Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 133
Текст из файла (страница 133)
сой) ВассегюрЬаВе Т4 й?5?А 118аее сага?ухеа йе сотга?епг !ош?п8 оу 5'-рЬоерЬате тегпиш ти 5?п8?е- е!таит?ет? РМА ог КМА то 3'-Ьут?тоху? теппшт ш япц?е-5?таит?ет? РМА ог КХА ?УЫепЬес?с апт? Сшпрогт 1982). Е)5Е5 1. Весапае япа11 шо1еси?е5 ?е.8., рМр) аге ет?ест?че апЬ5?та!ее, ЬастепорЬа8е Т4 КМА!18аее сап Ъе пает? то тат??о?аЬе? йе 3' сегш?п? оу ЯМА пто1еси1еа ?и ч?тго ?Пь1епЪес?т апс1 Сшпрогт 1982).
2. 1л8аВои о? о?!Вот?еохут?Ъоппс?еот?т?е5. 3. ВастегюрЬа8е Т4 КХА 118аее Ьаа Ьееп герогсет? то 5?ппи1аге йе аст?ч?гу о? ЪастеПорЬа8е Т4 РМА 1!цаее 15и8?по ес а!. 1977). Нотчечег, а8епта якЬ аа ро1уейу!епе 8!усо! йат шсгеаее шасгошо1есп!аг сго3ет??п8 аге ес?иаПу е??ест!те апг? пшсЬ ?е55 ехрепяче. ВАСТЕРЮРНАСЕ Т4 РМА Е!СА5Е Астгегтут РМА 1!8аае 5и?35?гатег 5'-рЬоерЬате ассертог5 !пс!цг?е 5!п8?е-5?гапт?ег? 0МА апг? РМА.
РЬоарЬате г?опог5 !пс!иг?е 5!п8!е- 5?гапт?ет? РМА апг! РМА апс! пас!сот!г?е5 еосЬ а5 рМр. Кеагтюпг 0МА ог РМА 5 АСС 3' РМАот 0МА | 5'АлттС, „3 ЬастепорЬаце Т4 0МА !!Раее АТР ..„А С С А А Т Т С... Т!теппо8ЕаЫе О!МА Ефа8е8 ТЬе Вепее епсойп8 тЬеппоатаЫе 118аае5 антош аечега! йегтпорЬт!к Ъассепа Ьаче Ьееп с?опег?, еет?иепсет?, апт? ехргеаеет? то Ь?ВЬ ?ече?5 гп Е. соЕ ?е.8., р1еаае аее Та?таЬааЬ! ес а1. ? 984; Вагапу апт? Се??апт? 1991! Еапег ег а1. 1991; )опаеоп ет а!.
1994). Еенега? оу тЬеае ептушее аге ага??аЫе Тгош сопппегста! 5опгсеа. Е??те йе Е. со13 епгуше, а1шоет а11 ГЬетшоетаЫе 118аеее иае МАР ае а со?асСог апт? ттог?т рте?егепт?а?!у ас и?с?та ?и т?оиЫе-а?таит?ет? РМА.?п ат?г??г?оп, тЬетшоетаЫе 1!Вааеа, 11?се ?Ье?т шееорЫ??с Ьопю?о8, сап сага!ухе Ыппт-епт?! 18аг?оп ш гЬе ргеаепсе оГ стоттт??п8 а8епте, етеп ат е!етатес? тегпрегатитеа (Та?таЬааЬ! апт? ?)сЬ?т?а 1986). Весаиае йеппоетаЫе 118аае5 гетатп аст?т?ту а?тег шп?т?р!е топит?5 оу йепиа1 сус?ш8, тЬеу аге иеет? ехсепа?че?у ?и тЬе 118аее ашр!1??саг?оп геастюп то т?есест пиит?оп5 ш шатпша?тап РХА5. Ачоимт ое 035(А Кес)исаео ТО СОмтеиаите 1 рмосе Ое 5' Теамсмс (см РВ) 5125 Ое 0оиасе-5таамоео 035(А (ЕМ ВА5Е РА185) Асб)6(уг Кспаае ((опмаг6 геасйоп) 5сгЬасгасег 5)пц)е- ог ссоиЬ)е-51гапс)ед 035)А е61Ь 5сйудгоху) сеггп)пи5; КЕЗА сч(1Ь а 55Ьус)гоху) сеггп)пи5.
