Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 152
Текст из файла (страница 152)
ТЬе шесЬог( 81чеп Ье1осч сз а пюй6сасюп оГ йе зса(шпд ргосег(иге ог!8!па!!у г!ечсзег( Ъу 5апипопз ес а1. (1981), счЬ(сЬ Ьаз япсе ипг!егдопе зечега1 ппргочегпепсз (5сЬоеп(е ес а1. 1984). рог ГигсЬег (п(огшас(оп, р1еазе зее сЬе с(1зсиззюп оп з(!чег Яашшд ш Аррепсдх 9. МАТЕс91А15 САНТ!О!91: Р1еазе зее Аррепгс!х 12 Гог арргорпасе Ьапдбпд оГ псаСепа1з гпаг(гегС члСЬ <! >.
Асе6с аспу (796) <! > Е)ече(ор!пд зо!и6оп Ргераге ЬезЬ Гог еасЬ изе ап а9иеоиз зо!исюп оГ 2.5ого зойшп сагЬопасе, 0.029о Гогсиа!йеЬуйе. <! > ЕГЬапо! (30;4) Е(хтд ю)идол раЬапос:81асга! асессс асЫ:Н,О (30: со:60! <! > РЬогодгарЬ(с гес(истд ю(ис!оп (5оч(2хег ег аl. 7979) Орсюпа!, р!еазе зее 5сер 70. Ргераге зо1ииоп А: Осззо!че 37 8 оГ СиаС! аиоС 37 З оГСизО сп 850 т! оГ оСегоисаей Н О.
АоСй сопееи- сгасесС С9Н4ОН <! > ип01 а г(еер Ыие ргесср!сасе Гоппз апо( йеп гдяо1ъез, Аг()изс йе чо!шпе со ! 1пег п!ГЬ Н,О. Ргераге 5осидоа 8: Осззо!че 436 8 оГ зогС!игп йюзи!Гасе !и 900 пг! оГ де!оп!хе0 НгО. АоС!изс йе чо!шпе со ! !1сег чАГЬ Н О. М!х егСиа! чо!шпее оГ 5о!ис!оп А апгС 5о!ш!оп В, й!исе сЬе пггхшге чАГЬ 3 чо1шпез оГ НгО, апгС изе йе Й1исег! пихсше ипшег8асе!у. 5г!чег п(!гаге зо)тюп РгеРаге ЬезЬ Гог еасЬ изе, 0 79о зоЫСюп оГ А8740п <! > <Иогана Вот а 209о зсос(о, зсогес1 ш а с!8Ьс!У с!изей Ьгогчп 81ая Ьоп!е ас гоогп сепгрегашге.
5гер 7 оГ ГЬ)з ргососо! гег(и)гез йе геадепсз I)зсес( оп раде А8.42 МЕТНО0 Вг сМРОКТА!зсТ Иеаг 8!очез апг( Ьапг)!е сЬе де! Вепду Ьесаизе ргеззиге апг) Впдегрппсз ргог(исе зса!и!пд агс!!асса. !и аг(8!с!оп, !с !з еззепиа! со изе с!еап 8!аззсчаге апг( г)е!оп!гег( н,О Ьесаизе сопсагп!пап!а дгеаИу гег(исе СЬе зепя898гу оГ з!!чег зга!пспд.
1. 5ерагасе ргосешз Ъу е1ессгорЬогеяз сЬгоидЬ ап Я>5-ро1уасгу1ашЫе де1 аз г(езсг!Ьес( оп раде А8.40. 2. Е(х сЬе ргосе!пз Ьу !псиЬа6пд йе де1 Гог 4-12 Ьоигз ас гоогп сегпрегасиге чч(сЬ депс1е зЬа1с- 108 ш ас 1еазс 5 де1 чо!шпез оГ 6х(пд зо(ииоп. 3. Е3(зсагг! йе 6хспд ю106оп, апг! агЫ аС 1еаЯ 5 де1 чо1шпез оГ 3098 еСЬапо1. 1псиЬаге йе де1 Гог 30 пшшсез ас гоош сешрегасиге сч(сЬ депс1е зЬаЫпд. 4.
