Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 162
Текст из файла (страница 162)
11 ь 1Ьеге(оге пос роя(Ые со ргейс1 сЬе еГ6слепсу ичсЬ иЬ(сЬ а 8)чеп ро1ус1опа1 апс)аеппп ичП с1есесс йКегепс ап68епк ер(сореа оГ ап ипгпоЬП(хей депагигед 1аг8е1 ргогелп. А!16ои8Ь !Веге (а ап оЬч!оиа бап8ег ш ияп8 ипбеГлпег$ геа8епь со аяау а саг8ес ргосеш 1Ьас плау а1ео Ье роог!у сЬагассепхей шоас ргоЫепь 1Ьас агье лч)сЬ лчеасегп Ыос6п8 1п ргасслсе сап Ье ао1чес) Ьу Пея8п(п8 абел)пасе сопсго!я ТЬеее шс1ис1е 1Ье гье оГ ( 1) апс!Ъоб(еа (Ге., ргеиппшпе еега, погпса1 аега, ог (гге1енапс июпос1опа$ апс(Ьо6(ее) 1Ьас аЬои16 пос геасс мчсЬ 16е саг8ес ргосе(п апс1 (2) сои!го! ргерагас(опа 16ас е(16ег сопса(п )сполчп агпоипь оГ лагос апс(8еп ог 1ас1с л1 а11о8еСЬег. Ойеп, 1Ьеге ь 161!е сЬолсе оГ ппшипо!о8(са1 геа8епса Гог лчеасегп Ыосбп8 — и Га ялпр1у песеяагу со лчог)г лч(сЬ лчЬасечег апс(Ьог$)еа аге ас Ьапй Нолчечег, лГ а сЬоке )е ачал1аЫе, елсЬег а ЬлВЬ-6сег ро!ус!опа! апс(аеппп ог а пихсиге оГ плопос!опа1 апс(Ьо6(еа га(аед а8а)пас сЬе с(епасиге6 ргосеш еЬои16 Ъе сией КеПапсе оп а яп8!е пюпос1опа! апс!Ъо6у ь Ьахагбоиа Ьесасье оГ 1Ье Ь(8Ь Ггел)иепсу оГ аригюгь сгоя-геасс(опе лч(сЬ лгге1ечапс рго1ешя !Г, аа ь игшаПу 1Ье саае, шопос!опа1 апс1 ро!ус!опа! апс)Ъо6!еа Ьаче Ьееп га(ае6 а8а)пас пасгче саг8е1 ргосеис, П ичП Ье песеяагу со чеглГу сЬас сЬеу геасс лч(сЬ ер(сореа 16ас еиЬег (! ) геяя депасигас!оп ичсЬ 8Р8 апс1 гедис(п8 а8епь ог (2) аге сгеасед Ьу ешсЬ сгеасплепс.
ТЬ)е сея сап Ье Попе Ьу ияп8 г)епасиге6 1аг8ес ап68еп ш а ао1Ы-РЬаае гайоиппшпоаяау ог ш лчеяегп атос Ыося 1п счеесегп Ыос6п8, сЬе аашр1еа со Ье аяауе6 аге ео1иЬл!гхес1 ъчсЬ десег8епсе апс$ гедис)п8 а8епся аерагасе6 Ьу 8Р8-ро)уасгу1аш!Пе 8е! е!ессгорЬогеяя апс! !сапа(еггес$ со а ао!Ы аиррогс (сьиаПу а шсгосеПи!оае ог РЧРЕ 61сег), лчЬкЬ лпау сЬеп Ье аса)пес$ (е.8., лч!1Ь Ропсеаи Я). ТЬе 611ег ь ялЪаес)иепс1у ехроае6 со ип!аЪе1ес1 апс!Ьоб(еа ареслТлс Гог сЬе саг8ес ргоселп. Р(паПу, 1Ье Ьоипд апс!Ьоду !а десессес1 Ъу опе оГ аечега1 зесопс(агу иппшпо1орса! геа8епсз (е.8., ллл1- 1аЬе!ег$ ог ап6-иппшпо81оЬиПп, ог ап6-иппшпо8!оЬи!ш ог ргоселп А соир!ед со Ьогаегаб(зЬ регох)6аае ог аПса1ше РЬоарЬасаае), ГоПолче6 Ъу аисогайо8гарЬу, епЬапсес! сЬепи1ипипея сепсе, ог епхушас(с ргодисс)оп оГ а со1оге6 ргес(риасе.
