Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 130
Текст из файла (страница 130)
АВ ссеаспЪес! аЬоме, пю1еси!ед те!СЬ геседдесС 3' Сеппш! сап Ъе гера!Тес! Ъу ЪасСепорЬаце Т4 ЕЗУСА ро!ушегаде !и а 6П!пц геас6оп япи!аг Со СЬаС сага1ухесс Ъу йе Ксепоуу ЕгацшепС. ТЬид, 13!А!Ад тВ!СЬ а пах!иге оЕ ргосгийпц 5' аис1 3' сеппии (е.ц., ТСоиЫе-Всгапссес! сЕТХАВ ВупсЬед!хесС 6огп ко сешр!асед) сап Ъе сопчегсесс со Ыипс-епс1ес1 гпо!еси1ед ЕроПВЬес!! Ъу ЬассепорЬаце Т4 ЕЗДА ро1ушегаде !и сЬе ргедеисе оЕ ЬсцЬ соисепсга6опд оЕ ЙМТРя 5.
Ехгегтяоп оЕ ишСацепк о1сцопис1еоСЫе рпшегд СЬаС аге Ьоипс1 Со япц1е-ВСгапс1ес1 !ЭТНОСА Сешр1аСед. ВасСепорЬаце Т4 ЕЗУСА ро1ушегаде гд ргеЕеггес! Еи СЬ!В геасиоп Со йе К1епоте ЕгацшепС Ъесаиде П саппос с!!ВР1асе сЬе ВЬогс о!сцопис1еосЫе 6.огп сЬе сегпр1асе. ТЬе ейксепсу оЕ шисацепеяд !д сЬегеЕоге шсгеадесс арргохипасе1у стуоЕо!й А4.20 Аррепйх 4: Епгутеь Иеб т Мо1еси1аг С!огппе ВАСТЕК1ОРНАСЕ Т4 0ЙА РОсхМЕКАЯЕ Асбч11уг 5 -+3' О!ч!А ро1утегаае 5иЬяега1е: 3сЬудгоху1, впе!е-еггаиг!ег! 0ЫА Гегпр1аГе-рпгпег согир1ех.
ТЬе епхуте саппоГ дьр1асе ГЬе яггапг1 аЬеад о1 1Ье и !с1г. Нпи ечег агЫ !1!оп о1 ЬасгегюрЬаде Т4 пепе 32 ргоге! п а1 !очче 1Ье епгугпе 1о Ьее!п еупгЬеа!а аг а п!с!г !и Ьибегв о1 !очч 'юпгс вггепВГЬ. Яеасбопг ЬасГегюрЬаее Т4 0ЫА ро!утегаае ° ~Ф Омь-(юЕ+ Р, МВг'г г!АТР г!ТТР г!СТР г!СГР Рог ехатр1е: "...с сс ....с с с т л т с с л Мф бЛТР бттР ЬасГег!оРЬаае Т4 0ЫА ро1угпегазе СССАТАС СТ з' ....Ссстлтс сл Асбч1!у: 3' — г5' Ехопис1еаье 5ггЬбгагег Сопяг1егаЫу гпоге аоВче оп а!пе1е-ьггапг1ег! О!ч!А гЬап оп г1оиЫе-ьсгапг!ег! 0ЫЛ; ехопис1еаье асг!ч!гу оп доиЫе-ьггапг!ег! О!ч!Ле 'ь Ыос!гег! Ьу 5' — э3' 0ХА ро1угпегаве асг!ч!гу.
