Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 117
Текст из файла (страница 117)
АсЫ Н,О со 1 1Ьег. Есьрепае йе ао!игюп )псо аПс)иоь апд асен1ске йепс Ьу ацсос1алп8 Еог 20 ги(пысеа ас 15 ра) (1.05 )с8)сш') оп Пс)шс1 сус1е ог Ьу 61сег асегП)гас)ои. 5соге сЬе Ьийег ас гооги сепсрегасыге. РВ5 Ь а согогооп1у оаед гсавегп йас Ьаа Ьееп ассарсесс Еог сВГГегсос арр!ссасгопа сСосе йас сЬе гсс|ре ргеаепсес( Ьеге 1асСса с!Сна!еос саоопа 1Е оссеыагу, РВВ |пау Ье аорр1сгоепсед юСсЬ с гам СаС1р апс1 0.5 огМ МВС1,. 10х ТПя Е13ТА (ТЕ) рН 7.4 100 тм Тгь-С1 (рН 7.4) 10 гпм Е(3ТА (рН 8.0) РН 7.6 100 гпм ТПа-С1 (рН 7.6) 10 гпм Е(3ТА (РН 8.0) рН В.О 100 гпм Тна-С1 (РН 8.0) 10 гпм ЕЕЗТА (рН 8.0) 5сегП(ге ю1иПопа Ьу аисос!ач!ив Еог 20 гп!пиСез ас 15 ря (1.05 )с8/снап') оп Пс)шд сус1е.
5соге сЬе ЬпГГег ас гоопс сегпрегасиге. Тгса-С1 (1 м) 13саю1че 121. 1 8 оЕ Тгь Ьаае 1и 800 гп1 оЕ Н О. Ас))пас сЬе рН со йе с)еягес) ча!пе Ьу асЫсп8 соисепсгасес1 НС1 <! >. РН НС1 7.4 70 гп) 7.6 60 гп! 8.0 42 гп! АПосу йе ю!исюп со соо1 со гооги сеспрегасиге ЪеЕоге гпаЫп8 Впа1 асЦиасгпепса со йе рН. АсЦиас йе го!игие оЕ сЬе ю1иПоп со 1 Псег сс)сЬ Н,О. Е)ьрепае )псо аПсрлоь апс! асеП1еге Ьу апсос)аг)п8.
1Е йе 1 м ю1шюп Ьак а уеПосу со)ог, с)(асагс( П апс( оЪса)п Тна оЕ Ьепег срла!Ьу. ТЬе РН оГ Тгь ао!иПопя ь СегпрегаСиге-с(ерепс!епс апс( с)есгеааея -0.03 РН ии)ь Гог еасЬ 1 С )псгеаае )и Сетрегаспге. Рог ехапср1е, а 0.05 М юЫПоп Ьаа РН га1иеа оЕ 9.5, 8.9, апс! 8.6 ас 5"С, 25'С, апс) 37'С, геаресс(ге!у. А1.10 Арреийгг 1: РгератаВоп оуЛеадеип аий Ви!7егя Иеа! гп Мо1еси!аг С!оп(и8 10х Васеег!орЬаВе Т4 ОНА Ро)угпегаае Впууег 330 шм Тгь-асе!аге (РН 8.0) 660 гпм роГааа!пгп асеГа!е !00 тм ша8пеяппп асега!е 5 тм 8!гЫогЬге!го! 1 т8йп! Ьох!пе зепип а1Ьпппп (ЕгасЕоп У; 5!8ша) 13!гЫе йе 10х а!ос)с Ьпо япаП а1и)попа апд ьгоге Егогеп аг — 20'С. 10х ВасеегюрЬаВе Т4 Ро1уппс1еогЫе К!паае Впйег 700 гпм Тг!к-С! (РН 7.6) 100 гпм МЕС! 50 тм ЙйюГЬге!Го! 13(гЫе йе 10х а!ос(с !пго аша1! а!н)попа апг! агоге (госдеп аг — 20'С.
