Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 154
Текст из файла (страница 154)
Ееагуег а1. !!983); В1а1се ег а1. !1984) !ОО РВ СЛегиПши)иеясеиг НоггегайЬЬ регохЫахе 1ши Еио1! 4-юйо-РЛеио!! НО ЗОО РВ с Пйехр!е аий Нийя реГЬ !1991) АПсайие РЛокрЬагахе 1 РВ АМРР)3 3-!4-шесЬохухрко11,2- й)охегаие-3'2'-гг!сус!о- !3<61'г)йесаи)-4-у!)- РЛеиу!РЛохрЬаге Рогеиг1айу саге!ио8ешс. ТЛе й!аш!ио- ЬеигЫ!ие геасгюи Веиегасег а Лгпи ргес)р)гаге, МЫсЬ и еиЛаисей Ьу гЬе айсПгюи о1соЬа1г, я1чег, аий ик1се! ха!гя Оеср ригр!е ргес)р)гаге. ОхЫЬей 1иииио! еииь Ыие ПВЛг ЕЬаг Ь саршгей ои Х-гау П!ис Еигшиехсеисе Веиегагей Ьу !игеихе Ьаийг арреагх п1й)и а Ееп хесоийячгЛегеах Еа)иг Ьаийг иеей аг 1еая 30 ш)иигех Го йече!ор.
ТЬе еигугиаг)саоу йерЬохрЬогу!асей ргойисг еииь ПВЛг. Весасье оЕ 1ь ЫВЛ гшиочег иишЛег, айсайие РЛохрЛагахе гарЫ!у Веиегагех а хггои8 я8иа1 ЕЬаг ргон!йеъ аи ехс)шяге!у хеигтче шегЛой оЕ )шпшиойегесгюи. Наь4сех ег а1. 1 1982 Ь )Згехе) аий 5сЬеы1ег !1984) йе В1ах аий СЛег- чйихЫ 11983Ь СегхЛои1 ! ! 988) ЗсЛиерреиЛеии аий КаШеиЛег8 1! 987); Нагрег аий МигрЬу 1!991); 5сЛиерреи- Леии ег а1.11991) 5таттпч )чис1етсАс)т!т А9.3 ЬТАПЧПЧС МОСЬЕ!С АС!ОБ ЕП|!т!!ит Вгот!т!е Ей|сПшп Ъ|ошЫе |чах хуптЬеягес) ш |Ье 1950а (п ап еттогт со |1ече1ор РЬепаптЬг(с)(пе соптроипсЬ ах ейесЯче |гурапосЫа! адепта Ейн1шш ептегаес) (гош |Ье хсгееп(па ргоагаш |чпЬ Яу)пц со!отя!с ччаа 10-50-Ео1д тпоге еКесЯче аВа)пхт тгурапохошех |Ьап |Ье рагеп| сошроипй ччах по гпоге тохк |о писе, ап|1, ип!1)се еат!)ег РЬепапйП|Ппея с))д по| (пс)исе РЬотозепяЯгатюп (п саи1е ( |Чат(с)пх апс) чЧо1те 1952).
РпЯ1 гесеп|1у, ей||Вши ЬгошЫе ччах тчЫе1у тес( тот |Ье |геа|п|еп| апс) ргорЬу!ах(х оЕ тгурапош(аяз (п сап!е )п тгорка1 апт( хиЪ|горка! соиптг(ея ТЬе сЬешка1 аттис|иге от ейЫшп| ЬготпЫе ь хЬоччп ат йе г(ВЬ|. Втйпе о1 Ей|йит ВготЫе то Нис!ек АсЫх Ей|сВшп ЬгошЫе сои|а(пх а р1апаг |Нсус1к РЬепаптЬг)с)(пе Нпц хухтеш йа| (х аЫе со тп|егса1а|е Ьетччееп |Ье атас)сес) Ьахе ра(гз от" с(оиЫе-хтгапс)ес) РЫА. Айег (пхегтюп ш|о йе Ье!|х, йе с)гиВ 1(ея регрепсВси1аг |о |Ье Ье1ка1 ахь ап|1 ша)сех чап |1ег Юаа1х соптаста тч)тЬ йе Ьахе ра(гх аЪоче апт( Ье!о|ч. ЮЬегеах йе р1апаг Нпц хухтеш об йе т(гиВ ь ЬиНед, Ьх реНРЬега! РЬепу1 ап|1 е|Ьу1 Вспорем рго)ес| )псо |Ье |па)ог Вгооче от" йе РЫА Ье1|х. А| хашгаЯоп ш ю1итюпх от" Ь(ВЬ юпк зтгепатЬ, арргохипате1у опе е|Ь|сПшп пю1еси!е ь (птегса1атес) рег 2.5 Ьахе ра(гя (п|1ерепс)епт от |Ье Ъахе сотпроятюп от' йе РХА.