йеасбоп: ЬасГегюрЬаае Т4 0ЫА ро1угпегаве ~~) . ~ ~О~А Ма" Рог ехатр1ег с с с л т с т' ,.... с„с,с„х ЬасгепорЬаае Т4 0ЫА ро1утегаве с с„с Ае' Сех Т е ТТАгА Ро1утегазез А4.2Т ВАСТЕК!ОРНАСЕ Т4 Р!х!А РОЕУМЕКАБЕ АсеиГуг ЕхсЬапае !гер1асегпепВ геасГ!оп 5иЬаГгаГег В оп!у опе г114ТР 'ь ргекепг, 3' — ~5' ехопис1еаье ас6иГу иг!11 г!еагаде г!ооЫе-аГгапс1ег! 0Ь!А 1гогп !Ье ЗсЬуйоху1 гепп!поь ип61 а Ьаье В ехроьег! гЬаг 'ь согпр1егпепгагу го гЬе г!МТР А сопепиоиь ьег!еь о1 ьупйеь!а апс1 ехсЬапае геасГ!опт и4!! ГЬеп оссиг аг ГЬаг роа!1!оп. йеасбопг РС РС РТ РС РС РС оп .....ССАС С С Ма2+ ~ Ьасгег!орЬаае Т4 !ааоР1гПТР ~ 0МА ро1угпегаье Ехопос!еаяе Асс!х!Гу 5',, СС 0МА Ро!угпегаке Асг!х!гу '...,С,С,*Топ и ....С С А С С С А4.22 Аррепйх 4: Епгутет Иед т Мо!еси!ат С!оп(п8 ВасЕег(ор$саце Т7 ОНА Ро!усттега5е (ВасСег(орЬаке Т7-!п(есСед Е.
соЕ!) ТЬе Р!чА ро!ушегаае аупсЬеятед аЕсет !пЕес6оп оЕ Е. го11 Ьу ЬассепорЬа8е Т7 (а а сошр1ех оЕ ссчо 68ЬПу Ьоипт( ргосеспя сЬе ЬассепорЬа8е Т7 Вепе 5 ргосе!и апт1 сЬе Ьоас ргосеш сЬ!огебох(п. ТЬ!а сошр1ех (а йе шозс ртосе%(че оЕ аП )тпоччп РЬ)А ро1угпегазея 1п осЬег счогйи сЬе ачета8е 1еп8сЬ оЕ РЬ)А аупсЬеа!хед Ьу а а(п81е шо1еси1е оЕ ЪассегюрЬа8е Т7 РХА ро!ушегаае ь Вгеасег йап сЬас оЕ РЬ(Аа аупсЬеыхет1 Ьу осЬег сЬетшо1аЪПе РЬ)А ро1ушегааея ТЬ!а ргорегсу Ьаа сопят1егаЫе асЬ апса8ея Еог ехагпр1е, ччЬеп аес)иепс!п8 РЬ)А Ьу сЬе 5ап8ег т1Ыеоху сЬашсегпипасюп шесЬот( (5ап8ег ес а1. 1977) (р1еаае атее СЬарсег 12).
ВассегюрЬа8е Т7 РЬ(А ро1ушегаае, П)се йе К1епочч Ета8шепс апт( сЬе Ьо!оептуше оЕ Е. го!1 РЬ)А ро1ушегаае 1 апт$ ЬассепорЬа8е Т4 РЬ(А ро1ушегаае, Ьаа а 3' — э5' ехопис1еаае ас6чПу (епсобет$ Ьу ЪассепорЬа8е Т7 Пепе 5). Аа тп ЬассепорЬа8е Т4 РЕ4А ро1угпегаае, СЬе 3' — э5' ехопис1еате ас6гбсу (а росепс. ТЬе т(е8гее оЕ ас6чПу оЕ йе 3'-+5' ехопис1еаае оЕ ЬассепорЬа8е Т7 РЬ)А ро!ушегаае ь -1000 сппеа йас оЕ йе К!епотч Ета8шепс.
