Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 140
Текст из файла (страница 140)
ТЛе йгас аатр!е 'ь с|еПчегес! Ео опе сЛагпЬег оЕ йе Легпосусогпесег. ТЛе аесопс! аагпр|е ь ПеПчеге6 со йе аесопс! а!с)е. Егче ас) иагеа аге сои пгес! !гоги еасЛ яВе оЕ йе Летосусотесег. МлпЬег оЕ се!а ас)иаге: 45, 37, 52, 40, 60, 48, 54, 70, 58, 60 Тога| соипг: 524 08ис!оп Еассог: |1 + 4)71 = 5 СеПе!гп! Пп ог!8|паП: 524 х 10' х 5 = 2.62 х 10е)гп! сеПа 5. 1пипесПаге!у айег сье, с!еап ГЬе Ьегпосусогпегег апс1 сочегаПР Ьу ппяп8 ш с)!в!6!ее) Н О Ео!- 1озчес) Ьу 70% есЬапо!.
0гу чч|сЬ 1епа рарег. А |МРО|СТАЛ|Т Оо пог аПозч йе сеП яьрепа|оп Со с!гу оп СЛе Летосуготегег. )ЧОТЕ5 Еггога йас спау геаи1с Егот ияп8 Ьетосусопсесег соипь аге с)ие со: ° ЧапаЫе хатр1тдЯот ЕБе огЕета! сеИ ысьрепа!от ТЬе сеП яьрепыоп тсьс Ье а8|сасес)| с!о пос аПоъч сЬе сеПа со аеи1е со йе Ьоьогп оЕ йе сои!а|пег. ° ЕпасЕес!иаге ог ехсесьЕчеИИтгг оу" ЕЬе Ьетосуготегег сЬатЬег. ТЬе чо1шие |и йе сЬатЬега соипсес1 !а Ьааес) оп йе сочегкПР геа6п8 оп йе яс1еа оЕ сЬе Ьетосусотесег. Очегйочч !исгеая еа йе чо!шие соипсед. ° СеИ с!итрЕпе.
Лаг8е с1шпра оЕ сеПа гпау Ье соо 1аг8е со епсег сЬе сЬапсЬег сЬгоиВЬ сар61агу ас6оп апс) счП! Ье ехс1ис)ес) 6огп йе сеП соипс. 5таП с1шпра сЬаг аге аЫе со епсег сЬе сЬапсЬег аге с)!Ебси11 со соипс зчПЬ ассигасу. 11 ь иирогсапс со Ьаче а топос!!арегае яьрепяоп оЕ сеПа Еог ассигасе соии6п8. ТЬе се1Ь сисьс Ъе сЬогоиВЫу пихес1 со асЫече итуогпшу. ЧсаЬ|йу Яаспсстд Чапось таи!Ри!асюпв оЕ сеПя шс1исПп8 расьа8|п8, Егее|бп8, апс! сП|ьос!ас!оп Егогп ргипагу сьаие, сап геаи!с ш сеП с)еай. Ехс1ияоп оЕ йе с!уе, Тгурап В1ие, сап Ье сьес1 со с)есегт!ие йе пшиЬег оЕ аигн)чш8 сеПа ш а рори1а6оп (РЬППра 1973). 1Моппа1 Ьеа1СЬу се1Ь аге аЫе Со ехс1ис1е йе с1уе, Ьис Тгурап В1ие сПйиаеа шсо сеПа сп ччЬссЬ спетЪгапе шсе8псу Ьаа Ьееп !окс.
ТЬе с)уе ехс1иа!оп тейос1 ь ап арргохппасе еас!тасе оЕ сеП ч!аЫПсу апс) ойеп с1оеа пос с)!ас!п8и!аЬ зчиЬ!п а 10 — 20% с)!Йегепсе. Ас)йс!оиаПу, сеПа йас ехс1ис1е с)уе аге иос песе|пап!у сараЫе оЕ ассасЬтепс апс) рго!оп8ес) аигч!ча! ог ргоПЕегас|ои. 1. Тгуряи)ке сЬе сеПа (р!еаае аее СЬарсег 17, Ргососо! 8: 5са8е 1, 5сер 18) апс1 ааерс)саПу сП!исе 0.5 т1 оЕ сеПа шсо РЬоарЬасе-Ьийегес! ааПпе со а сопсепсга6оп 6опс 2 х 105 со 4 х 10' сеПайп1. 2.
