Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 146
Текст из файла (страница 146)
5соге йе 61сега ас гоосп сетрегасиге ипс1! а11 ог" йе 6ш6 Ьах ечарогасей ТЬ(х ргосеаа сап Ье аесе1егасе6 Ьу ияп8 а Ьеас 1атр, а1$ЬоиПЬ йса га пос исша11у песеааагу. 4. г)ае Ыипг-епд согсерх (е.8., М)П)роге гогсерь) Со Сгапьгег опе ог еасЬ расг оу 6!гега Со а Ъеа1гег сопСа!п(п8 200 — 300 т1 ог" ке-со!6 5огЬ ТСА апг1 20 тМ ао61шп ругорЬохрЬаге. 5сч)г1 йе 61- сега сп сЬе аеЫ сю106оп гог 2 пиписея апг1 сЬеп сгапагег сЬегп со а 6ехЬ Ьеа1сег сопса10108 сЬе хате чо!ите ог' йе ке-со!д 5ай ТСАг'20 тм ао61игп ругорЬохрЬасе пихсиге. Кереас сЬе хчахЬ)п8 схчо пюге 6тея Оиг!08 гчах!608, сЬе ипшсогрогасе6 пиесеос$6е ргесигхогь аге естес (гого йе 61сега аи6 сЬе гайоае6че пие1е!е ае!Па аге Пхеб со сЬеш.
СопииегегаПу ачаПаЫе, чаеииш-дгсчеп Пссга6оп гпапаоЫа йас Ьо(6 ир со 24 П!сегх гпау аЬо Ье ыег$ со ъчахЬ сЬе 61сегх. 5. Тгапагег йе счахЬе6 ЕПсегх со а Ъеа)гег сопсасп(п8 70огЬ есЬапо1 ап6 а!1оьч сЬегп со гета)п сЬеге Ъпе6у, ТЬеп 6гу сЬе 61сегх еНЬег ас гоот сепсрегасиге ог ипдег а Ьеас 1агпр. 6. !паегс еасЬ ог сЬе 61сега (ъчааЬе6 апг) ипигавЬед) (псо а скш611а6оп сАа1.
Меаяпе сЬе агпоипс ог гаебоасспПсу оп еасЬ 6!сег. "Р сап Ье г1есеесег$ оп г$гу 61!ел Ьу Сегеи1гоч соипбп8 (ш сЬе 'Н еЬаппе! о! а Пгсшд хего60а6ои соипсег). ТЬе е(Пгссеиеу часЬ гчЬкЬ Сегеп!гоч гайа6оп сап Ье гоеахигег$ чапех угош ииспниепс со гихсгшпепс ап6 а!ао Перепбх оп сЬе Пеошесгу ог" сЬе хесп6Пас!оп ла!х ао6 сЬе апюипс о( Н,О гешаспсо8 гп сЬе Пссегх. 1чссЬ Пгу 61сегх, сЬе е(Пс(енсу о(Сегепсгоч соипбп8 !х -25ааа (опе гайоасПче г$есау $п уоиг сап Ье Песеесео 0 А(сегпабче!у, 'гр сап Ъе шеахиге6 часЬ !009о е(6ссепсу Ьу агЫ$08 а !егч пиПгасел о! сосиепе-Ьыеб хе(псП(асюп ПиЫ со сЬе Пг!е6 ПЬегь апг! соип6п8 го йе "Р еЬаппе! ау сЬе Пгсшд хегп6Паиоп еоипсег.
