Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 161
Текст из файла (страница 161)
1Е йе топос1опа! ап6Ъо|1у ЕаП| !и|о а с!ааа йаС Ь)п|Ь роог1у Со ргоСет А (е.8., Ьу Ь|пйп8 со ргосеш б ог со Ьшиап 18СЗ от тоиае 18С1), П аЬои16 Ье ригтТтет$ Ьу апойег тесЬот$ (е.8., аи|тпопшт я|1Еасе ргес|РПа6оп, ЕоПоъче|1 Ьу сЬготпасо8гарЬу оп РЕАЕ-сеПи1оае). Л1|егпаС(че1у, а Ьп<$8(п8 ап6Ьо|$у сап Ъе |ье6 Со апасЬ йе тпопос(опа1 апг)Ьо6у Со рготе|п А. Ргосе(п А соир!ет$ со а ъо1$|$ аиррогс Ьу суапо8еп ЪготЫе ь аиррПет$ Ъу кечета! тапиГассигега (е.8., ргосе|п Л-8ерЬагоае С1.-4В; РЬаппас|а). ЕасЬ ииПт!иег оЕ ячоПеп 8е1 сап Ь|п|1 -10-20 и|8 оЕ 18б (ет)и(ча1епт Со 1 — 2 и|$ оЕ апт)аегит).
Апт(Ьот$$еа ЬГпд Со ргоСе!п А сЬ|ейу Ьу Ьу|1горЬоЬ|с шсегасс)опа (РеЬепЬоГег 1981) йас сап Ъе йкгирсет$ ас 1оъч РН. Ргосе(п А ь гетпаг1|аЫу геяПепс апт! ъч)сЬ|саптЬ гереасед сус1еа оЕ ехро|шге со 1оъч РН ехсге|ие1у ъчеП; П сап а!ко Ье сгеасе|1 ъч(сЬ ЫВЬ сопсепсгас)опа оГ |$епасипп8 а8епь ялсЬ аа игеа, 8иап(6$ие Ьуъ)госЫогЫе, ог роСаъа(ипл ьойюсуапаСе ъч)СЬоит реппапепт |1ата8е.
Моет апт(Ьойеа сап ъч(СЬ|тапс$ сгапяепс ехроялге со 1оъч РН, апт$ сЬь сгеасп|епс ь поъч йе |сап|Гатт! п|есЬо|$ со ге1еаае сЬеп| !и ап асбче Еопп Егоп| ргосесп А — ВерЬагоае Ьеабя Рог ат$йс(опа1 1пЕоппасюп оп ргосе!п А, ргосеш б, ап|1 ргосеи| 1., р!еаае аее йе тпЕоппасюп рапе! оп сМА4$)МОСЕОВС|Е|М-В|МОПМС РКОТЕСМ8: РВОТЕ!М8 А, С, АМО Е а| СЬе епд оЕ СЬ!а аррепйх. А1йоиВЬ Ьуреппипипе апсьега га(аес( Ги ехрегипепса1 ап(та!а сопса)п чету ЫВЬ сопсепсгасюпа оЕ иииилпо81оЪ|йп йгессе|1 а8а!пас йе саг8ес апс$8еп, ялсЬ апсьега а1ао а1ъчауа сопса|п ап6Ьот$(еа йгессе|$ а8а(иас о|Ьег ап68епя 1п а|1й6оп, |Ье $ттипо81оЬи1ша |и апс(аега тау Ъ!пт$ ъч1|Ь!оъч анЫПу со тпо!еси!еа йас аге пос сгие саг8ес ап68епя Рог сЬезе апс$ ойег геакопк, апсьега сап гпапйеас а 1ече! оЕ Ъас(с8гоип6 геасспбсу йас ь ипассерсаЫу ЬтВЬ.