Ааер6саПу сгапауег 0.5 гп! оЕ йе с61исес1 сеП аиарепяоп ш РЬоарЬасе-ЬиЕЕегес! аа1ше со а ЕгеаЬ тЪе апс) асЫ 0.5 гп1 оЕ а ао1исюп оЕ Тгурап В!ие (0.4% ъч)ч). АВ.8 Аррепг))х 8г Соттоп|у Жег) ТесЛтг)иег т Мо!еси!аг С!отис 3. АПосч сЬе се))а со гешаш )п сЬе с1уе во1исюп Сог по )еах йап 3 ш)писеа апг) по!опаег сЬап 10 ш)писеа, ))ае а Раасеиг р)рессе со аашр1е йе се!)я ш г)уе апг) г)е))чег сЬегп со а Ьешосусогпесег Ьу сарг)1агу ассюп.
4. Соипс а соса1 оГ ас )еаас 500 се))а, )сеерша а верагасе соипг ог' Ыие се))а. Регегпипе йе Сге- с)иепсу ог' сЬоае сЬас аге Ыие, г.е., Ьаче пос ехс)иг)ес) йе г)уе. 5. Ресепшпе сЬе регсеш ч)аЬ)1|)у Сгош сЬе пишЬег ог'се)!з йас Ьаче пос ехс1ис1ес1 сЬе г)уе. ге 'ь сгура|п|гег) апг) геаиарепс)ег) |и 5 гп1 о! гпег)1ит; 0.5 гп| о! се!!а |а т|хег) чч18с 4.5 гп| о! сЛе аиьрепг)ег) се! 1а |п РВ5 1а Сгапасеп ег) Со а ьгпа11 СиЬе апг) гп!хег) ъч18с 0.5 гп| ипоп.
1п СЛе аагпр|е Сгапасеггес) Со йе Летосу|огпегег, 540 се!!а аге соипгег1; 62 о! СЛе е йе г)уе апг) аге Ыие. ТЛе регсепг ч)аЬ!! 13у егулаЬ 88.5%. Ле пигпЬег о! се!!а йас ехс|иг)ег) йе г)уе са| пигпЬег о! се!!в соипсег) = 88 5% ч|аЫ13)у Ригугсаг!оп оутис!е(сАс!дх АВ.9 РБгс1Е1САТ1ОЫ ОГ )Ь(Е)СШС АС10$ СА()Т!О)Ч: Р!еахе аее Аррепецх 12 Еог арргорпа1е Ьапд(!пц оЕ та1ег!а!8 таг1сед хч!й <! >. РегЬарх йе тох! Ьаяс оЕ а11 ргоседпгех ш пю1есп1аг с1опшц ь йе рппбсадоп оЕ ппс1ек асЫя ТЬе !сеу хгер, йе гепюча1 оЕ ргоге!пя сап ойеп Ъе сагпед оп! ягпр1у Ьу ех(гасдпц ас)пеопх 801п6опх оЕ ппс!ек асЫ8 хч!1Ь рЬепо1:сЫогоуопп <! > апд сЫого1опп <! >.
цпсЬ ехггасдопх аге гьед ччЬепечег п ь песеааагу го !пасдчасе апд геточе епхутех йа! аге паед !п опе агер оЕ а с1ошпц орегагюп Ье!оге ргосеесцпц го йе пех!. Ноччечег, адс66опа! теаапгех аге гес)шгед ччЬеп ппс1е!с асЫ8 аге рпп6ед 6от сотр1ех т!хгпгех оЕ то1есп1ех апсЬ ах се11 1ухасея 1п гЬехе сахея 6 ь папа! го гегпоче гпох! оЕ ЕЬе ргоге!и Ьу д!цех6оп ъчЬЬ ргогео!удс епхутех хпсЬ ах ргопахе ог ргосе!пахе К (р1еахе хее Аррепйх 4, ТаЫе А4-8), ъчЬ!сЬ аге асдче аца!па! а Ьгоад хрессгшп оЕ падче ргогеша, Ьеуоге ехггасдпц ичгЬ огцапк хо1чепгя Ех1гасйоп ил111 Р11епо1!СЫогоЕопп ТЬе вгапдагд гчау го гепюче ргоге!па 6 огп ппс1ек асЫ хо1тюпх !8 го ехггасг 6гхс ичЕЬ рЬепоЬсЫого!опп (ордопа1!у сопгашгпц Ьудгохус)шпц!пе а! О.
