Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 126
Текст из файла (страница 126)
1Е Вгт)41 саппот Ье хиЬ|$$- ттттет$6|т ВсоКП, йе РМА ишхт Ье ргераге6 Етош а|та[па оЕЕ. со/т' |Ьат аге т/сит (Маппть 1973; Вас)тшап 1980; КоЬегь ес а!. 1980). Сегташ о|Ьег епхутпеа тпау с1еаче ат хеср|епсеа |Ьа| рагба!- !у очег!ар |Ье тпосцйе6 т/сит тесоцш|юп ает)пепсе. Рета(!е|$ $пЕотшат(оп оп |Ье тпе|Ьу1а6оп хепя6л|у оЕ |пгПчЫиа! гехтгкт!оп епхушеа ь ргоч$6е6 Ъу |Ье КЕВА5Е ЧтеЬ 5!те (геЪаае.пеЬ.сош/геЬахе). т/сит пштапь оЕ Е. соц хЬочн по рЬепосуре, ап6 |Ье Ью1оц)са! яцшВ- сапсе оЕ т/ст и|ейу1а6оп ь оЪхсиге (Еог геч(е|н, р1еахе хее Ра1тпет апс$ Мат(пих 1994). У/те МотИйсаЕЕоп Сотропеп( оЕ Мог/ЕЕ(са/топ/!тех/пс/Еоп Бух(етз ° Туре/той(/тсатюп/геатг(ст(оп хухтетя ТЬе с1а|ька1 туре! тпосВВса6оп/техтпс6оп хухтеш ш и|апу |н$1<4-гуре а|та|их оЕ Е.
соВ ь епсо|1е|1 Ьу |Ье йгее !ь|1 (ЕсоК) цепея Тччо оЕ |Ье ро1урер|Ыех епсо|$е|1 Ъу тЬехе цепех (Ьтт/М ап|$ )ттт/5) аге пеебе6 то стапаЕег тпе|Ьу1 цтопра то йе Ха роя6оп оЕ ||но астреи!пез |п |Ье гесоцпиюп ает)иеисе ' ААС(Ь$ )СТСС." (Кап ет а1. 1979). ТЬ)а туре оЕ шо|$1Етсат!оп, чнЬ)сЬ ассоипь !ог -198 оЕ )чт' адешпе тпейу1а6оп ш Е, со/т', рго|есь Р)4А аца(пя Иеачаце Ъу йе Ьетегостипепс ЕсоК геягктюп епбопис1еазе (епсот)ест Ьу йе )ьтИМ5 цепех), а туре 1 техтпс6оп епс$опис1еаае чнЬ(сЬ, а| йе ехрепхе оЕ АТР Ьу|1го!уяя ргоВисех 6оиЫе-а!таит)е6 Ьгеа$|а ат а чат(аЫе сцхтапсе Еготп йе гесоцпЬюи яте (ВкИе 1987). Мапу ятаиь оЕ Е. соц иае6 Еог шо1еси1аг с!оп)пц саггу иштатюпх |и йе ЬЫ цеиех.
° Туре 11 итог/фстттюп/гехтг(ст(оп яьтетия С!акиса! (туре П) шо6$6сат[оп/гехтт!ст!оп хухтепь Ьаче ттно сотпропепь, а геяпс6оп епдопис1еахе ап|$ а РЬ(А шейу!|тапа(егахе; Ъо|Ь сошропепта гесоцп|хе |Ье хаи|е тагцет хет)пепсе. 1п |Вчо, туре П гехтпстюп епбопис1еахех жеане пптпетЬу1ате6 ает)иепсея ънЬегеах шетЬу!тгапхЕегааеа ргеЕег Ьепшпе|Ьу!атес$ хиЬ|тгатех цепега|е|1 |$иппц Рхт)А гер1!сабоп. ТЬе тпосВЕу|иц епхутпеа оЕ тпапу рго)татуот(с суре П шо|$1Е|сат)оп/гехтт(ст(оп хуатеша аге шопошега |Ьас тгапаЕег а тпейу1 цгоир то йе 5-сатЪоп оЕ йе руппбгцпе ппц оЕ сутоыпе, сгеа6пц 5-тпе|Ьу!сутояпе.
