Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 143
Текст из файла (страница 143)
Соптр1ете сПтес6опа тпау Ъе Еоипб оп йЬ ЪЧеЪ Яте. 1. 5е1есс а Мкгосоп ипп тч)тЬ а пис1еотЫе сит-оЕЕ ет)иа! то от япаПег йап тЬе шо1еси1аг яте оЕ йе пис1ек асЫ оЕ штегея (р1еаье атее ТаЫе А8-3). 2. 1паегт тЬе Мкгосоп сагтг)фе што опе оутЬе ттчо ч)а!ь аиррПе6, аь аЬочтп !п Е18иге А8-3. 3. То сопсептгате (тч)тЬоит аЕЕест!п8 ьа!т сопсептга6оп), ртрепе ир то 500 1л1 оЕ зашр1е ЕРХА ог КХА) !пто тЬе геаегчог. Септ66л8е Еог йе гесопипеп<$ед шпе, по! ехсеегпп8 йе е Еотсе ьЬотчп ш ТаЫе А8-3. Сопсепггагспр !чупс!езс АсзсЕЕ А8.17 аапзрЗе геаевозг пас!ею асзОа Сгаррео Оу Мвг Залпе зпнелео саппОре ЕЕС13ЙЕ АВ-3 Сопсеп1габоп!13еаа16п8 оЕ Ь!ис1е!с Асгд 5о1ибопа Еса!и М!сгоп ЕЕ!Сгасепсг!Еи а6оп сопсеосгасео аалзрзе 4. То ехсЬапце аа!с, аИ йе ргорег апюип! ог арргорпа!е с1!1иеп! !о Ъпп8 !Ье сопсеп!Тагес! Еатр!е !о 500 1с!.
Сеп!6628е Еог !Ье гесоттепс1ес1 !ппе, пог ехсеес1!08 ТЬе е Еогсе ЕЬосчп ш ТаЫе А8-3. То асЬсече а 1осчег аа1! сопсеп!га!юп, гереа! 1Ье еп6ге Егер аа ПЕСеааасу. Р!еааЕ ЕЕЕ йЕ 1оогпо!е Ье1осч Со ТаЫе А8-3. А ЕМРОКТАХТ !То по! очегЕз11 йе 8Ьга1е чза1. 5. Реточе йе геаегчо1г Егот !Ье ч!а! апс1 шчег! !Ье геаегчо1г ш!о а песч чса! !Каче йе 6Ьгаге ип61 йе Еатр1е Ьаа Ьееп апа1ухес1).
6. Сеп!ТЕЕ08е а! 500 — 10008 Еог 2 пппшеа пс а т1сго108е со гесочег ппс1еес ас!с! ш йе ч!а1. 7. Вепюче геаегчоп; сар йе чса1 го агоге йе аагпр1е. ТАВЕЕ А8-3 ЬСис1ео6ЕЕе Сис-оба Еог Мкгосои Сопсепгга1ога Мдхсмом 5рсм т!Ме КЕСОММЕМОЕП СМ М1МОТЕ5 8 ЕОКСЕ 4'С 25'С 1ЧОСЕЕОТ1ОЕ СОТ-ОЕГа М!скосом МООес Сосок СООе О5 55 уеПозч Пгееп с1еаг гоге Ыпе Носе йас и!сгаПЬгаиоп а1опе с!оса пос сЬапае ЬпЕаи сотроясюп. ТЬе яз1с сопселсгас!оп зп а аагпр1е сопсепсгасесс Ьу ар!пп!л8 сп а М!сгосоп нлП Ье йе галсе аа сЬас зп йе ол48па1 ааспр1е. Рог дега!ила, сЬе сопсепсгасед аатр1е и й1тед зн!сЬ Н,О ог Ьпй ег со !ь ог!8!па! но!тпе апд арал а8азп Есапед йасоппппоси йаП!сгас!оп1.
Тйа гезпонеа йе аа1с Ьу. сЬе сопсепсгапол Еассог оЕ сЬе «1сга01сгаиоп. Еог еаагпр!е,!Е а 500-р1 аатрсе солса!и!п8 100 пзм аа1с Ь сопсепсгасед со 25 р1 Е20а сопсепсгадоп Еассог1, 959е оЕ сЬе соса1 ядс зп йе аагпр1е ндп Ье гетонед. ТЬе ааЬ сопсепсгадоп зп сЬе аатр1е юзп гетазп ас 100 тМ. Кей1пип8 сЬе аатр1е со 500 р1 зп Н О едП Ьпп8 йе аа1С сопсепзгадоп Со 5 тч. Сопсепегадла Со 25 рс опсе тоге знп! гепзоне 99нае оЕ йе огз8!па1 соса! ы!с. ТЬе сопсепсгасезс аатр1е зн!П позу Ье зп 0.25 тм аа1с. Еог тоге сопзр1есе аа1с гепюна1, ап адспсюпас гес01т!оп апд арзппзп8 сус1е юзП гетоне 99.9 о о!' йе Епгда1 аа!с сопсепс. 'аа спйсасеа яп81е-ягапдед апд да !пд!сасеа дол!0-ьасгалдс.