То гпеахиге осЬег Ьосореа (гН, '"С, гг5, пр, есе,), !с гх еяеп6а! со ше со!пепе-Ьахеб хеш68а6оп Лшг$ ап6 сЬе арргорпасе есгаппе! ог" а 1нсиЫ хеги60асюп соипсег. ТЬе ейк(епеу оу соип608 сЬехе !хо!орех чае!ей гхош еоипсег со соипсег агй аЬои!6 Ъе Песегшспеб гог еаеЬ гпхсгшпепс. А8.26 Аррепйх 8с Соттоп(у Иес[ ТесЬпщиег т Мо)еси!аг С!опт8 7. Согпраге СЬе ашоипс оу га6[оасбн[гу оп СЬе ипснааЬес[ 611ег нч[СЬ СЬе ашоипг оп СЬе счааЬес[ 61сег, апс[ СЬеп са1си!асе СЬе ргорог1юп оу СЬе ргесигяог СЬа1 Ьаа Ьееп [псогрогагес[ аа с[еасг[Ьес[ сп СЬе рапе1 Ье[онн. АЕЬогр6осс 1о 0Б-81 НЕег5 0Е-8! 6!Сега аге рос66че1у сЬаг8ес[ апс[ аггоп8[у ас[аогЬ апс[ гегаш пис!ек аснЬ, шс[ийп8 о[38опис1еоСЫея СЬас аге соо япа!1 Со Ье ргес[р[сагес[ е6)с!еп([у чн[СЬ ТСА. 1)п[псогрогасес[ пис[еоСЫеа як[с [еаа 6866у Со 1Ье 6[гегь апс1 сап Ье гепючес1 Ьу счааЬ[п8 СЬе 611ег ехгепсбче!у ш аойшп рЬоарЬаге.
ТЬе ргосес[иге [а еааеп6а1!у Ыеп6са! Со СЬаг с1еаспЬес1 Еог ргес[рЬа(юп оу ппс[ек ас[с[а Ьу ТСА, ехсерс СЬаг СЬе 0Е-81 611ега аге нчааЬес[ [п 0.5 м [х[а НРО (рН 7.0) !па(еас[ о( ТСА/аойшп ругорЬоарЬаге. 0 РЗСОВЕ сн)п8 ес(иа1юп: арес(6с ас1М1у = 1 (2.2 х 10 ) (Р)) т -3- [(1.3 х 10а) (Р/) (С/Я1 3 снЬеге — Зпри1 гайоасбче ЗаЬе) (ЗсСЗ) Р/ = ргорог6оп о( СЬе ргесигьог СЬас Ьаа Ьееп Злсогрога1е6 (срш Зп чаеЬе6 831ег/ерш Зп ипснааЬесЗ 68ег, р)еаье атее аЬоне) гп = шааао(1епср[аге0ЧА(п8) 5 = ьрео(6сас6ч(уо((при((аЬе[()сСЗ/пшо[е) ТЬе пигпегагог о( СЬ(а есЗиаг)оп 'ь СЬе ргодисг о( 1Ьгее 1еппв СЬе йоСа! с(ргп Зп СЬе геас(юп [(1)(2.2 х С 0с с(рш/иСЗ)1; СЬе ргороггюп о( йене дргп снЬ(сЬ снеге Зпсогрогагед (Р/Ь апс[ а (асгог 1о сопнегг СЬе 8па( на)ие (ог ьреоук аспчсу (гогп ерш/и8 1о брис(68 (10~).
ТЬе с(епопбпа1ог гергеьеп(а 1Ье 1о1а3 шааа о( 0ЬЗА (Зп п8) а1 СЬе еп6 оХ 1Ье геас6оп, ес3иа! Со СЬе а(апЗп8 гпааь (гп) р(иь 1Ье гааза (Зи п8) асуп(Ьеа(геед 6иг!п8 йе геасгюп. ТЬе Запег 'ь са)си(асе6 (гоги 1Ье гвгпЬег о1 папошо[еа о( 6(х(МР 3 псогрогаге6 6Р/) (1/56 спи !1(р)(ед Ьу (опг 6 глеб СЬе ачега8е гпо(еси(аг гпааа о1 (Ье (свг , 6ЬЗМРа (4 х 325 п8/игпи(е = 1.3 х 10а пфипо)е). ЕХАМРЕЕ: 1и а галс)оис ргип(п8 геасбоп Зи счЬ(сЬ 50% о( СЬе габюас6н((у Ьаа Ьееп гпа1еиа(, (гоги а агап(п8 геасбоп соп(а(п(п8 25 п8 о( 1епср)аСе 0г(А алс( 5 прес(6с асбч((у о( 3000 С[ггпгпо(е: 1 = 50 )сСЗ, Р/ = 0.5, гп = 25 п8, апс( 50 (2.2 х 10н60.5) прес(((с асСМ(у о( СЬе ргоЬе 25 -Г [(1.3 х 10а60.5650/3000)] = 1.5 х 10~ бра/Зс8 Оесоигаттагйп оЕ5о!игйпя Сои!и(итц Екпс((ит ВготЫе А8.27 0ЕСОЬ)ТАМПЧАТЮЬ( ОЕ ЬОШТЮМ5 СОЬ)ТА!МЬ)С ЕТН1РШМ ВКОМ10Е СА()Т!ОЫ: Р1еаяе яее Аррепгпх 12 Еог арргорпа|е Ьапдппд оЕ п|а!епа1я таг!сес! ън(!Ь <1>.
