Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 122
Текст из файла (страница 122)
(ТЬВ ъо!ц6оп ыпаде Ъу йьо1гдп8 1.86 8 оГКС! ш 100 пт1 оГдеюптгед Н О.) Ад)пас 1Ье РН оГ сЬе тпейшп со 7.0 н)1Ь 51' )ъ)аОН <1> (-0.2 пс1). Ад)цас 1Ье мо)цте оГ 1Ье ао!ц6оп со ! Исег н 11Ь деюгдгет1 Н О. 51еп11ге Ьу ацсос1атчп8 Гог 20 т(пцсеа ас 15 ря (1.05 )с8уст~) оп Ит)- шд сус1е. )цас Ье1оге гье, атЫ 5 т1 оГ а яеп1е тю1цсюп оГ 2 М МИС! . (ТЬ)а ао1цбоп спаде Ьу йьо!ъ(п8 19 8 оГ МВС1, ш 90 пт1 оГ деюшгед Н О. Ад)цас 1Ье чо1шпе о(1Ье гю!цсюп Со 100 тп1 ълсЬ деюп(гед Н О апд асеп!Гге Ьу ацсос1ачсп8 Гог 20 тспцсеа ас 15 ря [1.05 1с81стг) оп 1н!шд сус1е.) 5ОС Мейшп ЮС тейшп ь ЫепСка) Со ЮВ птейшп, ехсерС СЬаС И сопСать 20 тМ 81цсоае. Айег 1Ье 5ОВ тпейшп Ьаа Ьееп ацсос!аъед, аИоъч И Со соо1 со 60 С ог 1еяь Адд 20 т! оГ а ВСеп1е 1 М тю1шюп оГ 8!цсозе.
(ТЬВ тю1цбоп В спаде Ьу йаао!ъ(п8 18 8 оГ 81цсоае (п 90 пт1 оГ деюпггед Н О. АГсег сЬе ацВаг Ьаъ дьао1чед, ад!пас 1Ье чо1цте оГ сЬе гю1цбоп со 100 тп! ъът!1Ь с1еюшгет1 Н,О апс1 асеп1(ге Ьу раяяп8 тс 1Ьгоц8Ь а 0.22-)ст 61сег.) А2.4 Аррепг)Ех 2: Мейп ТегПВс ВгогЬ (а1ао Еспогчп аа ТВ; ТаггоЕ апгЕ НоЬЬя 1987) Рег !пег: То 900 гп! оЕ г)еюп(ген Н,О, ай): ггургопе 12 8 уеааГ ехГгасГ 24 8 8!усе го! 4 гп! 5Ьа1се ипг)1 гЬе ао1игек Ьаче г))аао1чег) ап0 гЬеп яеП!1ге Ьу аигос1ач)п8 Еог 20 пипи!ее ас 15 ря (1.05 (с8)сгп~) оп 1и!иЫ сус1е.
А11отч йе ао(и6оп Го соо1 Го 60'С ог 1еая апд йеп агЫ 100 гп! оЕ а ьГеП1е ао1иГ)оп оЕ 0.17 М КН РО, 0.72 М К,НРО4. (ТЬ15 ао1иГюп аспас(е Ьу Йеао(ч)п8 2.31 ц оЕ КН РО4 апд 1254 8 оЕ К,НРО4 1п 90 гп1 оЕ Аеюп(гес( Н О. АЕГег йе за!!а Ьаче йаао!чес), аг))иаг гЬе чо1ипге оЕ гЬе ао1и6оп го 100 гп| и (гЬ Аеюп!гег) Н О апй аГег11(хе Ьу аиГос1ач(п8 Еог 20 пппиГеа аГ 15 ря (1.05 (с8!сгп~( оп 1к)иЫ сус1е.) 2х г'Т Мед)игп Рег 1пег: То 900 т! оЕ с(еюп)ген НгО, агЫ: ггургопе 168 уеакГ ехсгасГ 108 ХаС1 58 5Ьа1се ип61 йе ао1игеа Ьаче й1аао)чео. Мана! йе РН Го 7.0 ичгЬ 5 !4 14аОН <! >.
