Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 157
Текст из файла (страница 157)
Ниогортар$лу ТЬе ш|еия|у оЕ аи|огасПо8гарЬ!с (шашек оЕ ччеа)с $$-епиттегк кпсЬ ак |Н, |4С, апс( кк5 саи Ье епЬаисе|$ Ьу ипрге8пабп8 йе кашр1ек лч(тЬ сЬеписаВ |Ьат аге Пиотексеп| ап|$ еши шаиу РЬо|опк лчЬеи |Ьеу епсоиптег а яп81е с(иаптиш оЕ гасПа6оп (ЪЙЬоп 1958, 1960). Р!иого8гарЬу шсгеакек йе кетлк(т(ч(ту оЕ т(етест(оп оЕ '4С ап|$ лк5 арргохипа|е)у тепЕо1|$ апт( регипь т)етест(оп оЕ |Н, лчЬ(сЬ (к отЬегччье гбттиаПу 1пч(яЫе |о сопчеи|юпа1 аитота|$(о8гарЬу. Г1иого8гарЬу В йегеЕоге рагт|си)аг!у |ье(и1 Еог |Ье т(етест(ои оЕ гасПо1аЪе1е|1 рго|е(пк апт( пис1е|с ас(с(к !и ро1уасгу1аши$е 8е!к.
1и |Ье от(8(па( ше|Ьот(к (Воппег ап|$ $,ак)теу 1974; 1.ак1|еу апт( М(Пк $975), асрлео|ь 8е!к соиташ(п8 йе гасПоас6че кап|р1ек |чете ет)ш!!Ьгате|$ чч(тЬ $3М50, )шрге8иате|$ лч(тЬ йе кс|пППап| РРО (2,5-|$$РЬепу!охало!е), коа(те|1 |и Н О со тешоче йе РМ5О, |1пед, ап|1 ехроке|$ со Х-гау 6!ти а| — 70"С. ТЬеке ргосет(отек |чете сок|1у, тесПо|ь (гет)шг(п8 а| 1еак| 5 Ьоигк оЕ ччог(с), апс( |ггертот)цс(Ые |п (пехрет(епсет( Ьапт)к.
ТЬе шок| 6е|рлепс саике оЕ |И6сиПу лчак йе ЕаПиге |о теи|оче $3М5О: Сошр1е|е гепюча1 (к еккеи6а! |о ачо(с( кпс1|у ПеЬ айег |$гу|п8. Весаике оЕ |Ьеке ргоЫепь, а пшпЬег оЕ аПегпа6че ко!чепь Ьаче Ъееи т(ече1орет( |о т)е1(чег РРО |о |Ье катир1е. ТЬеке 1пс1ит(е ейаио1 (1 ак1|еу $980), 81ас|а1 асе6с ас(|$ (Яаипег ап|$ бт(кччо!|$ $983), ап|$ кечета1 о|Ьет от8ашс ко!чепь (е.8., р1еаке кее 56|ие ет а!. $974; 5оийегп $975). Рекр(те йеке ипрточегпепи8 РРО Ьак по|ч 1ат8е1у Ьееи гер1асе|1 ак а кс(пППап| Ьу кот)!шп каПсу)асе (СЬатиЪег1аш ! 979) ог Ьу сопииегс!а1 кс(пг(Пап!к (кее Ъе!очч).
(тт|1|Ь кот)!шп каПсу!ате, |Ье 1ече1 оЕ епЬапсетпепс ь арргохипа|е1у ет)иа! со йа| оЪ|аше|1 лч(тЬ ог8ашс кс|пВПапь, а1|Ьои86 йе Ьапс(к аге кПВЬПу плоте |$1ЕЕике. Соиппегс(аПу ачаПаЫе а|рлеоик кс(пгП!ап|к ялсЬ ак Еи|Напсе, Еп68Ьтп(п8, от ЕптеияЕу ()к)Е)к( ЫЕе 5с(епсе Рго|Ьлс|к) ап|1 АшрИу (АгпегкЬап|) аге корр!(е|$ |п!щи(|$ апт( кртау-оп Еогш аий $Е икет( (и ассотс(апсе лч(тЬ |Ье тиаииЕас|игег'к |пкттисВоик, 8(че геки!ь ечегу Ь(т ак 8оо|$ ак йоке оЬ|а|пе|1 гбй РРО, лч(тЬ Еаг 1екк лчог)т. Ноъчечег, йеу аге ехсеесПи81у ехрепяче.
