Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 120
Текст из файла (страница 120)
Е61исе йе ю!ибопк ълсЬ Н О со а Впа1 сопсепсгасшп ог" 50 спм дЫТР. 5соге еасЬ керагасе1у ас — 70'С !п кта11 а!киоск. 'ггггаче1епВСЬ (пгп) Ехбпс6оп СоеГВсгепс (Е)(м 'ст ') Ваке Рог а сичепе нч!сЬ а расЬ !епВСЬ ог" 1 сгп, аЬюгЬапсе = Ем. 100 тм ксос14 ко|ибопк о( еасЬ д(к)ТР аге сопипегсга!!у анаг1аЫе (РЬаггпасга). Рог ро!угоегаке сба1о геасссоок (РСКк), ад!ивс РЬе дНТР ко!одоп со РН 8.0 44!4Ь 2 к СсаОН. Соттег- сга||у ача||аме ко!ипопк о! РСК-8гаде дгсТРк ге9опе по ад!иксгоеиг. !3!теСЬу!ки1(ох|де (13МВО) РигсЬаке а Ь48Ь Вгаде ог" |)М50 <! > (НРЕС раде ог Ъепег). ЕВчЫе йе сопсепь ог'а СгекЬ Ъопде шсо ! -гп1 а1к!иопмп ксеп!е сиЬек. С!оке йе сиЪек 68Ьс1у апс1 ксоге ас — 20'С.
()ке еасЬ а!|с)иос оп1у опсе апд йеп д|ксагд. с)1сЫойге|со! (|)ТТ, ! м) !)!кко1че 309 8 о(сВйшйгеВо! сп 20 пг1 ос 00! м код!ит асесасе (РН 52) апд ксеп1гае Ьу 61сга6оп. !3!крепко шсо 1-гп1 а!киоск апд ксоге ас -20"С. с)пдег сЬеке сопд(с|пик, д!сЫосЬгеВо! В ксаЫе со охЫабоп Ьу агг. ЕЕгТА (0.5 м, РН 8.0) АсЫ 186. ! 8 о( д|код|ит Е()ТА 2Н,О Со 800 т1 о( Н О. 56г лВогогь!у оп а та8пе6с к6ггег.
Ад)гьс йе РН со 8.0 ълсЬ !к(аОН (-20 8 о( ХаОН ре1|еск< ! > ). (3|крепке гпсо а!|с)иоск апд ксеп!схе Ьу аисос1ач|гс8. ТЬе д!код|ит ка1с ог" ЕЕ|ТА ъч!11 пос Во шсо ю1и6оп оп|В сЬе рН о( йе ю1и6оп ь ад)иксед со -8.0 Ьу йе асЫиюп ог ХаОН.
ЕСТА (0.5 м, РН 8.0) ЕОТА В еСЬу1епе 81усо! Ык(|3-ат!поеСЬу! ейег) Ж,)ч',М',гч"-СеСгаасСе!с асЫ. А ю1иСсоп ог" ЕСТА |к шаде ир екьепба!1у ак декспЬес| гог Е|3ТА аЬоче апд ксегВ!аед Ьу еЬЬег аисос!ачш8 ог 61сегш8. Йоге йе ксе61е ко!шюп ас гоосп сеспрегасиге. ЕСЫйшп ВгогпЫе (!О т8/т1) АсЫ 1 8 о(есЬЫшт Ьгопиде <! > со |00 гп! ог" Н О. 56г оп а тацпес!с к6ггег (ог кечега1 Ьоигк со епыге сЬас йе дуе Ьак д|кко1чед. Хгар йе сопса|пег |и а1шпшшп Со|! ог сгапк(ег йе ю1исюп со а даг)с Ьосс!е апс| ксоге ас гоот сетрегасиге.
А О С Т 259 253 271 267 |.54 х |04 |,37 х !04 9.10 х 104 9.60 х 104 СЬет!си/ 5гое/г Бо/и6опз А/.27 бе1а6п (298»ч/ч) АсЫ 2 8 о(8е1а6п со а соса1 чо1шпе оГ 100 т1 оГН О апг( ансис!аче сЬе ао1исюп Гог 15 пиписеа ас 15 ря (1.05 )г8/ст-') оп !н1шд сус1е. б1усего1 (1098 ч/ч) Р!1исе 1 чо1шпе оЕ то1еси1аг-ЬЫ1о8у-цгас1е 81усего! т 9 чо1испеа оЕ асеп1е риге Н О.