5х ВАЬ 31 Впйег 3 М ХаС! 60 гпм СаС1, 60 гпм МЕС! 100 шм ТП5-С! (РН 8.0) 1 гпМ ЕЕ!ТА (РН 8.0) 10х РерЬоврЬогу!аг(оп Впууег (Еог (Ъе ичгЬ С1Р) 100 тм Тгь-С! (рН 8.3) 10 шм МЕС1, 10 тм ЕпС1, 10х РерЬоарЬогу1аг(оп Впйег (Гог 1)ае ъчгЬ 5АР) 200 шм ТПь-С! (рН 8.8) 100 шм МЕС1, 10 гпм ХпС1 1х ЕсоВТ Мейу1аае Впууег 50 шм ХаС1 50 шм Тг!ь-С! (рН 8.0) 10 тм Е)3ТА 80 )гм 5-ас(епозу1шейюп!пе йоге йе Ьпйег (п япа1! а!п1пога а! — 20 С. 10х Ехоппс1еаве 111 Впйег 660 шм Тгь-С1 (РН 8.0) 66 шм МВС! 100 гпм )1-гпегсар!оегЬапо! < ! > А<Ы ))-гпегсаргоегЬапо! )па! Ье1оге пае.
10х К1епоге Впйег 0.4 М рогааашш РЬозрЬаге (рН 7.5) 66 тм МЕС1, 10 тм )3-шегсарсое!Ьапо1 <! > Ргерагатюи оГ Виолетт апЛ 5тос)с Во)иттот А1.11 10х Е!п1тег К!паве ВцГГег 600 тпм ТПМС! (РН 7.6) 100 тпм МВС1 100 тпм сй|Ью|Ьге!|о! 2 т8йп1 Ьоч!пе аетц|п а!Ьшпш Ргераге ГтеаЬ )цат ЪеГоте цае. Хцс1еаве 81 Р18евт!оп Вцйег 0.28 М ХаС! 0.05 М аотйшп асетате (рН 4.5) 4.5 тпм 7п504 7Н,О $|оге а!!т)иота оГ пцс!еаье 5! ЬцГГет а| -20'С, апд ат)о пцс!еазе 51 то а сопсепттайоп оГ 500 цп!та)|и! )цат ЪеГоге цае. 10х Ргоге1паае К ВцГГег 100 п|м ТПМС) (РН 8.0) 50 п|м ЕРТА (РН 8.0) 500 тпм ХаС) 10х Вечегае ТгапасПрсаае Вцйег 500 шм ТПМС1 (РН 8.3) 750 тм КС1 30 тМ МВС1, ВХаве Н ВцГГег 20 |пм ТПМС1 (РН 7.6) 20 шм КС1 0.1 |пм ЕРТА (РН 8.0) 0.1 тпм Й|ЬютЬте!то1 Ртераге йеаЬ )ця ЬеГоте цяе. 5х Тегпипа1 ТгапаГегаае Впйег Моя шапцГастцгета ацрр1у а 5х геасйоп Ъцйет, тчЬкЬ туркайу сои|а!пя 500 тпм ротатяшп сасо|1у!ате (РН 7.2) <! > 10 тпм СоС1 6Н,О 1 тм сй|Ь!о|Ьгейо1 5х тегпипа! ттапаГетаье (от са!1ш8) Ьцйет |пау Ье ргератет! ассотсйп8 |о |Ье Го1!отч!п8 тпетЬот! (ЕьсЬепГе!й ес аЕ 1987): 1.