ВассепорЬа8е Т7 Р!чА ро1утпегаае т)оеа пос Ьаче а 5'-+3' ехопис1еаае ас6ч(су (ТаЪот ес а1. 1987). Рог (Псьсга6опа оЕ сЬе 5' — э3' РЬ)А ро1утпегаае апс1 3' — э5' ехопис1еаае асс(ч!6еа апд ехсЬап8е геассюп епсоде6 Ьу ЪассепорЬа8е Т7 Р(9А ро!ушегаае, р!еаае аее СЬе рапе1 оп ВАС ГЕКСОРНАСЕ Т4 ОНА РО$УМЕКА5Е (р. А4.20). Рог пюге тп(оппаСюп оп ип1д-суре апс1 шоййе6 Т7 Р)4А ро!ушегаае (5ет(иепаае апт$5ет)иепаае чегяоп 2.0), р1еаае аее йе шЕоппасюп рапе! оп 5ЕО$3Е$9А5Е !п СЬарсег 12. ($5Е5 1. Ргипег-ехсепяоп геасс(опа йас гет!шге сЬе сорутп8 оЕ!оп8 асгессЬеа оЕ сешр1асе.
2. КарЫ епд-1аЪе1сп8 Ьу еПЬег ПП!п8 ог ехсЬап8е (гер!асегпепс) геас6опа ятсЬ аа сЬоае Пеас6Ъе6 Еог ЬассепорЬа8е Т4 РЬ)А ро!ушегаае. Т$3егспо5(а$3$е 0МА-4$ереос$ео( 0МА Ро!угоега5е8 ТЬеппояаЫе РЬ)А-т(ерепбепс РЕ4А ро!ушегазеа Ьаче Ъееп рипйе6 ап6 сЬагассепге6 Егош а пшпЬег оЕ ог8апыпя ргппа61у Еготп сЬе йеппорЫ1к апд ЬурегсЬетшорЫ!(с еиЬассепа АгсЬаеЬасСепа, ччЬоае пюат аЬипбапт РЬ(А ро1ушегааез аге сепии(асепС оЕ РИА ро1ушегаае! оЕ тпесюрЫ1к Ъассепа, ап6 сЬеппорЬПк АгсЬаеа, тчЬоае сЬ(еЕ Р!пА ро1ушегааеа Ъе!оп8 со сЬе ро1ушегаае а Еапп1у. А1сЬоиВЬ сЬеге !а сопядегаЫе ятисшга! чапа6оп ашоп8 сЬетшоасаЫе РМА ро1ушегааея аП аге шопотпепс чч(сЬ тпо1еси1аг шааа ча1иеа гап8(п8 Егогп 60 )тР со 100 (тР.
ТЬе а(8п(Пссапс ргорегс(еа апс1 ассп66еа оЕ сЬегпюяаЫе Р!9А ро1ушегааеа аге 8(чеп !п ТаЫе А4-5. ТЬе Пгас ччеП-сЬагассепхет1 сЬегшовсаЫе РЬ(А ро1уптегааеа счете ьо1асет1 Егосп сЬе ехстетпе сЬеппорЬс1е Т)сегтит ат(иат(сит (СЫеп ес а1. 1976). Опе оЕ сЬеае еаг1у сао)атея Тат) РЬ(А ро!ушегаае, Ьая а1оп8 тч!сЬ а пшпЬег оЕ 8епескаПу еп8(пееге6 чапапь, Ьесогпе ап (пд(арепваЫе сотпропепс оЕ геас6опа со агпрИу прес(Пс аепиепсеа оЕ Р!чА !п тчсго Ьу ро1ушегаае сЬа(п геас6оп апд ш РЕ4А аес(иепс(п8 (р!еаае аее йе !псгос1исс(опт со СЬарсега 8 апт1 12, геаресс(че1у).
