Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 158
Текст из файла (страница 158)
1983; 1аУУ ег а!. 1989). )35иаПу, ЕЬе ПВЬТ еппаяоп ь теааиге6 Ъу гп)есбп8 1Ье геа8епь !пго ЕЬе а55ау 10Ъе роя6опе6 йгес11у 1п Егоп1 оЕ а рЬого11егесгог !п ТЬе ПВЬТ-68ЬТ теааиг!08 сЬатЪег оЕ 1Ье 1ипипогпегег. Аспйптгп ехгеь ап6 1Ье аспйпгшп сагЪохатЫе апа1085 (асг!6!и!01п-9-(Ж-501ЕопуЦсагЬохагпЫе) (Кш1се) ег а1. !989; Масбп81у 1991) аге ЕЬе рппсгра! сЬепи1шп1пехсепг )аЬе15 ихес) !п !ттипоа55ау (ачаПаЫе Егогп А55ау 13ея805 1пс, АТЬеп5, СА; ВеЬТ!089чег)се Аб, МагЬиг8, Сеппапу; С!Ъа Согп!08 13!а80056с5, Мебйе1й МА, апс1 Мо1еси1аг ЫВЫ ТесЬпо1о8у Ке5еагсЬ Ьгй СагйЕЕ, ()К). ТЬе 11егесгюп Пинг Еог ЕЬ15 тУРе оЕ!аЪе! ь -0.5 аиопго1е (0.5 х 10 '5 пю1е5). Иопхерагабоп !)ХА ргоЪе а55ау5 Ъа5ес) оп ЬуЬпйкабоп ргогесгюп Ьаче Ьееп дечЬе6 (Агпо16 ег а!.
1989). ТЫ5 суре оЕ аххау 6ое5 по! Тес)шге ТЬе Верага6оп оЕ Ьоипб Егот ипЬоип11 1аЪе1е6 Ерес!е5 апс) 50 сап Ье сопчеп!еп11у регЕогте6 !п а яп81е яер. ТЬе ЬуЬпйка6оп ргогесТюп а55ау Еоппаг ехр1огЬ ЕЬе пиПюпЕо16 6!йегепсе !п ЕЬе Ьубго1у5!5 гасе оЕ ап аспйшшп-е51ег- А9.18 Арреийх 9: Е)егесс(оп 5упетз ТАВОТЕ А9-4 АРРПсапопь оЕ СЬеписипипеьсепсе сп Мо1есисаг 81осоцу Тесннсоие Ехам осе Кеееаенсеь Се1! зиг(асе |по!еси1е апа!уяз Со!опу зсгеепюц Ме(ег е| а1. (1992) Яопе апь( Риггап| (1991) СР2 К соВ сгапз|оппе|1 зч)сЛ рцрб3 соп|аспюц Х-гаь ргого-опсоцепе Р1ап| апс( б|пца! цепо|пез; Еогепясз РХА Впцегрппбпц Ресогге апс( Сазягпап (1991); В|его|ег|Л е| а1. (!992) Вес1| ес а!.
(1989); Сгеазеу ес а1. (1991); Маг||и е| а1. (1991); Кагцег е| а1. (1993) 5|опе апс( Риггап| (1991) Псе|)а апс( 0|)а (1993) Вгопз|е|п ап|1 С|пуза (1989) Но!|хе е| а1. (1991) Впц1ег-81ип| е| а1. (1993) Хциуеп ес а!. (! 992); Но!|по|го|и е| а1. (1993) цсопе ап|3 Рис|оп| (!99!) !а|п ап|1 Мацга|Ь (1991) Соо1| е| а1, (!992); циси!П е| а1.
