Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 119
Текст из файла (страница 119)
|п гпо|еси|аг с[оп)п8. МОРЯ 'ь а соптропепС о[ Ъийегв ивет[ [ог Сйе е|есСгорЬогевь о[ 8)нА СЬгоиЯЬ айагове Яе[в (СеЬгасЬ еС а!. 1977; СоЫЪег8 1980). ТАРЕ бе1 Е!есггорЬогеяв Вийег 20 гпм Тг[в-асетате (РН 8.2) 0.5 птм ЕТ)ТА [7ве асейс асЫ со ат[)ивс сЬе РН оЕ сЬе Тг!в ю!шюп со 8.2, апт1 иве сЬе Егее асЫ оЕ Е[)ТА, пос сЬе юйшп ва[с. Сопсепсгасет[ ю1ийопв оЕ ТАРЕ Ъийег сап а1ю Ье ригсЬавет[ (е.й., Еготп Вес1опап). й !МРОКТА)ЧТ ТЬе ТАЕЕ Яе! е[ессгорЬогев)в Ъийег птивс Ъе соо|ет! со 14'С Ъе[оге иве. СеИоайпу Встйегз бх АПсаИпе бе1-1оайпВ ВиЕЕег 300 птм [наОН <! > 6 тпм Е[ТТА 1896 (тч)г) Рко!1 (Туре 400, РЬаппас[а) 0.1598 (ыг) Ьгоптосгею1 Вгееп 0.25% (то[а) ху!епе суапо1 ВгопюрЬепо1 В1ие Яо1иНоп (0.4о/о, те)ч) Т)[вво[че 4 тп8 оЕ ю[Ы ЬготпорЬепо1 Ыие !п 1 тп1 оЕ всеП[е Н,О.
Ясоге йе ю1ийоп ас гоогп сегпрегасиге. ТАВЕЕ А1-В бх Се1-1оад!08 Войега Воеееа ТуРе 6Х Вогееа 5гойхое Темгеахгоае 0.25% (ач)ч) ЬгогпорЬепо1 Ыое 0,25% (чг)ч) ху!епе суаоо! ГР 40% (Мч) аосгоье !и Н,О 4'С 0.25% (чг)ч) ЬгопаорЬепо! Ыое 0.25% (чг)ч) ху!епе суапо) РР !5% (ь)ч) Бсо!! (Туре 400; РЬаггаас!а) !и Н О гоопа гегпрегасоге 0.25%о (Мч) ЬгогпорЬепо! Ыое 0.25% (ю)ч) ху)епе суапо! РР 30% (ч)ч) 81усего! !и Н О 4С Н! 0.25% (ач)ч) ЬгогоорЬеоо1 Ыое 40% (хч!ч) аосгоае !и Н,О 1Ч 4С ВгогпорЬепо1 В1пе Впсгове Яо)пйоп 0.25% (чг!У) ЪгогпорЬепо! Ыпе 40% (хчуч) апсгоае Сгеао! Кед Во1цйоп (10 гпм) Рьао1че 4 пг8 оу ЕЬе хойпгп аа!! ог" сгехо! гед (А1дпсЬ) ш 1 пг1 оГ хгей1е Н,О. Вгоге гЬе ао1пгюп аг гоого гегпрегагпге.
