Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 118
Текст из файла (страница 118)
1984). В!ос)с|п8 а8епсо аге июаПу |пс1иг)ег) |п Ьо|Ь ргеЬуЪпйхасюп ап|$ ЬуЪг|1$(гас(оп ю1ис(опо счЬеп пЬгосеПи1оае 61сега аге иаегс. Но|чечег, счЬеп |Ье саг8ес пис1ек ас|сс ь ншпоЪ|1йе|$ оп пу!оп ше|пЪгапея йе Ыос)ип8 а8епп аге оугеп оппие|$1гогп |Ье ЬуЬпйхаСюп ао|ийоп. ТЬь ь Ъесаиае Ь!ВЬ сопсепсгаВопа оу ргосе!и аге ЪеПече|$ со (псегГеге ъчПЬ |Ье аппеа1ш8 оТ |Ье ргоЪе со |и саг8ес. ОиепсЬ|п8 оу |Ье ЬуЬпйхайоп я8па! Ъу Ыос)с|п8 а8епп ь рагВси1аг!у поскеаЫе нчЬеп оПВопис!еос|г)еа аге иае|$ ао ргоЬея ТЫа ргоЫеш сап оусеп Ье ао!нег! Ьу саггу|п8 ош |Ье ЬуЪ|Ы|хаг|оп а(ер |п а ю1иПоп соп|аиип8 ЫВЬ сопсеп1гайопа оГ 505 (6 — уоо), юйшп рЬоя рЬа1е (0.4 м), Ъонспе оегиш а!Ъиппп (!ого), апс1 ЕЕ)ТА (0.02 М) (СЬигсЬ ап|$ СПЪег1 1984). Нерапп ь аошейшеа чье|1 (пасса|) оу РепЬагй'о ю1исюп ог ВЕОТТО |нЬеп ЬуЬпйхайоп ь сагпе|1 оис ш |Ье ргеаепсе ос |Ье ассе1егасог, гсехсгап оп!Тасе.
1с Ы иае|$ ас а сопсепсгасюп оу 500 р8)ш1 ш ЬуЪпйхайоп ао1ийопа сопсаиип8 |1ехсгап ю!Тасе. 1п ЬуЬпйхасюп ю1шюпа сЬас с(о пог сопСаш 11ехСгап ю!Еа|е, Ьерапп В иаес) аС а сопсеп|гаПоп оГ 50 $|8(ш! (5|пВЬ апг|)опеа 1984). Нерапп (5!Вша рогс|пе Вгас|е 11 ог ег)и|ча1епс) (о й|ьо!че|1 ас а сопсепсгаПоп оу 50 ш8)ш1 ш 4х ВВРЕ ог 55С апс( асогег) ас 4'С. 0ЕЬ|НА|СРТ'5 $СЕАСЕЬ|Т РепЬагдг'о геа8еп| В иге|с (ог ° попЬегп ЬуЬ|Ы(гас(оп ° яп8|е-сору 5оисЬегп ЬуЬпйгаВоп ° ЬуЪпйгаПопо )пно(н(п8 РНА (гпшоЬП(гег( оп пу|оп гпегпЪгапео РепЬагсЫ'о геа8епс (о иоиаПу гпаг(е ир ао а 50х осос(г оо(ис(оп, ннЬкЬ 'ь (Псегегс ап|! осоге|$ а1 — 20'С.