схереас 5сер 3. 5. 1)(зсаггс йе ейапо1 апс1 асЫ 10 де1 чо1шпез оГ с(еюп!гес! Н О. 1псиЪасе йе де1 сог 10 пипигез аС гоопс СегпрегаСш е ибй депС1е зЬаЫпд. 6. гсереас 5сер 5 счч(се. ТЬе Ве! чг!!! яче!1 з!!ВЬс!у оСиг!п8 геЬуо!гаиоп. 7. 1)(зсаггс йе 1азС оГ йе Н,О ччазЬез, апд, счеаг(пд 8!очез, асЫ 5 де1 чо1шпез оГ я1чег пигаге ю106оп. 1псиЬасе йе де1 Гог 30 ппписез ас гоогп сешрегасиге идй депс1е зЬаЫпд. А8.50 Аррептссх 8: Соттоп!у Еуаетс ТесЬтдиет тп Мо1еси1ат С!оп!08 0Кст!!ЧС $06-РО!ЛтАСКУ!АМ!0Е СЕЕ$ Ю5-ро1уасгу1ашЫе Ве!а сои!а!и!па ргосеша гас!101аЬе!есс счссЬ аа5-1аЪе1ес) апцпо асЫа гпця Ъе сстсесс ЪеЕоге ацсогасбоВгарЬсс 1шааеа сап Ъе оЬсашей ТЬе гпа)от ргоЫепм епсоцисегес! счЬеп а ае! 15 с!пес! аге Е1) аЬппЬа8е апг) йвсогсюп апгс (2) сгасЫиВ оЕ сЬе Ве1. ТЬе уста! оЕ сЬеае ргоЪ1епы сап Ъе шспипсгег) 1!'йе Ве! 1а ассасЬес! со а ртесе оЕ чСтЬасгпап ЗММ рарег ЪеЕоге Ь са с1еЬус)гатей.
(Рот попгаг!1оасссче де1я поте сЬас йе ртеЕегепсе гпау Ъе со г)гу йе Ве! Ьесгчееп асесасе аЬееса со а1!осч сгапя11шпша6оп апгс еаау чсаца!!гас)оп оЕ йе с!пес! ае1.) Ноччечег, сЬеге га по ацагапсеегс 5010!!оп со сЬе аесопс1 ргоЫепс, ччЬ!сЬ Ьесогпеа шоте ртопоцпсег) счссЬ йтс1сег Ве1а сопсашша тоге ро1уасту1апсЫе. СгасЫпа аепета11у оссцга ччЬеп йе ае! га гепючесс Егогп йе с)гуш8 аррагасца ЬеЕоге и га сошр!есе!у г1еЬус1гасед. 1с 1а йегесоге еааепсса! со 1сеер сЬе с)гусп8 аррагасца си аоот! спит!!с!оп, со цае а ге11аЫе часццгп 11пе сЬас Ьаа Ееъч Яцссцасюпа 1и ргеяшге, апс) со цае йе сЫппея Ве! РоаяЫе со асЬтече сЬе гсеятесс рцгроае. Ап ехсе11епс а!сегпастче шесЬос1 са аоаЫиа сЬе ае! 1и Зоуо а1усето1, Е011оччес) Ъу г!ту!па 1и аст цяи8 а япср1е аррагасца (ача11аЫе !тоги АР В!осесЬ ог Очч1 5ссеп66с).
МАТЕР!АЕ6 САС11!ОМ: Р!еаае аее Аррепг)!х 12 Сот аррторпаСе Ьапгс!!па оЕ тпаСепа!а гпат!гесС чч!СЬ <!>. Есх108 ао!от!оп С!асга! асепс асттС:тесЬапос:Н О ! 10:20:70 ч7чсч) <! > Се! с!туес бе! с!туеса ате ачаПаЫе 6ого а пшпЬет о! соттетс!а! аоотсеа Се.а., 1 Ее ТесЬпо!051еа аогС Ртоптеаа), Сс Ь Ьеас со ршсЬаае сЬе с)сует його йе тапосассшет о! йе 5ут5-ро! уастусаттПе ае! е!ессторЬотеа!ь сапСса со сосите йас сЬе яге ос йе йует тчС!С Ье са11отет! со йас оЕ йе Пе!а атС чАП ассоттогСасе аечета! 5175- ро!уасту!атЫе Пе!а ято!сапеооа!у.
МеСЬапо1 120;41 соптатсп8 Зга 81усето1 <! > Орг!опа1, р!еаае аее 5гер С. И7Ьаттап ЗММ рарет МЕТНО0 1. Реточе йе Ве! Егош йе е!ессгорЬогеяа аррагасца апсс шсцЬасе 6 ас гоопс сешрегасцге си 5 — !О чо1цшеа оЕ Егхша ао!ц6оп. ТЬе ЬгопюрЬепо! Ыце сч1!1 сцгп уе1!осч аа йе асЫЫ Егхша ао!цсюп сбйцаеа спсо йе Ве1. Сопппце 6ха6оп Еог 5 шспцсеа айег а11 оЕ йе Ыце со1ог Ьаа с)1аарреагесс, апс1 йеп счааЬ йе ае! Ьпейу ш гсеюисгес) Н О.