Аг))иаг йе чо1игпе оЕ ЕЬе ао1иг!оп го 1 1!гег ългЬ деюп!ген Н О. 5гег111хе Ьу аигос1ач)п8 Еог 20 гп)пигеа аГ 15 ря (1.05 )с8/ст~) оп 1н)иЫ сус!е. А2.6 Аррепс((х 2: МегВи 6ТОЕААСЕ МЕ01А 44 !МРОПТАЬГТ ГЛае ЙКППед с)е!ои!гес) Н,О !и аП геореа. Еще Сп1тпгеа ВасгеПа цготч!08 оп р1агея ог ш 1!с)или сп1шге, сап Ье хгогес) !и а1н!иоь оГ 1.В гпесбши сошапипц 30Уо (чГч) хгеП1е 81усего1. А!14!по!5 оГ 1 ш! оГ 1.В нс(ТЬ 81усего! ЕЬои16 Ье ргерагес1 апс1 чоггехед го епялге йа! йе 81усего1 ь сагир!есе1у сбарегаед. А)гегиаг!че!у, ЬассеПа! Етга!па и!ау Ье хлогес1 Ги ЕВ 6еегбп8 Ьийег: Е В )геег(п5 Ьнууегс 36 шМ К НРО, (апЬус1гопх) !3.2 гпМ КН РО4 1.7 шМ Еос(!шп сЬгате 0.4 шМ М850 7Н О 6.8 гпМ апииопнии ял1Еа!е 4.496 (чуч) 8!усего! лп Г.В ЪВ Ггеегбиц Ьпйег (Хппгпег аис) Негу!пс)ег С!ЪЪлих 1997) ь Ъея гпас)е Ъу с!!550!у!08 йе ха1ь !и 100 ги1 оЕ ЪВ Го ГЬе хрес66ес1 сопсеплгалгопх.
Меаялге 95.6 гп! оГ йе гехп16и8 50106оп шго а ЕгехЬ сопга!пег, апс1 ТЬеи асЫ 4.4 ги1 оЕ 81усего1. М!х !Ье ао1пбои лче11 апс) йеп хгег41гхе Ьу рахх!08 6 ЕЬгоиПЬ а 0.45-)лги СПхрохаЪ|е Ъ)а!Пепе 6!гег. Рог гиоге ГиЕоппа6оп оп 5!Ога8е оЕ ЬасгеПа! сп1шгех, р1еазе хее Арреисбх 8. ВтаЬ Сп!тпгеа Ргераге алаЪ си!Шгеа !и 81ахх гба15 (2 — 3 ил!) лч(ГЬ асгелч-оп сара 6иед чч!ГЬ гиЪЪег Пах)сетя АсЫ гио)геп ЬВ а8аг ип61 ЕЬе ч(а15 аге !лчо-йис(5 Гп1!. Ап!ос!аче ТЬе раг6аПу 61!ес1 ч!а!5 (АТЬ ТЬелг сара !Сохе!у хсгетчес) оп) Гог 20 пиппгеа а! 15 ря (1.05 148/сшл) ои 1н!СЫ сус1е.
Вешоче йе ч!а)5 !гоги йе аигос!аче, 1ег ЕЬеги соо1 го гоопл гегпрегагше, аис( ЕЬеп 68Ьгеп ЕЬе сара. 51оге йе ч!а15 аг гоопл гегпрегашге пп61 пеес)ей АМТ1 В1ОТ1С6 ТАВОТЕ А2-Т Соиииои1у Наев АиВЪГоНс 5о1и6оиа ТАГОккГшс СошсешткАЕГош 5тоск 5ОГСТГОм' СошсешткАЕГОш 5ТОКАСЕ Пееххео РЕА5МГО5 5 т к! ш с е ш т РГА5мГО5 Мациспаса Гоаа асс аасахоагив о! ГссгасусЬпс.