ТЬе сага!убс и|есЬашяп оЕ |Ь(х теас6оп (пчо!чеа пис!еорЬ!!к а!гас)г оп С" оЕ |Ье тагце| сусояпе Ъу а сухте[ие геядпе |о цепегате а соча1еит $птегшет$$ате. ТЬе адецтюп оЕ йе пис1еорЬ11е а!!о|на йе |тапа(ет оЕ а тпе|Ьу! цгоир Егош 5-ат[епоау1шейюп(пе |о йе ас6нате|1 5-сагЬоп. АЬятастюп оЕ |Ье ртотоп ат йе 5-роя6оп у!е!6х ап еихутпе |Ьа| ип|1егцоех сои)ица6че е!ип|па6оп то у!е16 |Ье ртодист 5-тпе|Ьу1- сутояпе (Хи ап|$5ап6 1987; Еог теч|ентя р1еаае аее Кшпаг ет а!. 1994; Уег|$(пе 1994; Ъ|т(пИег 1994). Сои|ась Ьетчнееп суре П геатпсбоп епхутпеа апт$ |Ье|г гесоцш6оп хет)иепсе |пчо1че атпшо асЫх йат аге чнЫе!у херагасес$ |п йе ргипагу рготе!п хет)иепсе, тези!т!пц $и Ьепйпц ап|1 ИпИпц оЕ йе тагцет Р)4А (Кип е| а!.
1990; ч|т(пИег ет а1. 1993). Туре П шетЬу1ахеа рто|1исе а тоге га|1- ка! сЬапце !и Р)4А аттис!иге Ьу |огс(пц |Ье тагцет сутояпе то В!р опт оЕ йе р1апе оЕ йе РЬ(А Ье1!х ап|$ !пто йе ас6не яте оЕ йе епхутпе. ТЬ(а В|рр!пц шесЬап)хш, |чЬ~сЬ ччах Ятхт ехтаЫьЬе6 Еог М.НЬо1 (К!пиааа|ь)|ах ет а1. 1994), Ь ЬеВече6 со Ье ип|негаа1 ашопц 5-ше|Ьу1су|ояпе сгапя Еегахея а11 оЕ |нЬкЬ аЬаге а ъче!1-соихетче6 хес оЕает)иепсе шот)Еа ап6 а соипиоп атсЬ(тес|те (Еог геле|ч, р1еаае аее ЪйпИег 1994).
Мейу!а1$оп-т$ерепт$еп1 Ке51т[сбоп Ьуц(еп|5 $п Е. со!т' Е. со1т' К сои!а(па ат! еая |Ьгее ййегепт шетЬу!атюп-с)ерепт(епс гехтгктюп аухтепь |Ьас гесоцп(ге |$(ЕЕегеит тагцет ает)иеисех оп1у |чЬеп шейу1ате|Ь игтт (6-шетЬу1абешпе [ бА)), итстА (""Сб [ 'С = 5-шетЬу!сутояпе!), ап|$ итсгВ (Р(У ~С) (Ка1е(цЬ ап|1 !|т!!хоп 1986; НеЬтпап ап|1 Мо|1е1 Мог)ЕЯсагЕопlЯелгг)сгЕоп 5улгетл т Е.
соП А4.5 1987; Ка!е!8Ь ег а1. 1988). РЕ4Ах ГЬаГ аге шеГЬу1алес) аГ аисЬ ятеа аге Епербс)епт1у с!оиес1 лпго ъчПлЕ-Гуре алга!па оЕЕ. соП 1'1дЧл)тта)сег ел а1. 1988). Рог ехашр1е, Ьшпаи РЕЕА, ччЬ)сЬ 1а ехгепяче1у шегЬу1агес1 лп члчо аг "'лбб, Ра геьгпсгес) Ьу тсгА. Хопгеаггкт!п8 хгга!пь оЕ Е. соП !Ка!ел8Ь апг$ ЧгПьоп 1986; Ка!е)8Ь ет а1. 1988) аге ГЬегеЕоге ргеЕеггег) Еог ГгапхЕоппалюп апс) с1оп1п8 оЕ гпегЬу!асегЕ РХА. М ЕсоК! шегЬу1аае саса1ухеа йе ггапаЕег оЕ шейу! 8гоирь Егош 5-ас)еллоу! !.-шейюплпе 18АМ) го йе ас)еи)пех шаг)сегЕ ъч1гЬ а агат 1') лп гЬе ЕсоК1 гесо8пПюп аес)иепсе лп сддттс ГЬе 68иге ал ГЬе п8Ы. ТЬе шог66сапоп оЕ аг)еи)пе Го 6-шегЬУ1апипоРиппе Рго- с т т д д с~ сесь гЬе РХА Ьогп с1еача8е Ьу ЕсоК! !бгеепе ег а1. 1975).