ТЬе аеотпетгу от йе Ьахе ра(гх апс) йе|г роятюп(пц |ч)тЬ гехрест то |Ье Ье1)х аге ипсЬапаес) ехсерт (ог |Ье|г с)1хр!асетпепт Ьу 3.4 А а1опа йе Ье1(х ахь (Чаг(пц 1965). ТЬь саихех а 2796 (песете 1п |Ье 1епВ|Ь от с)оиЫе-хтгапт!ес) РХЛ (Рте(те!бег 1971) хатигатес) тч(тЬ е|Ь|йшп ЪготпЫе. ЕйЫпип ЬгошЫе а!хо Ь)п|Ь чч(тЬ Ь(ВЫу чаНаые яокЬюшесгу то Ье1|са1 геВ(опх тогшес( Ьу )псгахтгапс) Ьахе рапбпц ш КНА апт( Ьеат-т(епатигет( ог япВ1е-хтгапс)ес) РХА (ЪЧаг)пц 1965, 1966; Ьересс( апс) Рао!е|Я 1967).
ТЬе Я|хек рояЯоп от" |Ье р!апат агоир об етЬ)йиш ЬготпЫе ап|1 Ьх с1охе ргохипЬу то |Ье Ьахех са|ье йе Ъоипс) с)уе |о с)(ар!ау а 20-25-(о!Я )псгеахе ш Яиогея сепг у)е1д сошраге|1 |о |Ье |1уе (п тгее хо1иЯоп. ЫЧ га|ПаЯоп ат 254 пш ь аЪхогЪед Ъу |Ье РХА ап|1 тгапяп)|тес( то |Ье т)уе; тат()ат)оп ат 302 пш апс( 366 пп| ь аЬюгЬет( Ьу йе с(уе пхе1Е ТЬе епегцу ь ге-епитте|1 тч(тЬ а с)иаптшп у(еЫ об 0.3 ас 590 пш ш йе тес)-огапце геЯ(оп оЕ йе ч)яЫе хрестгшп (Ьерес|1 апт( Рао1е|Я 1967; Тшпа е| а1.
1999). Мох| об йе сопипегс|а11у ача|1аые (ЗЧ 1фЬт хоигсех епит Р Ч 1(ВЬ| ат 302 пп|. ТЬе Яиогея сепг у)е1д от" е|Ь1|Пшп ЬгошЫе-РХА сошр!ехеь ехсие|1 Ьу (ггайапоп 1х сопхЫегаЫу цгеатег ат 302 птп йап ат 366 пп| Ъит ь х))ВЬ|1у 1ехх йап ат зЬогтег |чаче!епВ|Ь (254 птп). Нотчечег, |Ье апюип| оу РЬотоЫеасЬ)па от йе |1уе апс1 пкЫпц от' йе РЫЛ ь пшсЬ 1ехх а| 302 пп| йап а| 254 пш (Вгип1с апт( 5ипрюп 1977). Матти ОНА т Сей ЕЙ|йшп Ьгоп|Ые ь ччЫе!у ивет! |о 1оса|е 6.аВшепть о) РХА 1п ааагохе ае! ь (Ла)) ап|1 Вогя 1972; 5Ьагр ет а1. 1973; р1еахе хее йе |птго|1исЯоп то СЬартег 5 апд Рго|осо1 2 ш СЬартег 5).
ТЬе т(уе ь июа11у )псогрогатет) што |Ье це! апс) |Ье е!ес|горЬогеях ЬиВет ат а сопсептгаЯоп от'0.5 )|В)ш1. А1|ЬоиаЬ йе е1ессгорЬогепс шоЬ~1Ьу от !шеаг с(оиЫе-хтгапс)ес) 13ХА (х тес(осев Ьу -1596 ш йе ргехепсе от" ей|сПшп ЬготпЫе, йе аЬ|1Яу Со ехапипе йе це! |Вгес|1у ипс(ег Ь|Ч |1!шшпаЯоп Ь а дгеат ас)чаптаВе. 5!псе йе Яиогехсепт у)еЫ оу е|!исВшп ЬгошЫе-РЫА сошр1ехех )х пшсЬ Ягеатег йап |Ьат от йе ипЬоипт( с)уе, япаП атпоипь от' РХА (-10 пц!Ъапт)) сап Ъе с)есессес) ш А9.4 Арреит(тх 9| Ретеспоп 5уттептт |Ье ргезепсе от' (гее етЬ!6)иш Ьгопи|1е |и 8е1а (5Ьагр ет а1.