! со) апс1 гЬеп хч!ЕЬ сЫого!опп. ТЬ!8 ргоседпге га)сех адчапгаце оЕ йе Еас! йа! дергогешгхагюп Ь гпоге еЕ6с!еп! хчЬеп пчо д!ЕЕегепг огцап!с 801- чепь аге пхед шхгеад оЕ опе. ЕпггЬеппоге, аЫюпцЬ рЬепо1 депагпгех ргогешх еЕ6сгепг1у, и доех пог сопгр!еге1у шЬЕЬП !!Махе асдч!гу, апд Ь ь а 801чеп! Еог 1()х)А пю1есп1ез гЬаг сопгаш !опц !гас!8 оЕ ро!у(А) (Вгаъчегтап е! а1.
!972). Вой оЕ гЬехе ргоЫепы сап Ье с!гсшпчепгес1 Ьу пяпц а ппхгпге оЕ рЬепоЬсЫогоуопп:ьоату1 а1соЬо1 (25:24:1). ТЬе апЪхес)пеп! ехггасдоп ъч!ЕЬ сЫогоуопп геточех апу 1спцеппц ггасех оЕ рЬепо! Егот йе ппс1ек асгд ргерагагюп. Ехггасдоп ъчгЬ ейег, хчЫсЬ очах ъчгде1у пхед Еог гЫ8 рпгрохе Еог тапу уеагя !х по 1опцег гес)шгед ог гесопппепс1ед Гог гоп6пе рпп6садоп оЕ Е)ХА. 1.
Тгапхуег йе хабр!е со а ро1ургору1епе гпЪе апд адд ап ес)па! чо!шпе оЕ рЬепо1:сЫогоуопп. ТЬе пос!сгс асса чдП !сод го рагйгоо шго йс огцашс рЬаас П гЬс рЬспо! Ьас пог Ъеео адсс(оагс!у ечгд1!Ьгагсд го а рН оЕ 7.8 — 8.0. 2. Мгх ЕЬе сопгепь оЕ йе гпЬе пп61 ап епш1яоп !оппя 3. Сепгпупце гЬе пшсгпге аг 8098 оЕ йе тахппшп хреед ЕЬа! йе гпЬех сап Ьеаг Еог 1 пппше а! гоогп гегпрегагоге. 1Е гЬе огцатс апд ас)пеопх рЬааех аге по! гче)1 аерагагед, сепсп!пце ацагп !ог а 1опцег гппе. Хоппацу, гЬс ачосош рЬасе Еогогс йе оррсг рЬасс.
Ноюсчсг, !ЙЬе ас!оеоос рЬаае ы дспсс Ъесаосе оЕ яа!г (>0.5 хг) ог юсгосе (> !088), П ъчП! Еопп ЕЬс !оысг рЬасе. ТЬс огцасдс рЬаае Ь сая1у !дспг(- ПаЫе Ьесаые оЕ йс усцо~ч со!ог соогпЬшед Ьу ЕЛс 8-Ьудгохучсдпоцпс гЬа! Ь аддсд го рЬспо! допо8 сПсд!!Ьгадоп (р!еасе асс Аррсойх !). 4. Е)хе а ргрегге со ггапхуег йе ас)пеопх рЬахе го а ЕгехЬ гоЬе. Рог япа11 чо!шпех (<200 П1), пае ап апготагк ргрепог 6ьед хч!ЕЬ а йхрохаЫе 6р. Р!хсагд гЬе шгегуасе апс1 огцапк рЬахе. То асЫече ЕЬс Ьесг гссочсгу, йе огцасдс рЬасе апд !пгсгЕасе гоау Ъе "Ьас!с-ехггасгед" ас Еоцочч: Айег гЬе Бгя ачосоы рЬасс Ьас Ьссо ггапс6хгсд ас дсаспЬсд аЬочс, а<д ап сс!оа! чо!шпс оЕ ТЕ (рН 7.8) го ЕЬе огцаок рЬасе апс( !псег(асс.
МЬс веП. 5ерагаге йс рЬасес Ьу ссогпЕсцаггоп ас !и 5гср 3. Еогоьое й!с сссопд ачоеоы рЬасе ю!ЕЬ ЕЬе Еггсг, апс! ргосеед го 5гер 5. А8.!О Аррепг(|х 8: Соттоп!у Жег! Тес)гтг)иеь т Мо!еси!аг С!отпе 5. кереаг Мерь 1-4 ип61 по ргогеш ь ч(ь|Ые аг йе шгегЕасе оу 3Ье остап(с апс) ас)иеоиь рЬаьеь.