5Сег!1!хе СЬе ю!и6оп Ъу разяп8 Ь СЬгои8Ь а ргеппае6 0.22-!пп Выжег. 5соге )п 200-гп1 а1к)иоса ас 4'С. 1РТб (2058 сч/ч, 0.8 М) 1РТб )а ьоргору1СЬЫ-!3-Сг-Ва1асгоаЫе. Ма)ге а 2098 ао1игсоп оЕ 1РТб Ъу 61ыо1»!п8 2 8 оГ 1РТб !п 8 гп1 оЕ г)!а61!ес) Е1,0. Аг))иас сЬе чо1шпе оЕ йе ю!и6оп со 10 гп1 »6й Н О апс) асе61гхе Ьу расьспц Ь сЬгоиВЬ а 0.22-)ст 6!ароааЫе 6!сег.
Рсарепве сЬе ю1шюп шсо 1-пс1 а1н!иоь агЫ асоге йегп ас — 20"С. КС! (4 м) Р!аю1че ап арргорпасе апсоипс оГао1Ы КС! сп Н О, аисос!аче Гог 20 тсписеа оп 11с)шд сус!е апд агоге аг гоогп Сетрегагиге. 1с$еа11у, СЬь ю1и6оп аЬои1с4 Ье г(1»Ыег) !пго япа1! (-С00 Сс1) а1и)иоса т асеп!е сиЬеа апг( еасЬ а1щиос сЬегеаЕсег иаег( опе сппе.
Ый!шп СЫогЫе (1лС1, 5 м) Рью1че 21.2 8 оГ ЫС1 ш а Впа1 чо1шпе оЕ 90 т1 оЕ Н О. Ас)) ия йе чо1шпе оЕ йе ао)шюп со 100 т1 »6й Н О. 5сег!1!ге йе ю1и6оп Ьу ракяп8 6 сЬгоиВЬ а 0.22-)ссп 61сег, ог Ьу атос!ач!п8 Еог 15 ппписеа ас 15 ря (1.05 )с8/етс) оп 1(с)ш6 сус)е.
йоге йе ю!исюп ас 4"С. МВС1с 6НсО (! М) Р!55о!че 203З 8 оГ МцС1, оН,О !п 800 т1 оГ Н,О. Аг))иас йе чо1шпе со 1 1!сег ълсЬ Н,О. Рьрепае шсо а1н!иоь апг) асеп!схе Ъу ансис!ач!п8. МВС1, ь ехсгете1у Ьу8гоюор!с. Виу апса11 ЬоСС1еа (е.8., 100 8) ап6 до пог агоге орепес! Ьо61еа Сог 1оп8 рег!огЬ оГ Сппе. м88О, (1 м) Рью1че 12 8 оГ МВВОс т а Йпа1 чо1шпе оГ 100 т! оЕ Н О.
5Сег11ые ЬУ ансис!ач!п8 ог Ес)- сег асег!1!гас!оп. 5соге ас гоот сетрегасиге. Ма!Сохе (2098 сч/ч) Рью!че 20 8 оЕ та!созе ш а Впа! чо!шпе оЕ !00 сп! оЕ Н,О ап6 яеп1)хе Ъу рамссс8 и сЬгоиВЬ а 0.22-ргп 61сег. 5соге сЬе асе61е ю1исюп ас гоосп сеспрегасиге. ХаОН (1О с4) ТЬе ргерага6оп оЕ 10 сс ХаОН <! > !пчо1чеа а Ь18Ыу ехосЬегтк геасс!оп, с»Ь1сЬ сап сасье Ьгеа)га8е оЕ 81ась сопсаспегя Ргераге йь ао1исюп »6сЬ ехсгете саге сп р!аас!е Ъеа)гега.
То 800 гп1 оЕ Н,О, а!ос»1у а»Ы 400 8 оЕ С4аОН реПеса < С>, абгппц сопбпиось1у. Аа ап аеЫед ргесаисюп, р!асе йе Ьеа1сег оп ке. ггЬеп сЬе ре11еса Ьаче сС!аю!чег) сотр1есе1у, асс!иас йе чо1шпе со 1 16ег »6й Н„О. 5соге йе ю1и6оп !п а р1аз6с сопса!пег ас гоот сеспрегасиге.
