Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 129
Текст из файла (страница 129)
1п й(к саке, с1еаче тЬе РХА !и йе арргорпате тектпстюп епхупте Ьи6ег, гегпоче тЬе геятк6оп епгуше Ьу ехтгастюп кч)тЬ РЬепоЬсЫогототш, ргес)рпате йе РХА чч!тЬ ейапо1, йкко!че П тп ТЕ, апд адд тЬе арргорпате чо1шие от" а 10х РХА ро1ушегаке Ьиттег. 2. 1.аЪеПп8 тЬе тегпип) от Р)к(А гга8шептк Ьу ияп8 !"Р]дХТРк то 66 гесеккед 3' тегиипт (епд1аЬеПп8). 3. Епс1-1аЬе1ш8 от' Р!чА пю1еси!ек члтЬ рготптйп8 3' саПк. ТЬтк геаспоп ччог)ск тп ткчо кта8ек. Р!гкт, йе 3' — т5' ехопис!еаке астпдту гетиочек рготгийп8 3' саПк 6ош йе РХА апд сгеасек а тесеккед 3' тегпииия ТЬеп, !и тЬе ргекепсе ог" ЫПЬ сопсепсгадопк от" опе тайо1аЪе1ед ргесигког, ехопис!ео1угк де8гадатюп (к Ьа1апсед Ьу шсогрогапоп оу дарк ат тЬе 3' тегпипик.
ТЬтк геаспоп, кчЬ!сЬ сопякь от сус1ек от геиюча1 апс1 гер!асетпепс ог йе 3'-теппша1 пис!еотЫек Ггош гесеккес1 ог Ъ!ипт-епдед РХА, )к коше6гпек саПес1 ап ехсЬап8е ог гер1асешепт геас6оп. !г" тЬ)к туре ог" геас6оп !к икед тот епс1-1аЬе!ш8, ЬастепорЬа8е Т4 РХА ро!утпегаке ь йе епхуше от сЬоке. АЫюицЬ ЬотЬ йе К!епокч тта8гпепт оу Е. со6 РХА ро1угпегаке 1 апд ЪастепорЬа8е Т4 РХА ро1утпегаке сап саггу ош ап ехсЬап8е геастюп, тЬе ЬастегюрЬа8е епхугпе сагпек а тиоге ротепт 3' — >5' ехопис1еаке аст)ч)ту.
4. 5уптЬек!к оу йе кесопд ктгапд от сРХА !и сРХА с!оп!и8. 5. 5уптЬеяк от" доиЫе-ктгапс1ес) Р)к)А тгош к!пц1е-ктгапдед сепгр!асек дипп8 ш ч)тго шита8епеяк. ТЬе К1епокч (га8тпепт сап йкр1асе ЬуЪпйхед оП8опис)еотЫе ргппегк !гоит тЬе тегпр!ате, !еайп8 то !окч ттес)иепс)ек от' шита8епек(к. ТЬь ргоЫеш сап Ъе ачогдед Ъу иыи8 ЪастепоРЬаце Т4 Р)к(А ро!ушегаке, ччЬ)сЬ с1оек пот сагье ктгапс1 йкр!асетпепт ()к)окка! 1974). 6. 5ес)иепсш8 ог" РХА ик!и8 тЬе 5ап8ег дгдеоху-итейатед сЬатп-теппшапоп гиейос1 (Еап8ег ет а1.
1977). А4.16 Аррепг((х 4: Епхугпег Иег( сп Мо!еса!аг С!отп(г 7. Ас опе типе, йе 3' — э5' ехопис1еаье асс!ч(су о( йе К!еиоч (гаВшеис чаа иаетс со т!!Кекс рго- СгиеВпВ 3' Сегппш сгеагес! Ьу коше геагг!сг!ои епкупсея Еаге!у, ЪасСет!орЬаВе Т4 РХА ро1ушегаае Ьаа Ъесоше сЬе епхуше о( сЬо!се (ог сЬЬ ригроае Ъесаиае о( 1(а цтеасег 3' — р5' ехопис!еаае асс!ч!су. 8.