Аа 1ис1е аа 1-5 п8 оГ ап ачега8е-а(лед ргогеш сап Ье бегесгес) Ьу лчеагегп Ыоиш8. Рог гпоге шГоппа6оп оп лчеагегп Ыо16п8, р!еаае еее Аррепйх 8. Алтт!тот(тет А9.29 Еттипоргес(р|Еа ЕЕоп 1гпшипоргес!р)са6оп Еа чье|1 со т)есесс а«6 т!иа«6сасе сагиес апс!цепа |п ппхсигеа оЕ ргосешя ТЬе роъчег оЕ сЬе сесЬп(т)ие Пеа ш «а ае!есбч«у: ТЬе арес!Пс«у оЕ |Ье «ппшпоц!оЬи!ш Еог Пз 1фа«6 ь ю Ь)иЬ йас |Ье геаи!с!пи апс!реп-а«6Ъот)у сошр!ехеа сап Ъе рипйе|1 (топ| сопсапппас)пд ргосе|пя Риг|Ьегшоге, иппшпоргестр«абоп !а ехсгеп|е1у аепа!с(че ап|1 !а сараЫе оЕ десесс)пи аа 1«- с!е аа 100 рц оЕ гагПо1аЬе1ед рготеш.
ътътЬеп спор!ей ъч)СЬ ЮБ-ро!уасгу1аппс1е ае! е!естгорЬогеяа, йе сесЬ«!ъ!ие ь !т)еа! Еог апа1уыа оЕ сЬе зупсЬеях апд ргосеяящ оЕ Еоге!ип апс)репа ехрге|ье6 ш рго)тагуос!е апд еи)тагуос!е Ьоаса ог ш |и ч«го зузсешя ТЬе сагиес ргосе!и ь июаПу птппипоргес!р)саге|) Егоп| ехсгасса оЕ се1Ь |Ьас Ьаче Ъееп гатП- о1аЪе1ей Но|нечет, пппшпоргес|р«асюп сап а1ао Ье паем со апа!ухе и«1аЬе!е6 ргосеша аа 1опц аа юйк(еп|1у аепяс!че шесЬоба аге ачаПаЫе со т!есесс йе тагес ргосеш аЕсег П Ьаа Ъееп 6)аюс(- асет( (топ| йе а«6Ъос)у.
ЯисЬ |песЬотЬ !«с1ис1е епхушас!е асс(н)су, Ъ!пйпи оЕ гагПоасс|че!агап|!я апс1 ънеасегп Ыо|6«и. БоИ-рЕтахе КатЕЕоиптипоаихау ТЬе юП|1-р!тахе гагПо)пипшшатьау (тъ1А) ь а Чиапс)сассче ||тес)тот( йа| ь еараЫе оЕ ъ)есеес)ттц аа Псс!е аз ! ри оЕ тагес апс!иеп. ТЬ(а тпеапа |Ьас К1Аа аге ыЕПстеп|1у аепяс|че со шеая|ге, Еог ехаспр1е, сЬе ап|оипс оЕ Еоте!цп ргосе!и ргот)исет) Ьу сгапаЕессет) п|апппаПап сеП си!сигея ТЬеге аге шапу т)!ЕЕегепс )т(птЬ оЕ ИАя ъчЬкЬ ЕаП п«о Еоиг Ьаа)с т)еяипя ° Сошреппоп ЯЕАя 1п сЬыпесЬой |Ье ип!аЬе1ет) тагес ргосеш ш йе сеас аашр1е сошресех ъч«Ь а сипата«с агпоипс оЕ гагПо1аЬе!ед ргосеш Еог Ьшт)1«и ясеа оп йе апс!Ьоду. ТЬе апшипс оЕ гас!(пасс(н(су ргезепс !п йе ипЬоип|1 ог Ьоипт( тагес ргосе|п Еа йеп тпеааигей ТЬ)з суре оЕ а|ьау сап Ье ехсгетпе!у аепяс)не Ьис гет)и!геа йас тагес ргосеш Ье ачаПаЫе (ргеЕегаЫу |и а риге Еопп) со аегче Ьо|Ь аа а сошрес!сот а«6 аа а агап|!агй ° Ешшо)тт!тхетЕ аит(ахеи Я1Ая 1п сЬ)а |пе|Ьо|1, ип1аЪе1е|! апс!аеп ь ассасЬе6 со а аоПт) юррогс а«6 ехроает) со гагПо1аЪе1е|1 апс!Ьот!у.