5сег)1!гас!оп ь пос песемагу. Ь)аС1 (8ог!!ит СЫогЫе, 5 М) Рьао!че 292 8 оГ Ь)аС! сп 800 т! оЕ Н О. Аг))иас сЬе чо)ите со ! 1Ьег ълсЬ Н О. Рьресье спсо а1!г)носа апг) асе61схе Ъу аисос!ачш8. 5соге йе 14аС! ю!и6оп ас гоогп сеспрегасше.
А/.28 Аррепйх /: Ргерагаг(ои о/ Кеацеигь апд Вафегь (/ьед т Мо!еси/аг С/оигиц Ро|уе1Ьу|епе ц|усо! (РЕС) )ь а ьсга)цццсЬа)п ро|угпег о/а ь)тр!е гереацпц ип|1 Н(ОСН СН ),ОН. РЕС )ь ача||аЫе |п а гапце о/ гпо|еси|аг сче)цЬ)ь счЬоье пагпеь ге8ес| 1Ье пигпЬег (и) о/ гереаг)пц ип)сь )п еасЬ ,' пю|еси|е. |п РЕС 400, /ог ехашр!е, п = 8-9, шЬегеаь )и РЕС 4000, и гапцеь /югп 68 1о 84.
РЕС )пдисеь ' гпасгопю|еси|аг сгосчд(пц о/ ьо|и1еь )п ас|иеоиь ьо!игюп (Улпгпеппап апд М)испи 1993) апс! Ьаь а гапце о/ иьеь )и гпо|еси|аг с|оп|пц, |пс|ийпц: ° Ргессрцабоп о//2/с/А то/еси/еь ассогс//иц /о /Ие/г ь/хе. ТЬе сопсепггацоп о/ РЕС гес)и(гед (ог ргес|рИа1юп )ь !и |пчегье рюроггюп 1о йе ь)ге о/ |Ье ОЫА /гцатепгь (Ьь апс! 5сЫец 1975а,Ь; Оца|а апд С|1Ьег1 1977; Е)ь 1980); р|еаье ьее СЬар1ег 1, Рго1осо! 8, апд СЬаргег 2, Рго1осо! 6.
° Ргессрйабоп апс/ риийсайои о/Иас/ег/орИаце рагбс/еь (Уасиатого е| а!. 1970). ° /псгеаь/ид СИе еКюс/епсу о/геаььт /аВоп о/сотр/етеп гагу сИа!пь о/ пос!е)с асЫь ди ниц ЬуЬг)д)аагюп, Ыип1-епд 1|цагюп о/ ОНА пю|еси|еь, апс| епд-!аЬе!!пц о/ ОНА чд|1Ь ЬасгегюрЬаце Т4 ро1упис)ео1)де |опаье (2!шшеппап апд М|п1оп 1993; р|еаье ьее 1Ье |п/оппа1юп рапе! оп СО)с) РЕН5!)с)С А~ЧО СКО)А/О!(с)С РсЕАСЕ)с)Т5 )п СЬар1ег 1). ° Еиь/ои о/си/гигед се/И и//Л Бас/ег/а/ рго|ор/аьсь (5сЬа/(пег 1980; КаььоиЬас|ецап е1 а!. 1982).
Рогаьяшп Асе1а1е (5 М) 5 М ро1аьь|иш асе1а1е 81ас|а| асе1к асЫ <! > Н,О 60 сп1 115 ш! 28.5 ш1 ТЬе геьи1дпц ьо1игюп |ь 3 М сч(й геьресг го рогаььшгп апд 5 М сч|1Ь геьресг 1о асегаге. 51оге 1Ье Ъи//ег а1 гоош 1егпрегагиге. Я>5 (20% ьч/ч) А!ьо са11ед ьойшп 1аигу1 ьи1/аге. Р!ььо1че 200 ц оЕ е1есггорЬогеяь-цгаде Я>5 < ! > |п 900 ш| оЕ Н О. Неа1 1о 68'С апд ьйг ъчЬЬ а гпацпедс гйггег го аыгьг д|ььо!иг)оп, 1Е песеььагу, ад!ия 1Ье РН го 7.2 Ьу адйпц а Ееьч с1горь оЕ сопсепггагес1 НС1 <! >.
