Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 147
Текст из файла (страница 147)
5гпаПег пю1еси1еа аге геса!иес) ш йе рогеа оЕ сЬе Ве1, юЬегеаа сЬе !аг8ег Е))н)А ь ехс1ис)ес) апс) расьеа сПгесс)у сЬгоиВЬ сЬе со1шпп. Вю-Се! Р-2 сап Ье гье6 со аерагасе оПВопис1еосЫеа 6ош РЬоарЬасе !опа ог с)! !Тря Вю-Се! ь аирр1се6 ш сЬе Еопп оЕ а Ве! апс) пее6 оп!у Ье ес)ш1!Ьгасед ш гиии!п8 ЬиКег ЬеЕоге иае. 5ерЬас)ех ь ьирРПес) аа а рончс)ег сЬас шиас Ье Ьус)гасес) ЬеЕоге иае.
Ргерагас!оп оЕ Бер)сас!ех 1. 5!оса!у ас)6 5ерЬас)ех оЕ СЬе с)еа!гес) Вгас)е Со йз66е6 Яеп1е Н,О ш а 500-ш1 Ьеа)сег ог ЬоСКе (10 8 оЕ 5ерЬабех С-50 Вгапи1еа у!е1сЬ 160 ш1 оЕ а1иггу). ЪЪгааЬ сЬе ячоПеп геяп к!сЬ 6!ж!1е6 асеп1е Н О аечега! с!шеа со гепюче ао1иЫе дехсгап, ыЫсЬ сап сгеасе ргоЫепь Ъу ргес!Риасш8 с1ипп8 ейапо1 ргессрсса6оп.
2. Ес)иП!Ьгасе йе геяп си ТЕ (РН 7.6), аисос1аче ас 10 ря !0.70 )с8!снап') Еог 15 ииписея апс) зсоге аС гоогп Сегпрегаюге. Со!огпп С)сгогпа1орар)су 1. Ргераге 5ерЬадех ог Вю-Се1 со1шппа сп сПароааЫе 5-ш1 Ьогоы!каге 81агь рсреССеа ог Раагеиг р!Рессеа р1и88ес) сн!сЬ а япаП агпоипс оЕ яеп1е 81ась нноо1. 1Ле а 1оп8, паггонн рсреие !е.8., а сПзроааЪ|е 1-ш1 р1аас!с рсрессе) со риаЬ йе чноо1 со йе Ьопогп оЕ йе 81агь ог Рахсеиг рсрепе.
2. Еае а Раасеиг рсрессе со 66 йе со1шпп нн!сЬ а а1шгу оЕ йе 5ерЬас)ех ог Вю-Се1, саЫп8 саге со аноЫ ргобис!п8 ЬиЬЫея ТЬеге ь по пеес) со с!оае йе Ьоссоси оЕ йе со1шпп. Кеер асЫ!п8 Ве1 ип61 сс рас)ся со а !ече! ! сги Ье1ож сЬе сор оЕ сЬе со1шип. ЪсгааЬ сЬе Ве! нн!сЬ аечега! но1- шпеа оЕ 1х ТЕ!х" ЬиКег (РН 8.0) (р!еаое аее АррепсПх !). 3. Арр1у йе !)1)А аагпр!е !!и а чо1шпе оЕ 200 Сс! ог 1еаа) со сЬе сор оЕ йе Ве1. ЪСгааЬ оис йе аашр1е сиЬе сн!сЬ -100 Р1 оЕ 1х ТЕХ ЬиКег, апс1 1оас1 йе нчааЫп8 оп йе со1шпп аа гооп аа сЬе сс)х)А аашр1е Ьаа епсегес) сЬе Ве!. ЪЪЪеп сЬе снааЬ!п8 Ьаа епсегед йе Ве1, ипшесбасе1у 66 йе со!шпп нн!сЫх ТЕЬ! ЬиКег.
А ЪЧАаМНС Со!ишлх гьед Со аерагаге гас)!о!аЬе!ес) 06)А !гоги гас)!оасг!не ргесигаога аЬоиЫ Ье гип ЬеЫпс) Сис!Се асгеепа Со ргогесг а8а!паг ехроьиге Со гас)!оасг!н!Су. А8.30 Арреийх 8| Соштоп!у Еутег) ТесЬигг)иет т Мо!еси)пг С!отпч 4.
