Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 159
Текст из файла (страница 159)
Ре1ет!оп ог ппиатюп от' йе йгее сагЬоху-тегпипа1 апипо асЫ геаЫиеа Вепегатеа сутото1к Гогпь от тЬе епхуше. 5ечега1 от тЬеае сутор1аятис пютапь арреат со тета!и йП ептутпат!с асттчПу (Сои!6 апт! 5иЪгатпап! !988), Ьит В ь пот ует )спотнп тчЬетЬег йеу аге пюге ассеаа!Ые то аиЬатгасеа йас аге атЫет! то тЬе ехттасеПи1аг шее)!иш. 1п асЫ!т!оп со со1егатш8 сЬап8еа ат ть сагЬоху! тетпипия 6гебу!ис!тетке тч61 ассерт а!тегат!опа со ть апипо сегпипия ТЬе епхуше Ьаа Ьееп ехргеаает( ш Е. соВ (1) аа а тияоп рготеш йат !ас)ь йе Птгат ях апипо асЫа от 1ис!тегаае апт! сиота!пз е!ВЬт апипо-тетш!па! геа!т!иеа епсот1ес1 Ьу йе ехргеаяоп честог апс( йе аупйе6с о68опттс1еотЫе ыет! тот с!ошп8 (т!е чттет ет а!. 1985) апт( (2) аа а 92-)сР йяоп чч!тЬ а шос66ес1 5тарЬу1ососсит аитеит А рготе!и (5иЬгашапт апт( А9.22 Аррепйх 9: Регесглюп 5уяепь РеЕиса 1988).
А лег!еа оу еи)сагуог!с ехргеаяоп чесгога 1ог теааиг!пц ргопюгег аггепцгЬ Ьаа Ьееп г!ене1орег! Ьу Ргоплеца. А раг6си!аг1у иаей1 чегяоп, гЬе Риа1 Еис!1егаае Кероггег Аааау 5уагет 1РКЬ), епсодез гъчо 1ис!1егааея опе угот гЬе Пгейу апг1 йе ойег Егот гЬе аеа рапау (Аеп!Па гешблпилл). ТЬ)а г)иа! герогсег аааау ргочЫеа а сопчеплепг лпсегпа1 агапе)агд 1ог поппа!- !гаг!оп оу цепе ехргеяцоп теааигегпепгя Е!гебу 1ис)легаае, !ао!агег! епЬег Егопл 6геРПеа ог Егогп Е. соП ехргеаяпц а с1опег) сору оулЬе 1ис)уегаае репе, ь ачал!аЫе сопипегслацу 1ВоеЬппцег МаппЬепп, 5!цта, апг) Ргоплеца).
А ао!и6оп оу рог!Плед 6гебу !ис11егаае 11 тат!) Ьаа ап аЬаогЬапсе аг 280 пгп оу 0.75 1Ре1ллса апс1 МсЕ!гоу 1978). А88ауз аког Бгейу ЕисЫегаье Еитиюте1гу АгЫРПоп оуАТР апг! 1ис!1еПп со ргерагаг!опа оГ 6гебу 1ислуегазе цепегасех а ПааЬ оу ПцЬг гЬаг реа)са 0.3 аесопг) 1агег апъ1 1аага уог а Ееъч аесопця 'чч'Ыип 1 пипше айег пихшц ялЬ- а!гале апг) епхуте, йе шлепягу ойЬе епилгеъ) ППЬг уа1Ь го -1088 оГ реа1с ча1иеа апъ! гЬеп г1есПпез тоге а!оъч1у очег а репой оу аечега1 пппигея ТЬе ъ1есау лп !лцЬг етьяоп ь сагьег1 Ъу а1оьч Гигпочег оу йе епхуте апъ1 ргосЬлсл лпЬлЬ!Гюп Ьу ругорЬоарЬале (РеЕиса апг! МсЕ!гоу 1978).