ТЬе ос(г ю|исюп 'ь й!исес) сеп(оЫ |псо ргеЬуЬп|йа1юп Ъи((ег (июаПу бх 55С ог бх ВВРЕ спаса(п(п8 1.0оА 505 100 и8(гп! с)епасигесс оа(|поп ореггп 0ЫА). 50х РепЬаг81'о геа8еп1 сопса|гь (п Н О (РепЬагдс 1966): 156 (ннМ БсоП 400 1оА ЬнМ ро(ун)пу(ругго()г(опе 11й ЬнМ Ъо|8пе оегигп а)Ъигп(п (5$8пса, ЕгасПоп Н) ВЕОТТО <!> ВЮТТО 'ь иае|$ (ог ° Сгипоге(п-Но8пе|ь ЬуЪпсйа|юп ° Вепсоп-Рачь ЬуЪпсйа1юп ° аП 5оисЬегп ЬуЬ|$|$(гас(опо осЬег (Ьап о(п8(е-сору с(ос Ыосо ап|$ о(ос Ыоь 1х ВЮТТО 'ь 5оА (снгн) поп(ас гсг)ес( п|ПЕ йою!нес( |и Н,О спаса(п)п8 0.02;й юйигп ах(г(е < $>. 1х ВЕОТТО 'ь осогег( ас 4'С апс! 'ь й(исес)10-254о|с! )псе ргеЬуЪп|ПгаВоп ЪиВег Ъе(оге иое. ВЮТТО оЬои(г) пос Ъе иоес) |п согпЫпаВоп ъьй Ь~ВЬ сопсепсгас(опа о(505, |нЫсЬ нн(П саиое |Ье гпП)г ргосе(по со ргес(р(саге.
П Ъас)|8гоипгс ЬуЬпгйа6оп В а ргоЫегп, Ноп)г(ес Р-40 гпау Ъе а|Ые|! |о а Ппа! сопсеп1га1юп о(1;4 (нМ. ВСОТТО п|ау сопса|п ЫВЬ (ене(о о( ВЫаае апг! оЬои!с( Ъе 1геа1е|1 ъг(СЬ йе|Ьу1ругосагЪопа|е (5(е8е! ап|$ Вгеопй$| 1986) ог Ьеасе|$ онеги)8Ь| 1о 72оС ()нсопосе)п е1 а1. 1992) ннЬеп иое|$ (п попЬегп ЬуЪ|$|$)гас(опо ап|! гнЬеп КС4А В иоег( ао а ргоЪе.
ВЮТГО ь по1 |ь ейессйе ао РепЬаг81'о ю1и6оп ннЬеп (Ье саг8е1 РНА 'ь (гпгпоЬП)гесс оп пу1оп ЬПегя А1.16 Арреийх /с Ргерагайоп ау рсеацеисз аис/Вифегз (/зес/ т Мо/еси!аг С/оптц В/ос/с/пц Ацепгз (/зес/ Еог И/езгегп В/огг/пц. ТЬе Ьез! апс|!еазг ехрепзгге ЫосЫпц геацеп! !з попЕа! с!пес| пийс (|оЬпзоп е! а!. |984). 1! |з еазу со изе апс! !з сопграгсЫе илгЬ ай оЕ йе сопипоп !шшипо!оц!са! с|егес6оп зузгешз. ТЬе оп!у 6гпе попЕа! с|пес! пийс зйои!д по! Ъе изес1 В соЬеп згезгегп Ыогз аге ргоЪес1 !ог ргогешз йа! шау Ье ргезеп! ш пийс.
Опе оЕ йе Еойоичпц гес|рез шау Ъе изе6 со ргераге ЫосЫпц ЪиЕЕег. А Ъ|осЫпц ю!игюп !ог зчезгегп Ыогз ь РЬозрЬасе-ЬиЕЕегес! зайпе сопга|пспц 59 (зз/ч) попЕа! с1пес| пийс, 0.019о Апг!Еоаш, апс1 0.02о юйшп акЫе. В1ос|йпц ВиЕЕег (ТЬУТ Вийег Сопзашшц а В1осИпц Ацеп!) 10 гпМ Тпз-С! (РН 8.0) ! 50 шм )з)аС1 0.059о (ч/ч) Тзссееп-20 ЫосЫпц ацепс (198 [со/ч! це1а6п, 39о [со/ч! Ъогйпе зепип а|Ьшшп, ог 598 [со/ч] попЕас с|пей пийс) Оршюп аЬои! зоЫсЬ оЕ йезе Ыосйпц ацеп!з ь Ьез! оапез Егош 1аЬогагогу го 1аЬогагогу.
