Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 164
Текст из файла (страница 164)
ТаЫе А9-5 яипгпапгеа )Ье ехсЬагюп апг) ет)аяоп хаче1епВ(Ьз оЕ чаг)оиа Йио- госЬготея Егиоаоснаоме Ехс~тдт1ом ЪЧсюгсенстн (пш) Е6055юм ЪЧАчегемсгн (пп1) Г)иогезсегп КЬобаш)пе Техас Кед Оге8оп бгееп К-РЬусоегугЬпп ТАВЕЕ А9-5 Ехс!(а()оп апд Еш!аь)оп М)аче)епа(Ьа о( Е)иогосЬгошеь 495 Ыие 540 8гееп, иыЫе 595 огап8е-ген, чыЫе 496 Ыае 480, 545, 565 Кгееп, ЫяЫе 524 8геепЬЬ-уе))ох 575 огап8е-ген 620 гед 524 8гееаЬЬ-уе)!ою 574 огап8е-ген А9.34 Аррепйх 9: Регесгйп Буггетз ° Етуте-сощидагегГ апгГЬогГГея Апг!Ьоб!еа сопр1е6 |о Ьогзегаб!аЬ регохЫаве, аП|аПпе рЬоя рЬагаае, !1-8а!асгоядазе, апс) пгеаье аге ачаПаЫе сопппегс|аПу. ТЬеае сап Ъе паес) аа аесопг)агу геа8епга Гог |Ье епгутаг!с с)егесг!оп оГ рпгпагу апг!Ьог!у-апг!8еп сотр1ехея рог Ьо|Ь пптцпоасгееп!п8 апд нчеагегп Ыогг!п8, епгутаг!с те|ЬосЬ аге тоге аепяг!че ап6 8!че 1о|чег Ъас)|8гоппгЬ ГЬап га6!о1аЪе1ег) апГ!Ьоб!еа ог рго|е!и А.
Епгуте-соп)п8а|ег) ап|!Ъоб!еа аге рагбсп!аг!у паеГп! Гог асгееп|п8 ехргеаяоп ПЬгапеа Ьесапае я8па!а Пене!ор йгесбу оп |Ье пЬгосеПп1оае ПЬег (га|Ьег |Ьап оп а аЬеес оЕ Х-гау 61т ог а рЬоарЬоп|па8ег), ао ГЬа| роя6не р!а|!пеа сап Ье !осагег) пюге асспга|е1у. Соп)п8асе|1 епху|пеа сага!ухе |Ье Еоппабоп оЕ !пао!пЫе со1оге6 ргес!рЬа|еа оп |Ье апгЕасе оЕ а пЬгосеПи!оае 61|ег ас |Ье я|е оЕ ап апг!Ъог)у-апг!8еп сотр1ех !То|нЪ!и е| а1. 1979; Нанн)сеа е| а1. 1982; В1а)се е| а1. 1984; КпесЬг апд Рппопб 1984; То|нЬ!и ап6 бог|Гоп 1984; На|ч)сеа 1986). АП|аПпе рЬоарЬасаае ап|1 Ьогаегаг)!аЬ регохЫаье аге |Ье |поя сопппоп1у пае6 соп)п8агег) епгутея АП|аПпе рЬоврЬагаае гета!па ас6че Еог аечега! Ьоигя дппп8 ъчЬ~сЬ |Ье епй ргойк| оЕ |Ье геас|юп — а |1аг1| Ыпе ргес|рЬаге оЕ сИогтагап (Мсяс)еу 1970) — сопг!ппеа |о ассппш1асе ап|1 т|епяГу |и со!ог.
Ву сопсгааг, Ьогаегаб!аЬ регох!6аае !а !пас|!чаге6 нн!|Ь)п а хогг репо|1 оГ |ппе Ьу Ьа ьпЪаггаге, регохЫе, |чЬ|сЬ гпау ассопп| Еог |Ье !ованес аепя6|6|у оЕ Ьогаегас1!аЬ- регохЫазе-соп)р|8агег! апг!Ьоб!ез т г)егесг!п8 апг!Ьог)у-апг)8еп сотр!ехеа оп ппгосеПи1озе 61- Гега (М!егепдогГ е| а1. 1987). Рпг|Ьегтоге, аоте рго|осо!а па)п8 Ьогаегаб!аЬ регохЫаае ап6- Ьоб!еа егпр1оу а саге!по8епк сЬгото8еп, о-йап|яйпе, |нЬкЬ ге|!и!геа прес!а! ЬапдПп8 ап6 йя роаа1. Рог а ашптагу оЕ сЬгото8ешс апг) 1шшпеасепг тегЬода оГ дегесг!оп оЕ пптоЬ|1!гег! ап68епя р1еаае аее ТаЬ!е А8-12 !п Аррепйх 8.