Ад!иы 1Ье чо1шпе го 1 |Ьег сч!й Н,О. 51оге аг гоогп гегпрегагиге. 51еп1|гаг|оп |ь пог песеььагу. Ро пог аигос|аче. 81!чег 51а(п. Р!еаье ьее ьеат/иц ьес//оп (АРРепйх 8). цойшп Асе1аге (3 М, РН 5.2 апд РН 7.0) Е)(ььо1че 4083 ц оЕ ьойшп асегагеЗН О !и 800 ш1 оЕ Н,О. Ад)иы 1Ье РН 1о 52 сч!й ц|асга1 асег|с асЫ <! > ог ад)иьг йе рН го 7.0 сч(й й1иге асегк асЫ.Ад!иьгйе чо1шпе го 1 |ггег сч(1Ь Н О. Е)|ьреиье шго а1и!ио|ь апс| ыеп1(ге Ьу аигос|ачгпц. црегш!д!пе (! М) Е)|ььо!че 1.45 ц оЕ ьреппЫгпе (Егее-Ьаье Еопп) ш 1О ш) оЕ де|ои|гед Н О апд ьгеп1Ые Ьу раьяпц п 1ЬгоицЬ а 0.22-ргп Ес11ег.
5)осе 1Ье ьо!ос|оп гп ьшаП а!|с)иогь аг — 20'С. Ма1се а ЕгеьЬ яос1с ьо1игюп о/1Ыь геацеи1 ечегу пюпй. РЕС 8000 Чгог)с)пц сопсеп1гагюпь оЕ РЕС <! > гапце Егош 13% го 40% (чс/ч). Ргераге 1Ье арргорп'- аге сопсепггаг!оп Ьу д!ььо1ч|пц РЕС 8000 ш ьгеп1е Н О, ьчагшшц |Е песеььагу. 51еп1)ге йе ьо1игюп Ьу раьь!пц Ь йгоицЬ а 0.22-)снап 6|гег. 51оге 1Ье ьо1иг!оп а1 гоопг гешрега1иге.
СЬет!са! 5госЕ 5о!инопв А!.29 цТТВК Со!6 Я!а!ишц цо1пг!оп 5УВК Со!6 (! > (Мо1еси1аг РгоЬев) !5 вирр11ес1 ав а всос14 во1и6оп оЕ ип)споиип сопсепсгагюп !и с)!гпегЬу15и1ЕохЫе. Ацагове це!5 аге вгавпес1 ш а виог)с!иц во1и6оп оЕ 5"г'ВК Со!д, тиЬвсЬ В а 1:10,000 гВ1пбоп оЕ 5'1'ВК Со!6 пис1егс асЫ вгагп ви е!есггорЬогеяв ЪМ1Тег.
Ргераге ииогрбпц вгос143 оЕ 5'г'ВК бо16 ба!1у ап6 вгоге ш ТЬе баг)с аг геци1аГег) гоогп гегпрегасиге. Рог а г)!5сивв!оп оЕ всагпгпц ацагове це!5, р1еаве вес СЬарсег 5, Ргососо1 2. Тг!сЬ!огоасег!с Ас!в! (ТСА; 1009о во1псюп) То а ргеи!оив!у ипорепе6 Ьогг1е сопгагпшц 500 ц оЕ ТСА с!>, ас)6 227 ш1 оЕ Н О. ТЬе геви16пц во1и6оп вн!11 сопсавп 1009о !Тнви) ТСА. Х-ца1 Яо)пг!оп !299 ин/и) Х-ца1 13 5-Ъгошо-4-сЫого-3-)пс)о1у1-!)-Тт-ца1асгов!4)е. Ма1се а вгос14 во1и6оп Ьу 6!53о1ишц Х-ца1 !и с)ипегЬу1Еогитагп!6е (! > аг а сопсепггагюп оЕ 20 шцйп! во1и6оп.
1)ве а ц1838 ог ро1ургору1епе гиЬе. ввггар йе шЬе сои!а!п!пц йе во!пгюп !и а1шпшшп !о11 го ргенепг дашаце Ьу!!ВЬТ апс) вгоге аг -20'С. 1г гв пог песеввагу со вгеп!иее Х-ца1 во1игюпв Ьу 61сгаГюп. Р1еаве все йе шЕоппасюп рапе) оп Х-САЕ1п СЬаргег 1. нв нш 1Т 18 ПГ~П въем Еввзев 1 Еввв вес Тпв '! ввв ~ )') ЕЯ ~ )1.апшапввев вв ув ~.а!4~ ~))!в 1,~ ~ )СД пспшоев ПППППИППКПП Я~Ж~~В~Я~ЯЯЯЯ~~ЦЯ~Я Е!С$)КЕ А1-1 Реиогнс ТаЫе ГногпЬегв !и рагепгневев аге йе гпавв пипТЪегв о! йе гповГ яаЫе!во1оре о! гнаГ е!егпепг.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