Ч'е гесопппеп6 сапуспц ош рге|ип|пагу ехрегипепгз го бегегш!пе соЫсЬ оЕ гЬегп ззог)сз Ьея. В!ос|йпц ЬиЕЕег сап Ье згогес( аг 4'С апс! геизес! зечега! 6шез. 5ойшп агЫе <!> зЬои16 Ье асЫес! го а Ппа! сопсепггагюп оЕ 0.0598 (со/ч) го шЫЬ!! |Ье цгоззй оЕ писгоогцашяпз. ЕхЕгас1соп/Еузсз ВоЕЕегь апс| Бо[о1!оп8 Айсайпе Еуяз Яо1иГ!оп 1 (Р1аяпЫ Ргерагагюп) 50 шм ц1исозе 25 гпм ТгйиС1 (рН 8.0) 10 гпм ЕНОТА (РН 8.0) Ргераге 5о1ийоп 1 Егогп згапс!агс! згос)сз !п ЪагсЬез оЕ -!00 гп!, аисос!аде Еог |5 пипигез ас 15 ря (1.05 1сц/сшз) оп!щшс1 сус1е, апс| згоге а! 4"С. АПсайпе Еуяз цо1и6оп 11 (Р1аяпЫ Ргерага6оп) 0.2 !4 )з)аОН (ЕгезЫу сИигед Егопг а !О х яос1с) <! > 198 (зз/г) 5Р5 Ргераге 5о!игюп 11 ЕгезЬ апс1 изе а! гоош гешрегагше. А1|сайпе Еуяз цо1и6оп 111 (Р1аяпЫ Ргерага6оп) 5 М росаззшш асегаге 60.0 гп| 81ас|а1 асе6с асЫ <1> 1!.5 гп1 Н,О 28.5 гп1 ТЬе геы16пц ю1и6оп В 3 М ссс|гЬ гезрес! го рогаззиип апс| 5 м ичгЬ гезресс со асегаге.
5|оге йе зо|и6оп а! 4'С апс) ггапзуег П со ап ке Ьис|се! ) из! ЪеЕоге изе. 5ТЕТ !О гпм Тпз-С1 (рН 8.0) О.! м )з)аС1 ! шм ЕЕЗТА (РН 8.0) 598 (о/ч/ Тгйоп Х-!00 Ма)се зиге гЬа! |Ье рН оЕ 5ТЕТ ь 8.0 аЕгег ай |пцгейепгз аге асЫей ТЬеге ь по пеес( го згеп1гае 5ТЕТ ЬеЕоге изе. Соттоп!у г/5ее1 Е!ес1горБоге515 Вийеги ВиГЕег 'тстогйп8 5о1итюп 5сос1с 5о1ис!опЛ.!сег ТАЕ 1х 40 тпм Тпя-асесасе 1 тпм ЕРТА 50Х 242 8 оГ Тпя Ъаяе 57.! сп! оГ81ас!а! асеис асЫ <1> 100 сп) оЕ 05 М ЕРТА ГрН 8.0) ТВЕ' 5х 54 8 оГ Тпя Ъаяе 27.5 8 оЕ Ьопс асЫ 20 ш1 оЕ0.5 М ЕРТА ГРН 8,0) 0.5х 45 шм Тпя-Ьогате 1 пйс ЕРТА ТРЕ 1Ох 108 8 оГ Тпя Ьаве 15.5 гп! оГрЬоярЬопс асЫ <1> Г859Ь, 1.679 Всш!) 40 сп! оГ 0.5 ля ЕРТА ЕРН 8.0) 1Х 90 пзм Тг)я-РЬоярЬасе 2 шм ЕРТА Чгь-8!усше' 1Х 25 спм Тпя-С! 250 спм 81усспе 0.1ауа 5РВ 5Х 15.! 8 оГ Тгся Ьаяе 94 8 оГ 81усспе Ге)есиорЬогеяз 8тас)е) 50 ш! оГ 1096 ВР5 (е1естгорЬогеяя 8гас)е) "ТВЕ Ь ишаПу спас)е вост ясосед аз а 5х ог сох ясос)с зо!псюп.