ТЬе К!епосч (гаВшеиг Ьаь а1гю Ьееи иаег! ш СЬе ро1ушегаье сЬаш геасСюп Со атпрИу Вепошк РЬ(А вес!пепси ти ч!сто йас аге со Ъе пресс аа ргоЪеа ог (ог т!!гесс с!оп!и8 о( пшсаис а11е1еь о( !спотчи цепея Носчечег, сЬе Тат( РХА ро1ушегаке Ьак иосч Ьесотие йе епхуше о(сЬо!се (от йЬ ригроке Ьесаиае и Ь асаЫе си Ьеас апг! сЬеге!оге иеег! пос Ъе (геаЫу ат!8ет! а(сег еасЬ топит! о( купсЬеа!а апт! т!епаситас(оп.
!Х!ОТЕ5 ° Епсс-1аЪе1(па тч!(Ь сЬе К1епотч (га8шепс ргоч!г!еь ап а!сегпассче со сЬе иве о( Ьассет!орЬаВе Т4 ро1уиис1ео(Ые Ыпаье (ог Вепегас!и8 !аЪе1ес! РЫА (гаВшеиса сЬас саи Ье чает! аа яке тпаг1сегь г!иг!иа це! е1ессгорЬогеяя Весаиае РЬ(А (гаВпсепса аге 1аЬе1ет( !и ргорогсюп со сЬе!г псо!ат сопсепсгас!оиь апс! пос йе!г яхея ЬосЬ япа!1 аигс 1агхе (таВшепса ти а геяпссюп т!!цеьс Ъесопте 1аЬе!ет! со аи етсиа! ехсеис.
!с Ь (Ьегесоге роаа(Ые со иае аисотасВоцгарЬу со 1осасе ЬапсЬ о( РХА йас аге соо япа11 со Ъе ч!аиа! !хет! Ъу ьса!и!и8 тч!(Ь есЬ!т!!иш ЬгошЫе ог Я'ВК т1уея ° ТЬе сит!-611!па апт! епгс-1аЬе1!ид геас6опк чог1с сче!1 ои те1айче!у сгис1е РЬСА ргерагас!оиз (е.8., ш!и!ргерагас!опь о( р1аяп!сЬ). Е. СОЯ РЬ1А РОВ'МЕССА5Е ! КЕЕ1ЧОЪЧ ЕССАСМЕЬ(Т Ас((ч((уг 5 'т3 ' 0(4А ро1угпегахе 5иЬх(тагес 51па1е-ьсгапг1ег! 0(СА сегпр1асе чг1(Ь а рпгпег сопта1п1па а (гее ЗсЬуВгоху! цгоир.
(Сеасгюпт $4епотч (гаагпеп( о(Е. сод 0(СА ро1угпегаье 1 0((А — ! т(м(„-Р ПРР, 0~Аон МВт+ г(АТР г1ТТР г1СТР г(СТР Рог ехагпр(ет 5'... С С Сонз' Ср Ср Ср р Ар р Ср Ср Ар а 1ЧСВт ч ,сА(Р 11-(1, К1епотч (гаагпепс о( г(СТР'г1СТР 1, Е (( 0~А р 1у РС РС РС РА РТ РА С Р СР Т ° ° . х,..СССТАТССА А4.18 Аррепг)!х 4: Епгутез Жег! |и Мо!еси!иг С!отп5 ВасЕег!оргтаре Т4 О(ЧА Ро!ус|лега5е (Вас(епорЬаее Т4-1и(ес(ед Е. со!!) Вассег!орЬаце Т4 РХА ро1ушегаае (И, = 114,000) апд йе К1епо|ч ЕгаВшепс оЕ Е соП ро1угиегаае 1 аге япи1аг ш йас еасЬ роааеааеь а 5' — |3' ро1ушегаье асссч!су ап6 а 3' — л5' ехопис1еаае ас6чау йас В |поге ас6не оп япц!е-асгапг!ег! РХА йап оп ПоиЫе-ьсгапбег( РЬ)А.