!иппейа|е!у зтагт Со соПесС ЕгасПопа Е-200 )т1) т т)сгоЕи8е СиЬея !Е |Ье Е|С4А Ь !аЬе!егС гч!|Ь г'Р < ! >, п|еааоге |Ье гагПоасич!гу !и еаеЬ оЕ |Ье ь|Ьеа Ьу оа!п8 еЬЬег а Ьапг|-Ье!г! иппппоп|гог ог Ьу Сегепсгоч соопПпц !и а Пг|шд ае!пППа|юп соопгег. А|Ы пюге |х ТЕ|4 ЬоЕЕег |о |Ье сор оЕ |Ье це! аа геПшгед Егоп| сппе со Пгпе. ТЬе Е|С4А гчП! Ье ехе!о|Се|С Его|и |Ле Пе! апгС гчП! Ье Еошн| !и |Ье чо|8 чо!шпе !цаиаПу Зиая оЕ Фе соса! со1шпп чо!оп|е), ТЬе !еаеПп8 реа|г оЕ гаг)!оаес!ч!гу |Ьеге|оге сопя|и оЕ пос!ео|Ыеа |псогрогасег! ш|о Е|С4А, апг) Фе |гаПшц реа)г сопя|и оЕ ип!псогрогасегС 1" Р)гСЬ|ТРа. 5. Роо1 сЬе гайоасПче Етасс!опт )п |Ье 1еайп8 реа)т апгс атосе ас — 20'С.
й!ОТЕ5 1пасеа|1 оЕ соПесПп8 тйчЫиа! Етасс!опя |с )а роаяЫе |чПЬ ргасПсе со ЕоПосч сЬе рго8геаа оЕ йе 1псогрогасед ап|1 ип)псотрогасе|1 )яр)т))ч)ТРа гсоччп сЬе со1шпп ияп8 а Ьапг)-Ье1Й иипппотсог. ° СоПесс |Ье 1еайп8 реа1| Епсо а яеп1е ро1ургору1епе сиЪе аа |с е1исеа Егот сЬе со!шпп. ° С1атпр |Ье Ьопогп оЕ сЬе со1шпп ап|1 йасоппесс сЬе ЪиЕЕег геаегчо)г. ° Е))асагт! сЬе со1шпп т |Ье гайоасПче |чаяе. Ьрсссс-со!сстссп ОстостсаЕоцтар!су ТЬ!а тесЬот) |а яре|1 со аерагасе Е4)ч)А, ччЬ|сЬ раааеа сЬгоиПЬ |Ье Ве1-61!гас!оп тпаспх, Етогп 1оччегто!еси1аг-сче)ВЬ| аиЪасапсеа йас аге теса!пег) оп сЬе со1шпп.
5рип-со1шпп сЬгогпасо8гарЬу та рагски1ат1у иьеуи1 |чЬеп аератаПп8 1аЬе1ет) Е|Ь!А Етотп гайоасПче ргесигзогя Носчечег, П 14 а1ао иаег! ехсепяче1у сот ойег ригроаея Еог ехатр!е, со геточе ипччапсе|1 пис1еосЫе ргппега ог г!оиЫе-астап|!ет)!т1|егя со сЬап8е йе ЪиЕЕег !и чгЬкЬ япаП атоипса оЕ Т|Ь!А аге тПаао!чей ог со Егее сгит)е ргерагаПопа оЕ т!и!Ргерагасюпа оЕ р1аяпЫ ог ЬассегюрЬа8е у|ХА Еготи !пЬ!Ысога сЬас ргечепс с!еача8е Ьу гевсгкПоп епхутпеа. 5ечега1 аатр1еа оЕ Ег!)А сап Ъе Ьап|Пег! а!ти!сапеоиа!у.!и сЬ|а геаресс, арии-со1шпп сЬготасо8гарЬу )а пшсЬ тшрепог со сопчепсюпа1 со1шпп сЬготасо8гарЬу.
1. Р1и8 йе Ьоссотп оЕ а 1-т! йароааЫе ьупп8е сч)сЬ а япаП а|поипс оЕ яегПе 81ааа ччоо!. ТЬ!а |а Ьея ассогпр!ьЬет) Ъу ияп8 йе Ъагге1 оЕ |Ье аут!п8е со татр йе 81ааа ччоо! т р!асе. 2. РП! сЬе тупице шиЬ 5ерЬас)ех С-50 ог Вю-Се! Р-60„ег)ш11Ъгасег) |и !х ТЕ)х) ЪиЕЕег ЕРН 8.0) (р!еаае аее Аррепйх 1). 5Саг| йе ЬиЕЕег Посч)п8 Ьу Саррт8 йе я|1е оЕ йе ьупп8е Ьапе1 аечега! сипея Кеер а|Ы!п8 тпоге геып ипП1 йе аупп8е 14 сотр1есе!у ЕиП. 3. !пьет! сЬе аут!п8е )псо а 15-и|1 йароааЫе р1ааПс шЪе. СепспЕи8е ас !6008 Еог 4 ишшсеа ас гоотп сеп|регасше !и а аъч)п8)п8-Ъис)тес |осот |п а ЬепсЬ-сор сепсп6л8е. Его пот Ье а!аппе|1 Ьу йе арреагапсе оЕ йе со1шпп.
