арргорпа|е чо1шие оЕ а 10х 014А ро1угиегазе Ьи(Еег. ЕЗСРКЕ А4-1 Ь3(с(с Тгаиз(агюп ояи Е. со!т' 0ЫА Ро! и|егазе мзг и|с«те ~ 1 з 53п53е-зггаис(ес( и|с3сз аге 3итгос(исес( |иго |Ье РХА Ьу |геа|тиеи| тч3|Ь 0Мазе !. Е. сой 03«А ро3уп|егазе (Ро! 0 Ыис(з |о йе и|с!с ог зйог| дар |и с(ир3ех РгсА, аис( |Ье 5'|3 ехоиис1еазе ас|вйу о( РЬ|А ро1утегазе ! |Ьеп геточез иис!ео|Ыез (гоп| |Ье оие зггаис( о( йе 0Ь|А, сгеа6ад а |ептр3а|е Еог ятпийаиеоиз зуитЬез(з о( |Ье цгоъч3иК зггаис( о( 0ЫА.
ТЬе от|35(иа! ик3с 3з йеге(оге Ггапз3атес( а!иод |Ье 034А ию3еси3е Ьу йе согпЫпес( асПои о( |Ье 5' — >3' ехоиис3еазе аис( |Ье 5 — >3' ро!утегазе. |и йе геас|юп ртезеисес3 Ьеге, йе и|сЕ |и йе иррег зггаис3 о( |Ье с(ир3ех РЬ|А 3з тгаиз3агес( Егот Зей |о г35Ьт Ьу Е. сой 0ЧА ро!уи|егазе |п |Ье ргезеисе о( с(Е|ТРз. |и |Ье !отчет з|гаис! о( с(ир3ех ОЙ|А, и(сЕ |гаиз3айои оссигз Хгогп пф~ |о 3ей. ТЬе з|ге|сйез о( петч3у зуп|Ьез3гес( 03з|А аге гергезеитес3 Ьу |Ье со3огес( агготчз.
з ««те зстз еатз бттР «Фчт с з з Р(з(А ро)утиегазе 1 сопяз|з оЕ а з(пи1е ро!урер|Ые сЬа(п (М = !09,000) |Ьас сап Еиис|юп аз а 5' — эЗ' РЬЗА ро1утиегазе, а 5' — эЗ' ехопис1еазе, апс( а 3' — э5' ехопис1еазе (КеПеу апс1 5|шпр 1979) апс( йас Ьаз ап |пЬегепс К)з(азе Н ас6ч|гу. ТЬе Кразе Н ас6|6|у !з еззепба1 Еог сеП ч|аЬ|1иу (и Е.
соП Ьиг Ьаз пог Ъееп изес1 |п ию!еси1аг с!оп(иа. Рог Еиг|Ьег с1е|аПз, р1еазе зее |Ье |пЕоггпа|юп рапе! оп Е. СОН 0Ь|А РОЕЧЗЧЗЕКА5Е ! АЬ30 ТНЕ КЕЕЯОчтс ЕКАСМЕ3«Т |п СЬар|ег 9. В//А Ро!утегазег А4./3 Е. СОЕ/ 01ЧА РОПМЕКА5Е! (НОЕОЕ)х)ХУМЕ) Ас/й//) г 5 — >3 ' 0НА ро1угпегаье 5иЬх/га/е: 5(пе)еь(гапс)ес( 0ЫА (егор!а(е ча!(Ь а 0ЫА рпгпег Ьеаг)пд а 3 '-Ьус)соху( цгоор. /(еасбопг Е.
сой 0)хл ро)угпегаье 1 Ох~ Ом~ — ( Ю + гг, (С( ге с)АТР с)ТТР с)СТР с)СТР Рог ехатр/ег г...ССС ....с с с т л т с с л Магг (АТР,)ТТР Е. со// ,)Стр',)СТР, 0НЛ Р !Успехе( Р...СССАТАС Ст...г г.... С С С Т А Т С С А ...г. Асй/(уг 5'-г3' Ехопос1еаье 5иЬх/га/ег 0ооЫе-а(гапс)ес) 0/(А ог КНА-0ХА ЬуЬг!сЬ.
0ер ас)еь с)ооЫе-ь(гапс)ес) 0НА 1гогп ЕЬе 5 ' (епп)- п); а(ао с(едгас(еь (Ье йг(А согпропеп( о1 ап КЫА-0йл ЬуЬпс( (!.е., (Ь(я пис!еаае рохаеьаеь !пЬегеп( Кйаве Н ас(!ч!(у). /сеас//опг Е со/г 0)х(А ро1угпегаяе ! .г ~ом ' " °" ~Р'" Маг + х)пе!е-а(гапс)ес) 0ЫА Рог ехатр/ег С С С А Т С Т...г ,ссссстлсл...,. 1,1 г- ~ Е сой 0(х(А ро1угпегаье 1 С А Т С Т...г . С С С С С Т АеС А,, г. (Сопггпиес/оп 1о//опгпе расе.) А4.14 Аррепйх 4: Епеутег Егеег1 Еп Мо!еси1аг С1отпе Е.
