Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 149
Текст из файла (страница 149)
А8.36 Аррепг))х 8: Соттоп1у ЕЕкег) Тес)ти)иек Еи Мо)еси)аг С1отпе ьагес аегпр ргаЬе аар— еегвегег Ге оиА кешрг Ьогп ргоЬе авпгег ЬоГе Г!Съ)КЕ 8-5 Сир Ногп 5опкагог Еог Каис)ош Ега8шепгаС)оп оЕ кгЬЗА ТЬе сир Ьогп аиасЬтепг Еог а Неаг 5укгешк коп3сагог 3к с)ер3сгес) чч1СЬ а кашр1е СиЬе 3п р3асе. ТЬе сир Ьогп ипгС, ъчЫсЬ сопСа3пк а 3аг8е Ьогп ргоЬе, 3к аиасЬед со СЬе юп3сасог сопсго! ип)С апс) Ег !!ее) ъчйЬ 3се ъчасег Ьесоге сЬе кагпр1е 3к коп3сасей Тур3саПу, йе кагпр3е сиЬе 3к ЬеЫ 3п р1асе Егопс аЬоче Ьу ик3п8 а Ьигес с3агпр апс) а гсп8 ксапй А1сегпас1че!у, а сиЬе Ьо1с)ег сап Ье ЕаЬг3сасес) !гого С)аапсЬ р3аксгс апс) икес) Со ЬоЫ ир со е38Ьс СиЬек сог ягпи!сапеоик ргосекк)п8. 38ес)гаъчп, ъчей реггп3кк3оп, Егоре В3ггеп ег а3.
3 997.) еаеаЬеа Го аопооГ па 5опсса6оп Р)ъ)А каспр!ек аге юЪ)есСе6 Со Ьубгобупаш)с кЬеапп8 Ъу ехрокиге Со ЬпеЕ ри1кек оЕ кошсаСюп. Р)ъ)А сЬас Ьак Ьееп коп)сасе6 Еог ехсекк)че регюак оЕ сцпе 1к ехсгегпе1у ЙЕЕ)си!с со с!опе, регйарк Ьесаике оЕ с1аша8е сацаес1 Ьу 6 ее га61са1к Еепегасед Ьу сачйа6оп. Мокс юпкасогк ъч311 пос кЬеаг Ес)ъ)А со а яхе кпса!1ег сЬап 300-500 Ьр, апс1 й 1к сешрс)п8 со соп6пие юпкасюп цпс3! йе епбге роро! а6оп оЕ Е)Ь)А Ега8шепск Ьак Ьееп гейкед со сЬ)к к)ге. Ноъчечег, сЬе у!е16 оЕ ыЬс1опек 3к ссюайу 8геагег сЕ юпка6оп )к агирре ъчЬеп СЬе Ега8шепгк оЕ Саг8ег Р)ъ)А йгкг геасЬ а яхе оЕ -700 Ьр. СайЬгаЕгоп оЕ Енсе 5отсагог 1. ТгапкЕег 10 )се оЕ ЬассепорЬа8е )ъ ОЬЕА 3ог коше осЬег! аг8е РНА оЕ с1ейпе6 спо1еси1аг ъче18Ьс) со а писго368е сиЬе.
АсЫ ТЕ ЗрН 7.6) со а йпа1 чо1ише оЕ 150 р1. )53кспЪисе 25-р) а1)с)циск оЕ йе Ес)ъ)А ко!и6оп шсо йче ш)сгойсае сцЪек. 5соге ЕЬе геша)п)п8 Ес)ъ)Л !п ап 1се ЬасЬ. 2. Е1!1 сЬе сир Ьогп оЕ йе юпкасог (Бйцге А8-5) ъчйЬ а ш)хсиге оЕ ке ап6 Н,О. С!ашр йе йче ш)сгоЕи8е сиЬек сопса!п)пд йе Ъассег)орЬа8е )ъ Р)ъ)А )икс аЬоче сЬе ргоЬе. 1Е с!се сегорегасше оЕ сЬе капср1е гьек ссъгг)пе кошсасюп, сЬе креегс аис) чсеог оЕ йаВшеисабоп ъчс13 спсгеаке. 1с Ь сЬегеЕоге сшропапс со иих сЬе ке апгс Н,О айег еасЬ Ьигкс оЕ коиссаиоп апс) со асЫ ЕгекЬ ссе ъчЬеп песеккагу.