1Ох Рогпга)деЬуде бе!-1оайпВ Впйег 50% (чуч) 81усего1 (й1пгед гп РЕРС-ггеагес1 <! > Н О) 10 гпм ЕРТА (рН 8.0) 0.25% (хчуч) ЬгопхорЬепо! Ыпе 0.25% (учуч) ху1епе суапо1 РР РпгсЬахе а йай!ес1 с1еюпйед ргерагайоп оу РогпгагоЫе апд агоге )п апха)! а1)о по!а ппдег ппго- Веп аг — 20"С. А)гегпаг!Уе!у, с1еюшге геа8епг-Вгаде РогпхапгЫе аа деаспЬед ш Аррепйх 8. Роггпагп)де-1оайпВ Впйег 80% (чг)ч) с1еюпйед 1оппагпЫе < 1> 10 пУМ ЕРТА (РН 8.0) 1 га8/гп1 ху1епе суапо1 РР 1 пг8/гп! ЬгогпорЬепо! Ыпе К)х)А Се1-1оайпВ Впйег 95% (ч)ч) деюпйед 1оггпапгЫе <!> 0.025% (хч!У) ЬгопюрЬепо1 Ыпе 0.025% (хч)ч) ху!епе суапо1 РР 5 пгМ ЕРТА (рН 8.0) 0.025% (уч!У) 5Р5 Ргерагайоп оу Вифегг апд $(осЕ 5о1иГ(от АЕ19 Ргерага|Ып о~Ог8аи!с Кеа8епгл Ал.23 РКЕРАКАТ1ОМ ОГ ОКСА!Ч!С КЕАСЕМТ5 СА!лТ!ОМ: Р1еаье аее Аррепспх 12 1ог арргорпа!е Ьапг!Пп8 о! п|а!епа1а таг)сег! лч!!Ь <!>.
Р!лепо! Моя ЬагсЬеь ог сопипегс|а1 1щиеглес! рЬепо1 < 1> аге с!еаг апс! со!ос!ела апс! сап Ье иаес! !п пю1- еси)аг с!отп8 |чПЬои| гейяП1аг!оп. ОссаяопаПу, ЬагсЬез ог' 1и~иейег! рЬепо1 аге р!п1| ог уеПоъ; апг! |Ьеье аЬои!П Ъе ге) есгег) ап|1 гегигпес! |о |Ье тапигасгигег. СгуяаП!пе рЬепо! |а по| гесоттепг)ес! Ъесаые П пшъг Ье гег))ьгП1ег! ас 160'С |о геточе охЫа|юп ргойк|я я|сЬ аа с!шпопея йас саиае йе ЪгеаИолчп ог рЬоарЬоспеяег Ьоп|Ь ог саиае сгоя-ПпЫп8 ог ПХА ап|1 у|ХА.
Ес!гл!!!Ьга6оп о1 Р!лепо! Вегоге иае, рЬепо! |пия Ье ерш!!Ьгагег! |о а рН ог >7.8 Ьесаиае |Ье у|ХА рагппопа !п|о |Ье ог8апк рЬаае а| асЫ рН. Ч'еаг 81очеь, гиП гасе ргосеспоп, апг! а!аЬ спас лчЬеп саггу|п8 ои| |Ь!а ргосе|1иге. 1. йоге!н)иейес! рЬепо! а| -20 С. Аа пее|1е|1, геточе |Ье рЬепо! ггот |Ье ггеехег, аПо|ч П |о ъчапп |о гоот |егпрега|иге, апс! |Ьеп теП П а| 68'С. А|Ы Ьус!гохус)шпоПпе |о а Ппа! сопсеп|га|юп ол 0.19к ТЬ!а сотроип|1 !а ап аппохЫап|, а рагпа1 |пЫЪ||ог ог ПХаае, ап|1 а |чеа1| сЬе1а|ог ог" плела! !опа (К!гЪу !956). 1п а|Ы||юп, |и уеПолч со!ог ргочЫеа а сопчетеп| |чау |о Ыепл!!у йе ог8ап!с рЬаае.
2. То йе |пе1|ес1 рЬепо1, а|Ы ап ес!иа! чо!шпе ог'Ъийег (иаиаПу 05 М ТН>С1 )рН 8.0] а| гоо|п гетрегагиге). 5|)г йе пих|иге оп а п|а8пепс ал)ггег гог 15 пипи|ея Тигп огТ йе апггег, апг) |чЬеп йе гччо рЬааеь Ьаче зерагагед, акр)гаге аа гписЬ аа роьяЫе о! |Ье иррег (ас)иеоиа) рЬаье ияп8 а 81ааа р|репе аггасЬег! |о а часишп )ше ег)и!ррег) чч!|Ь арргорпа|е !гара (р!еаье аее Аррепспх 8, БПиге А8-2). 3. А|Ы ап ег)иа1 чо1шпе ог О.