ГЛас шсаГа чойош азахасашил аа!и Гс ГН ! В шсдГаиз ! Гог асГсспап а! Ьассспа ссансапс са ссссасусппс. '5ссп!ас носк со!опоил оГ аииЬюпса йаш!ссй го Н,О Ьу 6!папоп снсаоЕЬ а 0.22-рш 6!ссс. ахас!Ьюиса йшо!чса Га сйаио! иссд иос Ьс асспбассГ. 5сосс ао!асюиа ш !ГЕЬЬГГХЬГ соасашсга. Аплр!сППи СагЬсию81ш СЫогашрЬси!со! Каиашус!и 5ггсргошус!и Тсггасус!!иса 50 гпхуш! !и Н,О 50 т8уги1 ш НлО 34 т8уш1 !и сГЬапо! !О ш8/гп! !и Н,О !О ш8йи! !и Н,О 5 т8йи! !и сйапо! — 20'С -20 С -20 С вЂ” 20"С вЂ” 20'С вЂ” 20'С 20 р8йи! 20 р8йп1 25 р8йп! 10 рхйи! 10 р8йп! 10 р8йи1 50 р8йи1 60 148ут! 170 ГГ8!ш! 50 )48/ил! 50 148ут! 50 !сап! Апт!Ь!ог!сг А2.7 ТАВЕЕ А2-2 АпНЫойс Мо|Гев оЕ Асноп Могесигбв ЪЧЕ!СНТ Акт! вютю МООе Ое Аст!Он Г Ватны 1х| Овмхтюн АсВпошус!и С, !асвпогпус|п Р! 1255.4 924.
! 349.4 В1еошусш п.ау СагЬепк!Пш Ейю|вшп аа11) 422.4 СЫогашрЬепко! 323.1 СепеВс|п !6418 Вепе|к|п йш1Гаге! 692.7 Сеп|ашус|п 692.7 !пЬ|Ь|ь ргоге|п |упйеяя Нувгоп|ус!и В 527.5 Капагпус!и шопоап!Гаге 582.6 Ме|Ьо|геха|е 454.45 МПогпусш С 334.33 Хеошусш В ап1Еасе 908.9 ХогоЬюс!и юсПпш аа11 634.62 Реп|сП1ш С аосПшп аа1с 356.4 Рпгошусш ЖЬуПгосЫогЫе 544.4 РВЕагпрк |п 823.0 5|гергогпус|п |ш!Еа|е 1457.4 'п.а. !п|вса|е| по| агаваме. Ап|РЬо|егк|п Ашр!с!Пш Те|гасусПпе Ьу|Г|осЫог!|Ге 480.9 1пЫЬ|ь аупгЬеяа оЕ КХА Ьу Ъ|псПпв со сГопЫе-аггапсГес$ РХА.
Вгоайаресггпгп апВЕппва1 авепс Егогп 5|герсотусе|. 1пЬ!Ьгь сеП-каП ауп|Ьеяа Ьу !пгегЕеппв кн|Ь рер|Ыо- 81усап сгоы-!шЫп8. 1пЬ!Ь!га РХА аупйеяя с!еаза а!п81е-аггапсГесГ РХА. 1пЫЬгь Ьасгепа! ггаП ауп|Ьеяя 1пЬ!Ь!га |тапа!аВоп Ьу ЫосРПпв рер|Ыу! сгапатегаае оп |Ье 505 пЬоаоша! я|Ьпп||; а| Ь~ВЬег сопсепггаг!опа сап |пЫЬ|г еп1|агуогк РХА аупгЬеяа. Аш!по81усоя|Ге В гохк со а Ьгоа|Г гапве оЕ сеП гуреа !Ьасгепа!, Ь|ВЬег р! апг, уеааг, |пагп|паПап|, ргогохоапя Ье!пппгЬаП |ьеП |и ае1есПоп оЕ еп!сагуог!с се1Ь ггапа- Еогше|Г ччгЬ пеогпус|п геа!агапсе Вепея 1пЬ!Ъ|ь ргосе|п ауп|Ьеяа Ьу Ь!псвпв со 1.6 ргоге|п оЕ йе 505 г!Ъоаоша! |шЬпп|!.