3. 5ошсасе ас шахцпшп оисрис ап6 сопбпиоиа роъчег Еог Ъигкса оЕ 10 кесопбк. Айег еасЬ Ьигя, гепсоче опе оЕ сЬе ш)сгоЕи8е сиЬек йосп ЕЬе копкасог ап6 яоге й оп ке. 4. Айег юшса6оп 3к сошр1есе6, апа!ухе сЬе яхе оЕ ЕЬе 1))ъ)Л Ега8шепск ш еасЬ яогес1 кашр1е Ъу е!ессгорЬогеяк сЬгои8Ь а 1.4% а8агоке ее1. Т)ке кшсаЫе ксапбагбк Еог пю1еси1аг-ъче38Ьс шаг1сегк (р!еаке кее Арреп61х 6, Б8иге А6-4). 5. 5са)п апс1 рЬосойгарЬ ЕЬе 8е1, апс1 сЬеп ек6шасе сЬе ашоцпс оЕ копкасюп гес!шгес1 со ргос)исе а геаюпаЫе у)е16 оЕ 1га8псепск оЕ сЬе деа)гед яае (500 Ър со 2 )сЬ).
ТЬе сипек оЕ юпкабоп а)чеп ш сЬЬ шесЬос) аге Сог а сир Ьогп копссасог чай а поиноа) реа1с оисрис епегеу оЕ 475 И'. Весаике сЬе ассиа! оисрш оЕ сссйегепс юшсасогк чапек ълссе)у, сс ы песеккагу со са1сЬгасе еасЬ спксгигпепс. А ргоЬе-суре коиссасог саи Ье мед часЬ а иисгобр сЕ йе чо)ише оЕ йе Ес34А капср1е и спсгеакесс ш -250 р! со ассоиииоссасе йе ргоЬе.
Айег юсисабоп Ь сошр!есесс, сопсепсгасе сЬе РЕСА Ъу ргессрссабоп ъч!сЬ 2 чо1шиек оЕ есЬаио! аисс ьйыо1че си 25 и! оЕТЕ !рН 7.6). А8.38 Аррепг((х 8: Соттоп!у Иес( ТесЬтг)иег и Мо!еси!аг С!опте ХеЪи!|ге йе ТС!ъ(А кашр1е аг ! 0 ря (69 КРа) Еог 90 ьесопг!я '1Ъе пеЬи||гег аяза||у 1еа|ъь а |гп!е. А(гег пеЬи1схаСюп Ь согпр1егей со11есг йе П)ъ(А Ъу р1ас)пд йе епбге ишС ш а гоСог Ъис1сес ос а ЬепсЬ-сор сепсп(ице Ессеъ| ълсЬ р!ест ос 5сугосоаш со сиаЬюп.
Сепсп(и8е йе пеЪ- и!|лег ас 2500 грш Сог 30 аесопйя Апа1уке сЬе яхе ог йе Ест (гаашепск Ьу е1ессгорЬогеыь СЬгои8Ь а 1А% ацагоае Ее! ъч!СЬ арргорпаге вгапь!агй, е.8., сЬе сга8шепга 8епегагес! Ьу 6!аеас!оп ог" рс)С18(!9 Ес|чА ълсЬ 5аиЗА1. Рог с1есаъ1 ог ьсапбагъЬ, р!еаае аее Аррепб|х 6, ТаЫе А6-4. 1г йе Гга8шепгь аге Соо 1агие ()1.О 1сЬ) гереаг йе ргосеъ|иге шсгеаяпа еЬЬег йе ргеяиге ос йе и(сгоаеп даа (со 14 ря ог 96.5 Кра) ог сЬе!еп8сЬ оу пеЪи1гхабоп (2 ппписеь). Кереас сЬе ргосес1иге ип61 сопс!)сюпа аге Еоипс) йас ргодисе а геаьопаЪ|е у|е16 ог" (гарпепса о( сЬе ъ!еяге6 ыке (500 Ър со 1 1сЪ).
)ъ)еЬи!ггабоп апд |сееосгегу о1 Яе Тагце( ОНА Съ(еЬи!!ке СЬе сагаес Тъ(ъ(А со ргос)исе а геааопаЫе у!е!6 ог' (гаашепса ор сЬе деыгеа яке (500 Ър со 1 1сЬ). Сопйпп сЬас сЬе Сга8шепсасюп Ьак попе ассогь!)иа со р1ап Ьу апа1убпц ап а!щиос ог йе ьашр1е (-200 пи) Ьу е1есггорЬогеяь СЬгоииЬ а 1.4% арагоне ае! аь деасг|Ьес( аЪоче. Сепсп(ице йе РХА аашр1е ас шахиишп крееъ| гог 5 ш!посек ги а ш|сго(и8е, ъчаьЬ йе ре1- !ес ълй 0.5 ш! ог 70% ейапо1 ас гоопс сешрегасше, апъ! сеисг|Гиуе ада!п. Тъепюче сЬе ейапо1 апг! а11оьч СЬе ЕС|чА Со 6гу ш СЬе асг гог а геъч пипиСея 1)Ьао!не СЬе ре11ег о( 1)ХА |и 25 )с! оу ТЕ (РН 7.6). 10. Р(аспЪисе сЬе геша|пс(ег оу йе ьашр1е шсо съно пъ|сго(иае сиЪеа ап6 гесочег йе Л|ъ)А Ъу ргесгрЬа6оп ъч(сЬ 3 но!шпек о( есЬапо1 !и сЬе ргеаепсе ог" 2.5 счс апииопппп асесасе.