Рььосла6оп оГ гЬе епгуте-ргоь!исг сотр!ех оссига тоге ейк!епг1у ш гЬе ргеаепсе оГ асегу1 — соепхуте А 1СоА) ('ччоог! 1991) апс1 попюпк г)есегцепга якЬ аа Тпгоп Х-100 (Кг!с)са апг) Ре1ллса 1982). ТЬе сопсеплга6оп о1АТР ш йе аааау абесЬ ГЬе лплепялу о168ЬГ ргог)осев ил гЬе гъчо РЬааеа оу йе геас6оп. Р!гебу 1исйегаае Ьаа гъчо ъ)!ал!пег, сага1у6саПу асбче АТР-Ыпй шц ягея Опе яге Ь геаропяЫе уог гЬе ии6а1 ПааЬ, ъчЬегеаа йе аесопг), ъчЬ!сЬ Ьаа а ЫПЬег айлппу Еог АТР, ь шчо1чег1 !п йе соп6пиоиа ргодис6оп оГ ПцЫ оу!оъчег шгепягу 1РеЕиса апд МсЕ1гоу 1984). Аааауа 1ог!ис)уегазе цепегацу сопгаш сопсепгга6опа оГ АТР гЬаг аге вийк!епл го аагигаге Ьой ягеа оГ йе епхуте, 1лпс)ег гЬеае сопсцпопя йе атоипс оу ППЬг епипеъ1 диппц йе !пгца! ПааЬ ь ргорог6опа1 го гЬе аплоипг оГ епхуте ш йе геасгюп пихшге очег Пче огг!ега оу плацпци<1е.
Весаиае оу гЬе аЬогг дигагюп оу гЬе !пцца1 ПааЬ, тоаг аааауа 1ог 1ис!Еегаае геъ)и!ге арес)а1 1ипппогпегега гЬаг аге ъ!еяцпег! со ацоъч 1п)есг!оп апг1 гарЫ ппхшц оГ геацепь апг! лпипесцаге апа)уяв о1 лЬе епиггеъ) ПВЬг. А тог!егасе1у рпсе6 !штпоплесег сап ъ)егесг аа !Пг1е аа 0.03-0.10 рц о11ис!Еегаае. Ап !тргочеъ) 1ис)уегаае аааау ауагет ь ачал!аЫе Егогп Ргогпеца. ТЬе ауагет цепегасеа а Ьигаг оу ППЬг ъчЬоае шлеп.Пу геплалпа пеаг!у сопагапл Еог -20 аесопг!а апг! йеп ъ!есауа а1оъч1у ъч!гЬ а ЬаИ'-гипе оу 5 — 10 пппшея ТЬеае гпоге ЕачогаЫе Рцпегка аге асЫечег) Ьу шс1исцпц Тпгоп Х-100 апс1 аселу1-СоА ш гЬе аааау ауагегп.
Еис)уег!и ь охЫгхес1 гпоге е1Тк!еп11у Ъу 1ис!Гегу!-СоА гЬап Ъу 1ис)уегу1-АМР (Чгоог! 1991). ТЬе епипес1 68Ьг сап Ье теааигег) еПЬег !п а !шп)потегег ог 1п а 1щш6 асшППагюп соипгег. ЕлдиЫ ислпбПа1лоп хрес1гохсору. 11 а 1итгпотегег ь пог анацаЫе, 6гейу 1ис11егаае сап Ъе аааауег) ш а сопнеп6опа1 1щшд ас!п66а6оп соипсег. аеас!!оп сопс66опа Ьане Ьееп герогсег! йаг пипппгхе гЬе !пгепягу оу гЬе лт6а1 ПааЬ апъ) ор6пихе йе 1опц-!аа6пц ет)аяоп оГ !оъч-!плепа!гу 68Ьг Ьу 6гецу 1ис11егаае Щиуеп ег а1. 1988). ТЬе геас6опа аге сагг!ег! оиг лп писгойлце гиЬеа ог 96-ъчеП р1агеа (5сЬъчаггг ег а1.
1990), апг! гЬе елп!ггег! ППЬг ыпеааигес) !п а сЬаппе1 оу а ас!пгП!а6оп соипгег йаг ъ!егесь сЬетципипеасепсе. Соцесгюп оу с1ага Ьец!пх а уеъч аесоп<Ь айег йе геацепь Ьаче Ьееп т!хеъ! апъ! соп6пиез уог 3 — 5 пцпигея 1Упг)ег оргипа1 сопйбопя теааигегпепг оК 1опц-!аа6пц епиаяоп о1 ППЬг лп а ас!пг61агюп соипсег ь аа аепя6че ап аааау уог 6гейу 1ис)уегаае аа 1ипипотеггу. 5оте ас)пгц!аг!оп соипгега аге пол ецшрреъ) ъчпЬ а ргеаег сЬаппе1 уог г1елесбоп оусЬепи1ит!пеасепсе.