Мог!1Е1са6оп оЕ Ке8Ег1с6оп ЯЕе8 Ьу 0)ЧА Мебту!а6оп Рог шапу оЕ йе гуре П гехгпс6оп епхугпея а сопехропсПп8 плегЬу1аае Ьаа Ьееп )хо)асел1 гЬаг гпос66еа йе со8паге гесо8ппюп лег!иепсе апс1 гепг)егх П геяагапг со с1еача8е. ТЬехе шейу1ахея а пигпЬег оЕ тчЫсЬ аге ачал1аЫе !гош соиппегсла! хиррПегя аге иаебл! ли а пшпЪег оЕ сахКх !и шо1еси1аг с1оплп8. Рог ехагпр1е, лп гЬе сопхггисгюп оЕ 8епоиис Рлд!А ПЬгапеа !лМап!аг)х ет а1.
1978), гапг)огп Ега8гпепгх оЕ 8епоиис Р!ч)А 8епегасес! Ьу рагпа1 с!еача8е лч)гЬ гЬе геягкгюп епхушеь А!и! апс! НаеП1 сап Ье ггеагес! чч)гЬ М ЕсоК1 гпейу!ахе рпог го йе асЫ!г!оп оЕаупгЬепс ЕсоК!!ш1сегх. ЮЬеп йе Пп)гега апасЬес1 со 8епош)с РНА аге ялЬхесрлепг!у с68еьгес1 лч)гЬ ЕсоК1, гЬе пашга1 гехгпсгюп ягеа лч)гЫп гЬе 8епопис РХА аге ргогесгед Егош с!еача8е. ТЬе хапле ягаге8у гпау Ье иаегЕ Го драге па!ига! геьтпстюп ялех члЬеп ргерапп8 с)оиЫе-ьтгапг)ел) сРЕ4А Еог с1оплп8. МегЬу1аьех сап а1ао Ье ихес1 го а!гег гЬе аррагепт с1еача8е хрес)Еле)гу оЕ сегга!п геьггкг)оп епхугпех (Хе!хоп ег а1.
1984; л4е1аоп апс1 5сЫ1сПсгаиг !987). ТЬеае а!легат!опх аге ассошр1ьЬег) 1и чиго Ьу лпегЬу1агюп оЕ а хиЬьег оЕ йе вес)иепсеа гесо8шхед Ьу сегсаш гехгпс- и т и и д Поп епхугпея Оп!у тЬе шегЬу1агегЕ аиЬьегх лч61 Ъе геяхгапс го с1еача8е. Рог ехалп- с т с д д с Р)е, ГЬе геЯпсгюп епхУше Н)исП гесо8пгхеа гЬе с!е8епегаге ьег!иепсе бТРУРиАС с т т д д с от т идс апс1 ъпП гЬегеЕоге с!еаче йе Еоиг аег)иепсех хЬоъ и аг гЬе п8Ы. ТЬе М Тай! шегЬу!ахе гесо8п)хех оп!у йе аег)иепсе ТСбА апгЕ илегЬу!асеь гЬе ас)еп!пе гехЫие ЕМсС1еПап6 1981). ТЬе гшЬаег оЕ НгисП гесо8п!гюп вес)пепси йаг сопла)па гЬе !пгегпа! лес)иепсе ТСбА ччП! йегеЕоге Ье геяагапг со с1еача8е айег шегЬу1агюп Ъу М Тал)1, ччЬегеаь йе оГЬег ГЬгее гесо8пиюп аециепсев ъч61 гегпаш ьепял)че Го НтсП. А аесопс! с1ааа оЕ очег1аррш8 шегЬу1апоп апс1 геагпспоп ягех оссигх аг йе Ъоипс$апеа оЕ йе гесо8пгпоп хег!пепси оЕ а геагпспоп епхуше апс1 а шегЬу1ахе.