Нолчечег, |Ье ехоиис!еаае асс|чау оЕ ЬассепорЬаВе Т4 РХА ро1ушегаье ыпоге сЬап 200 с!шея сЬас оЕ йе К1епосч ЕгаВшепс. Весаиае !с г(оеь пос 6(ар1асе оПВопис1еос!с!е рпшега Его|и япа!е-асгапдег! РХА сешр!асеа (Хоааа! 1974), ЪассепорЬаие Т4 РХА ро1ушегаае ъчог(гь шоге ейк!епс1у йап сЬе К1епо|ч Егаашепс !и шисааепеяз геассюпа ш ч(сго. $)5Е5 1. Б!ПиВ ог !аЪе!шВ йе гесеааег( 3' сегппп! сгеасег( Ьу сПгеас!оп оЕ РХА сч)сЬ геяпс6оп епгушея ЕаЬеПпВ геассюы шыс Ье сагпес( ош !и сЬе ргеьепсе оЕ Ь!ВЬ сопсепсгас!опз оЕ г)ХТРа ш огг!ег Еог сЬе ро1ушепгасюи (Е|П!пВ) геассюп со очеггнЬе!гп йе ролнег6л! 3' — э5' ехопис!еаае асс!ч)су.
2. Епб-1аЪеПпВ оЕ РЫА пю1еси1еа счиЬ ргосгигПпг 3' саПя ТЬ!ь геас6оп |ног(са |и ||но ьсаВея р!гас, йе росепс 3' — >5' ехопис1еаае асбчау гешочеь ргосгисПпц 3' саПа Егош йе РЫА апг( сгеасеа а гесеааес( 3' сегпипия ТЬеп, |и сЬе ргеаепсе оЕ Ь!ВЬ сопсепсгасюпа оЕ опе га|По1аЬе1ед ргесигаог, ехопис!ео1уск г)еигас(ас!оп !а Ьа1апсе|1 Ьу шсогрога6оп оЕ с(ЫТРа ас сЬе 3' сегип'- пия ТЬ!а геассюп, ъчЬ~сЬ сопясы оЕ сус1еь оЕ ге|иона! ап|1 гер!асегпепс оЕ йе 3'-сепшпа1 пис1еос(г(еа боги гесеааег( ог Ыипс-епс(ег( РХА, ь вошел(шея саПе6 ап ехсЬапВе ог гер1асегпепс геас6оп.
1п шапу садбея а а!пВ!е Ъийег сап Ье иае6 Ьой Еог Ыеачаце оЕ РХА лч(сЬ а гезспсс!оп епгуше апг( Еог |Ье ялЬаег)иепс еп6-1аЬеПпВ. ВассепорЬаВе Т4 РЫА ро1ушегаье М!1 6лпс6оп ас -509о оЕ шахипа1 асбчау |п |папу Ъийегь сЬас аге сопипоп1у иьед Еог 61Веьсюп оЕ РЫА сн!сЬ геьспс6оп епгугпея Но|нечет, пос аП геаспс6оп епгушеь лчог)с ш Ьи((ега иаег) 1ог РХА ро!ушегаье геассюпя апд П 1а аг(ч)ааЫе со саггу оис РПос геасс!опа ъч!сЬ сЬе рагбси1аг ЬассЬ оЕ епгуп|е оп Ьап|1. 1Е йе геаспссюп епгуше г!оеа пос счог)с ш |Ье Р)х)А ро1ушегаье ЬиЕЕег, и |чП1 Ъе песеааагу со сапу оис йе геьспсс!оп епгуше гПВеа6оп ап6 епс)- 1аЬеПпВ |п с|но аерагасе егеря 1и сЬ!а сазе, с!еаче сЬе РХА )и йе арргорпасе геяпссюп епгуи|е ЪиЕЕег, гешоне |Ье геяпсбоп епгугпе Ьу ехсгассюп лч!сЬ РЬепоЬсЫого(опп, ргес!РПасе йе Р)х)А |ч)сЬ ейапо1, 6!ьао1че П ш ТЕ, апг( асЫ |Ье арргорпасе | о1игпе оЕ а 1Ох РХА ро1ушегаье Ъи)Тег. Б!ПпВ ап|1 епс1-1аЪеПпа геассюпь лч!сЬ Ъассег!орЬаВе Т4 РХА ро1ушегаае сап Ъе сагпег! оис ас 12'С со шахип)ге сЬе гасю оЕ ро!ушегаае асс!ч(су со ехопис1еаае асс(ч)су.