Вгоа|Г-аресггпш апПЬюгк; Ь!псЬ го 705 ПЬоаоп|а! апЬ- шп| ап|1 !пЬ!Ь!Га Вгогч|Ь оГ Вгаш-роянче апсГ Вгаш- певавче Ьас|епа ап|Г гпусор!аяпая А Ео1к аск1 апа1ов; а рожегуп! !пЬ|Ь|гог оЕ йе епхугпе ЙЬу|1гоЕо!а|е ге|Гпсгаае. 1пЫЫВ РХА аупйеяя апВЬас|епа! |о Вгаш-рояВтп Вгаш-пава!!че, ап|Е асЫ-Гас| ЪасПП, В!о|14 го 305 г!Ьоаогпа! | пЬппн апсГ шЬ~Ь|ь Ьас|епа1 рго|еш ауп|Ьеяя Васгепо||аВс аппЪ|овс; !пЫЬ|ь Вго|г|Ь о! Вгаш-рог!||те Ьасгепа.
1пЬ|Ь!ь рерИ|1о81усап аупгЬеа!а !п Ъасгена1 сеП гга!В. 1пЬ|Ь!ь ргоге|п аупгЬеяа Ъу асппв аа ап апа!ов оГ апппо- асу! |КХА !самее ргеша|пге сЬа|п |егпппагюп!. 5ггоп81у !пЬ|Ь!ь ргоЬагуонс КХА ро1ушегаае ап|Е шапппаПап КХА ро!ушегаае со а 1еяег |!евсее. 1пЬгЬ|ь рго|е|п ауп|Ьеа|я Ь!псГа |о 305 пЪоаоп|а! |пЬппП. 1пЬ|Ь~|а Ьасгепа1 ргоге|п аупгЬеа!а; Ыос1са г!Ьоаоша! Ъ|псПпв оЕ аш!поасу1-|КХА.
Р!еаае аее йе !и!оппагюп рапе! оп АМР1СГШХ АХР САКВЕХ1С1ШХ аг йе епсГ оЕ СЬар|ег 1. Р!еаае аее |Ье !пуоппагюп рапе1 оп СНЕОКАМРНЕХГСОЕ а! |Ье епсГ оЕ СЬаргег 1. Р1еаае аее |Ье !пЕогшаноп рапе1 оп КАХАМ гСГХ5 аг йе епсГ оЕ СЬар|ег 1. Р!еаае аее йе |пгоппаноп рапе1 оп ТЕТКАСЪСИХЕ аг |Ье еп|1 оЕ СЬаргег 1.
А2.8 Арреит!тх 2: Мет(та йОПЗТ1ОМй РОК ЪЧОККИЧС 'сттт!ТН ВАСТЕК1ОРНАСЕ Х А СМРОКТА~ЧТ Оае Йас!!!ет) с)е!оп!тес) Н О !и а0 георея Ма1соае Ма1соае, ап шйисег ог йе йепе (!аитй) сЬас епсос)еа йе ЬассепорЬайе Э. гесерсог, 15 ойеп асЫетс со сЬе тпесйшп с)опием йгоъчсЬ от Ьассепа сЬас аге со Ъе иаес1 тот р1айп8 ЪассегюРЬайе )с. Лйй 1 ш1 от" а атеп1е 20% тпа!Соае ю1ийоп тот ечегу ! 00 ш! от' апет)!шп. Рог а йтгСЬег т((асиаяоп ос йе пае ос ша1Соае, р1еаае аее йе Магепа15!(ат ш СЬартег 2, Рготосо! !.