СОЕЕ О!х!А РОЕУМЕКА5Е 1 (НОЕОЕ!х1ЕУМЕ) АсГ1и11уг 3'-г5' Ехопис1еаье 5иЬа4гагег 0оиЫе-ьггапг!ег! ог ь!пц1е-аггапг!ег! 0ЫА сопга1п1пц 3'-Ьуг!гоху1 геггп1пЕ 0едгаг!еь 0ЫА 1гогп 3'- Ьуг!соху! Геггп1п1. Ехопос!еаье асгМгу оп г!ооЫе-а!ганг!ег! 0ЫА 1а Ыос!гег! Ьу 5'-г3 ' ро!угпегаье асГ1чГу апг! 1а !пЫЫГег! Ьу г!ЫМРь иг1ГЬ 5' рЬоьрЬаГеь. йеас6опг Е, со1г 0ХА ро1угпегаье 1 ~-Н.-,'ф.-..~.~ О * МК2 г р он Рог ехапгр1ег СС С АТСТ~ Ме2г Е. сой 1 0ЫА ро!угпегаее 1 С~С С +~ А ее С-~-а Т Р Р Р АсГ1и1Гуг ЕхсЬапде (гер1асегпепЦ геасГ!оп Кеасйопг Ехопис1еаае АсгМгу ,,...
С„С А С С„С„„.. М5е+ ~ Е сой !а-ееР1г!ТТР ~ 0ИА ро1угпегаае! а' СС а' ....С С А С С С он ' 0ЫА Ро1угпегаае Ао5игу 5иЬеггагег 11 оп1у опе г!ЫТР !а ргеаепЬ ЕЬе 3 ' — э5 ' ехогвс1еаее асгМгу гМ11 г!едгаг!е г!оиЫе-аггапг!ег! О!х!А 1гогп ГЬе 3 '-Ьугй оху1 Гептхгва ипГ!! а Ьаае 1а ехроьег1 ГЬаг 1а согпр1егпепГагу Го ЕЬе г!ЫТР А соп6пооиь яег!ея о1 ьупгЬеа!е апг! ехсЬапде геас11опа и1!1 ЕЬеп оссог аг ЕЬаг роа1г!оп.
Р)ктА Ро!утегакек А4.15 Ьагце Ггарпеп( о! 0]5!А Ро]утпега5е ! (К]епочч Ргаетпеп$) (Е. со6) ТЬе 5' — э3' ехопис!еаке асплту ос Е, со1т РХА ро1ушегаке 1 )к ойеп тгоиЫекоше Ьесаике )т де8гадек йе 5' тегиипик о( ргииегк тЬат аге Ъоипд то РХА сегпр1атек апд геиючек 5' РЬокрЬатек тгош тЬе сегиши от' РХА тта8шептк тЬат аге то Ъе икед ак киЬкггатек Еог 68ат)оп. ТЬе 5'-+3' ехопис1еаке асйлту сап Ье гепючед рготео1упсаПу ттош тЬе Ьо!оепхуше кчПЬоит а6:еспп8 етйег тЬе ро1ушегаке асдлту ог тЬе 3' — э5' ехопис1еаке аспчпу (К!епосч апд Неппшакеп 1970).
ТЬе К!епосч тта8шепт от' Е. соП РЫА ро1ушетаке 1 йас ь ачаПаЫе содау 1гош сопипегста) коигсек сопкьтк о( а яп81е ро!урертгде сЬаш (М„= 76,000) ргос)исес1 Ъу с1еача8е от си!асс РХА ро1утпетаке 1 ълтЬ киЬП!ьдп от Ьу с!оп!п8 (!асоЪкеп ет а1. 1974; )оусе апс1 Сппд1еу 1983). Рог гигтЬег с1етадк, р1еаке кее йе тп(оппапоп рапе) оп Е.
СОР О!ЧА РОЗХМЕКА5Е! АГАПЭ ТНЕ КЕЕ!стОИс ГГсАСМЕМГ ти СЬартег 9. Е)5Е5 ). РППп8 йе гесеккед 3' тегпиш сгеатес1 Ьу й8екпоп ос Р1к)А чч!тЬ гектпстюп епхушек. 1п тпапу сакек, а яп81е Ьи((ег сап Ъе икед ЪотЬ тот с1еача8е ог РМА ъчПЬ а гекгпстюп епхутие апд Еот йе киЪкесрлепт 66!пц ог" гесеккед 3' тетпиш' (ог епс1-1аЪеПп8 о( РХА ию1еси1ек счПЬ рготтидш8 3' тат1к [р!еаке кее Рке 3]). ТЬе К)епоъч тта8шепт ъчог)ск кчеП )и ч(гтиаПу аП Ьийегк гьес1 )ог й8ектюп от" РХА сч)гЬ тектгкдоп епхутпек. Ноъчечег, пот аП гектпстюп епхугпек ъчот)с ш Ьитгетк икед тот Р!чА ро!ушегаке геаспопк, апд и ь адчьаЫе то сагту ош рт!от геастюпк ълтЬ тЬе ратпси1аг ЪассЬ от' епхуше оп Ьапд. 1т" тЬе гектпстюп епхуше доек пот счог)с ш йе РХА ро!угпегаке Ьийег, П гчП! Ье песеккагу то саггу оит йе гектпсдоп епхуше д!Еект!оп апс1 6Птп8 от" гесеккед 3' тегииш ти ткчо керагате яерк.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