ТЬе турек оЕ Х-гау 61|и пкет( Еог Пиого8гарЬу кЬои!|$ ша|сЬ йе Пиогексепсе крес|гшп оЕ |Ье ксии61ап|. 5осПши каПсу1а|е еиитк а| 409 шп, лчЬегеак РРО еииь ас 375 пт. Сопипегс|а! епЬапсегк етпП е!йет Ыие ог (Ж ПВЬ|. РПшк йа| ате кепя6че |и |Ьь ге8(оп оЕ |Ье крес|гшп аге саПе|$ "кстееп-туре" Х-гау 6!иь аи|$(пс!и|1е Кот(а)т ВюМах М5, АшегкЬаш Нурег61ш-МР, ап|$ Ри)$ КХ.
Аи сотое((орарЬу апг( РЬозр)гот!Тпач(тге А9.13 ТАВЕЕ А9-1 5епсппигу о( АигогаеподгарЬТЕ Мейо65 Еог Ое(еспоп о( Васс!о!зогорез 5есч51тсчстч (г(рш!пппх) 15ОТОРЕ МЕТНОП 556 по епЬапсепгепс Лиого8гарЬу Тгап5егееп 1.Е (Ког)а)г) 30 — 60 2 — 3 0.8 — 1.2 52р тпгеес !псепз((у!п8 зсгееп Тгап5егееп НЕ (Ког)а)г) 2 — 5 0.5 0.05 — О. ! Эзр спгеес (псепз!Еу!и8 зегееп Тгап5егееп ЕЕ (Ког)а)г) !5 — 30 1 — !.5 0.4-0.6 14С йиого8гарЬу Тгап5егееп ЕЕ (Ког(а)г) 2 0.8-!.2 1251 !осеоз!Еу!п8 зегееп ! — 2 Зц йиого8гарЬу Тгап5егееп ЕЕ (Кода)г) 10-20 74-!!О Ьеп516сг!Еу ОЕ 01ЕЕегепй АссЕогайодгар!)сс МеЕ!ТоеЬ 6еЕЕ!пВ пр АНЕогайоцгарЬ5 1. Ргераге Ве15 Еог аисогаг)(оВгарЬу ш опе оЕ йе ЕОПосч!пц кауга а. Р(х сЬе ЯЭ5-ро1уасгу1аш(г)е ае15 сои!а(пшВ 55Р ог '55, '4С, ог 5Н аз г(езсг!Ьег( ш СЬарсег 5, Ргогосо! 11.
сЛе а сошшегс!а! Ве) г(гуег Со г)гу 1Ье Ве!5 оп1о С)тЬагшап ЗММ рарег. Ь. Р!х СЬе зег)иепсша ае)5 сои!а!и!пВ 55Р ог 555 аз 11езсНЪег1 ш СЬаргег 12, Ргогосо! !2. 1Ле а сопппегсса) це! г!Туег Со г(гу СЬе ае!з оп!о ЪЬагшап ЗММ рарег. с. Рог псахппа1 зепс66чпу апг) гезо!ипоп, 6х, г!Ту, апг( гпоипс 1Ье ро!уасгу!аш(г(е Ве!5 сопСа!и!па 52Р оп Ьас)г!пц рарег.
5ас!з(ассогу ипа8ез о( гчес, ипйхе6 Ее!з сап а1ю Ье оЬса!пег) аз 1оп8 аз 1Ье 8е!з аге зеа1ег) !и а р!аз!к Ьа8 ог гчгаррег( ш 5агап Ссггар Ье(оге сЬеу аге ехрозег) со сЬе 61гп (р1еазе зее СЬарсег 5, Ргосоео! Н). згр-!аЬе!ег) пие!ек асЫз !и а8агозе Ее!з сап Ъе г)есеесег( Ьу ехрозгп8 сЬе гчес Ее! (гчгаррег) !и 5агап Саггар) со Х-гау 61ш. Ноъчечег, Еог шахипа1 зеоз!1!ч!су апг( гезо!и6оп, сгапз(ег сЬе гаепо!аЪе!ей пие1ек асЫз со а зо!Ы зиррогс (и!сгосеПи1озе ог пу!оп гоешЬгапе) аз 6езег!Ьег) сп СЬарсег 6, Ргососо1 8. Огу сЬе зо!Ы гаррота апг( еочег гчпЬ 5агап Саггар со ргечеос еоп1апипасюп о( !псепя(у!п8 зегеепз апг1 Яш Ьо16егз.