1973). Ечеп япа!1ег ср|апт|6ех от" Р)чА сап Ье десестед (т |Ье 1ЭЬ)А Ьаа ргечюих!у Ъееп сгеасе6 |ч|й сЫогоасеса!6еЬубе, а сЬешка1 пшта8еп |Ьат геаста |ч|й а|1ешпе, сутояпе, ап|1 Виап!пе (Ргешагатпе ет а1. 1993). А тпоге ргастка! ъчау то епЬапсе Виогеасепсе (а то беаташ |Ье Ве1 !п а ао!и6оп сопсашш8 10 шхт МВ|+ Ье1оге ехапишп8 (т ип6ег (Лг |1!ипипа6оп (5ашЬгоо1| ет а1.
! 989). С2иапб~а6пд ОоиЫе-и1гапс!ед ОНА ТЬе тоггпа6оп от' сошр!ехеа Ьет|чееп РХА ап6 ейЫшш ЬгошЫе сап Ъе оЪ|егче6 ччВЬ |Ье па)се6 еуе Ъесагье от" |Ье 1а|8е шетасЬгошатк аЬ!й !п |Ье аЪаогЪ6оп хрестгиш оЕ йе 6ги8 |Ьат ассошрап(еа Ь)п6!п8. ТЬе ог(8(па! тпахипшп ат 480 шп (уе11отч-огап8е) В аЬ!тте6 рго8|еаяче1у то 520 шп (рш1|) ч6|Ь а сЬагастеп|6с ьохЬехтк рошт ат 510 пш. ТЬь ргочЫеа а яшр1е |чау то еяппа|е йе сопсептгатюп от" а аашр!е от Р)чА Ьу тр|ап666че арестгорЬототпесгу (Хат!п8 1965).
А Еаатег апд |поте аепя6че тпе|Ьо|1 и61|хеа йе !Лт-шт)исе6 Виогеаепсе епппе|1 Ъу !птегса1ате6 етЬ!6)иш ЪгошЫе тпо!еси!ея Веса|ье |Ье апюипт от Виогеасепсе (х ргорогтюпа! то |Ье тога! шаха от" Р!4А, йе т!иапт(ту от РХА сап Ье езтппасед Ьу сотпрапп8 |Ье 118Ьт епппе6 Ъу |Ье аашр1е ат 590 птп чп|Ь |Ьат от а аепеа от" агап|!апЬ ()ог п|оге штогша6оп оп т)иапИуш8 РХА тч)тЬ етЬ!6!иш ЬготпЫе, р1еаае атее Лррепйх 8). 1трготгед ттегыопх о1 ЕВттйит ВготЫе Рипел от" ппегса1абп8 дуез Ь(пд то РЬ(А чч)тЬ пшсЬ Вгеатег атТ|п(ту йап |Ье рагепт пюпошегк сошроип6 (Саи8аш ес а1. 1978).
НопюсВ|пега от ейЫштп ЪгошЫе ап6 Ьетегот(ппега оЕ ас6- сВпе ап6 е|ЬЫштп аге тЬегеГоге тписЬ |поте аепят)че геа8епта Еог бе!ест!п8 Р!4А |Ьап В шопошепс е|Ь!гВшп ЬгошЫе. Рог ехатпр!е, аа 1(тт)е аа 30 РВ от' РХА сап Ье детестед оп а соптоса! Йиогехсепсе Ве1 асаппег (е.8., р1еахе аее б1ахег ет а1. 1990; б1ахег апд Куе 1992). Но|нечет, |Ье рясе тот тЬ!а шсгеаае !п аепыт!н(ту В чету атеер; 1 тп8 от етЬ16ппп ЬопюсВтпег соатх аЪоит сеп т!шеа |поте йап 1 8 от" е|Ь|гВшп ЬгошЫе.
