Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 167
Текст из файла (страница 167)
Ргосеш б Ъ!пйь со сЬе Вгзс сопьсапс Во|па!и оГ18б (ЕгпсеП ес а1. 1985) апй |Ье !псегаес|оп Ьепчееп |Ье пчо п|о!ееи1еыпчо1чеь а68пгпепс оГ 13 ьсгапйь со Гопп а соп6пиоиь ГС-ьЬеес аегоя сЬе шсегаейп8 ьигГасеь (Регг!е)с апй |С|!8!еу 1992). ТЬе ьсгиссигеь гесо8пией Ъу ргосеш б апй ргосеш А аге с1оье!у ге!асей (5сопе ес а!. 1989). Нолчечег, п|апу ьрее|еь апй ьиЬе!аььез оГ !8бь ГЬас йо пос Ьшй ъчеП со ргосеш А Ь~пй чйсЬ Ьл8Ь ей|е|епсу со ргосеш б. Рог ехап|р1е, ргосе|п б !ь аЫе со Ь|пй е(6с|еп|1у со Ьип|ап пппнлпо81оЬиПпь оГ |Ье 18б3 ьиЬс1ая, лчЬегеаь ргосе|п А саппос (5)оЬпп8 ес а1.
199 Ц. СЫгпегк ргосешь, еопса|пш8 68апй-Ь!пй!п8 йоп|ашь оГ ргосешь А апй б ехЬ!Ь~с сЬе согпЬ!пес! ьрее!6е|6еь оГ сЬе рагепса! Ргосе|пь (Е1|аьтп ес а1. 1988, 1989). Опе росеп6а! й!ьайчапса8е оГ ргосеш б аь а геа8епс со соПеес иппп|пе согпр1ехеь апй со рипГу 18бь !ь |Ьас и Ь!пйь ьсгоп8!у со Ьоч|пе ьегшп а1Ьшпш (В)огс)с ес а!.
1987). Носчечег, |Ье !8б-Ь!пй!с|8 ясе апй |Ье ьегигп а1Ьшп|п-Ь~пгПп8 ясе аге ьсгиссигаПу й!ьс!пес (Ну8геп ес а1. 1988; 5)оЬг!п8 ес а1. 1989) апй еп81- пеегей чегяопь оГ ргосеш б !асЫп8 |Ье а!Ьшпш-Ь!псПп8 ясе аге сопипеге|аПу ачаПаЫе. ТЬе ьегшп а1Ьипип йогпашь оГ ргосеш б Ьаче Ьееп те|1 аь рипбеа6оп са8ь ш 6ляоп ргосешь ()ь)у8геп ес а1. 1988, 1991; 5)о!апйег ес а1.
!993). Тп/отта/|оп Рапе!я А9.49 Р|С()КЕ А9-14 1яо|а6оп о/ Ап6Вепя ог СЯ/Ьо)е Се!!я ()ясп а Вас|-5 А Гия1оп Ргоге1п ТЬе $$8ите |Ниясгасея сЬе ияе о/ а lас гергеяяот ((асс-5рА) Ыя|оп рюсесп /ог гечегя)Ые тесочету о! рго|е/п апВдепя ог ччЬо|е сеНя ия)пд шадпег'к Ьеас/я сч/сЬ а соир1ег/ ОЬ|А !гацгпепс сопса|п- /пВ |Ье |ас брега|от (/асО) яес)иепсе.
|дп апс/деп от сая тадпебс Ьеаб чот соир|еб ястерсачкяп Ьюг|пу/асеб ОЯСА стадтепт Рго!есп Ь Ршсеш $. (М„-76,000) (Йсегясгош апс) В)отс(с 1989) Ь а сеН-чтаН сошропепс о/ |Ье апаегоЬк Ьассепшп Рерсотатертососсш таепия (В/отс)с 1988), счЬ|сЬ Ь|пс)я ч6|Ь ЬсВЬ айш|су со сЬе к 1сВЫ сЬашя о/ пппшпо81оЬи! шя. ТЬся спсегассюп с1оея пос )псег/еге ъпй сЬе ап68еп-Ьспйп8 я|сея от сЬе апс)Ьоссу (Йсегясгосп апсс В)огс1с 1989). Ргосеш 1.