2. Р1асе р!есез оЕ саре псаг)сег( сч!(Ь гаебоаспче !п11 агоипг( йе ег)ае оЕ сЬе зашр1е оп сЬе Ьас11- !па рарег ог Вагап Хгар. Сочег йе рсесез оЕ 1аре сч!ТЬ 5соссЬ Таре. ТЬ15 аггапцешепс ргечепь сопсапнпабоп оЕ ТЬе 6!Тп Ьо!дег ог сп1епгВЕуспВ зсгееп сч!(Ь йе гаебоасстче !п11. А! сегпассче!у, аиаеЬ 1шп!пезеепс!аЬе!з со сЬе рарег ог 5агап Ъ)ггар. ТЬезе шау Ье ригеЬазег( Егопг зечега! гпаии(аесигегз (е.8., 51гаса8епе).
ТаЪ|е А9-1 5Ьоъчз сЬе зепзгбчсбез оЕ 6!ЕЕегепс аисогаг(!оагарЬ!с шесЬог!5 Еог йе г!есесс)оп оЕ гайосзосорез, к(сЬ апг! иг!1Ьоис чапоиз епЬапсешеппп ТЬе агпоипсз оЕ гаг)(пасс(ч)су зЬосчп ш 1Ье СаЫе аге СЬозе гег!и!Тег! Со оЬСасп а г(егесгаЫе ппаВе (А = 0.02) оп ргебазЬег) 611п йаг гз ехрозег) Со СЬе загпр1е Еог 24 Ьоигз. МисЬ 1опВег ехрозиге С(шез шау Ье песеззагу Со оЪСа!и риЬ- 1!5ЬаЫе ппаВез. А9Л4 Аррепйх 9т Оетест!оп $узтетз 3.
1и а Паг)стоит, р1асе сЬе загир1е Еи а 1фЬс-с!ВЬс Х-гау 6Ьп ЬоЫет апг1 сонет тс зч!сЬ а зЬеес оЕ Х-гау 61т. 1Е ргейазЬет1 61ти Ез изет), сЬе ргеехрозед яг1е зЬои)6 Гасе сЬе затр!е; тЕ ап !псепз!Гуспд зстееп )з изей йе ргеехрозед а!де зЬои16 Гасе йе !псепз)Еу!па зсгееп. 4. Ехрозе йе 61тп Гог ап арргорпасе 1епасЬ оЕсипе (зее ТаЫе А9-1).
зчЬеп сопчеп6опа! штепа!Еу!п6 зсгеепз ог ПиогоцгарЬу ь изей сЬе 6Ьп птя Ъе ехрозе6 ас -70"С. ТЬе !озч сетпрегасиге зсаЪт1схез сЬе з$!нет асопь апт1 юпз сЬас Готт йе 1асеис ппабе оГ сЬе гайоасстче зоигсе. 5. Кетпоне СЬе 61ти Ьо1дег Стоп! зтогабе (тье 6)очез Со Ьапгс!е Ьо1дегз Яогет$ ат — 70'С). 1п а бат)стоит, гетпоче йе 61тп аз т)исс)6у аз роззтЫе апд аПозн тс со тчатт ир со гоотп сетпрегасиге ЪеЕоге т)ече1ор!па. 1Е 6 И песеяагу со оЬсасп апойег аптогаг$1оагарЬ, арр1у апойег 61гп !пппесиасе!у апг$ гетпгп сЬе 6!гп Ьо16ег апет зсгеепз со тЬе Егеегег аз гарг61у аз розз1Ые.!Е сопиепзасгоп Еоппз Ьетоге сЬе пепг 6!гп сап Ье арр1!егт, а1!огч йе загпр1е апгс зсгеепз то геасЬ гоогп сегпрегасиге апгс м!ре азгпу а!1 сопиепзасгоп ЬеЕоге арр1у!па сЬе пезч 61гп. 6. Гтече!ор сЬе Х-гау 6!тп еПЬег тп ап аисоитаск Х-тау 6)тп ргосеззог ог Ъу Ьапг1 аз ЕоПозчз: Х-гау Йене!орет 5 ииписез 5оо асе6с ас!6 яор Ьай ог ччасег Ьай 1 тпшисе гар$6 6хег 5 ииписез гиппш6 тнасег 15 иипшез ТЬе Сетирегатигез оЕ аП зо1и6опз зЬои16 Ье 18 — 20 С.