Рог ехаплр!е, а Ват!.П яге 1ббАТСС) гЬаг Ьаррепа го Ъе ргесег)ег) Ьу СС ог ЕоПолчес) Ьу бб раг6аПу очег1арь а яге 1ССбб) йас сап Ье шейу!агес1 Ъу йе еихуше М Млр!. Весаихе М Млр! шегЬу!агех гЬе 5' сугояпе оЕ !ь гесо8ппюп аегрлепсе ("лССбб), йе ВатН1 яге Ьесогпех гпегЬу!агег1 аг ап !пгегпа1 сугояпе геясЬле !ббАТ" лССбб) апс! йегеЕоге !х геяяапг го с1еача8е Ьу м.наея ВатН1. Апойег ехашр1е ь ргоч)6ес1 Ьу В86 апс) М НаеП! 61иягагес1 аг сссниииисисс йе !ей. Аа)п йе сааех о(Нгпс!ПМ Таг)1 апг! ВатЕ!ПМ.Млр1, гЬе гпегЬу1аг!оп Ыос)са гЬе йеача8е оЕ а ргечюих|у ех)аг1п8 геагг!сг!оп яге.
Р!паПу, сегга)п аг1еп!пе шегЬу!ааеа сап Ье иаес! лп соп!ипспоп лчиЬ гЬе гпегЬу1агюп-с1ерепс1епг гехгпсПоп епхуиле Ррп! со ргог)исе Ьл8Ыу арес)Еле с!еача8еа аг аег!иепсеа 8 — 12 Ър 1и !еп8гЬ !МсС1еПап6 ег а1. 1984; МсС1еПапг1 апгЕ Хе1аоп 1987; ЪЧеП апг) МсС1еПапд 1989). А4еб Аррепйх 4: Епгутег !75ег) |и Мо!еси!аг С)оп)щ ТАВЕЕ А4-Т !ЕовсЬ)хоспег Раив ТЬаг 0111ег 1п ТЬеп 5еп816911у |о 5ес!пепсе-врос!1)с Мейу1айоп 15О5СН1ТОМЕв РА|85 Метну|Атеп 5еооенсе СОТ ВУ )Чот Сит Ву |и еесЬ ганс йе Вгсг со|агап |пн а гпе|Ьу|яеа ге р|епсе, |Ье аесопд соЬппп 1пга ап погсЬ|гогпег йас сига йга аепоепсе, апа йе йоа со!игпи!спа ап Ьоасьаопгег йаг г|оеа пос сй |Ьп геппепсе.
рог геуегепсеа, р|еаае аее МсС!еиапа апа Не!аоп 1|988). 18ерппгей я|сЬ репп|яюп, |гогп МсС1епапа апа Не!гоп |988.) 'Ап епсугпе и с|ааябед аа гпаепяпге го тейу1аиоп П Ь спп йе тегЬу|агеа гевпепсе аг а гаге йас п а| 1еая опе гепй сЬе гаге ас явасЬ и ста |Ье ппглесЬу1асег) аевпепсе. Ап епсугпе и с!ааябед аг аепяине |о тейу|аиоп 11 8 Ь йЬ|Ьггеа ас |еаа| 20-То|8 Ьу гпесЬу|агюп ге!а|8 е со йе ппгпегЬу1агеа аеппепсе. е5ес|пепсеа аге й 5' — 43' огаег. В = 6 ог Л; У = С ог Т; Ун = Л ог Т; аиС = 4-те|Ьу1су|ояпе, 'С = 5-гпе|Ьу|суюа|пе, апд "А = Е-те|Ьу1аг)епспе. ТЬ)5 еха|пр1е 6)ггегх сгош йове аЪоче ш йа| йе 5|га|ейу сгеагег а я|е 1и РЬ)А йас о|Ьегсчье сноп!6 по| Ье с1еачес1 Ьу Ррп).