Ь~птся со а сч|с)е гап8е о/!8 яиЬс!аяяея шс1ийп8 Ьшпап, тпоые, гас, гаЬЬтс, аптс сЫс)теп (р!еаяе яее Тайе А9-8), Ьис Ь тсоея пос Ь|птс со Ьочспе, Воас, ог яЬеер 18. ТЬеяе ярестея-ярестйс Ьспйп8 сЬагассепя6ся ша1се ргосетп 1. а иге|В! соо! /ог апс|Ьос)у рипйсасюп, сп раг6си1аг тот |Ье рипйсасюп о/ тпопос1опа1 ап6Ьойея тгош псейа яирр1ешепсес$ сч/сЬ теса! Ьочше яегшп от Ьоч|пе яегшп а1Ьшшп апс) сЬе рипйсасюп от Ьшпап)гесс ап6Ьойея столп сгапя8епк апипа1я.
Ргосеш Е ы ачас1аЫе сошшегсса11у (е.8., СЬО)ч/ТЕСН апс) Рсегсе). А10.2 Аррепйх 10: ОХА Апау ТесПпо!оПу !!ЧТКО0!.)СТ!ОМ Ътт)тЬ тЬе ПгочппП аЪипт!апсе оГ вел!цепс!пи дата тготп висЬ йчегве огПап!япв ав уеавт, Ьастепа, тгц!т Пу, вечега1 р1аптв, апт( Ьшпапв сотпев а ртевв!пП пеет! тот грече!ор!пП апт! арр1у!пП тесЬ- по1оП!ев Со рег!опп согпргеЬепяче типст!опа! апа1увев. Тли пнсгоагтаув Ьаче Ьееп т(ече1орет( тп гевропве то тЬе пеес1 !ог япш!тапеоив апа1уяв о! гЬе раиегпв от ехргевяоп от Птоцвапт)в от Пепев.
Мкгоаггаув гЬеге(оге о(уег ттешепс)оив ас(чаптаПев очег тгайтюпа1 "япП1е-Пепе" шетЬот!в висЬ ав поттЬегп ЬуЬт!хат!оп, гечетве тгапвспртаве — ро1утпетаве сЬа!и теастюп (КТ-РСК), апс1 пис1еаве рготес6оп. Т!ле Ргосеы 1п а сурка! арр1катюп, Ь!ПЬ-с1епв!ту пис!ек асЫ вашр1ев, цвиаПу сРХАв ог оППопис1еотЫев, аге с1еПчегет( (ог рппсе6) Ъу а гоЪотк вувтеш опто чету япаП, йвстете атеав от соатес1 ялЪвттасев (ог сЬлрв) цвиаПу писговсорк П1авв в1Ыев ог тпетпЬгапе 61сегв, апс1 тЬеп ппшоЪ|1ыет! со тЬе ялЪвттасе. ТЬе гевц!тша пбсгоатгау !в гЬеп ЬуЬт!йхет( чптЬ а сотпр1ех пнхште от Пиогевсепт1у 1аЬе1ес1 пцс1ек ас!т!в (ртоЬе) депчес1 тгош а с1еягес1 воигсе.
РоПолч!пд ЬуЬпйгатюп, тЬе Пиогевсепт тпат)сегв аге т1етессед ив!пП а ЫПЬ-гево1итюп 1авег всаппег. А раттегп от' Пепе ехргевяоп !в оЬса(пет1 Ьу апа1ух!пП гЬе в!апа! еппттет1 ттош еасЬ врос чптЬ йП(та( !шаП!пВ войтчаге. ТЬе ратсегп от Пепе ехргевяоп от гЬе ехретппепта( вагпр1е сап тЬеп Ье сотпрагес( чбтЬ гЬат от а соптго1 (ог й(уетепт!а! апа1увев. ТЬе иве от теппв чапев ш гЬе !Пега!иге; Ьотчечег, тп тплв йвсивв!оп, ргоЪе тетегв то тЬе пихсцте от' 1аЬе1ес( пис1елс асЫв апт! тагПес т(епотев тЬе ппшоЬП(лед аггау от пис1ек асЫ ватпр!ев. Арр! !са6опь Ттчо сЬ!ет" арр1ка6опв от !л!х)А шкгоатгау тесЬпо1оиу аге девспЬес1 ЬпеПу Ье1олч. ОтЬег арр1тса6опв !пс1ит!е Пепе йвсочегу, Пепотур!пП, апт! ратЬлчау апа1уяв. Апа!уыил оЕ Сепе Ехргеьяоп бепе ехргевяоп раиегпв аге Ью1оП!саПу !птотшат!че апт( ргочЫе йгест с1иев то гипс!!оп.