7. сазе сЬе !тааез оЕ йе гайоас6че ог 1шшпезсепс тат)сета со аПВп сЬе аисога6!обтарЬ зчссЬ сЬе затр1е. Р$собр$сотппауиц Аисогаб)обгарЬу Ьаз Ьееп сЬе ташзсау оГ то!еси1аг с!оп!п6 Еог тпапу уеагз. Кесепбу, Ьочгечег, сзчо сурез оГ рЬозрЬог)та6$п6 Печтсез Ьаче Ъесоте анас!аЫе сЬас сгеасе Етабез оЕ гайа6оп зошсез оп соптршег зсгеепз тасЬег сЬап оп сопнепсюпа1 рЬосоцгарЫс 6!тп. Опе суре оЕ с1ечке Еагеа г1есессог) зсапз сЬе Ве! ог 61сег !и япаП чч!пбознз гбтЬ а Се!бег соипсег, сотрП)п6 а сопсоиг тар оЕ сЬе пшпЬег оЕ тайоас6не 6$з)псебгассопз рег ипи агеа. ТЬе осЬег деч!се сьез р!асез спасет) чч)сЬ а ПВЫ-гезропяче рЬозрЬог. ТЬе 61пт ог 61тег $з йгесс1у ехрозег) со йе р1асез, ап6 йе епегбу ет$ссе6 ь зсогед !и а еигор!ит-Ьазес) спас!па. ТЬе р1асез аге сЬеп зсаппед Ъу а 1азег, ге!еаз!п6 рЬосопз сЬас аге соПессег$ со Гопп аи !табе.
ВосЬ г1ечтсез ргезепс йе ппабе оп а сотрисег зсгееп. ТЬезе $пятшпепсз аге тоге ехрепзтче сЬап сЬозе гет)шгес) Еог сопчеп6опа1 аисота- 6!обгарЬу ап6 сЬе ипааез Ьаче а !отчет тези!и!!оп. Нозчечег, сЬе $тааез саи Ье де!естес! ш -1О-20ого оГ йе типе тес!и)гед Ьу сопчепсюпа! аисогаг$$оагарЬу ап6 а Паг)стоит ь пос гет)шгей 1п аг$6!!!оп, сЬе 1шеаг гапбе оЕ ста6$п6 шзсгшпепь ехсепбз очег аЬоис бче огбегз оГ табпбиде, ап ипргочетиепС оЕ аС 1еазС !00-Го!6 очег сопчеп6опа1 Х-гау 61т.
Гтепз)тотпеСг!с апа1узь оЕ !тацез тз сЬетеЕоге тпоге ассигасе аид Еаг ятр!ег. ГуесаПз оЕ рЬозрЬот!тпа6!п6 тесЬобо1обу ипП чагу чн$1Ь йе т)ечке изе6 ап6 тпапиЕасшгегз' тпзсгиссюиз зЬои!т) Ье ГоПозчей ТЬе $табез аге сарсиге6 е1ессгопкаПу аиг$ сап Ъе зсогед апд ргераге6 Еог риЫкастоп из!п6 ргоагатз зисЬ аз Аг)оЬе РЬосозЬор ГАг)оЬе 5узсеиь 1псогрогасе6). СЬетг!11тгпегсеисе А9.17 (Ь!5-Х-тегЬу1асг!6!и!ит пЬгаге; 1Ье сЬеппса) 51гисгиге оЕ 1ис!8еп!и ь 5Ьочгп аг ТЬе г!8ЬТ) Учах ВупгЬеякес1 !п !935.