Кегпоч!пе Е$ЬЫ!огп ВгогпЫе $гогп 0Ь!А ТЬе геас6оп Ъеглнееп е|ЬЫшгп Ът|пЫе <! > апс( )5ЬГА (я генегяЫе ( л'ггаг(п8 1965), Ъи| |Ье с)!яяос|а|юп оЕ йе соп|р1ех !я негу я1о|ч апс( Гя |пеаяшес1 |и с1ауя га|Ьег |Ьап пипи|ея ог Ьоигя. Рог ргас6са1 ригрояея, с(!яяос!абоп (я асЬПечед Ьу раяя)08 йе сотр1ех |ЬгоиВЬ а ятаП со1шпп рас1|ес1 нн1!Ь а са6оп-ехсЬап8е гея(п ялсЬ ая Е)оннех Аб 50нЧ-Х8 (нлгаг(п8 1905! Ка|ПоЕЕ е| а1. !907) ог Ьу ех|гас6п8 лн1!Ь ог8апк ю!непп яисЬ ая !яоргорапо! (СоххагеП| е| а1.
1968) ог пЪи|апо1 <! > (ЪЧап8 1969). ТЬе Еоппег те|Ьод Ьая Ьееп яЬоннп |о геяи1| (п йе геп|она! оЕ ейЫ- т|п ЪготЫе со а Ь|псПп8 гапо Ье!о|н |Ьа| с)егессаЫе Ъу Пиогеясепсе, а то1аг га|Ы оЕ с)уе:пис1ек асЫ о(1:4000 (Па|По(Ее| а1. 1967). 015ро5!пе оЕ Ей|гггогп ВгогпЫе Е|Ь~|Пшп Ьго|пЫе Пяе!Е !я пос Ь18Ыу пш|а8епк, Ъи| П !я тегаЪоПхес( Ьу писгоюгпа1 епхутея со согпроипс1(я) йа| аге |по|1егасе1у пш|а8етс (п уеая| ап|1 $а1топейа гурЬииийит (МаЫег апс1 Ваягоя 1974; МсСапп е| а1. 1975; Масбге8ог апс) )оЬпяоп 1977; 5108ег е| а1. 1999).
А пшпЪег оЕ те!Ьос!я Ьане Ьееп деяспЬе|1 |о с(есоп!ат(па!е яо1и|юпя ап|1 яиг(асея йа| соп|ат ог Ьаче Ъееп ехрояес( |о е|Ь|йшп ЬготЫе. ТЬе сопсепсга6оп оЕ ей|гПшп Ьгопис1е Гп ю!и|юп тау Ъе гейкес1 |о <0.5 (л8йп1 нн1!Ь ас6насес1 сЬагсоа1, |нЬ(сЬ сап |Ьеп Ъе Гпс!пега!ее( (Мепохг( е| а1. 1990). АЬегпа6не1у, е|Ь||Пшп Ъгоп|Ые сап Ье |1е8|а|1е|1 Ъу |геа|гпеп| |нПЬ яойшп т|п|е < ! > апс( ЬурорЬоярЬогоия асЫ <! > (Еипп апд 5апяопе 1987). ОесопФапппа6оп оЕ СопсепЕгаЕег! Ьо!||6оп5 оЕ ЕЕЬ|сл)пгп ВгогпЫе (яо!и6опя соп!а)п(пе >0.5 тфп1) МеЕЕ|осl 1 ТЬ|я те(Ьос( (Ьлпп ап|1 5апюпе 1987) ге|1исея |Ье пш|а8епк асбн||у оЕ е|ЬЫтп| ЪготЫе |и йе 5и!топе!!аlт!сгояоте аяяау Ьу -200-Ео1й 1.