ТЬь 8епега! 8|га|е8у ог" ияп8 хрес|йс гие|Ьу1аве5 |п соп)иис6оп сн)1Ь ге5|йс6оп епхушев Ьах ргойкес1 )60 песу с!еачайе хрес)йс|6ев апд |папу июге аге ровяЫе (сог гесегепсе5, р!еаве 5ее МсС!ейапс1 апс1 )с)е!5оп 1988). А со|прйайои оу |Ье хепяйч|- йех оу )псйчЫиа1 геяйс6оп епхугпе5 |о я|е-Ерес)йс июсййса6оп5 гиау Ье гоипд ас |Ье ПВВА5Е ЪЧеЪ 511е: геЬаве.пеЬ.сош)геЪаве. 5ечега! ра)гх ог" 15овсЬ)хошегв СП1уег |п йей вепябч)Гу |о я|е-врес|йс п|е|Ьу1а|юп (хее ТаЫе А4-1). 5псЬ епдопис1еаве ран 5 аге |ьейй гог Яис1у|п8 |Ье 1ече) апд СП5|6Ьп6оп ос я|е-хрес|йс ше|Ьу1айоп |п сейи1аг РЬ)А, )ог ехашр1е, «Сб |и шашша15, ю|СС апс) "'5С11С )и р1апь, апс1 бюЕАТС |п еп|егоЬасгепа !ЪЧаа)тч))1с апд Е1ачей 1978; МсС1ейапс1 1983; В!гс) ег а1.
1985). 5епя6чйу |о я|е-хрес|йс Р)9А п|ейу1айои ь с1еаг!у по| 1ипйес1 со геяпс|юп епху|пех Ъи| ь а ргорег|у ог' РЬ)А-Ъ!пй)п8 рго|е|п5 |и 8епега! (5ее 5|егпЬег8 1985; ЪЧап8 е| а!. 1986). 4С, "'5С, " ЕС, апс1 "А я!е-врес)тгс шосййса6оп а| "попсапоп!саГ' я|е5 пиП Ыос1с Еечега1 суре П ше|Ьу1ахев. ТЬе Па|а аге впипиапхей ш ТаЫе А466 ! пЛоепсе о4 Мейу1а6оп оп О)ьЬА Марр1щ Мапииайап Р)яА соп|ашх ЕС ге5!6ие5 1и асЫ)Гюи |о |Ье тоиг иогша! Ьавев. ТЬеве ге5Ыиех аге 1оипс1 рпгпап!у а| |Ье 5' 5Ые оу С геядие5.
А11ЬоиВЬ оп!у а рог6оп от' Срб йоиЫе15 аге шейу1асей |Ье рапегп ог' |ие|Ьу!а|юи ь ЫВЫу сеП-суре-Ерес)йс (В)гс) апй 5оийегп 1978); апу 8)чеп СрС йоиЫес !5 шегЬу!асей |п |Ье и|а)оп|у ог" сеП5 ос а 8)неп рорп1а|юп ог ш оп1у а сетн оу |Ьеш. )х)еаг1у ай ге8|псйоп епхуше5 сьей тог 1оп8-гапйе шаррш8 ог'шапипайап сЬгоиювоша! РЬ)А гесо8п|хе хес)пепсе5 йа| сои|а)п Срб. Веса|ье йь ейиис1ео|Ые оссигв арргохииа|е!у йче- Т" |СС66А ТС'"'С66А 66|УС"ос !Т.С 66ЯаА С'пасхч66 66ТАС'"ЕС СЯ|ССС С 'СС6 6 4АТС ТССС6п'аА ЕСпЯАТСУ СС аС66С АссП1 Ассп! Ау)! ВгрМП ВНН! !М| а!) Крп) Мгр! Лггр! 5аиЗА1(РпиЕ!) 58о151 ХЬоп Хта) 1СУг91) ВгрМП ВгрМП Агап !Есо471) Асс! П ЕсоК11 Агр 7181 Нрап !Нарп) Нрап МЬо! (реп) )сгги! муп 5та1 ТАВЕЕ А4-2 Ме(Ьу1аВоп Вепа!С!У(Су оГ Туре П 0ЫА Мейу!ааеа (Чот ВЕОскеи ву Реюе Моп!е!сАТ!О!9 Ать ВТОскеп ВУ Реюе Мои!у!сАУ!Ои Ат МетнУЕА5е (8рес!е!с!УУ) А6 »С'1' 66АГС»" С СА6'"5СТ6 М А1и! (А6'"'СТ) М ВагиН1 (66АТ"'гСС) М СГгб! (САСР'гСТ6) М С!а! (АТС6"'аАТ) С6 аАТСС Я»АТССАТ АТ»'»ССАТ Т"пССА 6ААТТ»" С М СНВ1П (ТССЯ»А) М ЕсоИ (6А"'»АТТС) М ЕсоИ! (С»СУЧ66) Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