ТЬе епгугле рйоарйогу)аСе5 ргосги6)пе 5' 5)пе)е-5(галс)ест 1ептнп( гпоге гаркйу СЬал Ыига еп65 ог гесе55есс 5' сеггп)пс; Ьоъхехег, ч41Ь Еи(йссепс епгупсе апг( АТР аисЬ Сегпигн! сал Ье согпр(еге)у РЬоарйогу)асег(. ТЬе геасйоп ас п)сК5 Ог Кара )п ссоиЬ)е-51галбесс 0МА ь )е55 Е(йе(епс сйап (ог 5)л- К)е-5(гапссе6 сеггп)л1) Ьохеехег, илсЬ 5ий)с)епС сопсепггайоп5 о( АТР апс) епгугле, еар5 сап Ье согпр)есе(у рЬоарЬогу)а)асс апс( п(сйа сап Ье рйоарйогу)асес) 1о 707. Кеас6оп: 5'357Р)034А ог 5'(гар)КМА 4 АОР Рог ехагпр)е 5' ССС, 3 р р !) лР)с(АТР сйСЬюСЬгейо! Ме" Ьас(епорйаее Т4 ро)упис(еос)ссе )о)паае 5*С С С...' -'; АОР Асс(ейуг К)паае (ехсЬапце геасйол) 5сгЬ51гасес 5)пе)е-5(галс(ест 013А иа)1Ь а 5срЬоарЬа1е 1епп(пи5 )ыпо51 е(йс)епс)у )аЬе)ед (96'А).
Кесеааесс 55 рйоарйаге (агап(п) аге )аЬе)ес) Со 706 сч(СЬ 5ий)с(епс елгугпе. 5срйоарйа1е цгоир5 аС п)сй5 аге )аЬе(есс 50-(о)гс )е55 Ей(с)епс!у СЬап 5)пд)е-5(гапбе6 5срйоарйасе Сеглс)лс. Кеас6опс 5 С С С ... ' + ехсеаа А0Р | Ьассег)орйаае Т4 ро!упис)еойссе )о(паае (Ч Р)с)АТР сйСЬ)оСЬге)10! Мес' А4.36 Аррепг((х 4: Епгупсее Жег( гп Мо!еси(аг С(оп(пе ТАВЕЕ А4-У Сопсепсгайоп о( Еаза )п К)пааспй Кеас1)оп5 50 101) 250 500 1000 2500 5000 ВАСТЕК!ОРНАСЕ Т4 РОТУ)530СЕЕОТ30Е К!35)А5Е Ьасгег)орйаее Т4 ро)упис)еос(г)е К)паае 0МАОНЕ ог К)х)АОНК !) МР)АТ3' сйСЬ)оСЬге)со! Мйс+ 17х 30 с ЗЗ х 10-5 8.4 х 10 ' 1.7 х 10-' 3.5 х 10 4 8.4 х 10 ' 1,7 Г)цазеа Ктазея апг) РЬозр)гагаеез А4.37 АИса11пе РЬоцрЬа1аце5 ГЕ.
со!1, са)Г !п)еа6пе, апс1 ьЬНтр) ТЬе йгее аПса1ше РЬоарЬагааеь — Ъасгепа1 аПса1ше рЬоарЬагаае !ВАР), са!Г 1псеаг)па1 аПса1ше РЬоарЬагаье (С1Р), ап6 аЬг)тр аПсаПпе РЬоарЬагаае (5АР) — сага!ухе гЬе гепюча1 оГ 5'-РЬоя РЬаге геяс)пеа Ггогп Г)МА, ПХА, гЬ)ТРя апс) дЯТРя Рог Гпгйег Песаг1я р1еаае аее йе шГоппа6оп рапе! оп АЕКАЕ!МЕ РНО5РНАТА5Е ш СЬаргег 9. с)5Е5 1. Вегпоч)пц 5' РЬоарЬасеа Ггот Г)ЯА ог ВЫА рпог го 1аЬеПпц 5' гегт)п) ю!гЬ спр. 2. Вепюч)пц 5' рЬоьрЬагеь !тогп Ггацтепга оГ 1)1чА го ргечепс ае!Г-Пцаг)оп.