3 10 30 50 100 !О 30 60 125 300 10 20 50 100 125 14,000 14,000 14,000 14,000 500 185 95 50 35 15 8 10 6 25 15 А8.18 Арреиг))х 8: Соттоп1у Гтвег) ТесЬпа1иеь гп Мо!еси!аг С!оп)п8 Сопсеп1га6пц )Ч<с!е!с Ас1гть Ьу Ех$гас6оп чч1й Во1апо! Вттг)пд ехтгаст)оп оГ ас!иеоиь ьо1ит)опь чч)тЬ ьоЬепо юсЬ аь ьесопдагу Ьиту! а!соЬо1 (1ьоЬитапо1) ог и-Ьиту! а1соЬо! (и-Ьитапо1<1> ), юше оГ тЬе ччатег тпо1еси1еь аге рагт111опес1 што тЬе огВап)с рЬаье. Ву саггушд ош ьечега1 сус!еь оГ ехтгастюп, йе чо)итие оГ а пис1ек асЫ ьо! ит)оп сап Ъе гедисед ядшйсапт1у. ТЬ)ь шейод оГ сопсептгатюп гь иьед то гедисе тЬе чо1шпе оГ д1!иге ю1итюпь го йе рошт гчЬеге тЬе пис1ек асЫ сап Ье гесочегед еая!у Ьу ргес)р)тат)оп ъч)ГЬ ейапо1. 1.
Меаятге ГЬе чо!итпе оГ тЬе пис1ек асЫ ю1иНоп апд асЫ ап ег)иа! чо1шпе оГ 1ьоЪитапо!. Мтх тЬе ьо1ит)оп гче11 Ьу чогтех)па. АсЫЬюп оГ тоо пшсЬ гюЪшапо! сап геви1с ю гегпоча1 оГ а11 йе Н,О апд ргесграапоп оГ йе гшс1ек асЫ. Н гЬЬ Ьаррепв, асЫ Н,О го ГЬе огаапк рЬаве опт!1 ап аг1псопв рЬаве !ъчЬГсЬ вЬоп1д соптагп йе пис1ек асЫ) геарреагв. 2.
Септпй тле йе ьо1и!)оп ат птахипшп ьреес1 Гог 20 ьесопдь ат гоотп тетпрегатиге тп а ппсгойце ог ас 1600е Гог 1 пипите Гп а ЬепсЬтор сепГг1Гиае. Г1ье ап аитошатк ппсгортреттог то гешоче апд д)всагд йе иррег 11ьоЬитапо!) рЬаье. 3. Кереат Мерь 1 апд 2 опт!1 йе деягед чо!шпе оГ ас)иеоиь рЬаье 1ь асЬтечед. Весапве ЬоЪыапо1 ехггасгюп доев пот гегпоче ва!т, йе ва1т сопсептгагюп гпсгеавев Гп ргорогдоп то йе гедпстюп ю гЬе чо1шпе оГ йе во!шюп. ТЬе ппс!етс асЫ сап Ье ггапвГеггед то ГЬе деягед ЬпГГег Ьу в реп-со! пгпп сЬгогпатоагарЬу ог Ьу ргесгрпадоп тчттЬ ейапо1. Г2иапг|гаггои 07'|ъГис!е|с Аси|ь А8.ь9 Я1.)А!ЧТ1ТАТ1О|х| ОР !511.)С|.Е1С АС10$ СА!)Т1О)ч): Р1еабе ьее АррепеПх Т 2 Гог арргорПа!е Ьаис|ПОВ о1 та1еПа15 гпаг1сес| иг|ГЬ <1>.