Со|прап|оп оЕ |Ье ап|оипс оЕ гатПоасс)н)су йас Ь!п<Ь арес)ПсаПу со сЬе татпр1ех ип|1ег сеас ън)сЬ сЬе атпоипс |Ьас Ь!птЬ со а 1|поънп ап|оипс о( пп|поЬ|1ьед а«6деп аПоъна |Ье апс(иеп 1« йе сеас аашр!еа со Ъе т)иапс!гасе|(. А)сЬоииЬ пает) огеаяопаПу, сЬ|а суре оЕ атьау ь пос рагс)си!аг1у |ьеЕ«1 Еог т)иапс)сас)оп оЕ япаП ашоипь оЕ Еоге!ип ргосе!и !п сошр1ех пихштеа (е.и., !п сеП 1уаасез); тпоас оЕ |Ье Ь!пт)1«и ясеа оп тЬе юПт! ыррогс Ьесогпе отпор|ей Ьу ргосе)пз о|Ьег сЬап йе сагдес ргосеш, ю сЬас сЬе аепяс!н)су оЕ |Ье атьау !а сошрагас!не!у !оъч.
° Етт«Ь|!!ге|! апт!Ьойу ИАя !п сЬыпесЬот), а а!пи!е апс!Ьобу Ьоипд со а юПъ! мррогс ь ехроает) со гагПо!аЬе1е6 апс(иеп. ТЬе ашоипс оЕ апс!иеп ш йе секс аашр!е сап Ье т)есегпипет! Ъу йе ап|оипт оЕ га6(оассМсу |Ьас Ь)пт)а со сЬе а«6Ьот)у. ТЬ(а а|ьау (а пос иаеуи! Еог т)паис!- гас!«Е! йе ашоипс оЕ Еоге)ап ргосеш ш п|апу ъ!(йегепс аатпр1ея сЬ)ейу Ъесаиае оЕ йе ргас6- са! т!1ЕПс«1су оЕ та|По!аЬе!шц йе ргосеш е«Ьег ш нтно ог ш ч«го. ° РоиЫе-апгтЬотЕу 1|1Ая!п сЬ)а шесЬод, опе а«6Ьот)у Ьоипт! со а юПт) аирроп ь ехрохет) со йе ип1аЪе1е|! сагиес ргосе|п.
АЕсег ъчааЬ!пд, йе сагиес ргосе|п Ьоипт( со сЬе ппшоЪ|!|хе« ап6- Ьот(у ь т)иапс!тагес) ъч)сЬ ап ехсеть оЕ а зесотст) гагПо!аЬе1е|1 ап6Ьос)у. ТЬ!а аааау ь ехсгеп|е1у аепяс)че а«6 арес|Пс Ьесаиае сЬе сагиес ргосе|п ь есьепбаПу рипйе|1 апт) сопсепсгасет( Ьу ипшипоайъогрт!оп. Риг|Ьегшоге, п|апу Сеат аашр!еа сап Ье ргосе|ьед яши!тапеоиа1у.
Ночтечег, |Ье шесЬот) гет)и(геа сЬас сЬе Пгя апт) аесопт! апс|ЬогПеа тесова«!хе по«пнет!арр!пи ер(сореа оп сЬе сагиес ргосеш. 1|1еаПу, |Ье Пгас апс!Ьот(у (а шопос1опа1, ъчЬегеаа сЬе аесопт( сап Ье е«Ьег а ро!ус1опа! апс!Ьо«у ог а шопос1опа1 апс!Ъот)у оЕ 6!йегепс арес!Етс)су. Но|нечет, ш А9.30 Арреайх 9| Регесг!оп Букгепь коте сакек, П тау Ье рокяЫе го |ье |Ье кате ро1ус1опа! ап6Ьоду Гог Ъо|Ь раг|к оГ |Ье аккау. 1Г кш|аЫе ап6Ьойек аге анаПаЫе, |В~к )к |Ье |пе|Ьо|1 оГ сЬо|се Гог л!иапг(гаг(оп оГ |аг8е| рго|ешк |и сотр1ех пихгигек.