(1993) Воьч|пап е| а1. (1991) Но!1)се е| а!. (1991) Сасе е| а1. (1991) Епц1ег-В!и|и ес а1. (1993) Роо!еу ес а1. (1992) Вгопз|е|п еС а1. (1992) РХА зециепс|пц 5(пц1е чес|ог ап|1 пш10р!ех М13 япц!е-зггап|)ес) РХА РХА-Ьспс(спц ргосе(п со|пр1ех АР-! (!ип!Роз) Негрез зппр!ех чпиь 1 1.Р1. |есер|ог П.-б, РРРР Ьс)-2 |(14:18) сЬ|опюзо|па1 сгапз!осасюп; ЕЬ|епа тоиосугоцеиеь М13|пр8 соп|а|шпц Х-гт рго|о-опсоцепе 8-и-ца(ассояс(азе !асц цепс Н1ч" ап|С )епсп4гы гечегзе |гапзспрсазе Рос(з!Ос Ыоя Се) пюЬ!Еиу зЛ(К аяау !п яси ЬуЬпйхабоп Хог|Ьегп Ыосбпц РСК рго|Ььсг |се|есс|оп Р!а|спе зсгеепюц Керопег цепе Кечесье сгапзспр|азе аяау С!оыпс((от Й!!)|с(!е РВК328 с-РА Н1.А с1ая 1 апбцепз Ргосе|п: с-туЬ |и|гоп РХА |п|егасбоп Нсч'-! апПЬойез; |гапзрегпп КР1Р |ур(пц цоигЛегп Ыоп|пц 5оийъчезсегп апа1уяз СЫезгегп Ыопбпц !аЪе1ес( ргоЪе сЬас !з ЬуЪпйхес( со сотр1етепсагу сагцес Е)ХА аис( !аЪе!ес( ргоЬе Егее |и ьо!иПоп.
Нус(го!уяз из!пц а РН 7.6 Ьогасе ЬиЕЕег с(езсгоуз сЬе сЬеии1ипипезсепс ргорегсу оЕ сЬе 1аЬе1, апс1 сЬе 1|ВЫ епизяои ргос(исес( аЕсег йе Ьус(го(уз!з ьсер |з с(ие ьо!е!у со йе ЬуЬпйкес( !аЬе!ес( ргоЪе (ача|1аЫе Его|и Сеи-РгоЬе, 5ап (3!ецо, СА). Еигпспо! апсЕ ЕЕ8 Апа!РВВ 1.ипиио1 зчаз сЬе Еггзс сЬеии1ииииезсеис сотроиис( со Ье иье|! аь аи иипшиоаяау !аЬе1 (5сЬгоес(ег ес а1. 1978). 1лцЬс оп!зь!оп !з спццегес( Ьу асЫшц аи охЫапс (е.ц., Ьус(гоцеи регохЫе) ш йе ргезеисе оЕ а ьшсаЫе саса1узс (Ьогзегас !ЕЬ регохЫазе, иисгорегохЫазе, ЕегпсуаиЫе). Ноччечег, 1аЪе1шц н!а йе 5-аииио цгоир оЕ !шишо1 ге|!псе|! !!8Ы еииьяои Ьу а Еассог оЕ 10. !зо!ит)по(, сЬе б-апипо !зотег оЕ 1шишо1, !ь 1ея еЕВс|епс сЬаи 1ипипо! (с)иапсигп у(е)д 0.19о), Ъис 1аЬе1!иц ас йе 6-рояНои (исгеаьез сЬе )!8Ьс епиьяоп Ьу а Еассог оЕ 10, апс( йиь сЬ!ь сотроии|1, аис1 Ьь аиипоятЪзПСигес! апа!оць, зисЬ аз Ас-(4-ат(поЪигу!)-)ь(-е(Ьу!(зо(ит!по! (АВЕ!), Ьаче Ьесогпе сЬе Еаногес( 1аЬе1ь Еог ииитпоаяау арр1касюпь (КоЬеи ес а!.