Еп1отшат(оп Рапе1к А9.35 НОКйЕКА0!$Н РЕКОХ!0АйЕ Ногкегайй регохЫаке (НКР), а Ьегпе-сопсашшц ргосе)п, ь цепегацу ьо1асе6 Еготп чл!6 Ьогкегаб)кЬ тооь ак а пихсиге оЕ кечега! Ьохугпек. ТЬе с1аяка1 ргерагасюп (Ятаппоп ес а1. !966) Ь ртес1опппапс!у а ппхсиге оЕ пчо !оггпк (Ьотушек В апд С), еасЬ ъ лсЬ а М, -40,000. НКР саса1угек йе сгапкЕег оЕ пчо е1ессгось Егопс а юЬксгасе со Ьубгоцеп регохЫе, со цепегасе Н,О апг1 ап охЫыес1 6опог. ЪътЬеп 3,3'-сПапипоЬепгь йпе (РАВ) ь гье6 ак йе ыЬягасе (СгаЬагп ап6 КагпочкКу 1966), йе охЫые6 ргобисс ро1ушепхек со Еопп ап шсепке Ьгоъчп гекЫие сЬас Ь шко1иЫе тп ЬосЬ Н О ап6 есЬапо1.!п сЬе ргекепсе о( сгапясюп е)епъепск, юсЬ ак соЬаП апд пк)се!, йе гекЫие Ь а к1асеу Ыие-ЫасЫ ТЬеке геасбопк Еопп сЬе Ьаяк оЕ кепя6че сЬгопсоцепсс аыаук Еот регохЫаке йас Ьаче Ьееп икет( Еог пъапу уеаь сп е! ее!гоп писгоксору (КоЬЬспк ес а1.
197!), 1пипипосусосЬепиксгу (НаКапе апд Ртегсе 1967), чагюгь епхуше-Пп)сец пппшпокогЬепс асьаук апг( ъчексегп Ыошпц (кее Р(Вите А9-4Ь Ночтечет, йапипоЬеплйпе Ьак ютпе т(Ьаг1чапсацек ак а киЬ- ягасе: 1с ск рокяЫу саге(поцешс (Сагпег 1975; ЪЪтеьЬигцет ес а1. 1978), апс) К ь пос ак кепя6ъе а т)есессог оЕ НКР ас6чьу ак тпоге тесепс1у дече1орес$ сотпроипсЬ кисЬ ак 33',55'-сесгапсесЬу! ЬепхЫспе (ТМВ) (ец., р!саке кее КоЬегск ес а1. 1991).
ТЬе охЫабоп ргоцисск оЕ ТМВ ате поппацу ко!иЫе Ьис сап Ье "сарсигей' Ьу ргесгеа6пц Ыоь ъч(сЬ с!ехстап м1(асе (МсКпптп-ВгексЬЫп 1990) ог Ьу ияпц а раг6си1асе Еопп оЕ ТМВ сЬас Ь ачат!аЫе сопипегстацу. ЪЪт(сЬ йеке пюйцсассопк, ТМВ Ь кшсаЫе Еог бесесс1оп оЕ НКР-апс(Ьоцу сощицасек йас аге йгессе6 аца(пя ргосешк (шс! ийпц апс)Ьойек оЕ апосЬег крестек) от ПцапгЬ йас сап Ье апасЬес1 со пис1есс асЫ ргоЬек. Гп агЫКюп со РАВ ап6 ТМВ, осЬег НКР юЬксгасек сЬас сап Ье охЫЬес1 со шко1иЫе сЬготпоцешс ргоцисск )пс1ибе 4-сЫого-1-парЬйо! (Ригр!е ргессриасе) апд 3-апппо-4-есЬу!сагЬаго!е (гег1 ргес(РПасе). Ые)сЬег оЕ йеке киЬксгасек ь ак кепя6че а т!есессог оЕ НКР асбчьу ак йашшоЬепг(йпе. 1п агЫсбоп, а пшпЬег оЕ сЬгопъоцепк киЬксгасек Еог НКР аге ачацаЫе сЬас у(е!д аьгасбче1у со1огей ко1иЫе охЫасюп ргоцисся 1п агЫ(сюп со ТМВ, сЬеке !пс1и6е О-РЬепу1епейапипе йЬуйгосЫопс(е (ОРР) (сапцеппе огапце) (Ъъто1сегк ес а1.