6. Ас)с) ап ес)иа) чо1шпе оу сЫогоТогш апг) гереас Мерь 2-4. 7. кесочег йе пис1ек ас(с) Ъу ьгапс(агс3 ргес(р(гаг)оп ич)Ь ейапо1. Оссаьюпайу, ейег < ! ) ь иьсд го гспюче сгасеь о! сЫого(огт (гоги ргерагайопь ор Ь|ПЬ-то)еси1аг-ис|ПЫ 034А (р1саье ьее йс Хоъеь Ье)оън). МОТЕ5 ТЬе огйапк апс) аг)иеоиь рЬаьеь шау Ье ппхес) Ьу чоггехшй ъчЬеп (ьо1аг(пд ьша11 ОНА шо1еси!еь (<10 1сЬ) ог Ьу кеп11е ьЬа)с(пй ъчЬеп (ьо1аг(пй ОНА шо1еси1еь оГ шос(егаге ь(ге (10 — 30 1сЬ).
11|Ьеп (ьо!аг(пк!агйе ОНА гпо1еси!еь ()30 1сЪ), 1Ье Го11оъч(пц ргесаигюпь шиь1 Ъе га1сеп Со ачоЫ йеаг!пц (р!еаье ьее а1ьо СЬаргег 6). ° Мгх 1Ье огйапк апс) аг)иеоиь рЬаьеь Ьу госа6пд 1Ье шЪе ь!ои 1у (20 грш) оп а игЬее!. ° Т)ье!агде-Ьоге р!реиеь го ггапьГег йе Р)ъ)А (гош опе шЪе 1о апойег. Н15ТОЗЕ1САЕ РООТЫОТЕ ОЫ РНЕЫОЕ (С Н О, ЕЪЧ. = 94.11) Опй! йе пзк1 1950ь, йе ьгапс(агс( гпе|Ьос( о! риг((у(пц ОНА (пчо)нес( ьгпрр(пй ргоге)п (гогп йе пис|вс ас(г( илй с(егегйепг апс3 ьггопа ьа|1 ьо|игюпь (е.ц., регсЫогаге). Бпа! с(ерго1еп)хаг)оп ииь асЬ)енес) Ьу ьечега| ехиас6опь ъий сЫого(огпь (асег) ъчй 'ьоагпу| а|соЬо| (5ечад 1934; 5счац е1 а|. ОН 1938). ТЬе йгьг герог ес( иье о! рЬегю| го рип(у пис)е)с аск)ь ъчаь риЫьйес! Ьу К|гЬу (1956), ъчЬо ънаь аъчаге о! йе роъчег о! рЬепо| 1о ех|гасг ргоге)пь (гогп аг)иеоиь ьо)иг(оп (Сгаььгпапп апс) Оейпег 1953).
|п Ыь (п|йа| рарег, К|гЬу ьйои ее( йа1 еигасйоп о( Ьотоаепагеь о! татгпайап йььие ъчйЬ а гио-рЬаье рЬепо3-Н О гпЫиге аг гоопь гегпрегагиге |ес! го рап)3)оп)пц о! | КЫА |пго 1Ье аг)иеоиь !ауег. ОНА гегпа|пес| аььоо|агег3 илй рго1еп а1 6ъе |п1ег|асе. КлЬу г(и)с(с1у геа))лес( йа1 гер|асегпепг о! Н„О Ьу ьо|ийопь о! апюп|с ьа|гь ге!еаьег3 Ьой кЫА апс| 0(ъ(А |пго йе ас(иеоиь ,' РЬаье ййгЬу 1957; (ог геч(еъч, р(еаье ьее К)гЬу 1964).
А)3ЬоийЬ 3Ье сье о! ап|оп|с люсь 1о ге|еаье ргоге(пь (гогп 0)ъ)А ъчаь гуле(с)у аЬапсЬпес) )п (аког о! ьггопк апюп|с с)егегцепь ьисЬ аь 505, К)гЬу'ь ог(й)па! с|еьспргюп о! рЬепо! ех|гас|юп (огпь )Ье Ьаь(ь о! тапу рипйсайоп гпейосЫп согпгпоп иье гас|ау. ТЬе (ипсйоп о! йе рЬепо! ь ргоЬаЫу йе ьагпе аь йаг о! а ргогев ьо(неп6 |3 ехггасЬ рго1еп йаг Ьаь Ьееп с|ььос|а|ес| (гопь пис|ес ас)с)ь Ьу апюглс ьайь ог с|егегйепгь. 5о е(йс)епг ь йь ргосегь йаг риге ргерагайопь о! пис|ес аск| аге оЬсйпес3 айег |иьг Ьчо ог 3Ьгее еигасйопычй рЬепо!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