Согге1ат!пи сЬапаев ш цепе ехргевяоп тч!тЬ врес!Пс сЬапВев !п рЬувю1оПу сап ргочЫе тпесЬаи!в6с !пв!ПЬтв што тЬе дупаш!св от чат!оцв Ью1оП!са! ргосеввев ш ап огПап!яп. Мктоаггау тесЬ- по!оПу шау Ъе явей, тог ехашр1е, !ог япш!тапеоив!у т(есест!пП ехргевяоп от" тпапу Пепев ш сИ- тегепт т!ввиев ог ат т!!Пегепт с(ече1оргпепта! втаПев; тот сотпраг!пВ Пепев ехргеввед !п поппа! апс( йвеавел! яатев; апт! (от апа(уг!пП тЬе гевропве от сеПв ехровес1 то с(гиВв ог с1Негепт рЬуяо1оП1- са1 сопй6опв. ТЬе ча1ие от писгоаггаув тот Ыеп6ту!пП раттегпв от" Пепе ехргевяоп Ьав Ьееп т)ешопвттатет1 с1еаг!у ш отПап!япв висЬ ав уеавт, тгц!т Птев, писе, апт! Ьшпапв. !и уеавт, !ог ехатпр!е, Веце ехргевяоп раиегпв оЬта!пей цв!пП сРЬ)А аггаув согге1ате чету ччеП цптЬ сЬапВев !п тЬе уеавт сеП сус1е (уеавт т(ага ветв апт( апа1уяв тоо)в аге ачат1аЫе ас сшПш.втаптотс1.еди1рЬголчп/).
1п ехр1огабопв от Ьшпап сапсег, ехртевяоп аггаув Ьаче а!Пет! ш гЬе пю1еси1аг с!авяйсатюп от" В- сеП 1ушрЬошав апт) 1еи1сепиав. ТЬеве втийев ате П)се!у то Ье!р ив то ипт1егвтапс( тЬе ратЬорЬуяо1оВу о( сапсег апс) то т)еПлпе сагПетв тот тЬегарешк !птегчеп6оп. Моптгогтпе СИапееи т Сепоттс ОНА Сапсег сеПв туркаПу ехЫЪтт Пепош!с швтаЪл1Пу, !пс1ит!!пц Ваш-оВ6лпст!оп пшта6опв от опсоПепев ойеп шаг)сед Ьу Пепе атпрЬПсатюпв ог тгапв1осатюпв апт! 1овв-от"-Плпст!оп ппиатюпв ш Очеглетч апт/ Бс/тета оу Р/|/А /Ч/(сгоаггаут А!0.3 |шпог аирргеааог цепеа оттеп тпаг)сед Ьу рошт шита6опа апд аиЬает)иепт 1оаа от' Ье|егохуВоя|у ог Ъу ЬошохуВоиа |1е1е6опя ТЬгее 1аЪогатопеа аге потч ияпВ ш(сгоаггауь тот Ь(ВЬ-геао1и6оп апа1уяа от" Вепотпк РМА: ° ТЬе Вготчп 1аЬогатогу (ешь.агап(огйес1и/рЬготчп) ыеа сР)чА писгоаггауя ° ТЬе Сгау 1аЬогатогу (сс.ис|Ееди/Вгау/) паев ш(сгоаггауа от" Вепошк РХА с!опт ш ВАС честогя ° ТЬе Ът/(В1ег 1аЬогасогу (пис!еиясьЫ.огВ/тч(В!ег/) иаеа ш(сгоаггаув |1епче|1 тготп !отч-сошр! ехпу гергеьептатюпа от Вепош(с РХА.