Ес)ц!!!Ьтате 5 8 оГ СЬе!ех 100 (Вю-Кат)) ъч!|Ь 10 тп1 оГ 3 М рогата!цш асе|ате ат гоотп тетретатцге. 2. Айет йче пипцтея теточе ехсеаа!щц!т! Ъу часцшп якйоп. ЪЧааЬ йе СЬе1ех |Ьгее т!шеа тч!|Ь 10 т1 оГ|1еюп|хе|1 Н О. 3. Ргерате а 1 М |ю1цтюп оГ ротааапип сасоду!ате. Ет)ш!!Ьтате |Ье сасо|1у!асе ао1цйоп тч!|Ь йе ттеатет! СЬе!ех теяп. 4. Кесочет йе сасос)у!асе гю)цтюп Ьу раьяп8 й тЬтоц8Ь а ВцсЬпет Гцппе1 Гтттет) чг!|Ь ЪтгЬатшап Хо. ! Гйтег рарет. Ргерагайоп о7 ВиЯегг апй 5/оса 5о!ийопз А1.13 Хеисгайаасюп Вийег 1 (Еог Тгапауег оЕ РХА со ЫпсЬагдесс МепсЪгапеа) 1 М Тпа-С1 (рН 7.4) 1.5 М ХаС1 Хеисга1!аас!оп Вийег Н (Еог А1)са!1пе ТгапаЕег оЕ РХА со Ху1оп МепсЬгапеа) 0.5 М Тгы-С1 (РН 7.2) 1 М ХаС! Хеигга!са!пд Во!и6оп !Еог Хеигга1 ТгапзЕег, Роийе-аггапссесс РХА ТагВега Оп!у) 0.5 М Тг!а-С! (РН 7.4) 1.5 М ХаС1 РгеЬуЪг!йгас!оп 5о1исюп !Еог Рос, Ыос, апс! ХогсЬегп НуЪгсйаасюп) 0.5 М сойцсп РЬозрЬаге (РН 7.2)' 798 <ъч/у) 5Р5 1 псМ ЕРТА !рН 7.0) «05 М рЬоарЬасе Ьцсуег ь 134 а оЕ МаНРО, 7Н О, 4 гп1 оЕ 8598 НЗРО«< ! > (сопсепсгас- ес! рЬоарЬопс асЫ), Н О Со 1 1сгег.
Рге/суЬпг//гас/оп апг/ НуЬг!ТЕ/гас!оп Бо/ссссот РгеЬуЬпйаасюп/НуЬпйаа6оп Во1и6оп (Еог Р1ас)ие/Со!опу Ьсйа) 5098 Сг/г) ЕоппаспЫе (орйопа!) <! > бх 55С (ог бх 55РЕ) 0.05х В1.ОТТО Ас ап а1СегпаСХе Со сйе аЪоче гю1ц6оп, цае СЬцгсЬ Вцйег (р1еаяе аее гес!ре оп р. А1.12). Еог абгссе оп са)йсЬ ЬуЪпйхас!оп ао)цС!оп Со ияе, р!еаае аее сЬе рапе! оп РКЕНУВйсРсУАТ!ОХ АХР НУВК101УАТЮХ 5ОСС/Т!ОХ5 |п 5Сер 5 оЕ Ргогосо1 32 сп СЬаргег 1. Еог ас)ч!се оп сЬе цае оЕ ЕоппаспЫе, р!еаае атее сЬе !пЕоппасюп рапе1 оп ГОВМАМЮВ АХО !Т5 С/5Е5 сХ МОСЕСС/Ий ССОХсХС сп СЬаргег б.
РгеЬуЪгЫсаас!оп/НуЪг!йсаа6оп 5о1ис!оп (Еог НуЪгЫиас!оп ш Аииеоца Вийег) бх 55С (ог бх 55РЕ) 5х РепЬагс)с'а геаВепс !атее р. А1.15) 0,598 (гг/г) 5Р5 1 р.В/пс1 ро!у(А) 100 )с8/гц! ьа)псоп анрепа РХА РгеЬуЪгЫ!гас!оп/НуЪпй!аа6оп 5о1ис!оп (1ог НуЪгЫ1хасюп ш РоппагпЫе Вийега) бх 55С !ог бх 55РЕ) 5х РепЬагс)с'а геа8епс (атее А1.15) 0.598 (са/г) $Р5 1 СсВ/пс1 ро!у(А) 100 Ссц/пс! аа1псоп ьрегпс РХА 509о /г/ч) Еоппапибе <1> Айег а СЬогоц8Ь ппх!п8, 61сег сЬе зо!цс!оп сЬгоц8Ь а 0.45-Сспз с)!кроьаЫе се1!ц1оае асесасе гиеспЬгапе (5сЫекЬег 8« 5сЬиеП 1тп!Воъ. яуг!п8е гпегпЬгапе ог е9ц!ча1епс).