Тъчо суреь оу шегЬос|5 аге ъчЫе|у пьес| со гпеаб иге йе аиюипс оу пис1е|с асЫ |и а ргерагасюп. 1Г йе ьагпр!е |5 риге (Ье., ъч|ТЬои! яцшйсапс аиюппгб оГ сопсапппапеь ьпсЬ аь ргосеспь, рЬепо1, ацагоье, ог ойег ппс|ек асЫ5), ьрессгорЬосошесг|с шеаьигегпеп! ОГ ТЬе ашоипс ОГ БАг !ггайасюп аЪьогЬег| Ъу сЬе Ьаьеь ь ьиир!е апс1 ассигасе. 1Г ТЬе апюипс оу 13|ь)А ог К)х)А ь чегу япаП ог |Г йе ьашр|е соп!ашь яцп|йсапс с!иапиг|еь оу пприг|с|еь, йе агпоипс оу пис1ек асЫ сап Ье еьшпасес| Ггош йе ииепягу оГ Япогеьсепсе еш!!!ее| Ьу ей|ЕПши ЬгошЫе ог НоесЬьг 33258.
А ьппипагу ОГ йе спеСЬос|5 соиииоп|у пьес| со шеаьиге ЕЬе сопсепсгайопь ОГ 1))ч)А ш ьо1исюп аге Пьсес| |и ТаЪ|е А8-4. Мохе с|есаПес| о|ьспьь|оп ау йе гпейосЬ ГОПоъчь аусег ТЬе гаЪ|е. ТАВЕЕ АВ-4 Меаьпг!иц 1Чис1е!с Асй Сопсеп!гаНопь МетнОО 1н5таимент Соммент5 АЪьогЬапсе а| 260 пл| йиогогпе|ег Епиьяоп ас 458 пгп |п йе ргеьепсе оГ Ноесйп 33258 Р|рьск1| Еа Ыс !гоп| 1пч|сгоцеп) ЕсЫйшп Ьгопийе ьрос сеьс ьрессгорЬосо|песег С)ьеГи) оп1у Еог ЬЕВЫу риг|Тсес) ргерагайопь оГ пис1ек асЫ, япсе |с де!асса апу сопъроипд йас аЬьогЬь ъсцгигссагсс)у а| 260 пш, ъчЬссй шс1ш1еь, Гог ехап|р!», РНА, ЕНА, ЕРТА, аггй рйе|ю1. Т1к г ию оГ аЬьогЬапсе ас 260 п|п апд 280 пп| 'ь ойеп |пей аь а сеьс Еог сопсапипаИоп оГ а ргерагасюп оЕ РХА апй ЕХА чйй ргосе|п.!Зеьрпе |ь роро!агйу, |Ьь сеьс ь оГ с)иеьссопаЫе и огсЬ.
Хис1есс асЫь аЬюгЬ ьо ьсгопц)у ас 260 пгп |Ьас оп!у а яцп|йсапяече) оЕ ргопйп сопсагп!пайоп ъчй! саиъе а яцп|6сапс сЬапце |п сЬе гасю оЕ аЬьогЬапсе ас |Ье си|о чгаче1епцсЬь ! СсгагЬигц апй СЬпьпап 1942; С)аье! 1995; МапсЬепег 1995, 1996; ТУПГ|пцег ес а). 1997) Гр!еаье ьее йе рапе! оп АВ5ОВРТ1ОЫ 5РЕСТПОЕСОРУ ОЕ )ъ)Е)СЕЕ1С АС1Р5 оп |Ье Гойом|пц раце). '1Ъе ьрес|йс аЬьогриоп соеСТ|с|епь оЕ Ьо|Ь РХА апй ЕХА аге айессей Ьу |Ье юп|с ьсгепцсЛ апд йе рН оГ йн.
ьо1ипоп ЕВеачеп ес а1. 1955; чУПЕ|пцег ес а1. 1997). Ассшасе гпеая|гегпепь оГ сопсепсгайоп сап Ье шаде оп!у ъчйеп йе рН ь сагейийу сопсгойей апд сйе юп|с ьсгепцсЬ оЕ |Ье ьо1ииоп и 1оча 1с и сПЕ6си1| со п|еашге |Ье аЬьогЬапсе оЕ япай чо1шпеь оЕьо1шюп апй сЬе гпесйод ь гейаЫе оп!у очек а Га!г1у па|точь гапце оГ сопсепсгасюпь Е 5 рц)ш) со 90 рц)гп1).