Ноъчечег, гЬе агапг!агг) сЬаппе!а ньето 1ог соипгшц оуагоплк сцяпгецгагюп сап Ье чье !ог аахау о11ислуегаае ргочЫег! гЬе солпсЫепсе слгсшл ь гигпег! о6; ТЬе соипга рег пипиге аге йеп ргорог6опа1 го йе шгепягу о11ипипеасепсе. 11 йе солпсЫепсе слгсшг саппог Ье гигпег! ВЫ1итЕиеьсепсе А9.23 оЕЕ, лЬе 1илепягу оЕ 1ппипеьсепсе лч111 Ье ргороггюпа1 со лЬе ьсрлаге гоог оЕ лЬе сопигь рег пипиле аЕлег Ьас)с8гоипс! Ьаь Ьееп ьиЬггасгей РИоЕодгарулЕс апсЕ Х-гау Ят. р)гейу !ис)Еегаье сап Ье с!егеслел! Ъу ехрояп8 йе 118ЬЕ-ет)лг!и8 геаслюп го Х-гау ог рЬосо8гарЬ~с 61гпь 1с)е ллгес ег а!. 1986; 1'лгпи апс1 13е1иса 1987).
ТЫь гпеГЬос) Еь иьеЬл! Еог рге!пшпагу ьсгеешп8 оЕ ьатр1еь Еог ГЬе ргеьепсе ог аЪьепсе оЕ Вгейу 1ис)Еегаье 1е.8., ьсгееп)п8 6ььие ехсгасгь оЕ ггаиь8ешс апппа!ь ог еь6гпа6п8 лЬе ге!а6че еЕЕлс)епслеь оЕ а ьепеь оЕ гпилапл ргопюгегь). РЕгеЕЕу ЕисЫегазе аь а Кероггег Мо!еси!е ТЬе иье оЕ!ис)Еегаье аь а герогсег депе Ео!1олчь йе ьате Ьаяс ьггасе8у л!ече1орел! Еог ойег героггег Вепе ьуьлетя 1п ЪпеЕ, а ье8тепг оЕ Ел)чА соплалп)п8 рилабче ге8и1алогу сы-асбп8 е1етепгь 1ь лпьеглес1 !иго а р1аяпЫ ирьггеат оЕ а с!опес1 сору оЕ!ис1Еегаье сул!ь)А. ТЬе сЬппегк сопьлгисг гь пьес) со ггапьЕесс си1илгес1 се1!ь оЕ йе арргорпасе суре, апл! 1ислЕегаье ас6Ыгу гь аььауел! ьоте гппе 1асег 1п ехлгасгь оЕ гЬе сгапьЕесгел! се!!ь.
ЪчЬеи лЬе аььау 1ь сагпе6 оиг 1и гЬе ргеьепсе оЕ ехсеьь ьпЬьггагеь, йе аиюипл оЕ 1ипппеьсепсе 1ь ргороггюпа1 го гЬе сопсепсга6оп оЕ пелч1у ьупйеяхед еплугпе. Весаоье ехлгасгь аге 11)се!у го сопгаш АТР, лчЬоье сопсепсгал)оп 1ь ип)споччп, 1ис)Еегаье 1ь Вепега11у теаьигел! Ъу абсВп8 !исраел)п аь лЬе 1аьг ьиЪьггаге. Рготогег1еьь ехргеььлоп чесгогь Еог!ис)Еегаье Ьаче Ьееп с1еьспЬе6 Ьу Ь)огс!ееп 11988).