Ма1се ир а асеп1е 20% атос)с зо1ийоп от' ша1соае аа то11отчя тпа1соае 20 8 Н,О со !00 тп! 5сеп1сае сЬе ао1ийоп Ъу рааяпй й сЬгоийЬ а 0.22-)сш 61сег. 5соге йе асеп1е ю1исюп ас гоотп сетпрегасше. апс( ой1ийоп от Ьассет!орЬаце )с атос)ся 5Сеп1!ае сЬе Ъийег Ьу аисос1ач(пц Тот 20 ппписеа ас 15 ря (1.05 )сйусш') оп 1н)иЫ сус1е. Айег йе ю!итюп Ьаа соо1ес1, с)сарепае 50-тп1 а1!тсиога )пСо атеп1е сопСаспегя 5М тпау Ъе асогес) спйейппе1у ас гоош сетпрегасиге.
А 2% 8есайи то!илии ь атас(с ьу агссс!и8 2 8 оГ 8е!айи си а соса! чосиите ог" с00 ти! иг' н О аигс аисийачгп8 тьс ао!ийии уиг с5 из!пасет ас 15 ртс (1.05 сфситт) ии 11иистс сус!с. ТМ Рет !йег: 1 м Тг!яС! (РН 7.5) 50 пт1 М85О, 7Н О 2ц Н,О со ! !йег 5сеп1!ае сЬе Ьийег Ъу аисос1ачспй тот 20 пйписеа ас ! 5 ря (1.05 )сй!сшс) оп 1н!иЫ сус!е. Айег йе ю1ийоп Ьаа соо!ес1, йарепзе 50-гп1 а1нрлога !псо ксеп1е сопса(петя ТМ тпау Ъе яогей шс1ейпйе!у ас гоош сетпрегасиге. ТЬ!а Ьийег га наес( Сот атога8е Рег 1йег: ХаС! М85О4 7Н20 ! М Ттт5-С1 (РН 7.5) 2% 8е1айп ю1ийоп НО 528 8 28 50 ш1 5 тп) со ! 1йег МЕ01А РОК ТНЕ РКОРАСАТ1ОМ А!х)0 оЕЬЕСТ1О!Ь) Ог УЕАоТ* А САГ)Т1О)х Р1еаае аее Аррепг!!х 12 Еог арргорпа|е Ьапг)!!па оЕ п|а|епа!8 шаг)сед ю!1Ь <! >, 4~ 1МРОГГТАЬГТ Г)ае г)!81!!!ег! г)е!оп)ген Н,О |п а!! гес!рея Г)п!еаа огЬегю)ае 81агег), тег))а апг! 8о!иоопа аге 81ег!!)гес! Ьу аи1ос!ач)пВ а1 | 5 ря (1.05 !|а|сш|) Гог 15-20 гпши|ея Со|пр1е|е Мпшпа) (СМ) ог Яупйее!с Со|пр!е|е (ЯС) апг! !Теор-оиГ Мед!а То |еа| йе роюсЬ ге|1шгегпепь оЕ 8|га!па, Ь !8 |ьеуи! |о Ьаче гпейа !п юЬ|сЬ еасЬ оЕ йе сопнпоп! у епсоип|еге|1 аихо|горЬгеа ь аирр!ешепгег) ехсер| |Ье опе оЕ !п|егеа| (багор-оиг шейа).
Е)гу Вгоюй аирр1ешеп|8 аге 8|огег) ргепнхей СМ (ог 5С) ь а шег(!шп !п юЬзсЬ йе дгор-оггг пнх сон|а!па аП роаяЫе |шрр1е|пеп|8 (!.е., по|Ь!па ь "с)горрег( ои|"). уеаа| погоВеп Ьаае ю(ГЬоиг апнпо ас!о8' 6.7 а В1исоае 20 В Вас|о АВаг 20 В г)гор-ои1 пих 2В НО |о 1000 ш! 'Уеааг погодеп Ьаге ю!ГЬоиг апнпо ас!й (УЬГВ) Ь аоЫ еЬЬег юЬЬ ог ю!ГЬоиг апипоппип я|1Еа|е. ТЬЬ гес!ре Ь ЕогУЕГВ ю!ГЬ апипопгип| |и1(а|е,!Е|Ье Ъоп!е оЕУЬГВ Ь !ас$с!пц апипошшп хи!Гасе, а|Ы 5 а оЕ апипопшгп |и1Еа|е ап|1 оп1у 17 а оЕ УХВ.