! ал' ТН>С1 (рН 8.0) |о |Ье рЬепо1. 5|!г |Ье пих|иге оп а та8пепс зпггег гог !5 пппи|ея Тигп о!Т йе ьпггег апс! геточе йе иррег ас)иеоиа рЬаье аь г!еасг!Ьес! !п йер 2. Переаг йе ех|гаспопь ипп! |Ье рН ог' йе рЬепо!к рЬаае )а >7.8 (аз теаяигес! лч)гЬ рН рарег). 4. Айег йе рЬепо! !а ес)иП!Ьгагес) апс! |Ье Ппа! ас)иеоиа рЬазе Ьаа Ьееп геточеП, ас)П 0.1 чо1шпе ог О.! х4 Тг)>С1 (рН 8.0) сопсашш8 0.288 !3-тегсарсое|Ьапо1 < ! >. ТЬе рЬепо! |ю1ипоп п|ау Ье яогег) !п гЬ!а !огт ипс!ег 100 гпм Тпв-С1 (рН 8.0) |п а ППЬг-г!8Ьг Ьоп1е а| 4"С гог репой ог ир Го ! |попй. РЬепо1:С!л!огогоггп:18оаплу! А!со!ло! (25:24:1) А пих|иге сопяьпп8 ог ег)иа! рагп ог' ес)ш1!Ьгагес! рЬепо! ап|1 сЫого)огт:ьоату! а1соЬо! < ! > (24:1) !а ггес!иепс!у иаег! со гепюче ргоге!па ггот ргерагапопа ог" пис!е!с асЫя ТЬе сЫогогогт с!епагигеь рголе!пь ап|1 УасППасеа |Ье аерагаг!оп ог" гЬе ациеоиа апг) ог8апк рЬааеь, апс! йе !аоату1 а1соЬо1 гес)исеа гоат!п8 с!иг!п8 ех|гаспоп.
Хе)|Ьег сЫогогогт пог !аоату1 а!соЬо! гег)и!ген сгеа|гпеп| Ьегоге иае. ТЬе рЬепо!:сЫогогогтбаоату1 а1соЬо1 пих|иге гпау Ье агогес) ип|1ег 100 гпм Тг!>С! (рН 8.0) !п а ППЬг-г!8Ьг Ьогпе а| 4"С гог рег!о|Ь ог' ир со 1 топ|Ь. С/лет/са! 5/ос/г цо/ибера А1.25 СНЕМ!САЕ >ТОСК йОШТ!ОМЬ САСЗТСОЬ1: Р!еаае аее Аррепйх 12 Гог арргорг!аге Ьапд1!пц оГ тагес!а!а таг)сед лч!СЬ <! >. Асгу1аппйе Яо1иг!оп (4598 чч/ч) асгу1атЫе (Р!4А-вес)иепс!иц цгаде) <1> Х,Х'-тесЬу!епеЬ!лассу!апис1е <1> Н,О 434 ц 16 ц со 600 т1 Неас сЬе ю1исюп со 37 С со 6!аю!че йе сЬеписа!я Ас))иас йе чо1шпе со 1 16ег чбсЬ Йя С!11ес( Н О. Рцгег СЬе ао1и6ои СЬгоицЬ а пбгосе11и!осе 61Сег (е.ц., Ха1це, 0.45-гпкгоп роге яге), апс( а!осе сЬе Гл1сегес) ю1и6оп ш айаг)с Ьосс1еа ас гоот селпрегасше.
Ас6потус!п Р (5 псц/лп1) Рлаю)че ас6погпуслп Р <1> ли тейаио1 <! > ас а сопсепсга6оп оГ 5 тц/т). 8соге йе асос)с ю!ибоп ас — 20'С !и йе баг)с. Р1еаае аее йе лп(оппасюп рапе1 оп АСс С!9ОМуесм Р ли СЬарсег 7. Апппопппп Асегаге (1О М) То ргераге а 1-16ег ю1и6оп, с)!сао!че 770 ц оГ апппоишт асесасе ш 800 т1 оГ Н,О. Ас))иас чо!ите со 1 16ег лч)сЬ НлО. 5сеп!!ге Ъу 6!сга6ои. А!сегпа6че)у, со ргераге а !00-пл) ао!и6оп, Йыо!че 77 ц оГ апипопипп асесасе ш 70 пл1 оГ Н,О ас гоогп сегпрегасше. Ас))иас СЬе чо1ите со 100 пс! ъч!сЬ Н О. 5сеп!!ге сЬе ю1и6оп Ьу рааа(пц 6 сЬгоицЬ а 0.22-рсп 61сег. йоге йе ао!и6оп ш 68ЬС1у аеа!ес( Ъоп!еа аг 4'С ог аг гоот СетрегаСиге.