1979; РагаацЬ ес а1. 1982). РугЫоругЫагбпез гергеьепс а ьерагасе с1ая оЕ сЬеии1шпшезсепс сотроиис(ь. Еаг!у с(аса |ийсасе сЬас (Ьеье сотроиис(з, рагиси1аг1у йе 8-аииио-5-сЫого-7-РЬеиу! апс( 8-Ьу|(соху-7- РЬепу1 с(епнас!чез, зн!(! Ье изеЕи1 аь 1аЬе1з апс1 со-я|Ъзсгасез Еог с1есессюп оЕ регохЫазе 1аЬе1з. Сотраге|! со !шишо1, йезе сотроиисЬ Ьаче а пшсЬ тоге шсепзе сЬеии1ииипезсепсе (-50- Ео16) (Маьиуа ес а1. 1992). О|ет!!иттеясепсе А9Л9 С!теп|!!ипппеясеп$ Епкугпе А88ау8 АИга!те РЬоярЬа1аяе А|1ашапгу1 1,2-г!1охегапе агу1 РЬоярЬа|ея (е.ц., АМРРЕ|; сцяос!1иш 3-(4-ше|Ьохуяр)го[1,2-йохегапе-3,2'-Гг)сус1о !3.3. 1хг) с!есаи] -4-у1)-РЬепу1РЬоярЬа|е) апс1 |Ье 5- шЪя6|и|е|1 апа1оця (е.ц., 5- сЫого: СВРВП ачацаЫе угогп Тгорис 1пс.) Ьаче Ъесоше ех|геп|е1у рори1аг ая сЬепп1ипипеясеп| яиЪя|га|ея гог аП|ацпе РЬоярЬа|аяе 1аЬе1я (Вгоппе)п е| а1.
1989, 1990, 1991; цсЬаар ес а!. 1989). ТЬе |1е|еспоп 1пш| уог |Ье епху|пе ь 1 хер|огпо!е (10 " шо!ея) апг) |Ье ПВЬг еппяяюп ь 1опц1|че|1 (>1 Ьопг), |Ьгь п|аЫпц й|я ап Ыеа1 яуя|егп гог ияе |ч1|Ь шегпЬгапе-Ъаяег) аяяауя. ТЬе ПВЬг епия|цоп !гоги |Ьця геас6оп сап Ье епЬапсег! Ьу а пу1оп шешЬгапе яигуасе апг! Ъу сег|а)п ро1ушегя, уог ехашр1е, ро1учшу!ЬепхуИЬепху1гП|пе|Ьу1а|п|попшш) сЫог)де. 1п |Ье саяе оу пу1оп, |Ье епЬапсе|пеп| ы)ие |о яеср|ея|еппц ог йе |!ерЬоярЬогу1асес) шсеппесца|е ш Ьу|1горЬоЬ|с г!оша)пя; йеяе ягаЬП)хе апг! пни)ш)хе поп!штипеясеп| |1есошрогц|юп ог йе 1пгегшег!!аге. СЬепп1ипппеясеп| аяяауя Гог аП|ацпе РЬоярЬа|аяе 1аЬе1я аге по|ч |ье|1 |чЫе1у 1ог Ыо|ппц апг! Е))чА яег)пепе)пц (Вес)с апс! Коя|ег 1990; Т)хагс) е| а1. 1990). В-еа!асах!Мазе А<1ашапгу! 1,2-г!!охегапе агу1 ца!ас|ояЫе яиЬя|га|ея (АМРС!3) уог |Ь|я епхуше аге 1псгеагцпц |и рори1агпу.
ТЬе епгуше с1еачея |Ье ца!ас|ояЫе цгопр Ггогп |Ье 3-ро|66оп оу|Ье агоша|к ппц |о ргос)исе а РЬепохЫе 1пгегшег!)аге, апг! й|я сошроипг! |!есогпрояея со ргог!исе ПВЬг. ТЬе г)егесГюп 1ппп уог |Ье епхугпе пгцпц йь а|ьау ь 30 хер|ошо!ея. Ногяегаг!|я!г Регохгг!аве Ьши1по! апг) о|Ьег сус1к г!)асу1Ьу|!гахЫея яегче ая сЬепи1шгппеясеп| сояиЪя|га|ея гог ЬогяегасцяЬ регохн1аяе.
ТЬе Ъа|цс ьоеихугпе ог" ЬогяегасцяЬ регохЫаяе сап Ье аяяауе|1 |п апюппь <5 апопю1ея (5 х 10 " пю1ея) и|цпц ап а|ьау геацеп| сошрпгцпц 1ши|по1, Ьу|1|оцеп регохЫе, ап|1 ап епЬапсег (е.ц., 4-юг)орЬепо! ог 4-Ьу|1гохус)ппаппс асЫ) (ч||Ы|еЬеаг! е| а1. 1983; ТЬогре е| а1. 1985; ТЬогре апг) Кгк!са 1986). ЕиЬапсешеиг ог |Ье асЫк !яоепхуп|ея ог регохЫаяе ь пшсЬ 1е|ь ец:ес6че. ТЬе го1е ог |Ье епЬапсег ь со !псгеаяе йе 1п|еп|6|у оГ |Ье ПВЬг епияяюп ап|1 гег!псе Ьас)гцгоип|1 ПВЬг еии|ьюп |1ие |о охЫа6оп оу !ппппо1 Ьу регохЫе ог ойег охЫапь.