НоесЬьс 33258 ь опе оГ а с!аь оГ 86-Ьепвп|Ыахо1е йиогеьсепс дусь йас Ь!пс) поп)псегса!аспш1у апд |ч|й ЬгцЬ арсе|Пспу со доиЫе-ьсгапде 1 РНА. Айег Ь~псйпц, йе йиогеьсепс у|еЫ |псгеаьеь йо|п 0.0! со 0.6 ЕЕап апй СьгоЬПеЬ !975); Ноесйьс 33258 'ь |ЬегеГоге а иьеГи) йиогосЬгогпе сог йиогоп|еспс де!асс)оп апд с)иапс!сасюп оЕ доиЫе-ьсгапс)ед РНА. НоесЬьс 33258 шсегась ргеГегепйайу ъч|й А!Т- псЬ гец)опь оГ йе РНА Ьейх, ъч|й сЬе !оцуп оГ |Ье |псепьйу оГ йиогеьсепсе |псгеаяпц |п ргорогс|оп со сье А+т сопсепс ое сье РНА ГРахье1ес ес а1, 1989). тье йиогеьсепс у|еы оГ ноесььс 33258 'ь арргох|п|аш1у сЬгееГоЫ 1оъчег ъчпЬ япц1е-ьсгапдес1 РНА 1НПыц апд Сгорр 1975), Ниогошесгу аыауь ъчиЬ НоесЬя 33258 йо пос ъчой ас ехсгеп|еь оЕ РН апб аге айессед Ьу ЬосЬ йесег- цепЬ ап|1 ьа1Ь (Згап 1.апс)|ег апд СЬеуььепь 1986).
Аяауь аге йегеГоге ишайу сагпе|1 оШ |п 0.2 М НаС!, 10 |пм ЕРТА ас рН 7.4. ТЬе сопсепсгапоп оЕ РНА |п йе ипцпоъчп ьагпр1е и еьс|гпасей Его|и а ьсап|1агс) сигчс сопьсгиссед ияпц а ьес оГ геГегепсе РНАь 110 — 250 пц)гп)) ъчЬоье Ьаье сошрояйоп и сЬе ьагпе аь сЬе ипЕпоъчп ьап|р1е. ТЬе шсепясу оЕ епиьяоп ь пеаг)у Ппеаг очес а 1000-Го!6 гапце оЕ РХА сопсепсгасюпь.
ТЬе РНАь гп|ы Ье оГ Ьюцй гпо1еси1аг ъче|цЬ| ь)псе НоесЬьс 33258 йоеь пос Ь!пд еЕ6с|епс1у со хи|ай Егацшепсь оГ РНА. АП Р)4Аь ап|1 ьо)ипопь гпгьс Ье Егее оГ ей|йшгп ЬгогпЫе, ъчЬ|сЬ с) иепсЬеь сЬе йиогеьсепсе оЕ НоесЬьС 33258. Но|чечег, Ьесаиье Ноесйп 33258 Ьаь ПП!е арйпйу Гог ргоге|пь ог гПНА, п|еаьигегпепсь сап Ье сагпей оис ияпц сей )уьасеь ог риийед ргерагайопь оГ РНА ЕСеьагопе ес а1. 1979, 1980; ЕаЬагса ап|1 Ра|цеп ! 980). ТЬь шесйосс Е цоог) оп)у Еог ьо1ийопь сопса|пшц 1оъч сопсепсгасюпь оЕ РХА апй ЕНА ! <1О рц)гп)), апй ь Ьо|Ь ехрепяче ап|1 ге)айче1у ь!оъч 130 — 40 пиписеь). С)'ъг сгапяйшгипасог А Гая ап|1 ъепясл е псе!Пой сЬас исйпеь |Ье Б)г-)пдисед йиогеьсепсе епипе|1 Ьу !псегса1асед е|ЬЫи|гп Ьгопийе гпо1еси!еь.
ТЬе РЫА ргерагасюпь ипйег сея аге ьроссед опсо ап ацагоье р)асе сопса|п|пц 0.5 рцгпъ! есЬЫшпь ЬгогпЫе. А ьепеь оЕ РНАь оЕ Епоъчп сопсепсгайоп аге |пей аь ьсапйагйь, Весаые сЬе а|поппе оГ йиогеьсепсе 'ь ргорогсюпа! со йе соса) гпам оГРХА, сЬе Оиапйу оЕ РНА сап Ье еьс)гпасей Ьу сошраппц йе ПЕЫ сап)ссай ас 590 пгп Ьу |Ье сея ргерагайопь апй йе ьсапдагбь. ТЬе гея|!сь оГ |Ье амау сап Ье гесогдед оп 61п|.!п а япи!аг, о1йег сея, бечдореб |п |Ье еаг1у 1970ь, РХА ьагпр)еь апй ьсапс)агйь аге ьропей опсо а ьЬеес оЕ 5агап Еггар, ш)хесГ ъч|й а Й1исе ьо1исюп оЕ есЬ|йигп Ьго|пЫе, апд рйосоцгарЬей ТЬе сЬзеГ ргоЫегп ипй сЬе гпесЬой П сЬас |с ь ьепяс|че со |псегйшепсе Ьу ЕНА.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