ЪйзкЬ тпейо|1 ог сотпЬ|патюп от" тпетЬо|Ь тчП! Ье аиссеаати! ш тпеааиппВ сЬапцеа (п сору пшпЬег от" попаЬипдапт аес)иепсеа чпй Ь(ВЬ а|а|татка! сопП|1епсе ш с1шка1 аашр1еа гешашв то Ье |1е|егпипе|1. Мита6опв апд ро1упюгрЬ|япя |п рагтки!аг япВ1е пис!ео|Ые ро!упюгрЬ(япа (5ХРз), сап Ье а|исПед чпй|п ап6 апюпВ арес(еь ияпВ Ь(ВЬ-депяту оПВопис1еотЫе аггауя ТЬеае ао-саПед пппа6оп |1етестюп аггауа сопяат от" оПВопис!ео|Ыез гергеаептшВ аП )тпотчп аес)иепсе чапап|а от' а репе ог а соПестюп от" Вепея Весаиае ЬуЬг(6(хатюп то оПВопис1ео|Ыеа (а аепя6че епоиВЬ то де|ест япВ!е-пис1еотЫе пияпатсЬея ап Ьотпо1оВоиа Пепе саггушВ ап ип)тпотчп вес)иепсе чапа6оп сап Ье асгеепе6 гарЫ1у тот а !агре пшпЬег от" сЬапВея Ехашр1еа от" пш|абоп т(есес6оп аггауа шс1и|1е а р53 репе сЬ(р, ап Н1Ч цепе сЬ~р, ап|1 а Ьгеаат сапсег ВЫСА-! репе сЬ~р.
ТЬе гетпашс)ег от" тЬ(а сПасия(оп (осиаеа оп |Ье тесЬпо1оВ(са! аьресп от" РМА шкгоаггауя тч(тЬ П61е тигтЬег етпрЬаяа оп арр1катюпя П (а ппрегат|че |о гешетпЬег |Ьат РХА шкгоаггауа гергеаепт а т(ече!оршВ тесЬпо1оВу ап6 |Ьат |Ьеге гетпа|п аиЬатап6а( оЬ|тас1еь ш |Ье деяВп ап|1 апа1уяа от" тЬеае ппсгоаггауя ОЧЕКЧ!ЕЪЧ А!ч(0 ЬСНЕМА ОГ ОНА М!СКОАКЙАУ5 ТЬеге аге ях Ьаяс атера (п регтогш(пВ а РХА писгоаггау ехрептпеп| (р!еаае аее Р(бриге А!0-1): |. РгосеаашВ сРХА с1опеа то Вепегате рппт-геаду тпатепа1.
2. Рпптшц сРЬ)А с!опек (ог оПВопис1еотЫеа) опто а аиЬ|тгасе. 3. Ватпр1е К1чА (ао1а6оп (еПЬег тота1 КХА ог тпКХА). 4. Ргерага6оп от" |Ье ргоЬе (е.В., сРЫА ауптЬеяа ап|1 1аЬе1шд). 5. НуЬг(6(татюп от" |Ье 1аЪе1ет( ргоЬе РХА то йе РЬ)А аггауед оп |Ье аиЬ|тгате. 6. !тпаВе асс)шятюп от' ЬуЬ|1|Пта6оп геаи(тз апд ппаВе апа1уяя С!опе Ьоогсеь апт! ТЬе!г Оеьсг!р6оп ТЬе (п(6а! геаоигсеа гет!и(ген со беяВп апс) таЪг(саге Пепе ехргеаяоп ппсгоаггаув шс!ит(е Вепопис ог сРМА ает)иепсе дата, сРХА с1опея ог Ьо|Ь. ТгасП6опа! арргоасЬеа со Пепе т)ысочегу, аисЬ ав с!оп(па, Ьаче Ыеп66ес1 оп1у а япаП аиЪ|ет от цепеа (п ап огцапып.