ТЬ!я |!иа! ебесг Ьая <1гап|апс ппрас| оп |Ье дегесг)оп оу регохЫаяе ас6чпу аи|1 шсгеаяея |Ье гапо ог" я)цпа1 со Ъас)гцгоипс) Ъу яечега! |ЬопяапНоЫ 1|Ье епЬапсег) сЬепи1ши!пеясеп| а|ьау геацепь аге ачацаЫе угош АгпегяЬаш). ТЬПя яепяциче аяяау Гог регохЫаяе (>1О-го!6 июге яепе46че |Ьап а со1огипе|пс а|ьау) Ьая Ьееп соп|Ь!пег! ейес||че!у |ч1|Ь йе сага!утес) герогсег |1еро|66оп !САИЭ) рго|осо1 ! "гг'!81е е| а!.
1993). 1п |Ьь агпр66са6ои ясЬегпе, а регохЫаяе 1аЬе1 геас|я |чПЬ а Ъюпп |угапш|е яиЬя|га|е |о ргойке ЬзцЫу геас6че гасцса1 рго|1ис|я йас геас| тч1|Ь гЬе 1аЬе! апг) апу рго|е)п !и |Ье иип|есца|е ч)с)и)гу ог" йе 1аЬе1. Ь)ехС |1еро|6|е|1 Ъюип цгоиря аге геассег) |ч1|Ь яггергач)йпрегохЫаяе (1п |Ь~я |чау, йе ог)ц)па! регохЫаяе 1аЬе! ь агпр66ег! шапуго1о), апс) Ъоипс! РегохЫаяе ь г)егесгег) и|цпц йе еиЬапсе|1 сЬепи1шпшеясеп| аяяау.
51ци16сапг ппргочешепгя !и яепе4|пц|у |чеге асЬ)ечег! ие4пц йе согпЬ|па|юп оуСАК!3 ап|1 сЬеип1шшпеясеп| с)есеспоп ая оррояе|1 со со1- огпие|ис |1есес6оп ог' йе г)ерое4|е|1 регохЫаяе. Хап!!ггпе Охгсгаяе ТЬ)я епхуше сап Ье аяяауе|! игцпц а ипх|иге оГ!ипипо1 ап|1 ап !гоп Е)3ТА со|пр!ех !Ваге| е| а1. 1990; Ваге| аиг) Рег| 1990). ТЬе аяяау 1я яепя1|1че !|1е|еспои!ппи 3 а||ошо1ея), ап|! опе по|аЫе ай ап|аце ыЬа| |Ье ПцЬг егпья)оп !гоги |Ье хап|Ь!пе-охЫаяе-сага1ухе|1 сЬепи!ппппеясепс геас6оп ь чегу 1опц-Пчег! (>96 Ьоигя). В!о)иттетсеисе А9.21 В!ОПЗМПЧЕЬСЕЬ!СЕ В!о1иш!пеасепт ог8апыпа Вепегате ПВЬт (гогп сЬеписа1 геас6опа тЬат аге саса1ухет( Ьу епхушеа саПес1!ист(егааея Мапу от тЬеае геаст!опа аге ехтгетпе1у етбс!епт апт! Ргот(исе аЬош опе РЬосоп рег 1ис(тегаае сус1е.