()пхупппетг)с суашпе дуеа ипге1ате6 то етЬ!6!иш ЬгошЫе аге п|оге аепя6че т)етессога от РЫЛ, Ьит |Ьехе дуех аге а1ао ехрепяче (р1еаае хее аес6оп оп 5'т'ВК Руеа Ье1отч). Рог ш)оппа6оп оп 6!ароха! от" ей|гВшп ЪгошЫе, р1еахе аее АррепсВх 8. Мейу!епе В!ие А!ао )спочнп аа 5|ч)ах В)ие, !п гесо8п!тюп от' йе патюпаРпу от' Саго |чЬо Вгат |упйеяхе6 йе 6уе ш |876, тпе|Ьу1епе Ыие (Р(егг-РачЫ ап|1 В1ап8еу 1949) !а |ютпетппеа |ье|1 аа а яа|п аког ВХА |Ьат Ьаа Ьееп тгапатеггед то ппгосе11и1охе 61|ега ог то сегта!и |урез от" пу!оп В!тета (Негпп ап|1 5сЬпий 1988) (р!еаае аее СЬартег 7, Рготосо1 7). Ме|Ьу!епе Ыие шау а1ао Ье |пей Со ага)п Ьапба от РХА !п а8агоае Ве1а (р!еаае аее |Ье рапе1 оп 88!Ее Р8ОТОСОс). ТЬе аип (х то ачоЫ |Ье |ье от етЬ16!иш ЬгошЫе ап|1 со тпшипгхе |Ье ехроаиге от |Ье РХА то 1Л' )ггат))акоп, |чЬ|сЬ сап Вепегате рупппгВпе сВ|пега апт) !о|нег |Ье Ь~о1о8(са! асбчиу от" |Ье РХА.
ТЬ!а ргоЫеш доев пос аееш то Ъе аегюия Ьит Ь (а печегйе1еь а |юигсе от" сопсегп то аоше !пче|68атогя Мейу!епе Ыие Ьаа пчо аЪ|огЪ|юп тпахипа (668 ап|1 609 птп) |и |Ье ч)яЬ)е хрестгиш, ап|1 ь ао1иЫе ш Н О. Рог ага!и!п8 тт)4А ппшоЬ!1|пей оп пу1оп ог ппгосеПи!оае, |Ье ануе !а паем ат а сопсептгабоп от 0.0498 ш 0.5 М ао6(иш асетате (РН 5.2). 8|а!и!п8 !а гечегяЫе апд сап Ье сагпе6 оит Ьетоге ЬуЪ|16(ха6оп.
5(ттие Кис!е(с Апг(л А9.5 ВР!ЕЕ РРОТОСОЕ 5!а!п!пВ О(х(А !п Се!ь чч!ГЬ Ме!Ьу1епе В1пе 1. Еоал( аис( или а Ве! сах| лч((Ь СТС а8агоье (и 1х ТАЕ Ьобег. ТЬе хтааел| агиоии| о( тлгхА |Ьа| саи Ье ге! (аЬ(у г(елесгел( ал а Ьаод Ьу ьга(и(и8 и(|Ь иле(ЬЛ(еие Ыее 'ь -40 иВ и 'ь гЬеге(оге иесехлагу |и илов| сжел |о (оас( 2-3 г(|иерее иоииа! 9оаиг(гу о( пг(А (иго |Ье 8е!. 2. А| йе еис( о( йе е!ес|горЬоге8с гои, р!асе |Ье 8е! (и а 8!ахх г((хЬ соила(и(и8 5 8е! чо!огиеь о( а хо(обои соила(ив8 0.001-0.0025% гие|Ьу!еие Цое (ача((аЫе (тот 5(8гиа) (и 1 гим Тияасе|а|е (рН 7.4), 0.1 и|м ЕРТА (рН 8.0).
3. (исоЬа|е йе 8е! Гог 4 Ьоогь а| гоои| Гегирега(оге, ъмй 8еи8е а8(Ьлт(ои ои а го|агу хЬа(сес 4. Р(иле йе 8е! Ьг(ейу (и г((ал(((ег( Н О аис( ехапние (| ои а ((8Ь( Ьох о(|Ье Е(ис( пьет( |о ((!оги(пате Хгау 8(шх. Ычег Яа!и!гтд Соуп| А1Ьегт чоп ВоПх|а|И (1193 ог 1206 — 1280) !а ТЬпсе Гапюпя Не лчаа йе |еасЬег оГ 86 ТЬошах Ас)шпал, Ье чгах ап а1сЬеппхт |чЬо йехспЬед агхеп!с хо с!еаг1у |Ьа| Ье хошейтпеь тесе!чех сгесП| Гог |Ье сПхсочегу оГ |Ье е1ешепс, апд, оГ ге!ечапсе |о пю1есп!аг с!оп!п8, Ье гесотйед йа| а(!чет пПгате ъчои16 ага(п Ьшпап х)с!п. Е!8Ь( сеп|ппех 1атег, й!чет х|ашш8 Ьаз Ьееп гейпела |и|о а ЫВЫу лепят!че тесЬп!с(ие Гог рояе1ес|горЬогебс йетесг!оп оГ Р(х(А ЪапсЬ !п ро1уасгу1ашЫе апй а8агохе 8е1я Ат Па Ъехт, й!чет хта!шп8 сап с)е(ест Ьапдь соп|а|п|п8 (1.0 п8 оГ Р(х(А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