Но|чечег, сЬеае геасс(опь аге ойеп сагпед оис ас гоогп сеп|регасиге ог аг 37'С сн)СЬоиС асЬ егяе еЕЕесгя 3. ЕаЬеПпг РЕ4А ЕгаВшепга Сог ые аа ЬуЬпгПга|юп ргоЪея ТЬе гесеааег) 3' Сепшш сгеагес! Ъу раг6а1 г!)иезус!оп оЕ г(оиЫе-асгапг(ес$ РЯА ъчПЬ сЬе 3' — э5' ехопис!еаае асспбсу аге ВПе|1 ъчПЬ (лгр) с(ЫТРа (гер1асегиепс ьуисЬеяа) (О'РаггеП ес а!. 1980). НуЪпсПга6оп ргоЬеа ргераге|1 Ъу сЬ!а сесЬп)оие Ьане с|но ас)чапсагеь очес ргоЪеа ргерагес) Ьу п!с)с сгапа!ас!оп. Р!гас, |Ьеу 1ас1| йе агбрасСиа1 Ьа|грш аггисгигеь СЬаС сап Ье ргог(исе6 сЬлппВ пк1| Сгапь!а6оп.
Весопй СЬеу сап еая1у Ье согчегсе6 шсо ьсгапйарес|6с ргоЬеа Ъу с1еачаВе ън!сЬ аи!саЫе геасг!сс!оп епгуисез (р1еаае атее Р!Вите А4-2). Ву сопсгая со пк)с сгапа1ас(оп, Ьосчечег, сЬ!а шесЬод с!оеь пос ргог(исе а ип!Еогш с1ВспЪ- и6оп оЕ 1аЪе1 а!опВ сЬе!епВсЬ оЕ йе РЫА. Ригйеппоге, 3' ехопис!еаае асссч)су с)еВгаг(еь япВ1е-ьсгапбес1 РЫА пшсЬ Еаасег йап П г(ецгас(еь с(оиЫе-астап|(ег( РХА, ю йас айег а пю!еси!е Ьаь Ьееп с)!Веьсес( со Па ш(с)ро(пс, П |чП! Йааос(асе |псо слчо Ьа1Е-!епасЬ а!пВ1е асгапсЬ сЬас снП! О!уЕА РВ1утетауеу А4.19 !згр!састра В Ь' еаопсс~еаае асгвау р ~уп гааг геасгюп Ва лН~ Ессй! геаглсьоп с деаг рангу аггапс-аресас ргоьеа ьу де~ е~есггорпогеиа ЕСССгЙЕ А4-2 РгосСисг!ои оЕ 5СгапгС-Врес11!с НуЬТ!ТС!гаС!ои РгоЬед Ье гарЫ1у гсецгассей!с !д сЬегеЕоге ипрогсапс со асор йе ехопис!еаье геасПоп ЪеЕоге сЬе еигуше геасЬед сЬе сепсег оЕ сЬе шо1еси1е.
Сопдес!иепс1у, сЬе гер1асешеис ВупсЬед!В гпесЬосс у!е!сЬ а рори1асюп оЕ гпо1еси1ед сЬас аге ЕиПу 1аЪе1есС ас сЬеп сепшш Ъис сопсаш ргоцгедд!тде1у с!есгеадспц с!паис!!сед оЕ 1аЬе1 сотгагд йесг сепсегя 4. Сопгегдюп оЕ сепшпс оЕ ссоиЫе-В!Таис!есс 136!А со Ыипс-еиссег! пю1еси1ея Ргоггийпц 3' сегпипс туП! Ье гегпоъес! 6:огп ссоиЫе-Всгапс!ед Тг!А!А Ьу сЬе росепс 3' — у5' ехопис1еаде асс!В!!у оЕ ЬассегюрЬаце Т4 13!А!А ро1ушегаде. !п сЬе ргедепсе оЕ Ь!цЬ сопсепсга6опд оЕ сС!АСТРВ, Еигйег ссецгассас!ои оЕ сЬе с!оиЫе-дсгапс!егс гец!оп оЕ йе сегир!асе М!! Ъе Ьа1апсес1 Ъу ВупсЬеяя ТЬе аЪгцсу со сопчегс ргосгийпц 3' сепишс со Ыипс епсЬ 1В ап ехсгеше1у ча!иаЫе геас6оп йас ь Егер!иеис1у иаесс ъуЬеп ргераппц 13!А!Ад Еог асЫЬюп оЕ ВупсЬеск 1ш1сегд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