1п тЬе 1аЬогатогу, 1т8Ьт Вепетатет! Ъу тЬе астюп от" 1ис!тегааеа сап Ье сартигет(, агпр1т6ей апт) шеааигет) ш а 1ипипогпетег. А аепя6че !патгишепс сап т!есест тЬе ПВЬт ргос1исет1 Ъу тЬе аст!ч!ту от 2 х !От 1ис!тегаае шо!еси!еа ( 10 т" гпо1еа), а!ече! йат В аечега! огт(егх от пта8- и!тит(е пюге аепябче йап апу поп-ПВЬт-ргот!ис!п8 ептугпат!с геастюп. Весаые ааааух тот 1ис!тегааеа аге яшр!е то регтотш, 1исттегаае Вепеа Ьаче Ьесоше ччЫе1у паем аа герогтегт тнЬ!сЬ, тнЬеп 1ш)тес) то арргорпате ге8и1атогу е1ешепьи ргочЫе ассигасе шеазигетпепта от йе 1ече1 от Вепе ехргеаяоп. 1п йе аЬогт арасе от' 3 ог 4 уеагя 1ис!тегааеа Ьаче гер1асет) сЫогашрЬепко! асету1тгапатегаае (САТ) аа тЬе герогтет ауатетп от" сЬоке. Аааауа тот 1ис!тегаае аге пюте аепят!че, таатег, апт) 1еах ехрепяче тЬап САТ аааауя тЬеу т!о пот тетрисе тЬе ые от" тат(!о1аЬе!ет) согпроипсЬ апс1 гпау пот шчо1че тЬе с(еатгист!оп от"- йе Ьоат сеПя Еисйегааеа аге тчЫе1у т(!атг!Ьитет( ш па!иге апт! аге сПчегае !п аттис!иге.
ТЬе Ъезт атит(!ет( аге тЬоае от йе сопипоп )н)огтЬ Атпепсап 6гейу РЬоттит руга!6 (РЬоттит 1ис!тет!и 4-пюпо-оху8епаае) апт( йе шаппе ш!сгоог8апып !с!Ьгто Ьагчеут (а))сапа!, гет)исет)-ЕМХ:охЫо охЫогет!истаае). ТЬе ргорег6ез апт( аиЬатгате арест6с!Пеа от' тЬезе ттно 1ис!тегааеа аге чету т(!(Тегепт. Е!ген! у ЕттсЫега8е Е!гебу 1ис!тегаае сата1ухеа тЬе охЫа6че т(есагЬоху1ат!оп от Тт( — ) !ист(епп !п тЬе ргеаепсе отАТР- М8т' со Вепегате оху1исПепп апт! ПВЬт: !ист(епп + АТР-М8т' +!ис!тегаае — > 1ис!тегаае1ис!(егу1-АМР + РР,.
1ис!тегаае:!ис!тету!-АМР + О, — э 1исйегаае -т оху1ис!Уепп -т СО -т АМР -т Ьч (562 птп) Еис!тет(п !а а Вепепс тегш тот аиЬатгатеа тЬат Вепегате 68Ьт т)иг!п8 охЫа6оп сага!утес( Ъу 1истУегааея Еттейу1ис!Уепп, 6-Ьут!гохуЬепхотЬ!ахо!е (о-(-)-(6'Ьут!тоху-2'ЬептотЬ!ато1у1)от-тЬ1- агоПпе-4-сагЬохуПс асЫ) тчаа 6гат !ао!атет( тп риге тотш тгош 6ге6!еа тп !957 Ьу Ви1ег апт1 МсЕ1гоу; 9 тп8 от" риге!ис!тет!и тнаа оЬтатпес1 тгош 15,000 6гейтея 1чотчат)ауя 1ист(епп ь ауптЬеятет) сЬеписаПу, Ргорег6ех о1 Бгейу ЕисИегаье Е!гебу!ис!тегаае ь а 521-апипо-асЫ рготе!и чч!тЬ а ргесПсте6 тпо!еси1аг тче!8Ьт от' 57,000 (с1е ЪЧет ес а1.
1987) йат ь саг8есет! то регох!аошеа !п аП ог8атбяпа тп тчЬ!сЬ тЬе рготе!и ь ехргеаает! (КеПег ет а1. 1987; тот геч!еъч, р1еате аее бои!6 апт1 5иЬгагпаш 1988). ТЬе шетпЬгапе-Ьоипс1 па!иге от" регохьотпеа ипт(оиЪсетПу 1ип!ь ассеаа от аиЬатгатеа (1ис!(епп апт1 АТР) то тЬе ептуше апт! тпау ассоипт тот йе!очч !ене1 от ПВЬт ргот)исес! тчЬеп 6гейу 1ис!тетке ь ааааует( ш тптаст шапипаПап сеПа (т1е Хет ет а1. 1987; Сои!6 апт! 5иЪгашаш 1988).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