Кайо!аЬе! 1щ оГ Ап6Ьойе8 ОГ |Ье кечега! |пе|Ьобк |Ьа| аге анаПаЫе |о гайоюйпа|е ап6Ьойек, |Ье ток| сопипоп!у ике6 ь а геас|юп |и лчЬ!сЬ ап е1ес|горЬ~!|с юйпе крее)ек ь Пепегагеб Ъу ох!Па6оп оГ Ха'лк! лч!|Ь сЫогапипе-Т (лн-сЫогоЪепхепеки1(ипат!Пе). ТЬе роябче1у сЬаг8ед юйпе |Ьеп геась лн(гЬ г Ье к!г(е сЬа|пк оГ |угоку1, ап6 |о а 1еккег ех|епг, ЬыЫу1 гек!Пиек (Гог геч!е|ч, р!еаке кее 8еенегк ап|1 СоипкеП 1982).
1ойпа|юп Ъу сЫогапипе-Т |чак Аеч!ке6 ак а те|Ьод |о 1аЬе1 япаП апюипп оГ ро1урер66е Ьогтопек |о чегу Ь18Ь крее|Тле ас6чиу (Нипгег апг! Сгееплноод 1962; Сгееплчоос( е| а1. 1963). Нолнечег, | Ье геас|юп сопйбопк аге ко кечеге ак го саике ехгепяче депашгабоп оГ ргосешк |Па| аге кепябче |о охЫабоп. ТЬе тоййе|1 ргосесЬлге с)ен!кег! Ьу МсСопаЬеу ап|1 Гл(хоп (1966, 1980), |нЬ!сЬ гьек 1о|чег сопсеп|га|юпк оГ сЫогапипе-Т аглг( 1оп8ег геас6оп |опек, у(е1г(к па6че рго|е(пк лч!|Ьоиг а я8п!Псап| 1окк |п |Ье еГГ|с(епсу оГ гайо1аЬеПп8. Ыолнабаук, пюкг шчек68а|огк ргеГег |о ике сЫогат|пе-Т соча!еп|1у соглр1ед |о попрого|ь ро1ук|угепе Ьеаг(к (!ос1оЬеабк, Р|егсе) (Маг)слчеП 1982).
ТЬ|к Ьак кечега! Ьепей|я П ге|Ьлсек гЬе атоипг оГ гайо!аЬе1е|1 то1еси1аг юйпе Пепегагед ш ГЬе геас|юп ап|1 кппр1|Т|ек теакигегпепь оГ |Ье 6те соигке ап6 очегаП ейю|епсу оГ га|1ююйпа6оп (СЬеп8 апд Кийс1| 1991). 1п асЫ(Г(оп, Ьесаике |Веге !к негу 166е соп|ас| Ъе||чееп |Ье рго|еш ап|1 | Ье охЫппп8 а8епг, охи)абче с1ата8е |о ГЬе ргоге|п !к т(п(т(хей Р(паПу, ъчЬеп юйпагюп ь сагпе|1 ош ассог6!п8 |о к|ап|1аг|1 ргогосо1к, по гпоге |Ьап опе а|от оГ '|к! ь !псогрогаГед рег рго|е|п то!еси1е, Соп(оппабопа1 йк|ог6опк сагье6 Ъу ГЬе |п|гойю|юп оГ а ЬиП|у юйпе аго|п аге |Ьеге(оге 1|ерг со а |тпипшп. Ап а1|егпа6че |о сЫогапипе-Т ь !одо8еп (1,3,4,6-|е|гасЫого-3а,ба-йрЬепу181усоигП), ап охЫ|ап8 геа8епс гекетЫш8 а Гоиг(оЫ сЫогапипе-Т (Ега)сег апг! 8рес)с 1978), !ос!о8еп (к краг!п81у ко1иЫе |и |налег ап|1 Гоппк а |Ь|п соа6п8 оп | Ье |чаП оГ |Ье |иЬе икед Гог гайоюйпа6оп.