1976), ап6 2,2'-агшо-й(3-есЬу!ЬепгсЬ(ахоПпе-6-ки1РЬоп)с ас)6) (АВТ5) (цгееп) (ЕпцчаП 1980). ТЬе Ьея йиотоцешс юцягасе ь 3-(р-ЬуцгохурЬепу!) ргор!опк асЫ (НРРА) (чю1ес) (КоЬегЬ ет а1. 199!). 1п сЬе ргекепсе оЕ Ьуг(оцеп регохЫе, НКР сап а1ко Ье окей со спццег а сус1ка1 сЬепи1шпшексепс геас6оп йас геки1ь ш сЬе охЫабоп оЕ!ипипо! со ап ехсКес) Еогтп оЕ 3-апипорЬйа1асе (1каасюп ап6 ЪЪтессетшаг)с 1974; Кокъчец апд ЪЪЪ)се 1978; Риттапс 1990; цсопе апг( Риггапс 1991) (р!еаке кее Р)ците А9- 5). Ак йЬ соптроипт! гесигпк со цтоипд яасе, Ыие ПВЬс Ь епиьес) ас 428 пш.
Ноъчечег, Ьесагье сЬе еЕП- с1епсу оЕ йЬ геас6оп Ь 1оъч, ъапогь раш-киЬксгшсед РЬепо1-Ьакед сотпроиптЬ аге икет( со шсгеаке сЬе ъ)иапс(су ап6 6игасюп оЕ сЬе ПВЬс епиье6 Ьу сЬе геасстоп (ЪЪтЫсеЬеас$ ес а!. 1983; Ноццкоп ап6 !опек 1989). 1п сЬе ргекепсе оЕ р-ю6орЬепо1, Еог ехатпр! е, сЬе!сцЬс епнпес) Ьу сЬе геассюп тпау Ье шсгеакед Ьу >1000- (о!6 ап6 йе епиясоп спау Ье кгьсаше6 Сот кечега1 Ьоигк. 1п адй6оп, епЬапсегк гебисе сЬе Ьас)сцгоипц Ьу шЫЬс6пц сЬеписа! охЫабоп оЕ 1шшпо!. ЕпЬапсегк аге сЬоицЬс со асЬсече сЬеке еЕЕесск Ьу е1ип(па6пц йе гасе-1ппт6пц ксер тп сЬе геассюп сус1е Ьу (1) геассшц ъчКЬ НКР апс! (2) Еопп)пц епЬапсег гайса!к сЬас тп сигп геасс чпсЬ 1шпшо! со Еопп!шптпо! гайса1к (р!еаке кее Р(ците А9-5). ТЬе пес гею1с ь ап шсгеаке ш сЬе е(Пс)епсу ап6 креес), Ьш пос йе сЬагассепкпск, оЕ сЬе 1сцЫ-рготЬлсспц геас6оп.
Ыцй еш(ссе6 Еготп сЬе геасбоп сап Ье сарсшед оп Х-гау 61тп, РЬокрЬопшацегя ог ССР сапъегак. НКР сап Ье йгесс!у соир1е6 со япц1е-ксгапце6 пис1ек асЫ ргоЬек (Кепи ап6 Кшх !984; 5сопе апт( Ршгапс 1991) ог и сап Ье сощицасед со ап ап6Ьоду крее(цс Еог Пцап<Ь юсЬ ак Ьюбп ог йцохуцешп йас сап Ье шсогрогасе6 тпсо пис!е(с асЫ ргоЬек Ьу ксапцаг6 епхушо1оц(са! сесЬп(т)иек. !п еПЬег саке, сЛе НКР/!иш)по) геас6оп ь киЕЕтс)епс!у кепябче Еог попгайоассье де!ест(оп оЕ пис1ек аскЬ !п цоисЬегп апг) погсЬегп ЬуЬгЫыассопк (ТЬогре апт! Кпс1са ! 986).