!ЧОТЕ5 ° ВАР га гЬе пгоя ас6че оГ гЬе йгее епкутея Ъпг и ь а1ао Гаг пюге геа!агапс со Ьеаг апс1 дегегцепь. 1! В гЬегеГоге сИГгсп!г со шЫЬП ВАР сотр1еге1у а! гЬе епс) оГ с1ерЬоарЬогу!агюп геасггопя ° Ргосешаае К )а паес) го 6)цея С1Р, гчЬЫЬ пшя Ъе сотр1еге1у геточес1 )Г апЪьес)пепг Пцаг)опт аге со ччог)с ейк)ет1у. Ап а1гегпабче тегЬо6 )а го !пас!!часе йе С!Р Ьу Ьеаппц Го 65"С Гог ! Ьопг (ог 75'С Гог 10 т)ппгез) !п йе ргекепсе оГ 5 тм ЕГ)ТА ГРН 8.0) ап6 гЬеп го рппГу гЬе с)ерЬоьрЬогу1агес) Рй)А Ъу ехггас6оп чНгЬ РЬепоЬсЫогоГогт.
° 5АР Га ехггете1у Ьеаг-1аЬПе ап6 сап Ье с)епагпгед сотр!еге1у апд )ггечегяЫу Ьу Ьеа6пц го 65'С Гог 15 ппппгея АЕКАЕ!НЕ РНО5РНАТА5Е5 Асс)иеуг РЬоьрЬасаае ЯиЬаегасег 5!пц!е- ог с)оиЫе-а!ганс)ес) ОГ !А апд РХА; гМТРь апг1 с)ЧТРя !1еасе!оп: а!!га)!пе РЬоьрЬагаае *онО"4А ог онЦНА ОНА ог а РГчА Хис1еазез А4.39 йЬопос!еазе А (Рапсгеа6с) (Воч!пе рапсгеаз) К|Ъопис!еазе А (Кразе А) !з ап епг(ог(Ьопис1еазе |Ьа( зреслТлса1!у апас1|з з!081е-зггапг(ег( К)ч)А 3' |о руПпийпе геыдиез ап|1 с1еачез гЬе рЬозрЬаге 1ш)га8е (о (Ье ал()асеп( пис1ео|Ые. ТЬе еп|1 ргог)исгз аге руПиийпе 3' рЬозрЬасез апг) о1!Вопис1ео(Ыез |ч!|Ь гегпппа! руг!ш!йпе 3' рЬозрЬагез (РачЫзоп 1972). Кразе А, лчЫсЬ лчог)сз (и |Ье аЬзепсе оГ соГас|огз апг) йча1епг сагюпз, сап Ъе шЬ|Ь|ге|1 Ьу р!асеп(а1 КЬ)азе шЫЬЬог (В1ас)гЪигп е( а1. 1977) ог Ъу чапас(у1-г!Ьопис1еоя|1е сошр1ехез (Риз)газ е| а1. 1982).
(л5Е5 1. Кешочш8 ипЬуЬг!Йаел( геропз оГ КХА Ггош Р)ч)А-КЫА ог К)ч)А-КХА ЬуЬг!сЬ. 2. Маррш8 ып81е-Ьазе ппиаВопз ш РЫА ог КХА (Муегз ес а1. 1985; Ълг(пгег е| а1. 1985). 1п |Ь~з гпе|Ьод, яп81е-Ьазе пиыиассЬез ш КХА-Р1МА ог КЬ)А-КЬ)А ЬуЬ|1<Ь аге гесо8и(аег( апл( с1еаче|1 Ьу КЬ)азе А. А ллр-!аЬе!ег) КХА ргоЪе сошр1ешепгагу |о |ч!1|1-|уре Р)ч)А ог КЬ)А |з зуп(Ьез(лег) !и чиго ияп8 а р!аяиЫ соила!п!п8 а Ьас|еПорЬа8е Врб ог Т7 ргоп|огег. ТЬе КХА ргоЪе |з |Ьеп аппеа!е|1 (о лез( РХА ог КХА сопгаш(п8 а яп81е-Ъазе зиЬз(1(и(юп.
ТЬе гези1(- ш8 яп81е-Ьазе пиыпа(сЬ ~з с1еаче|1 Ьу К)ч)азе А, апл) |Ье 1осапоп оГ (Ье пияпа|сЬ !з (Ьеп г)егегпипег( Ьу апа!ук(п8 | Ье з!лез оГ |Ье с1еача8е ргол(ис(з Ъу Ве! е1ес|горЬогеяз; -50% оГ аП роза!Ые ып81е-Ьазе гпыпагсЬез сап Ъе с)е(ее(ел( Ьу (Ьыпе(Ьой КЕРАКАТ1О)Ч ОЕ К)з(азг ТНАТ!5 ЕКЕЕ ОЕ 0)ч(азг )ззо(че рапсгеаис К)чазе (КНазе А) а( а соосеп|га8ои о(10 п|8)ил()о 001 м зогйлил асе|а|е (рН 52).