СЬепи1ипипе5сепг геасгюп5 аге )споучп ш ТЬе Вах рЬаае (геасбоп оЕ пПпс охЫе ап11 окопе), 1н(игЫ рЬаае (е.8., 1ипппо! охЫа6оп геас6оп), ап6 5о1Ы рЬахе (е.8., рЬоарЬогогь ох1- Па6оп геас6оп) (бипбегтапп апс1 МсСарга 1987; СатрЬеП 1988; 1гап 13у)се апс1 1гап Е3у)се !990). ТЬеге аге пшпегоих арр!Ыабопа Еог сЬепи!шпшеасепг геас6оп5 гап8!08 Егот ЕЬе ЕапиПаг егпег8епсу ПВЬ6п8 ЕЬа1 ехр1ои5 ТЬе Пиогеаепсе-Вепх!Пхенц регохуоха!аге охЫабоп геасгюп (Суа1шпе ЫВЬьбс)с5) го ЕЬе 51011у оЕ рЬа8осугоя5 ияп8!ис!Веп!и ог 1ипипо) Ео епЬапсе Учеа(с сеПи1аг сЬепи!ипипеасепсе (АПеп апс1 1.ооае !976).!п пю1еси!аг Ью1- о8у, сЬепи!шпшехсепг сотроип65 аге ихес1 а5!аЬе!5 !п пис1ек асЫ ргоЪе ап11 ргоге!и Ыо16п8 аррПсапоп5 (е.8., 5оиЕЬегп апс1 Учеагегп ЫО1608), апс1 а5 геацепь Ео с)есес! епкуте-)аЬе!е6 пис1ек ас165 ап6 ргоге!п5 (ТаЫе5 А9-3 апс1 А9-4) (Кпс1са 1992; Мика)сг ег а!.
!992). 5рес!Пс адчапга8е5 оЕ сЬепп1штипехсеп! аххау5 ап6 ргососо15 аге !тргоче6 Вепа!6чггу очег сопчеп6опа! гайопгегпс, со!огппегпс, ап6 Пиогогпегпс Пегес6оп Ву51епь, ЬакагйЕгее геа8епЬ, гарЫ ге50115, апд чегаа6!е аахау Еоппа15 (е.8., 5о!ибоп- апс) гпетЬгапе-Ъааес) а55ау5). С!тегп!!еепппе8сеп$ ЕаЬе!5 ТАВЕЕ А9-3 СЬепи101п!пеасеп! Ахаауа Еог !пипипоахаау апд Ыис!е!с Ас!и НуЬгЫ!капоп ЕаЬе15 Ретест1О19 е1м1т (ХЕРТОМОЕЕ5) 50В5ТВАТЕ ЕЕ17УМЕ НаОН 9 регохЫе АМРРР АМРНР !ипппо! е регЬогаге е 4-!оаорЬепо! ОПсгорегохЫа1е е регохЫе !ипппо! е Ре ЕРТА Асг!йшшп епгег АПса!!пе РЬопрЬага5е Д-и-Оа!асгоТЫазе НогпегайпЬ регохЫа4е !по!ипипо! ХапгЬ1пе охЫапе 500 50 5,000 50,000 3,000 Вгопп1яп апд Кг1сха (1989); Кг1сха 1! 991!.
АсгЫтшт ЕВЕег5 аптЕ Яе!агетЕ СотроиптЬ 1.!8ЬТ епиххюп Егогп ап асг!Йп)ит-еагег-1аЪе!е6 ап68еп ог ап6Ьос1у, ргерагес1 ияп8 ап ас6ча1ес1 1аЬе1 (2',6'-йтеТЬу1-4'-[)У(-5иссишпЫу1охусагЬопуЦрЬепу1 10-гпегЬу!асгЫ!пипп-9-сагЪоху1аге), ь гг!88егес) Ьу ятр1у асЫ!пц а пихгиге оЕ еойшп Ьус)гохЫе ап11 ЬусЬо8еп регохЫе. ТЬе ПВЫ !5 епниес1 а5 а гарЫ Па5Ь )а5608 (5 5есопйЬ апс1 ТЬь Типе 5са1е ипроае5 сегга!и сопаггагп15 оп 1Ье !пгба6оп оЕ ПКЬ1 ргос)ис6оп ап11 !Ь 1пеааигепгепг (Чее)15 ег а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