ТЬеге аге |Ьгее ъчауа со т(еа1 ъчиЬ сЬь ргоЫепи ° $7те аи тпосиоие ЫосГттад а8епг Ге.8., Ьочтпе еегаат аГЬитта, аоггааГ тегаот, ог ВЕОТТО) со соп|ресе ъчПЬ сЬе иппшпо81оЬиПп Гог попарес|Т|с Ь|пйп8 ясея В!ос)т|и8 а8епск аге гои6пе!у $ис1ит$ет$ |и ао!ис)опз и|ей Еог ехатр1е, ш $ттипо1о81са( асгееп)и8 оГ ехргеааюп 1тЬгапек сопасгиссес$ |п р1аяпЫ ог ЪассепорЬа8е г. чессогя ° лтеточе опттЬотГтез йат аге т$$гестетГ адата ерее$7т с топ гатт аттп8 апг$8егь Гту ат$ьогрттоп. МесЬо|Ь со геточе апс!Ьойеа йгессе|1 а8а!пас Ьассепа1 апс!8епк аге йаси|ьед )и СЬарсег 14, Аисл)лоъссек А9.27 Ргососо! 4.
Ап6Ъоецек йас сгокк-геасс ъчКЬ согпропепск !п еи1сагуо6с сецк сап Ье абкогЬе6 ъчссЬ асесопе ехсгасск оГ а сеП 1лпе ог с!ккие сЬас аге 1ъпоъчп пос со ехргекк сЬе сгие сагцес ап6- цеп. 1Е кисЬ а 1лпе саппос Ье Ыеп66ед ъч)сЬ сегса!псу, ике ап асесопе ехсгаес оЕ сопипегслаПу ачацаЫе дпе6 уеакс !5агпЬгоо)г ес а1. 1989). А1сегпабче1у, ипънапсе6 ап6ЪоеПек сап Ъе абкогЬед со апбцепк )ттоЬ|Пхед оп пКгосеПи!оке ог Р'ъгРР тегпЪгапек. ° Берагаге апгГЬогЕЕек йгееселЕ ацллГикг гЕле гатцес апс!цегл Егот еопгаттаг!пц ап6ЬогЕГек Ьу афглгсу ригфеа6оп.
!п копсе сакек (е.ц., ъчЬеп сЬе ап6цеп !к а ргосе!и), сЬе апбцеп тау Ье соир1е6 со а таспх кисЬ ак суапоцеп-Ьгопь!6е-асс!насе6 церЬагоке. Ап6Ъогцек ецгессес1 аца!пя ерКорек гцкр1ауед Ьу сЬе ргосе!и ъчП! Ье геса)пей Ъу йе со1итп; аП ойег иппшпоц1оЬи1шк ъчлП рака сЬгоицЬ. ТЬе Ъоипъ) апс!Ъобу !к йеп ге1еаке6 Егот сЬе со1шпп Ьу ацепск сЬас гПкгирс йе апс!цеп-апс!Ьобу согпр1ех (е.ц., росакяшп !косЬюсуапасе апд 1оъч-рН ЬиЕГегк). Ресацк оГ йе тесЬобк ике6 со ргераге ап6Ъоецек Ьу иппшпосЬготасоцгарЬу чагу сгот ап6цеп со ап6цеп ап6 Ггогп ап6Ъоду со ап6Ъоду.
Ноъчечег, сЬе цепега1 рппс)р!ек аге ъчеП-бексг!Ъед !п а пшпЪег оЕ гелеъчк (е.ц., р1еаке кее Нигп ап6 СЬапс1ег 1980; Наг1оъч ап6 1.апе 1988, 1999). нъгЬеп ияпц йеке теСЬобк, !С Гк еккеп6а1 Со ике Ь)цЫу рипйег1 апбцеп апс1 со ачоЫ йе ЪассЬ оГ апбцеп сЬас ъчак ике6 со гапке йе ап6Ъобу !п йе ехрептепса! апппа1к. РигсЬсгтоге, П !к ипрогсапс со гегпеплЬсг сЬас ап6Ьоецек ъч)сЬ еПТЕегспс аЕВпл6ек Еог сЬе ап6- цеп ъчП! кЬоъч 6)йегепс раиегпк оГ е1ибоп Егот йе со1шпп; сЬоке йас Ь!п6 1ооке1у со сЬе ап6- цеп ъчП! е1исе Пгя, асъ6 сЬоке йас Ь|п6 пюкс с!8Ьс!у чпП е!исе !акс, 1п Гасс, ап6Ьоецек ъч)сЬ сЬе ЬсцЬекс ачЫиу пъау Ье депасигед Ъу сЬе е!исюп Ьийег ЪеЕоге сЬеу еПккос)асе Егогп сЬе ап6цеп. ТЬик, сЬеге гк а сепдепсу гЬлппц лпипипорипцсабоп со ке1есс Еог ап6Ъогцек йас аге креслцс Гог йе апбцеп Ьис сЬас Ьтъ! ъчКЬ 1оъч айлпКу.