Моте гесеп| арргоасЬея тот ехап|р1е, !агре-аса!е аес(иепсшВ от ехргеяед ает)иепсе таВа (Е5Та), Ьаче Вгеат!у епЬапсед |Ье гасе от пепе 6(асочегу. бепВап(с почт Ьаа а соПестюп от >! ппПюп Ьшпап ЕВТя ЕВТ ает)иепсеа аге 6ерояте6 |пто |Ье датаЬап(с |1ЪЕВТ (тчтчтч.псЬ(.п1ш.п(Ь.Воч/с(ЪЕВТ/ шдех.Ь|ш1), а 6(ч(яоп от" бепВап(с. 5ет)иепсеа атоге6 ш |1ЬЕ5Т аге ьиЪ)естест со ап аитошатет( А/ОА Арреийх 10: Т)/и/А Аггау ТесЬио!ору Аггау ЕаЬпеа1)оп Тагде1 Ргерагадоп ограпап! сгпосве, гаг, оопп, Ру, р1апг, увавг, Ьас!епа, е!с ) вагпр!е вон!се )бвана, сер Впво, равно!ору вапнр)ев, сграп!впгв) О! О й е Ф О о О. Ф га й О. О О. .О О! О о .с О! ЬЕ и О генепе !гапвспрпоп !аЬеапр паа Рсогевсеп! буев вег)сапов сааба!еб СОМА бопе веп анвевие ссптпегс!М)у о !Ц)~ ~ ' Л !вв! ге!егепсе агах орропссеоббе спр )н)А оаггау ПуЬпс))га1!Оп 1пгаде Асти)ей|оп епгг АпаЬ)еде рапепг гесодпйоп всаппгпа Впав !о о!Ьег !ее!огоев: ° сОАР ° Ьсов !)па ° рва!раув ° ипяепе ба1аЬаае )асс!повесе бе1ес!Пп) своев р!абопп ~ ба1а сспнрабвоп с)а1аЬазе НСс)КЕ А10-1 Е!ОчгсЬаг11 Рег!Опп|па а )нггсгоаггау ЕхрегппеШ ргосеы саПес| !/п|с епе 1Ьаг сошрагеа ЕОТа апс! аааешЫеа очег1арр|па ьес|иепсеа !пго с|иагега (гчнчгч.псЬ)л1шл!Ь.цоч/1/шСепе/!пс|ех.|пгп1).
С1опе аегя сошрг|япа 1Ье 1агаеаг япа!е гергеаепга6че ог" еасЬ с1иагег, аге весргепсе-чеп6ед апс1 1Ьеп шаде ача|1аЫе го 1Ье риЫ|с 1ЬгоиаЬ 1гсепаес1 чепс|ога (Ьггр!//|шаае.1!п!.аоч/!шаае/Ьгш!/!с|!агг!ЬигогяаЬгп)1). ТЬе сиггепг Уп|с епе со|1ес6оп ОУ Ьип!ап апс| шоиае сгг)н)А аес|иепсеа 1-40,000 апс| 10,000 аес)иепсе-ча1!с|агес! с!опея геарес6че!у) !а ача!|аЪ|е |ог ригсЬаае 1ЬгоиаЬ огйс!а! чепс!ога аисЬ аа КеаеагсЬ Сепебса ()чм х.геааеп.соуп) апс| 1псуге Сепоппса (аеш.|осуге.сош/аеш/ргос1- исга/ип!цешч2.ЬЬггп1). ТЬе с)п!с епе сойесбоп |а !!|се!у!о ехрапс! ргорогбопа11у р61Ь ргоагеаа т Онегчтетчапт/Бс/тета аЕТ/А/А Мтсгоаггаут А!05 тЬе чагють Вепопте еет!иепсшй рго)есгя АпотЬег гетюигсе Еог тЬе Ьшпап сЕ)т )А сойесйоп !е тЬе Сеппап Ншпап Сепотпе Рго)ест (Ьттр://ъчъчъч.гхрс).т)е/Вепега!/Ьтш!/81оееагу/иптйепе.еЬтш1).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