ТЬе геяп рас)сь т!огчп апг! Ьесотеа рагс)аПу с)еЬут!гасес) т!иг!п8 сеиспри8аПоп. СопПпие со а|Ы тпоге геяп апг) гесепспуи8е ипП1 сЬе чо)итие оЕ сЬе рас)тес! со1шпп !а -0.9 гп1 апд тета)па ипсЬап8ет) айег септпЕи8ат!оп. 4. А|Ы О. ! т! оЕ 1х ТЕ)х) ЬиЕЕег со |Ье со1шппа, апт! тесепспуи8е аа )и 5|ер 3. 5. Переас 5сер 4 счч)се июге. 5роп со1шппа гпау Ье ьгогегС ас ФЬ аса8е !Е Пеягей 5ечега! арап со!шипа сап Ье ргерагегС япшЬапеоы1у апгС а|огай а| 4'С Еог рог!о||а оЕ ! топФ ог пюге Ьеуоге Ье!пц ыей РП! сЬе аут!пиеа гч!|Ь |х ТЕ!4 ЬыЕЕег апг! гагар РагаП!ш агоопгС |Ьеп| |о ргечеп| ечарогасюп.
5|оге |Ье со!шопа орпПЫ а| 4 С. ярип со1шппа асогегС |и |Ыа гчау аЛоо!г! Ье гчааЬег! опте а4|Ь а|оп!е |х ТРС4 Ьоууег аа г|еаег!Ьег| ш 5гер 4 |оя ЬеЕоге Феу аге оаег!. А8.32 Арреиу)ух 8: Сотт|т!у Иео) Тес))пуг)иеу |и Мо1еси!аг С!стт8 йЕРАКАТ1О!31 ОГ $1!ЧСЕЕ-ЯТКА!310Е0 АМ0 0О1)ВЕЕ-йТКАМОЕ0 0)ЧА8 ВУ Н дг0КОХУАРАТ!ТЕ СН КОМАТОСКАРНУ Ыоечеп сгса|агг д агег Ьеагег 3-ас Огарева в(е р)во|го вуппде аоп1агпгпд Ьуа о уараив пеоргепе дааае1 Г(еоргеп Ьураае и с пееоге(13-дааде) гп сгояде| Ье НСсгйЕ А8-4 Аррага|ш Еог Н |!го а ФеСЬго|па|о га Ь 3-ас Оправ ву аде сап ЬуОпгвуара(ае гас(е Ьох Хис1е)с асЫ3 Ь)п6 |о Ьубгохуараг)ге Ьу ч|г|ие оЕ |п|егас|юпд Ье||чееп йе рЬодрЬа|е Вгопрд оЕ йе ро!упис1ео|Ые Ьас)|Ьопе ап6 са!сипи гедЫиед )и |Ье и|а|пх.
Воипд пис!ек ас!63 сап Ъе е1ше6 ш рЬодрЬа|е ЪиЕЕегд. ТЬ13 3|ер !3 и|юаПу сагпе6 ош а| бО С, а1|ЬоиВЬ гЬеге |х по Вооб геадоп |о |1о гю ыпсе йе абдогрг!оп ап6 е!и6оп ргоВ)ед оЕ пис)ек асЫ3 аге !п6!3|!п8шдЬаые Ьеичееи 25 С апд бО С. ТЬе аЕВиПу оЕ пис1ек асЫ3 !3 бегег|п)пе6 Ъу йе пигпЬег оЕ рЬодрЬа|е Вгоирд |Ьа| аге ачаПаЫе |о Ь)пд со йе |па|пх, Вой яп8)е- апд попые-3!гапбед пис)ек асЫ3 Ъ|и6 го Ьубгохуарайе !и 0.05 м до6)и|п рЬодрЬа|е ЕрН б.8).