Тпт( апд (са Пепчасгчеа Ьаче а 5' — >3' ро1ушет!хас(оп-дерепдепс ехопис1еаае асс(ч)су. Рог пис!еосйе (псогрогабоп, сЬе епгуше тчог(тх Ъеас ас 75-80'С, Перепб(п8 оп сЬе саг8ес ает)иепсе; !ь ро1ушегаае асс(ч(су ь гебисед Ъу а Еассог оЕ 2 ас 60'С ап6 Ьу а Еассог оЕ 10 ас 37'С. !п тпапу сааея Ьотчечег, П ь песеааату со тпсбасе ро1ушепха6оп геасс(опт ас ятЬорсипа1 сешрегасигеа !п огбег со ргечепс йааос!ас!оп оЕ сЬе рппсет Етош сЬе сепср1асе.
Рог ЕигсЬег Еп(отшас(оп оп Та($ апт$ осЬег сЬеггпоасаЫе ро!угпегааея р1еаае аее сЬе (тссгодисс!оп со СЬарсег 8 апт( йе тпСоппасюп рапе1 оп ТАО АННА РОЕуМЕКА5Е ш СЬарсег 8. РЬТА Ро(утегааеа А4.23 ТАВЕЕ А4-5 Ргорег(се5 оГ Т)сего!05(аЫе 0)с)А Ро!угпегаае5 ОРТ1МОМ ТемрекАтоке ЕхоьсоссеА5е Емтуме МАасссеастокека ОВОАас!Вм ('С) Аст!И!ту ОЫТР ОЫА (РМ) (!ИМ) Т. Иг(ггаггсиг ВМ, ТЕ Рго, В!гас, Р-Е, Т 9 ппп ас 97.5 С 10 — !6 75-80 5' — 3' 20-100 Таг) 51о((е) Р-Е Гга8псепс Т. Иг(иаг(си5 21 ппп ас 97.5"С 75 — 80 50 попе 20 ппп ас 95'С гТгЬ ВМ, ЕТ, Р-Е 115 75 — 80 -20 120 пс)п аг 70'С 63 Рго 70 100 Ног ТИЬ Атг Атг, Ггппг Р-Е, ВосЬе 150 пйс ас 96"С 50 ппп ас 95'С ТЬг 75-80 75-80 ПТта ТЬ е пп о ! о8а таггВта ВИН!555 гсегойегтор!И1и5 5' — 3' (3'-5')а УВ51 60-65 ЕТ, В(о-Вас) Ыасг)!Иг 5геюсЬенпор85(иг 7 — 85 60-65 попе >2 Ьг ас 100'С Рио ВМ Ругососси5 и оеге( 60 — 65 ТВ 3' — 5' Рго 0.1 20 — 45 70 — 80 Оеертепс ',4ЕВ 0.01 70-80 20 — 45 Ругососсиг Гиг(осиг 240 ппп ас 95'С В!гас 72-78 1.6 Васа Гог йь саЫе ггеге са1сеп оопг гее!е555 Ьу Рег1ег ес а1.
(!996) апа Ве! апа МаЬЬиЬаш (1994), сгот!псегпес аоигсеа, апд 1гот 1Ьегасше аеапЬ- исса Ьу сотгпегсга! тапи(ассигега. Рог аесара оГ сЬе геасаоп сопгЫВопа йас аге орВта1 Гог сасЬ епеугпе, р1егие соп5ИЬ йе сппгисоопа аиррВес) 55!1Ь йе епгугпе Ьу йе пыпиГасгшег. "(ВМ) ВоеЬппаег МаппЬепп; (ГТ) Еркепсге ТесЬпо)оа!еа; (П') 1.гте ТесЬпо1о8(есс (Рго) Рготеаа; (!СЕВ) Нею ЕИ81апа Вю)аЬ5; (Р-Е) РегйпБтег; (Т) ТзКааа; (5сгао 5сгасааепс; (Лпгг) Лтгеасо! (Р)ппс) Р)ппгугпеа Оу. И5п5ресгед асЬМСу.