То десгеаае Ъас)с8гоцпс! соЬеп ЬуЬпйлп8 ипс)ег сопб!с!опт оЕ гес)исес! ьспп8епсу !е.8., 20 — 3098 Еогпсапис1е), Ь га цпрогсапс со цае ЕоппагпЫе сйас ь аь риге ая роса)Ъ)е. А!.!4 Аррепйх !: Ргерагапоп о/' Кеа8епгл ап>/В»фегл Иед >п Мо!еси!аг С!о>г>п8 РгеЬуЪпйга6оп/НуЬгрд(гагюп 5о!и6оп (Еог НуЬпйгагюп (п РЬоарЬаге-5Р5 Виггег) 0.5 М рЬоьрЬаге ЬиВег (рН 7.2)' 1 шМ ЕРТА (РН 8.0) 79о (ч>/ч) 5Р5 198 (и>/ч) Ьочше аегиш а1Ьипип (/ае ап е! есСгорЬогеяа раде о! Ъо>дпе аегиш а!Ьиппп.
!н!о ЫосЫп8 а8епга ог ЬуЬпйгагюп гаге епЬапсегз аге гес!шгед лч!гЬ гЬь раг6си1аг ргеЬуЬпйга6оп/ЬуЬпйгагюп ю1игюп. '05 М РЬоарЬаге Ьи!!ег ь !34 8 о! Ыа НР04 7Н 0,4 гп1 о! 859о Н>Р04 <! > (сопсепггаге>1 рЬозрЬог!с асгд), Н О го 1 !Пег. 20х 55С Р)аю1че 175.3 8 ог ЫаС1 апд 88.2 8 о! юд!иил сПгасе ли 800 ш! оГ Н,О. Ад)иа! гЬе РН го 7.0 чдй а геччдгора ол а 14 >4 ю1и6оп ог" НС! <!>.Ад)иа! гЬе но!и>пего 1 1пегнч!гЬ Н О. Р!арепае шго а1щиога. 5геп1!ге Ьу ашос!ан!п8.
ТЬе 6па1 сопсепггабопа о! гЬе )п8гейепь аге 3.0 М ЫаС! аид 0.3 М юйшп сПгале. 20х 55РЕ Р!аю1че 175.3 8 о! )н)аС1, 27.б 8 о! )н!аН РО4 Н О, ап>1 7.4 8 о! ЕРТА лп 800 гп1 о! Н О. Ад)иа! йе рН го 7.4 ичгЬ )н)аОН <! > (-б.5 гп! о! а !О М ао!иг!оп). Ад)иаг гЬе чо1игпе го 1 1пег лч!>Ь Н О. Рьрепае !пго а1щиогя 5геп!!ге Ьу аигос1андп8. ТЬе 6па! сопсепггадопа о! гЬе лп8гейепга аге 3.0 М ХаС1, 0.2 М ЫаН РОР апд 0.02 М ЕРТА. В!ое/с!пц Ацеп/х В1осЫп8 ацепь ргечепг 68апда (гош зг!сЫп8 го зш!асея ТЬеу аге гьед (и пю1еси1аг с!оп(п8 го згор попарес!6с Ълпйп8 о! ргоЬеа ли 5оигЬегп, погйегп, апд лчеагегп Ыог6и8, !л 1ей го гЬе(г олчи дечлсея гЬеае ргоЬеа лчои1д Ъ>пс1 68Ы1у апд попарес!6саПу со йе ялррогг(и8 и!ггосеПи1оае ог пу1оп шелпЬгапе.