СЕ стасЫпП оЕ ро!уасту!атпгВа ае!з тСотСпа тСтуспа и а сопяапс ртоЫет, аоаСг сЬе ПтхатС ае! гп 20аа тейапос, 39о а!усато! очеса!аЬс Ьеготе ртосеесПпП со 5сер 2. 2. Оп а ргесе оЕ Вагап чстгар 5118Ьс1у 1аг8ег йап йе Ве1, аггап8е сЬе Ве! ччссЬ тса сш согпег оп сЬе 1осчег пВЬс-Ьапсс аЫе. 3. Р1асе а ртесе оЕ с!ту С'чЗсасшап ЗММ рарег оп йе г!ашр Ве1. ТЬе рарег аЬоц!6 Ъе 1агае епоцВЬ Со сгеаге а Ъоггсег Е1 — 2 сш) агоцпс1 йе ае! апг) япа11 епоцаЬ Со 6С оп йе ае! с1гуег. Е)о пос ассешрс со тпоче йе ЗММ рарег опсе сопсасс Ьаа Ьееп тассе ъчЬЬ йе Ве1.
4. Аггапае апосЬег ргесе оЕ г)гу ЗММ рарег оп сЬе с)гуш8 ацгЕасе оЕ йе ае! т!гуег. ТЬ)а ртесе аЬоц!6 Ъе !атее епоцаЬ со ассопипос1асе а1! оЕ йе ае15 йас аге со Ье с)пег! ас сЬе ааше Шпе. 5. Р!асе СЬе аапЖч!сЬ оЕ ЗММ рарег18е1/5агап Югар оп йе рсесе оЕ ЗММ рарег оп СЬе ае1 с)гуег. ТЬе 5агап ЪСтгар аЬоц!и Ье црреггпоас. Югут8 5В5-Ро1уисгу)атЫе бе)г А8.51 б.
С1оае йе 1п1 ог" йе ае! с1гуег, апй арр1у апсгюп ао гЬаг йе 1п1 гпа)сеа а гфЬг аеа! агоппс1 гЬе це)а 1г гЬе с1гуег Ра ес)шррей ъчгЬ а Ьеагег, арр1у 1ои Ьеаг (50-65'С) го ареес) пр гЬе с)гу)п5 ргосеаа. 7. Ргу йе ае! Еог йе йпе гесопппепс)ей Ьу гЬе гпапигасгпгег !папа)!у 2 Ьопгя гог агапг)агс) 0.75-ппп ае1а). 11 Ьеаг ~чая арр!)ед, гигп огг гЬе Ьеаг гог а Гех гп)пигеа Ъе)оге ге1еаяпц гЬе гасшпп. 8. Кепюъе йе ае1, и Ь)сЬ 1а подач апасЬес1 со а р)есе ог' ЗММ рарег, ггогп гЬе йуег. 9. Кегпоче йе р)есе ог" 5агап Жгар апй еагаЫ)аЬ ап апгогаг!1оагарЬ ая деьсг)Ьед 1п Аррепг))х 9, ог агоге йе с)еЬуг)гагед ае! аа а гесогс) о! гЬе ехрегнпепг.
А8.52 Аррелг(гх 8: Соттол!у Еузег( ТесЬлп!иез т Мо!еси)аг С(олгле !ММШЬ(ОВЬОТТ$$Ь)С СА$)ТЕОГь): Р1еазе зее АррепсВх 12 Еог арргорпа$е Ьап|$$(п8 оЕ тагепа15 таг(се|1 ъч(ЕЬ <! >. ТгапПЕег оЕ РгоЕе$ее8 Егопь Се! Ео НЕег Е1ессгорЬогег(с сгапзЕег оЕ ргосе|пз Егогп ро1уасгу1агпЫе Ве15 го теп|Ъгапез $5 Еаг пюге ейк|епс ап|$ ппкЬ с)ц(с(сег ЕЬап сар)Вагу ггапзЕег.
ТгапзЕег $5 сагпе|1 оиг регрепсбси1аг1у Егогп ГЬе с$(гес6оп оЕ ггаче! оЕ ргоге)пз ЕЬгоц8Ь ЕЬе зерага6п8 8е1, ияп8 е1есггос(ез апс$ те|пЪгапез йа! сочег йе епбге агеа оЕ ЕЬе Ве1. Моя сопипегс)а1 е1есггорЬоге6с ггапзЕег с(еч!сез изе !аг8е е!есгго|$ез тас(е оЕ ВгарЬ(ге, р1абпшп ъч(ге тезЬ, ог зга(п1ея яее1. 1п о!дег с(еч(сез, чег6са1 е!ее!гас)ез ъчеге зиЬ|пег8е|$ ш а гап1| оЕ сгапзрег ЬиЕЕег ш а р1аз6с сгас$!е зиггоипгВп8 йе Ве1 апд йе тетЪгапе. ТЬе тоге то|1егп |1ечАсез цзе ЕЬе ейк)епс "зепи'-бгу" |пеЕЬо|1, |и ъчЬкЬ ъЧЬагтап ЗММ рарег за!ига!ее! ъч!ЕЬ ггапзЕег ЬиЕЕег гз изе|$ аз а гезегчо|г.