Апипопипи асесасе с)есотроаеа !и Ьос Н,О апс( ю1ис!опа сопсалпшц Ь аЬои!6 пос Ье аисос1ачес1. Апппоптпс Регаи)Гасе (109а лч/ч) апппопсшп регю1Гасе <! > сц Нло Со 10 пл1 Рью1че 1 ц аттопппп регю1(асе 1и 10 пл1 оГ Н 0 апс! яоге ас 4'С. Атгпопиип репи1- Гасе бесауа е!олч1у ш ю1ис!оп, ю гер1асе сЬе а!ос)с ю1и6оп ечегу 2 — 3 счее)ся Апппотшп регаи1Гасе ь гьед аа а саса1уас Гог йе соро1утепгасюп оГ асгу1атЫе апс) Ь|аасгу1ат!6е це1я ТЬе ро)уплепгабоп геасбоп ь с!пчеп Ъу Ггее гас)1са1а цепегасес) !лу ап охЫо-гес(исс!оп геассюп ш лчЬкЬ а Йатше (е.ц., ТЕМЕР) ь паем аа йе ас))ипсс саса!уас (СЬгагпЬасЬ апс1 Кос)Ьагс) 1972).
АТР (1О лпм) Р!аю!че ап арргорпаге агпоипС оГ ю!Ы АТР ли 25 АМ Тгь-С! (рН 8.0). 8гоге йе АТР ю1исюп ш япа!1 а1нрлоь ас — 20'С. Са!сшт СЫог!де (2.5 м) Р!аю1че 1! ц оГ СаС1 6Н 0 )и а 6па1 чо1шпе оГ 20 гп1 оГ 6!ас!1!ес! Н,О. 5сеп1!ге сЬе ю)исюп Ьу раса!пц 6 йгоицЬ а 0.22-(ст 6!сег. 5соге ш 1-т1 а1ирлоь ас 4'С.
Ассепоаспе Р)РЬоврЬасе (АРР) (! лпМ) Р!аао1че ю1Ы адепояпе ЙРЬоарЬасе ш зсег!1е 25 лпссс Тпа-С1 (рН 8.0). цсоге япа11 а1к!иоь (-20 сс1) оГ йе ао1ибоп ас — 20"С. АЕ26 АррепсВх |: ргерагаг(оп о~йеа8епгк стд Вифегк Иед т Мо!еси!аг С!опт8 Соотакк|е Яа1тп8 Яо1исюп Ег!кко1че 025 8 о(Соогпакбе ВН!1сапс В|ие 2250 гп 90 т1 о(гпейапоЬН О <С> (1:1ч)ч) апс1 |О гп1 ос 81ас|а1 асеск асЫ <! >. Р1!сег сЬе ю!ибоп сЬгоиВЬ а ЪнЬастап Ь(о. 1 61сег со геточе апу рагски1асе гпассег. 5соге ас гоогп сетрегасиге. Р!еаке кее йе епсгу оп Соотакксе Йагпгп8 гп АррепсВх 8. !Зеохуг!Ъопис1еок|де ТНРЬокрЬасек (дарк) !)око!че еасЬ дХТР ш Н О ас ап арргохипасе сопсепсгасюп ог" ! 00 гпм.
Оке 0.05 м ТгВ Ъаке апд а писгоргрессе со ад!икс йе РН ог еасЬ о( СЬе ю!и6опк со 7.0 (ике РН рарег со сЬес14 сЬе РН). (3!1исе ап а!|с)иос ог" йе пеисга1гхед дЬ!ТР арргорпасе!у, апд геад йе ор6- са! депясу ас йе нначе1епВсЬк 8!чеп гп йе саЪ|е Ье!осн. Са1си!асе йе ассиа! сопсепсга6оп ог" еасЬ дЫТР.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