гойет Ыеа! сопйсюпк, сЬе! ишс оЕ 6есессюп оЕ пис1есс асЫ ргоЬек Ь -5 х 10 'т пъо1ек (Ъ)йеа ес а!. 1988). Ноъчечег, сЬе НКРт!иш)по! геасстоп Ь сопкЫегаЫу 1екк кепясгче сЬап сЛепи! шпшексепс геас6опк шчо!ч)пц с1еачаце оЕ 1,2-йохесапек Ьу ацса!спе РЬокрЬасаке (р!еаке кее сЬе шЕоппа6оп рапе! оп АМРРР).!п асЫКюп, со асЫече тпахипа! кепк(с)ч(су, сЬе НКР!!иш(- по! геассюп тпау гег)шге ехсепяче орс(ш(гас)оп оЕ Еь чапось соспропепск.
Рог сЬеке геаюпк, НКР ь поч икес1 1ея сЬап ацса!ше РЬокрЬасаке Сот сЬе сЬепи!шптпексепс т)есес6оп оЕ пис1ек аскЬ апд ргосешк. А9.38 Аррепд(х 9| Регеспоп $уьгеть О! х ОХИ Е(Ч1(Ч ТЬе сагдепо1Ые ЙВоху8ешп (М, = 390.53) сап Ье дегХед Ьу сЬеписа1 ог епкуп|а||с гепюча! оЕ Еоиг ьи8аг геьЫиеь Кот деьасе|у1апасоьЫе С Ьо!агед Еоп| Р)ч)га((ь ригригел (КеиЬьгеш 1962) ог и сап Ье ехшас|ед диес|!у Его|п Р. опепга((ы' апд Р, !апаса 1.. ЗггорАн!адасеае (МаатсЬ ап|1 5сЬпеЫег 1941; Не8епаиег 197!).
ТЬе сЬеписа1 ыгис|иге оЕ ЙВоху8ешп (Сагд|че1! ап|1 5пиЕЬ 1953, 1954; РагаЫ ес а1. 1953) Ь ьЬо|чп )п |Ье Ьох ас |Ье г18Ь|. !п |по1еси1аг с!ошп8, й8оху8ешп Ь ыед аь а 118апд |Ьаг сап Ъе шсогрогасе|1 ш|о РХА ап|1 КХА ргоЪеь ап|1 де|ессед айег ЬуЬпйга|юп |ч||Ь ап ап6-Й8- оху8ешп-ап6Ьоду епкуте соп)и8а|е (Кеьь!ег е| а!, 1989; Кеьь1ег 1991) (р1еаье ьее БВиге А9-6). Р18охуВешп-!аЬе!ед ргоЪеь сап |Веге(оге Ье иьед ш 5ои|Ьеш, пог|Ьегп, апд до|-Ыо| !гуЬг)йхагюпь.
ТЬеу а1ьо Ьаче сопядегаЫе адчап|а8еь Еог ш яги ЬуЬпйга6оп, |и раке Ьесаые |Ье Ьарсеп ЙВоху8ешп Ь по| ргеьепс ш апипа1 се1!ь (е.8., р)еаье ьее Та|их апд РЕе!Ве 1989; Нетта6-Впчап!ои е| а!. 1990). ТЬЬ аЬьепсе е!ип!пагеь Ьас1|8гоипд сопспЬи|ед Ьу епдо8епоы пю1еси!еь.
5исЬ ьь пос а1|чауь |Ье саье ъчКЬ Ъю6п!аЬе1ед ргоЬеь. Р18оху8еп|п-1аЪе!ед пис!ек асЫ ргоЬеь сап Ье ыпрред Егогп пу1оп 6!|ел Ьу Ьеабп8 |Ье 61|егь Го 37'С Еог 20-30 гпши|еып а! аг8е чо)и те оЕ 0.198 5Р5, 2 тМ ЕРТА (РН 80) (СЬигсЬ апд К)еЕЕегН188)пь 1988). Айег |чаьЫп8, |Ее 61|егь сап Ье гергоЬе|1 |чпЬои| я8п|6сапс 1ом оЕ ей|с|епсу ог ьепябч|гу. Хосе |Ьа| абег ьечега1 сус!еь оЕ ргоЪ|п8, ьгпрр|п8, апд гергоЬ)п8, |Ье Ьас)|8гоипд оЕ сЬепи!и|п|пеьсепсе гпау шсгеаье я8п|6сапду дие |о |Ье ассшпи!а|юп оЕ а))са!1пе РЬоьрЬа|аье геыдие оп |Ье 61|ег. ТЬЬ ргоЫеп| сап Ъе ачоЫе|1 Ъу сгеа6п8 |Ье 61|ег идгЬ ргосешаье К ап|1 Еоппа|пЫе Ье||чееп ечегу ьесопд ап|1 |Ыг|1 ргоЪ|п8 (РиЪ||ь1|у е| а1. 1992). ЕаЬе11щ Хие1е)с Ас(|Ь чч141| 016охудеп10 Рог!аЬе1!п8 оЕ пис!е|с асЫь, ЙВоху8ешп Ь ьирр1|ед Ьу |Ье тапиЕасшгег (ВоеЬпп8ег МаппЬеип) 1п пчо 1огтя ЙВоху8епш-11-дРТР (Р10-!1-дРТР) апд ЙВоху8ешп-! 1-()ТР (Р!б-!1-УТР).