Ап6Ьоецек гпау Ье рипцеъ1 оп а кпъаП кса1е Ьу абкогрсюп со, ап6 е1и6оп столп, ргосет ап6цепк йаг аге нппюЬП)ген оп еПаго6гед рарег !01тксе6 1981), ог пссгосеПи!оке 61сегк !Виг)ье ес а1. 1982; 5пий ап6 ргкЬег 1984; ЕагпкЬаъч апд КосЬПе!Й 1985), аГсег е1ессгорЬогек!к сЬгоицЬ 5Р5-ро1уасгу!атЫе це1к. Ап6Ьоецек ргерагед Ьу й к тесЬо6 аге екреслацу икери1 Гог сопцгпипц йе ЫепсКу оЕ сРХА с1опек гко1асе6 Егот ехргекяоп ПЬгапек еопксгиссед т ЪассепорЬаце Х ог р1аяпЫ ехргекяоп нессогк. Рог ехатр1е, спапу Еа1ке-роя6че с1опек сап Ье е1нп)- пасе6 Ьу рипЕулпц ап6Ьоецек Егогп сгибе кега Ъу гбгсие оЕ йелг аЬГПсу со Гцпб со а Гияоп ртсе!и рагс1у епсос1ед Ьу сЬе с1опес1 сР)ь)А ап6 секбпц йе аЬППу оГ йеке рипце6 ап6Ьоецек со ргеслрКасе йе сагцес ргоселп ог со геасс ъчКЬ П оп а ъчеяегп Ыос. Ноъчечег, сЬ)к тесЬо6 ъчог)ък ъчеП оп!у ъчЬеп йе ап6Ъоецек геасс ъчКЬ ерПорек сЬас аге ецкр1ауед оп ъ)епасше6 ргосе)пк.
Туркацу, -50 пц оГ иппшпоринце6 ап6Ьобу )к гееонеге6 рег писгоцгасп оГ сагцес ргосе!и 1оабе6 оп сЬе ог)ц!па1 ВР5-ро!уасгу1апъЫе це!. Весаике оЕ сЬе !6!окупсгас!с пасиге оЕ сЬе тсегас6опк Ьесъчееп ап6Ьогцек апд сЬелг сагцес ргосеспк, П Гк пос рокк!Ые со ц!не сопецбопк Еог Ь)пеПпц ап6 е1и6оп сЬас аге ипгчегкацу аррПеаЫе. Рог ехагпр1е, токс ап6ЬогПек сап Ье е1исе6 Егогп йеи. ипгпоЪ|- 1ыед апбцепк ъч)СЬ 81услпе ЬиЕЕег !рН 2.8).