ТАО РЫА РОВ'МЕКАВЕ Асг)и)(уг 5 ' — 53 ' 0ЫА ро!угпегаае 555ЬК(гасе! 5!пк!е-асгапс)ес( !егор!асе, рппсег ъи)СЬ 3ЕЬус)соху!. Веасбопг Тас) ОЫА ро!угпегаае ° и*-(ем. Мопсе с)АТР сПТР с)СТР с)СТР 15ойепп Вг!!агае Гга8гпепс Т. СЬегпгорЬ(1155 Т. )) Ииие Т. иЬ(диоиг Т. Ьгоссгапиг Т)гегтасоссиг 1ггогари Ругососси5 (51гасп СВ-Г)) 5' — 3' попе попе ЕККОК КАТЕ ХТО а ь ТА В)с ! Ту (Мсасоте5 Ат 5рес1есео ТемРекАтоке) 100 ппп а1 100'С 66 480 ппп аг 100"С 50 А4.24 Аррепд!х 4: Епутег Иед т Мо!еси1аг С!отп8 гсечег5е Тгап5сг(рЕа5е (КМА-г!ерепг!еп1 0(х(А Ро!угпега5е) (Миппе апд агдап ге!гон(гиаея) Тнчо тогпь ог'гечегае ггапьсг)ргааез аге сопипегсга1!у ачаг1аЫе: а ргерагадоп спаде ггогп рипдед ач)ап гпуе!оЪ|аагояь чггиа (АМЧ) апд ап епхугпе )ао1асед тгогп а пгаш ог Е, сой гЪаг ехргеааеь а с1опед сору ог" йе гечегае ггапьсдргаяе 8епе ог гЪе Мо1опеу пшппе 1еи)сепиа ч(гия (Мо-М1Ч).
Во)Ъ епхугпек 1ас1с а 3'-+5' ехопис!еазе асг(че оп 0ХА апд сага!ухе гЪе геасггопя ьЪоччп Ъе!очч (п йе рапе! оп КЕЧЕК5Е ТКАЫ5СК!РТА5Е. ТЪе пшппе апд ач!ап речете Ггапьспргаяеь д!гтег тгогп еасЪ ойег гп а пшпЪег о) гекресгк ° ТЪе ач(ап епгуше сола(ага ог ггчо ро1урерггде сЪа)пь йаг сарру Ъой а ро1угпегаье асдчау апс1 а рончегги! Крахе Н асггчпу (Чеппа 1981). ТЪе пшппе епкуше, а ып81е ро1урердде сЪа)п от М, = 84,000, Ъаа а ро!угпегаье асг(ч(гу апд а согпрагадче!у нчеа(с КХаае Н аспч(гу (Сегагд 1983).
ТЪ(в юеа(с К)х)аде асГ(ч(Гу (а а сопа(дегаЫе адчап)а8е хчЪеп аоегпрдп8 (о яупГЪеа)ке КЕЧЕКВЕ ТКАЫВСК!РТАВЕ Асдта!уг 5'-+3 0Р)А ро!угпегаяе 5иЬ|Ггарег К)йА ог 0р)А !егор!аге иФЪ ап КХА ог 0НА рпгпег Ъеапп8 а 3 '-Ъудгоху! 8гоир. Кеаср)опг гечепе Ггапасг)р)аае О~~ Ю~ О~А — ( Ю) + В' М8г' Кр)А — ( дН)„р пРР,. г1АТР дТТР дСТР дСТР Рог ехатр/е: ттттт .... А А А А А 0 С Б С 1) С С Б А а М82- дАТР дТТР генерале Ггапьсг)рсазе дСТР дСТР р Т р Т р Т р Т р А р С р А р С р А р С р С р А р Т ....Арл АРЛрлр1)„С 1)„С Г)„С С 1)„А Аср)н()уг К)йаье Н (5 ' — г3 алс! 3 — э5 ' ехопЪопис!еаче) 5ггЬясга)ег Кочерге ггаирсг)РГаяе прес)8са!!у де8гадез К)х)А )и ал КНА-0ХА ЪуЪпд Ъу а ргосеаа)не гпесЪап)вт.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