Апойег япгайе р!аяиЫ, рбЕМ1ис, ьо!д Ьу Ргогпе8а, сопгашь йе Вгейу 1пслЕегаье 8епе роялюпел) лп йе сепсег оЕ йе пш16р1е с1оиш8 ге81оп оЕ рСВМ-11УЕ( — ). Си!шгеь оЕ тапипа11аи се!1ь (2 х 10ь се!1ь) лгапьЕессел) Ьу гЬе са1сшгп рЬоьрЬаге гпегЬос1 лч)гЬ а героггег сопягисг ш лчЬкЬ ехргеьяоп оЕ Вгейу 1ис)Еегаье 1ь 6ггчеп Ьу а тос!егаге1у ьлгоп8 ргопюгег ргос!исе -15 — 50 п8 оЕ 1ис)Еегаье. Ьцс)Еегаье асбч)гу гь яаке Еог ьечега! лчее)сь ш ехггасгь оЕ се11ь ьлогес! ал 4'С. 1пс)Еегаье лчаь Вгя пьем ли 1988 аь а героггег Еог ргогпогег ас6ч)гу 1и ггапь8епк писе 113й.е11а ег а1. 1988). Япсе йеп, и Ьаь Ъееп пьес! ьисеььЕи!!у аь а герогсег го илеаьиге гЬе л!ььпе ьрес)Всиу, с1ече1орплепса1 ехргеьяоп, апс1 ьггеп8гЬ оЕ тоге йап а л)охеп л!1йегепл ргоиюлегь ш ггапь8епк апипа1ь.
1ис)Еегаье 1ь соиппоп!у иье6 аь а героггег го 1осаге апс! апа1ухе ге8и1агогу е1егиепль 1и тапппа11ап Вепеь Ее.8., р!еаье ьее чап Хоппече!6 ег а1. 1988; Всополпоп ег а!. 1989; Нис)ьоп ег а1. 1989). 1п асЫЬюп, 1ис)Еегаье Ьаь Ьееп иьел1 11) го Ыепл)Еу рголешь гЬаг шЕ)иепсе Вепе ггапьспр6оп (Ч'агегтап ел а1. 1988; Ме!1оп ег а1. 1989), 12) го шчеь68але лЬе еЕЕесль оЕ тлс)чА ьггисгиге оп ргогеш ьупйеяь ЕВаиВЬтап аис1 Ночче11 1988; Ма!опе ег а1. 1989), апс) 13) го лпеаьиге гагеь оЕ гпггасе11и!аг ргогеш гесус!ш8 Щиуеп ел а1. 1989). Ьит)потесг)с теаьигетепгь саи с)егесг -5 х 10' пю1еси1еь оЕ 1ислЕегаье 1и 10 гп8 оЕ ргоселп лп а сгпс!е 6ььие ехггасг, лчубсЬ ль а ВчеЕо!д лпсгеаье ш ьепя6чпу очег аььауь Еог САТ асгпбгу лп 6ььие ехлгасгь (ВоЬ)пьоп ес а1.
1989). Вас1ег1а! 1.Ос1Еегаье Ьис)Еегаье оЕ Ъ'лЬг)о Ьагчеу1 1ь а Ьегегос!1тег лчЬоье а апс! )3 ьиЬип)гь (355 апс! 324 апипо асЫь, геьрес6че1у) аге епсос)ес) Ъу йе Ъаслепа1 1ихА апс) 1ихВ Вепеь. ТЬеье Вепеь, лчЬ~сЬ аге рагл оЕ ап орегоп ЕВе1аь ег а1. 1982; Еог геч1еы, р1еаье ьее 7ле81ег аис! Ва!длч)п 1981), Ьаче Ьееп с1опес), ьесрлепсей, аллс! ехргеььес), Ягьг лп Е. соВ (Ва1сЬч)п ег а1. 1984; СоЬп ел а1. 1985; )оЬпьгоп ег а1.
1986) апс1 гЬеп ш р!апгь, ччЬеге гЬе 1ихА апс1 1ихВ сльггопь лчеге р1асес! с)олчпьггеат Егопл лччо ьерагаге ргоиюгег е1етепгь ЕКопсг ег а1. 1987). ТЬе легиипабоп сол1оп оЕ 1ихА апл! гЬе ьЬогл 1илегс)ьлгопк с!1ьгапсе ьерага6п8 )ихА апс1 1ихВ Ьаче Ъееп гер!асес! Ьу ьесрлепсеь епсос)1п8 ро1урергЫе 11п1сегь 1Воу1ап ег а1. 1989; К)гсЬпег ег а1. 1989). ТЬе геьп16п8 Еиьес) 1ихА апл! ЕихВ Веиеь ехргеьь 1иф1у ас6че 1ис)Еегаье йаг сап Ье аььауес) ш уеаьс Е. со)л, апс1 р1апг се11ь.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