ТЬе рН оЕ йе сопсепсгясес) всостс ЬиЕГег слои!4 Ье -8сп 1 В!псе йе сопсепссасес) зсостс Ьпйег Сыс ЬеЕоге ияе апс) спа)се йе 8е! зо!ийап япс) йе е!ессгорЬогеяя Ьийег йоса йе звспе сопсепсгасес) зсос)с зосшюп. 5огпе !паев68асотз ргесег со ияе тпоте сопсепстасес! ясос1с васисюпв оЕ ТВВ ! СОх ая орразес) со 5х). Иотяеяес, 5х зсос)с зо!ийап Ь споге ясаме Ьесаияе йе яо!исез с)о пос ргессриате с)иг- ЫВ зсата8е. Раяясп8 сЬе 5х ог !Ох Ъийег всос)сз йгааВЬ а 0.22-рпт В!сег сап ртечепс ог с)е!ау Гаппабап оЕ ргес)р)сасев. Яттяе Тпз'-81усспс ЬаГЕетя Гот 505-ро)уасгу!апсЫе Ве1з !зее Аррепгйв 8).
КресЕа11кегЕ Е1есЕгор1тоге515 ВиЯег5 10х АйсаИпе АПагояе бе! Е1ессгорЬогеяя Вийег 500 шм )л)аОН <! > 10 шм ЕРТА АсЫ 50 ш1 оЕ 10 ЬС )Я)аОН апс) 20 ш! оЕ 0.5 М ЕРТА ГРН 8.0) Со 800 ш1 оГ Н О апс1 йеп ас))ивс сЬе йпа1 чо1ише со 1 1йег. ЕП1исе сЬе 10х айса!ше а8агояе Ве! е1ессгорЬогеяя Ьийег ичсЬ Н О со 8епегасе а 1х зчогЫп8 ю1шюп итипегйасе1у ЬеЕоге ияе.
~Ле йе яатпе я!ос)с оЕ 1Ох аПсайпе а8агояе Пе1 е!ессгорЬогея)я Ьийег со ргераге йе айсайпе а8агояе 8е! апс) йе 1х счогЫп8 ю1ийоп оГ айсайпе е1ессгорЬогеяя Ъийег. 10х ВРТЕ Е1ессгорЬогеяя Вийег 100 тпм Р1РЕ5 300 тпм Вь-Тгь 1О птм ЕРТА ТЬе Йпа! РН оГ сЬе 10х Ъийег гв -6.5. ТЬе 10х Ьийег сап Ье шас)е Ьу ас)осп8 3 8 оЕ Р1РЕ5 ГГгее асЫ), 6 8 оЕ В!я-Тг!я (Гтее Ьаяе), апс1 2 ш1 оЕ 05 М ЕРТА Со 90 тп! оЕ с)!втй1ес) Н О атк) йеп сгеас!п8 сЬе ю!Ыюп ччсЬ сйесЬу1ругосагЪопасе <! > ГЕспа! сопсепсгайоп 0.19а; Еог пюге с)етайя, р1еаяе яее йе шГогптайоп рапе! оп Р1ВТС)тсетССРСАКВСсйАТГ ш СЬартег 7). Е!есГгорЬоге5!8 ассе! Се!-!оайщ ВиЕЕег5 Ргерагапоп оЕВссфегя апсГ 5сос)с 5о!ийоия А1.17 А1.18 Аррепйх 1: Ргера габон о) )Сеайептт апт[ Виолетт Иет[ тп Мо1еси1аг С1оп[пй 10х МОРЯ Е1ессгорЬогеяв Во[Тес 0.2 м МОРЯ (РН 7.0) <! > 20 тпм юйшп асетате 10 тм ЕТ)ТА (РН 8.0) Ебвво[че 418 8 оЕ МОРЯ тп 700 тп1 освсеП1е Т)ЕРСсгеасет1 < 1> НО Ат[)ивс йе РН со 7 0 ттг|сЬ 2 Ет Ъ[аОН.
АтЫ 20 тп! оу ЭЕРС-сгеасет[ 1 м юйшп асесасе апт[ 20 тп1 ос [3ЕРС-сгеасет1 0.5 М ЕТ2ТА (РН 8.0). Ат[)ивс йе го[ише оЕ йе во!исюп со 1 
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