Ноъченег, ЕагпкЬаъч апъ1 Койце16 !1985) Гоппер СЬаг ап6ЪогПек со Ьигпап сепсгогпепс ргосеспк сои!6 Ье е1исес1 оп1у ъч!сЬ а ко1ибоп сопсалплпц 3 м росакяшп СЬюсуапасе ап6 0.5 м ХН4ОН. 1пчек6цасогк ъчЬо ъч)кЬ со ике сЬск росепбаПу роъчегЕи1 сесЬп)г)ие кЬои16 Ье ргераге6 со !пчея коте еГЕогс !п г1ецтпц сЬе орсппа1 сопеПсюпк !ог Ъ!пеПпц апд ге1еаке оГ сЬе!г рагбси1аг ап6ЬогПек Ггогп йелг сагцес ргоселпк. ! ггсссшссо!орса! А88ау8 Ап6Ьоецек аге ике6 т а ъчЫе чапесу оЕ аккаук, ЪосЬ ъ)иаПсас!не ап6 ъ)иапс)сас)не, со бесесс апс1 теакиге йе агпоипс оЕ сагцес апс)цепк. ТЬеке аккаук 1пс!ибе ъчексегп Ыосс!пц, иппшпоргес!рлсасюп, ап6 ко!Ы-рЬаке га6!о)ттипоаккау !К1А). А9.28 Арреийх 9: Регес6оп Булгетл Яея(ет В!оГГГпд Ч'еасегп Ъ|осс!п8 (ТолчЫп ес а1. 1979; Вигпессе !981; ТолчЬ)п апд боге)оп 1984) )а со ргосеиь лчЬас ВоисЬегп Ыосбп8 ь 1о Р)'(А. 1п ЬосЬ сесЬп(с)иея е!ессгорЬоге6саПу аерагасед согпропепь аге сгапа(егге6 Ггопл а Пе! со а гю!г6 ялррогс апс1 ргоЪе6 ъчсЬ геа8епь 1Ьа1 аге прес)6с Гог рагбси!аг лег)иепсеа оГ апипо аснЬ (ъчеасегп Ыосс(п8) ог пис1еосгбеа (8оисЬегп ЬуЬпйхасюп).
1п 16е саае оГ ргоселпя 1Ье ргоЪее иаиаПу аге апс!Ьоб)еа 16ас геасс арес)6саПу лч!1Ь апс(8еп(с ер(сореа г$(ар1ауес) Ьу 16е саг8ес ргосеш аиасЬес$ со 1Ье ао1Ы аиррогс. ЪЧеасегп Ыосс(п8 (а сЬегеГоге ехсгегпе1у иаеуи1 Гог сЬе $6еп66сас)оп апл$ с)иапс!сас!оп оГ ареслТлс ргосе(пе ш согпр1ех ш(хсигез оГ ргосе)па сЬас аге пос гайо!аЬе!ей ТЬе сесЬпнрле ь а!шоас аа лепя!(че аа асапдаг6 ао!(л$-РЬаае гас!(оптппипоаяауа апй ипП)се иппшпоргес!Риа6оп, доеа пос гес)и(ге 1Ьас 1Ье 1аг8ес ргосе(п Ье гайо1аЬе1ей ЕигсЬеппоге, Ьесагье е1ессгорЬогеск аерагас(оп оГ ргосе(па )а а!шоас а!ъчауа саге(е6 оис ипс1ег депасиг)п8 сопйсюпя апу ргоЫепь оГ ео!иЫ1)гас(оп, а88ге8ас(оп, апс( соргеслрПабоп оГ 1Ье саг8ес ргосе)п лч)сЬ адчеп66огь ргосе!па аге е1ипшасей ТЬе спска1 йКегепсе Ьесъчееп 8оисЬегп апс) лчезсегп Ыосс)п8 Пеа ш 16е пасиге оГ 1Ье ргоЬея МЪегеаа пис1ек асЫ ргоЬеа ЬуЪп6(ге лч)сЬ а ересл6сПу ап6 гасе 1Ьас сап Ъе ргейссес1 Ьу яшр1е ес)иас!опя апс!Ъойеа ЬеЬаче ш а пшсЬ лпоге )л$(оаупсгас(с шаппег.
Аа 6)асияед еаг1лег, ап $пл$(ч)л(иа! ипишпо81оЬи1лп шау ргеГегсп6аПу гесо8п!хе а рапки1аг сопГоггпа6оп оГ (са саг8ес ерПоре (е.8., Пепасигеб ог пабче). Сопаес)иепс1у, пос аП шопос!опа! апс!Ьоб)еа аге аи(саЫе Гог гье аа ргоЪеа Гп лчеесегп Ыося лчЬеге сЬе саг8ес ргосе(па аге <$епасигей Ро1ус1опа1 апсьега, оп сЬе осЬег Ьапй аге ипбеГлпег) ш)хсигеа оГ (пйч(г)иа! иппшпо8!оЬиПпя лчЬоае ареслТлс(су, а(6пПу, апс1 сопсепсгасюп аге ойеп ип)сполчп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