Яо1Ы-РЬаке геа8епь яюЬ ак !ойо8еп ап6 !одоЬеас)к (ачаПаЫе Ггот Р|егсе) 8(че гайосЬеписа1 у!е16к |Ьас аге есрла1 го |Ьоке оЬ|аше6 |н!|Ь Ггее сЫогапипе-Т (Ч~о1гапк)с) е| а!. 1990) лчЬ|1е я8тйсаппу ге|Ьлсш8 |Ье ро|епба1 Гог ехрокиге оГ 1аЪогасогу |ног1|егк |о чо1а6!е Гоппк оГ гайоюйпе.
Кайоюб!пагюп чп|Ь сЫогапипе-Т ап6 япи1аг сотроипбк чНП пос |ног1| лч(гЬ ргоге|пк апд рер|Ыек |Ьа| 1ас)с ассекяЫе |угояпек ог аге ех|гете1у к|ьсер6Ые го Пата8е Ъу охЫабоп. ТЬеке рго|е|пк кЬои16 Ье 1аЬе1е|1 Ьу |Ье Во1|оп-Нип|ег геа8епг (Во!соп ап6 Нип|ег 1973). ТЬе )и'-кисе(пат(6у! Пгоир оГ ГЬь геа8епг ()и'-киссшагп16у1 3-(4-Ьубгоху 5-['лкЦюс1орЬепуЦргор1- опаге) сопбепкек лч!|Ь Ггее апппо Пгоирк апс1 лч!|Ь ~пипо 8гоирк ш 1уку! к!Пе сЬа|пк го 8(че а Пепчабче !п |нЬ|сЬ ГЬе гайоюйпагед РЬепу1 Пгоир !к Пп)сег) ч(а ап атЫе Вопд |о |Ье |аг8ес рго|еш (Гог тоге де|аПк, р1еаке кее 1ап8опе 1980; Наг!олч ап|1 |апе 1988). АпГ!рерГЫе АпГ!Ьойе8 1Г |Ье кег)иепсе оГ а ргосеш ь )гполчп ог сап Ье Пебисе6 Ггот | Ье пис1е(с асЫ кег!иепсе, крее|Тле ап|ьега сап Ье га!ке6 Ъу пптип)хЬ|8 апипа1к лч(гЬ а куп|Ье||с рер|Ые соггекроп6!п8 |и кег!иепсе |о а ке8тепг оГ ГЬе пабче рго|е!и (Гог геч)елч, р1еаке кее 1егпег 1984).
1Г !пГоппа6оп аЬоиг |Ье ргипагу кесрлепсе оГ |Ье саг8е| рго|е|п Ь !пппб, |Ьеге п|ау Ье 1П|1е ог по сЬо!се !п |Ье рер|Ые кел!иепсе окей ак ап !ттипо8еп. Нолчечег, |Веге ь а 8оос) сЬапсе |Ьа| рер|п4ек сЬокеп а| гапдот чНП Ье аг 1еак| раг6аПу Ьипеб !п |Ье пабче рго|е(п ап6 |Ьеу тау Ъе гоо ЬудгорЬоЪ|с |о Ъе АОПЬайек А9.31 О, и! ч,я ч МР м' Я, О, ЧЧ РН им,чг Р с м,я и Л а а а а а а Ъ и т,з чч, ч н,з т Р ч о О,Е т,з в,ч Р' Н,К,О Е,Н о Е!Се)(ЕЕ А9-3 Нут(горЬОЫс!(у 5са!ек РН О, О, Е 5ечега! Ьут)горЬОЫс(ту кса)ек, арргохкпате!у иоггпа(- 'вел Со еасЬ отЬег апт1 (псгеак)п8 (гош Ьоиош то тор. 0ата (гоги (а) )аи(и (1979); (Ь) ЧЧО)(еис(еп ет а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