1)оиЫе-дггапбе6 п|о!еси!ед, |ч)й йе)г ъчеП-огдегед ап6 ечеи) у драсе6 де|3 оЕ рЬодрЬа|е геябиед, |па)се гпапу ге8и!аг соп|ас|3 чч)|Ь гЬе п|а|пх ап6 йегеЕоге ге(!и)ге Ь!ВЬ сопсеп|га6опд оЕ рЬодрЬа|е (0.4 м) Еог е! п6оп. 5)п8!е-3|гапс1- ед гпо1еси1ед аге гиоге 613огбеге6 апд а ыпаПег ргорог|юп оЕ йе|г рЬодрЬа|е гедЫиед аге ачаП- аЫе Еог соп|ас| ън)й йе и|а|пх. Непсе, яп81е-дггапде6 Р)п)А 13 е!иге|1 |п !о|нег сопсеп|габопх оЕ рЬодрЬа|е (-0.12 м).
Раг6а1 дир!ехед ап|1 РМА-ПХА ЬуЬгЫ ию!ест!ед е1ше ас )п|еппееПа|е сопсеп|га6опд. )ч)ис)ек асЫ3 аге оЕгеп е)иге6 !и |шсЬ )аг8е чо1шпед |Ьа| |Ьеу пеев |о Ье сопсеиггаге6 ЬеЕоге |Ьеу сап Ъе одесса. Е|Ьапо! ргес|риа6оп ишд| Ье ачоЫе6 ип6! йе рЬодрЬа|е юпд Ване Ъееп ге|понед Во|и йе до!и6оп. ТЬ|3 !3 Ъеы асЬ!ече6 Ъу сопсепггаг)и8 йе е1иа|е Ьу ех|гас|юп чч!й ||юЪшапо! ап(1 йеп ге|ион)п8 йе да!| Ъу сЬгогпа|оВгарЬу |ЬгоиВЬ С-50 ВерЬадех со1шппд. Ва|сЬед оЕ Ьубгохуараг)ге чагу 3ПВЬПу )и |Ье!г сЬагас|епдбсд, ап(1 П |3 йегеЕоге ипрог|ап| |о саггу ои| рге1ппшагу ехрегипеп|3 |о де1ег|п!пе йе ор|ипа1 рЬодрЬа|е сопсеп|га6опд Еог е1и6оп оЕ яп8!е- ап6 6оиЫе-дггапде6 пис!ек асЫ3.
ТЬ(3 сап Ье ассо|пр1|хЬе|1 Ьу деи!п8 ир ||но Ьу|1гохуара|Пе со1шппд ад дедспЬе|1 Ъе)оъч. Опе оЕ йе со1шппд 13 !оабе6 чн)|Ь а ыпаП апюип| !-103 сргп) оЕ 3|Р-!аЪе1е6 Р)п)А йа| Ьад Ъееп Пепагигеб Ьу ЬоП|п8 Еог 10 иипи|ед |п ТЕ ЕрН 7.б). ТЬе о|Ьег со!шип гесе|нед ап е(1иа! а|поши Е-103 сри|) оЕ 3|Р-1аЪе1е6 па6че РХА. ВасЬ оЕ йе со! шппд |3 )чадЬе6 ч6|Ь а депед оЕ ЪиЕЕегд сои|а)п!и8 шсгеаяп8 сопсеп|га|юпд оЕ досПши рЬодрЬа|е Е0.01, 0.12, 0.1б, 0.20, 0.24, 0.28, 0.32, 0.3б, апс1 0.40 м).
ТЬе а|поип| оЕ гасПоас6ч||у е1ш!п8 а| еасЬ рЬодрЬа|е сопсеп|габоп 13 |Ьеп |пеаылгед |п а П(!иЫ дс)п6Па6оп соип|ег (е!|Ьег Ьу Сегеп)соч соип6п8 ог ш а чча|ег-|п|хс|Ъ)е Пиог). 1ЛдиаПу, яп8!е-3|гапбе6 Р)п)А е!и|ед 1и 0.14-0.1б М до6!шп рЬодрЬа|е ЕрН б.8), |чЬегеад Попые-3|гапбес$ РХА |х по| ге|иочес$ Егогп йе со!шпп ип61 йе рЬоърЬа|е сопсеп|га6ои ехсее63 0.3б м. 1п |Ье рго|осо1 |Ьа| ЕоПоунд, 55 ЪиЕЕег сои!а)ид йе рЬодрЬасе сопсеп|габоп йа| 13 ор|ппа1 Еог е1ибоп оЕ 3)п81е-дггапде6 Р)уоА( Р5 Ъ|лЕЕег соп|ашд йе сопсепсга|юп йа| |х ор|пиа! !ог е1и6оп оЕ 6оийе-дггапс1е6 Р)п)А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