1п еасЬ Еопп, й8оху8епш Ь соир1ед Ьу ап а1)са11-ыаЫе 1)п)са8е апд а ьрасег агт |о деохуипйпе |НРЬоьрЬа|е апд и6- Йпе |НРЬоьрЬасе, геьрес6че1у. а о !! (! о о Р о Р о Р оснь он н ° Р10-11-д()ТР Ь а ьиЬягаге Еог Е. со6 РХА ро1утегаье, |Ье К1епо|ч Ега8теп| оЕ РХА ро1утегаье 1, ЕЬегтоьсаЫе ро!утегаьеь ьисЬ аь Та9, гечегье |гапьспр|аье, апд сегпипа! |гапьЕегаье. Р68оху8ешп сап |ЬегеЕоге Ье ш|гос(исед шсо РХА Ьу а чапе|у оЕ агап|)аг|1 геас|юпь шс!ийп8 гапдо|п рг)т(п8, шс1| |гапь1а|юп, ашр116са6оп, епд-6!1ш8, апд 3'-га!1(п8.
° Р!С-11-(7ТР Ь шсогрога|ед ш|о КХА дипп8 ш |6|го ггапьспрпоп оЕ РХА гетр!асеь Ьу Ьас|епоРЬа8е-епсодед РХА-дерепдепс КХА ро!уп|егаьеь (ТЗ, Т7 апд 5рб КХА ро!утегаьеь) (р1еаье ьее ТаЫе А9-6). 0118опис1ео6деыЬа| Ьаче Ьееп 5'-агпша|ед дипп8 ьуп|Ьеяь сап Ье 1аЬе! ед чд|Ь ЙВоху8ешп Ъу геас6оп гд|Ь ХН5-й8оху8епш (ЙВоху8ешп-3-О-те|Ьу!сагЬопу1-е-апипосаргок асЫ-Х-Ьудгохушсс|- пагпЫе еьгег; ВоеЬпп8ег МаппЬепп) (РдсЬгепсЬ апд СЬшсЬ 1993). А9.40 Аррепг(сх 9: Е)есесс(оп 5уяетз О1дохуцея ВС|Р ох!беаоп Сз-огата-4-оного-Э-!пасу| рпоерпе|е| !! Вг Π— Р— О Ие+ Вг е!Хи!се и рпоерпе1еее н сс!м | С| Вг ох!беооп Вг С! Ьяе-рыр!е риырбе|е со| са!обеей ео1ЬЫе ИВТ гебасоап |пиоЬЫе |е1|егаипп сйапбе| ~( ~~,~" ~ (=/"'~~ '», ~( ч нзсо гги и иоа огй и и» н ф ч~ ф Ь ~н С -г~~~~~ 'и=и гебосЬоп ОСНз НВСО Ыае-рогр1е ргес!Рае1е со|обеее, ео!оЫе Р)СС2КЕ А9-7 Охйа6оп оГ ВС1Р апсс Кедис6оп оЕ )9ВТ 1п СЬе ВС1Р/ВСРТ 1пйсаСог КеасСюп (Керпп|ес), ъч|СЬ реут!за)оп, Ггот Кезз)ег 1991 (Соруг)ВЬС 1991 ЮАсас(егп1с Ргезз Гипс)оп!.) 1я-Врес)11с АпС!Ьос1!ез Сояр)е|Е Со Керог(ег Епхуясев Н(ВЬ-аГЕ!пссу йаохуаепш-зрес~6с апПЬойу Ь гаье|1 ш ВЬеер !ттип!гес) сч(ТЬ сЬе йВохуаепш-спасе!) ргосе|пз е|1ез6п ог Ьомпе бегит а!Ъипип.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