еа| (о 100'С Гог 15 и|!полез. А((оъч )| (о соо) з!оъч(у ло гооп| |еп|рега|иге. Аг()из( гае рН Ьу агИп8 0.1 о(иоле ог'1 м Тпз-С( (рН 7.4). Рьрепзе )оло а((г(ио(з апг) йоге а(-20'С. РНазе ргес|раа(ез лчЬеп соиеп(га(ег) зо)и(сооз аге Ьеа(ес((о 100'С а( иеи|га! рН.
гс!Ьоп(лс!еа5е Т1 К!Ьопис1еазе Т! (Кразе Т1) |з ап епдог(Ьопис1еазе (Ьаг зрес!Вса1!у апас1|з (Ье 3'-рЬозрЬасе Вгоирз оГ Виаи!пе пис1ео|Ыез апг) с1еачез |Ье 5'-рЬозрЬаге 1(п)га8е (о |Ье аг))асепс пис1ео(Ые. ТЬе епл( ргос)ис(з аге Виапояпе 3' рЬозрЬасез апг( о!!8опис!ео(Ыез лч!(Ь (епп!па! Виапоыпе-3'- рЬозрЬа|е Вгоирз (РачЫзоп 1972). з' з гл Ач ор ба ч се сч оа Агл Агл оа + ир ое "са Ае Оа ч с (л5Е Кешоч!08 ипЬуЪг(йгег( ге8)опз оГ КлчА Ггош РЬ)А-КХА ог КХА-К!чА ЬуЪг(й.
А4.40 Аррепд(х 4| Епгутея Ие|$ (и Мо(еси)аг С(отп8 0еохуг[Ьопссс!еа8е 1 (Рагссгеа6с) (Вогдпе рапсгеая) ТЬе епдопис1еаяе Р)ъ)аяе ! Ггош Ъоч(пе рапсгеая ь а 81усоргосеш йас дейгадея доиЫе-ягапдес1 Р)ъ)А Ьу ап ш-1ше 5)ъ)-2 шесЬашяп $ичо1чсп8 пис!еорЬ|!к аССас(ь оп йе ясьы1е рЬоярЬод$- еяег Ьопд. ТЬе рЬоярЬасе Вгоир гешашя ассасЬед со |Ье пеъч 5' сегпипия Р)ъ)аяе 1 геъ)и(гея д(ча1еп| шеса! юпя Еог Р)ъ)А Ьу|1го1уяя (Кипиг 1950) апд сйяр1ауя гиахииа! асйчйу ш йе ргеяепсе оЕСа" апд е|йег М8|' ог Миг+ (Рпсе !972). ТЬеяе сайопя ъчог(ь яупег8(яссса!1у; ш |Ье ргеяепсе оГ ЬосЬ Са|+ (О.! гим) ап|1 М8|+ (10 шм), йе гасе оЕ Ьу|$го1уяь ь Вгеасег |Ьап йе яип оГ йе гасея Гог е|йег сайоп а1опе. Ноъчечег, ЫВЬ сопсепсгасюпя оГ МВ|' ()50 шм), Ьис пос оГ Са|+, аге |пЫЬ|согу. ТЬе |иоде оЕ ассюп апд сЬе ярес(йсйу оГ |Ье епгугпе аге айессед Ъу йе суре оЕ сйча1епс сасюпя ияед.
1и |Ье ргеяепсе оЕ Мпгь, ог ъчЬеп чегу ЫВЬ сопсепсгаиопя оГ йе епгуше аге ияед ш сЬе аЪяепсе оЕ гиопоча1епс сайопя, Р)ъ)аяе 1 Ъгеа1|я Ьой ясгап|Ь оГ я|регЬе1|са! доиЫе-ясгапдед РЬ(А япш1|апеоия1у ас арргохииасе1у йе яаше ясе (Ме18аг апд Оо1ЙЬъчай !968; СашрЪе1! ап|1 !ас1|яоп $980). $и сЬе ргеяепсе оГ М8", Р)ъ)аяе ! ъчогсъя си а соса1!у ей|уегепс ГаяЬ~оп апд спсго|$исея исс(ъя шсо еасЬ ясгап|$ оГ доиЫе-ясгап|$ед Р)ъ)А ш|1ерепдеп|1у. Ая гпоге апд п|оге п[с)ь ассипш!асе, йе пшиЪег оГ Ьаяе ра(гя Ьесъчееп а|Цасепс шс1|я оп орроясе ягапсЬ Вга|$иа11у десгеаяея апс1 ь ечепсиа11у шяийк(епс со ЬоЫ |Ье гпо1еси1е сойейег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