Рог сгапзЕег 6о|п ЯЭЯ Ве15, ЕЬе тетЬгапе $5 ТАВЕ.Е АВ-1! Ви(уегз Еог Тгапз(ег оГ Ргогейпз !гоп| Ро)уасгу!аписе Се)з Го МетЬгапез Виеееа Туре ос Тахнзееа Кеееаелсе 24 |пм Тпз Ьазе $92 шм 8$усше 20егз шейапо! <$> ТоъчЬ!п е| а!. (!979) 5епп|-Вгу ВЕеггп|п апг$5сЬауег-ЬГЕе!зеп ($986) 48 |пм Тпз Ьазе 39 гпм 8!усше 20оге шейапо! <$> 0 0375о~о 5Е|5 !пппегяоп Ме|Ьапо! пппппыеа аггеПГпз оЕ йе хе! апгГ |псгеа|еа йе еГПс|епсу оГЬ|псапз оЕ рго|е|па |о пагосеПо|оге п|ешЬгапег. ТЬе еа|с|епсу оЕ |гапа|ег |пау Ье аКес|ед Ьу йе ргеаепсе оГ 505 |п |Ье еГес|горЬогепа ЬоГЕег, |Ье рН оЕ |Ье |гап|Еег ЬоЕГег, апгГ ггЬегЬег |Ье ргоге|па ггеге агаГпез ш йе зе! ЪеГоге |гапа|ег. То шахоп|ге |гапа|ег оГ рго|еш |о ше|пЬгапеа, йе сопсеп|гацоп оЕ 505 |Ьоом Ье 50 ! апд йе рН |Поем Ье >80.
Е АР5 Ьппег аЬооЕП Ье огегЕ Еог |гапайг |Г йе рга|еш Ь го Ье ае9оепсез оп йе шешЬгапе Гмооа |992!. В|уса|с |п|ег6:геа ггПЫЬга ргосег|пге. 1пцпипоЫогбп8 $5 цзес$ го Ыеп6Еу апс$ гпеазиге йе 5!хе оЕ п|асгото!еси1аг апг$8епз (изиа11у ргогешз) йаг геасг ъч(ЕЬ а зрес|6с ап6Ъо|1у (ТоъчЪ|п е! а1.
1979; Вигпеие $981; Еог геч(еъчз, р1еазе зее ТоъчЬ(п ап|1 богс(оп 1984; бегзЬоп$ ! 988; 5|оп ! 989; Рохгоп ! 990). ТЬе ргоге)пз аге 6гя зерагагес$ Ьу е1есггорЬогеяз ЕЬгоиВЬ Я)8-ро1уасгу1ат$6е Ве15 апс$ йеп сгапзЕегге|1 е1есггорЬогее(- са11у Егогп ЕЬе Ве1 го а зо1Ы зиррогг, зисЬ аз а шггосе1101озе, ро1уч)пу1$6епе с66иогЫе (РЧРР), ог сабошс пу1оп теп|Ьгапе. Айег йе ипгеасгес$ Ь|псбп8 56ез оЕ йе |петЪгапе аге Ыос(сес( со зирргезз попзрес$6с ас(зогрг(оп оЕ ап6Ъос$!ез, |Ье $пппоЬ$1гхе|1 ргосе|пз аге геасге|1 ъч)ЕЬ а зрес$6с ро1ус1опа1 ог топос1опа1 апг)Ьос(у.
Лпг(8еп-ап6Ъос(у соп|р1ехез аге 6па11у !оса!ее! Ьу гас$$- 08гар)6с, сЬгото8епк, ог сЬепи1шпшезсепг геасгюпз. МцсЬ гпцтЬо-)цтЬо Ьаз Ъееп ъчпиеп аЬоцс ъчауз со ачоЫ йе ргоЫетз ГЬаг сопцпоп1у апзе (п пптцпоЫогг(п8. ТЬезе ргоЫетз (пс1и|1е !пей!с(епг ггапзрег оЕ ргоге(пз, 1озз оЕ апг$8еп(с ягез, 1оъч зепя6чйу, Ь|ВЬ Ъас(с8гоипс$, апс$ попс)цап!)гаг(че с(егесг)оп теЕЬос$5. А)ЕЬоцВЬ по та8!с шсапгагюп сап е!ипшасе а11 оЕ йезе ип|$еягаце |$$ЕЕ|си1$$ез Еог ечегу апг(8еп, а япа11 а|поипс оЕ ехрептепгаеюп 15 изиа11у зийк(епг со сиге а11 Ъиг йе пюз! оЬ|1игаге гесЬшса! ргоЪ1етя Со|пргеЬепзгче геч|еъчз Ъу В)еггшп ап|$8сЬаЕегСВе1зеп ($986), В!еггиш е! а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