Ргор-оиг М|х СошЬ(пе |Ье арргорПа|е шцгейепь, пнпиа |Ье ге1ечап| |шрр1ешеп! я апг) пнх !п а аеа1ег) сон|а|пег. Тшп |Ье соп|ашег еп|1-очег-еп|! Еог ас 1еаа| 15 пипи|еа; а|Ы а Ее|9 с!еап шагЫеа |о Ье!р пнх йе 8о1кЬ. асЫ 'аерпи|е|Г Гго|п Аг|апи е| а1. (1998). Аг!еп!пе А1ап!пе АГВ!и!пе Аарагаа(пе Аараг|к асЫ Суяе|пе С1игаш!пе С1и|апнс асЫ С!ус!пе Н!81(йпе 1поя|о1 18о1еис!пе 1.еис|пе 1.уяпе Мейюшпе рога-АпипоЬепгок РЬепу!а!апше Рго!|пе ВеПпе ТЬгеоп|пе Тгур|орЬап Тугояпе Огас|1 |га!!не Ме|Е!а Еог йе Ргораеаг!оп апг) Весг!оп о( Уеагг А2.9 0.5 В 2.0 В 2.0 а г.о В 2.0 В 2.0 В 2.0 В 2.0 а г.о В г.о В 2.0 В г.о В 1О.О В 2.0 ц 2.0 В о.г В г.о д 2.0 В 2.0 ц 2.0 В г,о В 2.0 В 2 О В 2.0 В А2.10 Аррепйх 2: Мейа ТАВЕЕ А2-3 СотропепЬ о( 5ирр!ешепсес! М!и!ша! Мейа 5тОсх СОмсемткАтюм ЧОшме ТОк 1 Епек Ое ЕсмАЕ СОмсемткАтюм Чосиме Ое 5тОск тО СОм5птиемт (Сс100 МЕ) 5ТОСХ ОЕ МЕОсиМ (МЕ) 1М МЕО10М (МС/НТЕК) 5РКЕАП ОМ РСАТЕ (МС) '5сосс ас гоопс сашрссасша.
РАса аисг ан1ос1ааш8 сьс пьсяшн. Вирр1ешепсес( Мпшпа1 Медпцп ($ММ) ВММ ь Я) (р1еаае аее Ье1очч) со счЬ(сЬ сапоиа кгосчСЬ 5ирр1егпепь Ьаче Ьееп асЫей ТЬеае ю1иНопа сап 1Ьеп Ье 5согес( Гог ехсепс(ес( репосЬ. 3оше 5Ьои(д Ье 5согес1 ас гоот сеспрегасиге, ш огс(ег со ргечепс ргес(р(сасюп, тчЬегеаа сЬе осЬег ю1иьопа шау Ье ге(пцегасей Ъй~егечег арр1каЫе, НС! аа1ь оГ агйпо аспЬ аге рге(еггей Ргераге ТЬе тейшп Ъу асЫ(пк сЬе арргорпасе чо1шпеа оГ йе 5сос1с ао1шюпа со йе !пкгейепса оГ ВР гпейшп апс( йеп ас()иасспк ТЬе соса1 чо1шпе со 1 1Ьег сч(ТЬ й51111ес( Н О. АсЫ ТЬгеопше апс( аарагск асЫ ю1иНоп5 аерагасе!у со йе тейшп аГсег Ь ь аисос!ачей А1сегпайче1у, Ь Ь ОГсеп псоге сопчешепс со ргераге йе тейшп Ъу аргеайпк а япа!1 с!иапс(су оГ йе аирр1егпепс(5) оп сЬе аиг(асе оГ ап Ю р1асе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