Сеигфи8пггои А8.39 СЕ(ЧТ)с! Г!.)САТ1О)Х( 200,000 1 50,000 1оа,аоа 90,000 ва,аао га,ааа ва,ааа 1,ааа,ааа ва,аао аа,ааа 1аа ва ва 1аа,аоа за,ааа 40 го,аао за 10,000 20 1а †!— габьа (пнп) 10,000 1,000 ЯСГ (д) гргп мАА МАЕ МАХ КРМ 13,700 27,400 27,617 151,000 20,500 151.3 145.6 146.3 161.0 107.0 9,000 13,000 13,000 29,000 50,200 Г!С()КЕ АВ-7 )А)опгоегапг (ог Сопнега)оп о1 Ко(ог 5реег) (гргп) апг) Ке)айне Сеп(г!(пКа! Гагсе (КСГ) ТЬе аугпЬо) г гергеаеп(а гЬе гагВа( с(!5(апсе (гоги Гпе сеп(ег о( (Ье го1аг го (Ье ро(п( (ог гнЬ)сЬ КСГ 'ь гег(а(гес(.
ТЬь 'ь Вепега((у ес!свна1еп( 1о г„о( (Ье го1ог. Гог(Ье ехапгр1е п1аг!сег(, го(ог ареег( = 80,000 гргп апг! г = 20 пнп. КСГ сап Ье геас) аз -145,0008 (гоп1 (Ье гпкЫ)е аса!е. Сь)пВ (Ье ег!иа(гоп В(неп аЬоне, ЙСГ сап Ье са(са(а1ес( аа 142,0808.
(Г(улге )а(пг)(у ргон!8ес( Ьу 5!ап Спг(ь.) ТАВЕЕ АВ-7 Согпгпоп1у ()вег) Корога вогна11 Когога С53 5огнаП гареьреей 65А 5огна!1 серег апрелреей НВ6 АН629 5огнаБ ц!ггаареее( 55-34 5огча!1 Вес1ппап Когога )А17 Вес1ппап )А20 Вес(спгап 5(Н 28.1 ВесКгпап Туре 50 Весрапап ЧВ50 Вес1сгпап 5Ж40 Тг Вес)сгпап 5(аг41 Тг Вес(ппап 5И'50.1 Вес)сгпап Туре 60Тг Вес(сгпап Туре 70Т( Вес)ппап 123 108 171.3 70.1 86.6 158.8 153.1 107.3 89.9 39.5 17,000 20,000 28,000 50,000 50,000 40,000 41,000 50,000 60,000 70,000 39,800 48,400 150,000 196,000 242,000 285,000 288,000 300,000 362,000 504,000 А8.40 Аррепд)х 8: Соттоп!у Гтьед Тес)тищиек 1ч Мо1еси1ат С1отпч 50$-РОГ~АСКИАМ!0Е СЕЕ ЕЕЕСТКОРНОКЕЫЬ ОЕ РКОТЕ1)ч!й А!гиок! а11 апа1у6са1 е1естгорЬогеьеь оГ рготетпк аге сагпед оит тп ро!уасгу1ап)Ые Ве)к ипс1ег сопсВтюпь тЬат епьиге д!ккос)ат!оп оГ тЬе рготешь што йе)г )пд!ч!диа! Ро!урертЫе ьиЪишь апс1 йат ш!п!ппхе а88ге8ат!оп, МоЯ соиипоп!у, йе кттоп81у апюшс детег8епт Ю5 ь тьед тп сотп- Ь)патюп сч)тЬ а гес1ис!п8 а8епт апд Ьеат то д)ккос)асе тЬе рготешк ЬеГоге йеу аге 1оадед опто тЬе Ве!.