>ч>!гЬои! ЫосЫп8 а8епгя П ччои!д Ъе !илрокяЫе го де!ее! апугЫп8 Ъи! йе аггоп8еаг гаг8ег шасгошо1еси1ея Хо опе (спонна !ог аиге нчЬа! сагьеа попарес)глс Ьшйп8 о! ргоЬея НудгорЬоЬ>с рагсЬея 68и!п )гприпиея ехсекяче!у ЫВЬ сопсепггабопа о! ргоЬе, очегЪаЫп8 ог иидегЪаЫп8 о! шггосеПи!оае 61сеь, апд Ьоиюро1угпегк лес)иепсеа )и пис1ек асЫ ргоЪеа Ьаче аП Ьееп Ыашед ггош гппе го гппе, со8ейег лн!гЬ а Ьоз! ол!е>ь 16се1у си!рпгя нл>Ьагечег гЬе саизе, гЬе ю1шюп ь ПепегаПу яплр1е: Тгеас гЬе 6!гега чдй а ЫосЫп8 ю1игюп сои!а!п!п8 а сос1сгаП о/ыЬагапсеа йа! чу! сошресе чдй гЬе ргоЪе !ог попарес!6>с Ъ>пйп8 а!геа оп йе ю1гд ялррог!.
В1осЫи8 а8епга лног(с Ьу Ьгиге !огсе. ТЬеу аге гьед )и Ь18Ь сопсепггагюпа апд ВепегаПу сопа!аг ог а сосЫал! о! ЫВЬ- гпо1еси1аг-лче!8Ь! Ро1ушега (Ьерапп, ро1учшу!Ругго1гд!ие, иис1ек ас!да), ргоге!иа (Ьочше аегиш а1Ьшшп, поп(аг дпед ипПс), апд >1есег8епь (5Р5 ог ХопЫе! Р-40). ТЬе !оПомчп8 гесопппепда6опа арр1у оп1у го пу!оп ап>1 гдггосеПи!оае 61сегя СЬаг8ед пу!оп 6>1сега аЬои1д Ье ггеасед аа деаспЪед Ьу гЬе !пйчЫиа1 шапигасгигег. В!ос!Вп8 А8еп!а (/лед !ог А>ис!е!с Ас!д НуЬпд!га!!оп. Тлно ЫосЫп8 а8епь >п сопипоп гье ш пис1ек асЫ ЬуЬпйга6оп аге РепЬагд!'а геа8еп! (РепЬагй 19бб) апд В|ОТТО (Воч!пе Еасго Тгапагег ТесЬпи)ие ОР6пигег; !оЬпюп е! а!.
1984). )3аиаПу, гЬе Ясега сап улп8 гЬе птппоЫПгед гаг8ег шо!еси1еа аге лпсиЬагед лч!гЬ гЬе ЫосЫп8 а8епь !ог ап Ьоиг ог гъчо Ъе!оге гЬе ргоЬе !а аддед. !п шпаг сааея Ьас)с8гоипд ЬуЬпйга6оп ь согпр1еге1у аиррге>ьед лнЬеп 61геь аге шсиЬасед чдгЬ а ЫосЫп8 а8еп! сопяаг!п8 о! бх 55С ог 55РЕ сопгаш!п8 5х РепЬагдг'а геа8епг, 1.098 5Р5, апс( 100 ш8/ш1 депагигед, зЬеагед аа1пюп арепп Р)н!А. ТЬ1а ипхшге аЬои1д Ье иаед Ргерагаг(оп оу ВиЯегг алг$5гос)г 5о!и||о|и А1.15 нчЬепечег сЬе гасю оу я8па! со поье ь ехрессе|1 со Ье 1осч, Гог ехагпр1е, |чЬеп саггу|п8 ош погсЬ- егп апа1уа|а оу !осн-аЬипг)апсе К)х)Ао ог 5оиСЬегп апа1уяа оГ яп8!е-сору аег)иепсеа оу шашгпаПап Р)х)А. Носчечег, ш шоас осЬег сйсшпяапсеа (бплпасе|п-Но8пе|ь ЬуЬпйхаиоп, ВепсопРачь ЬуЪ|1|$(хас(оп, 5ои1Ьегп ЬуЬпйхайоп оЕ аЬип|1апс РЬ)А аег)иепсея есс.), а 1е|ь ехрепа|че а1|егпаВче ь бх 55С ог 55РЕ сопсашш8 0.25 — 0.59о попуас ||пес| пиП| (В1.ОТТО; )оЬпюп ес а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