ТЬе депатшед ро1урертЫеь Ътпд Я)5 апд Ъесоше пе8а6че!у сЬаг8ед. Весагье йе апюипт оГ Я)5 Ьоипд ь а1июкт а!счаук ргорогтюпа! со тЬе тио1еси!аг чче!8Ьт оГ тЬе ро1урертЫе апд ь шдерепдепт оГ Вк ьес)иепсе, ЯЭ5-ро1урерт!де сотпр1ехеь ш!Вгате тЬгоиВЬ ро1уасгу!атпЫе Ве1к !п ассогдапсе едтЬ тЬе яхе оГ тЬе ро1урертЫе. Ат ьашгаиоп, -1.4 8 оГ десег8епт ь Ъоипд рег 8гатп оГ ро1урертЫе. Ву ияп8 п)ат)сеть оГ )спосчп пю1еси1аг сче!8Ьт, В !к рокк!Ые то еьтипасе йе ию1еси1аг сче)8Ьт оГ тЬе ро1урертЫе сЬа)п(к). МодтТтсат!опь Со йе ро)урертЫе Ьас1сЬопе, якЬ аь )к)- ог О-1ш1сед 81усоьу1а6оп, Ьоччечег, Ьаче а ы8п)Всапт ипраст оп тЬе аррагепт пю!еси1аг чче)8Ьт. ТЬиь, йе арратепт тпо1еси!аг сче)8Ьт оГ 81усоку1атед рготешь ь пот а тгие гейестюп оГ йе шакк оГ йе ро1урертЫе сЬаш.
1п шок! саьеь, 5Г)5-ро1уасгу1ашЫе Ве! е)естгорЬогеяь )к сагпед оит сч!тЬ а д!ксопт!попик ЪиГГег ьуьтеш )и счЬ)сЬ тЬе ЪиГГег ш йе геьегчотгь !к оГ а РН апс1 юпк ьтгеп8тЬ сИГегепт Ггош йат оГ йе ЬиГГег гьес1 то сая тЬе Ве1. ТЬе 5Г)5-ро1урерт!де сотпр!ехеь ш тЬе кап)р!е тЬат ь арр1)ес1 то тЬе Ве! аге ячерс а)оп8 Ьу а пюли8 Ъоипдагу сгеатес1 счЬеп ап е1естпс сштепт )к раккес1 Ъетсчееп йе е1естгос1еь. АГтег ии8гатш8 тЬгоиВЬ а ьтасЫп8 Ве! оГ Ьт8Ь рогояту, тЬе сотпр!ехеь аге с1ероятес1 )и а чету тЬтп топе (ог ктас1с) оп йе ьигГасе оГ йе геьо)лп8 8е1. ТЬе аЫ1Ву оГ с1ьсоптшиоиь Ьийег ьуьтеиь то сопсептгасе а)1 оГ йе согпр1ехеь 1и йе кашр1е )пто а чету яиа11 чо1шие 8геат1у !псгеаьек тЬе геьо!и6оп оГ Я)5-ро1уасгу)аиис1е Ве1к. ТЬе д!ксопт!попик Ьийег ьуяеит йат ыпокт сч!де!у гьес1 счаь оп8!па)!у свеч!кед Ъу Огпяе)п (1964) апд Раль (1964).
ТЬе кашр1е апс1 йе ктас)с!и8 Ве) сопташ Тпь-С! (РН 6.8), тЬе иррег апс1 1оччег ЬиГГег геьегчотгь сои!а)п Тпь-81ус)пе (РН 8.3), апс1 йе геьо1лп8 Ве1 сопсашь Тпк-С1 (РН 8.8). А11 сотиропепть оГ йе ьуьтеш сои!а)п 0.198 Я)5 (Ьаепип11 1970). ТЬе сЫогЫе юпь )и тЬе каптр1е апд ьтасЫп8 8е1 Гопи тЬе!еад)п8 ед8е оГ тЬе шолп8 Ьоипдагу, апд тЬе тга)1- )п8 ед8е !к сошроьед оГ 81усше пю1еси!еь.
Ветсчееп йе 1еад!и8 апд тга)1)п8 ед8ек оГ йе шоч)п8 Ъоипдагу ь а топе оГ )отчет сопдистпдту апд яеерег чо1та8е Вгад)епт, счЬкЬ ксчеерк йе ро1урертЫек Гготп тЬе катпр!е апс1 с1ерояь тЬеш оп тЬе ьигГасе оГ тЬе геки)ч)п8 Ве1. ТЬеге тЬе Ь)ВЬег РН оГ тЬе геьо!чш8 Ве! Гачогк тЬе юпгхабоп оГ81ус!пе, апд тЬе геьи16п8 81усше юпь пегасе тЬгоиВЬ йе ьтас1сед ро!урертЫеь апд тгаче) тЬгои8Ь тЬе геко1ч!п8 Ве1 ипп)ед!асе1у ЬеЬ)пд тЬе сЫогЫе юпь. Ргеед Ггопт йе пюч!п8 Ьоипс1ату, тЬе Я)5-ро1урертЫе соитр1ехеь иточе тЬгоиВЬ тЬе геьо1ч)п8 Ве! )и а топе оГ иш!огш чоВа8е апд РН апд аге ьерагатед ассогд)п8 то яхе Ьу яелп8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