АгЫ яиЕЕ|с(еп! Н О |о гес)исе |Ье сопсеп|гапоп оЕ е|Ь(сПшп ЪгогпЫе |о <0.5 т8!т1. 2. То йе гея|16п8 ю106оп, а|Ы 0.2 но1шпе оЕ ЕгеяЬ 5% ЬурорЬоярЬогоия асЫ апс( 0.12 но1шпе оЕ ЕгеяЬ 0.5 м яойшп п(|П|е. М|х саге(иПу. А !МРОГ|ТАЫТ Ма)се юге |Ьа| |Ье рН о( йе ю)и|сап !я <3.0. НурорЬоярЬогоия ас|8 ь июаау яирр(!е|Г ая а 509о ю1иьоп, лнЫсЬ Ь соггоя!не апд шы| Ье Ьавс(!ес) а4|Ь саге.
РгеяЫу й!и|е |Ье асЫ |пппейа|е1у Ье(оге ые. 5одшш аЬН|е яо! с Поп (О 5 м) |ЬоиИ Ье Гге|Ыу ргерагеа Ьу йяю16п8 34 5 8 о( яойип| ш|п|е ш Н,О |о а Впа1 но1 игпе о( 500 и|!. 3. АЕгег !псиЬа|юп Еог 24 Ьоигя аг гоогп |етрега|иге, а|Ы а !агре ехсеяя оЕ 1 м юйшп ЬкагЪопа|е. ТЬе ю1и|юп тау полн Ъе сПясагс1ей Ме(Его(Е 2 ТЬ(я |пе|Ьо|1 ЯиП1агс)ес ап|1 Но(пип8 1988) ге6исея |Ье пш|а8еп!с асбнпу оЕ ей||Пшп ЬгогпЫе (п йе 5а1тоие!!а)ткгояогпе аяяау Ъу -3000-Е010.
Нолнечег, йеге аге герог|я (Ьлпп апс) 5апяопе 1987) оЕ гпи|а8етс асбй|у |и оссаяопа1 Ьа|сЬея оЕ "Ыап)ся" |геа|ес1 нн(ГЬ йе с1есоп|апипабп8 яо!шюпя. А8.28 Аррепгслх 8: Соттоп1у Иегс Тес)лпциез т Мо!еги1аг С!опт8 1. АгЫ хиЕПссепс Н,О со ге|сисе |Ье сопсепсгассоп оГ ей|гПшп Ьго|пЫе со <0.5 тВГт1.
2. АгЫ 1 чо)ите оГ 0.5 м КМп04 <! >. М|х сагеуиПу, апг) сЬеп а|Ы 1 чо1ите оЕ 2.5 сл НС1. М!х сагеВлПу, апд аПочч |Ье ю1и6оп со агап|! ас гоо|п сетрегасиге Гог зечега1 Ьоигз. 3. А|Ы 1 чо1шпе оГ 25 сл ХаОН (1>. Мсх сагеуиПу, апсс йеп с!)юаггс йе ю1исюп. 0есопсагп1пабоп оЕ 011Ше Ьо!оГ1опв оЕ ЕФЬсйоюп ВгогпЫе (е.8., е!есСгорЬогеаса ЬиГГег сопгаспсп8 0.5 ифп! еййпип Ьготйе) МеЕЕсосЕ У ТЬе ЕоПоъчсп8 те|Ьо|1 ла Его|п ! ипп апд 5апюпе (1987).
1. АгЫ 2.9 8 оЕА|пЬег1пе ХАР-16 (5!Вша-АЫгссЬ) Гог еасЬ 100 |п! оГ ю!и6оп. АгпЬег1Пе ХАР- 16 сх а попйпк, ро!утепс аЪюгЪепс. 2. 5соге йе ю1и6оп Гог 12 Ьоигь ас гоот сетрегасиге, яЬа)г|п8 П спсегт)ссепбу. 3. ЕП|ег йе ю1игсоп СЬгоиВЬ а ЪгЬагтап Хо. ! П!Сег, апг) г)1всаггс йе 61СгаСе. 4. 5еас йе 61|ег ап|С АгпЬег1Пе гесбп |и а р1авгк Ьа8, апг) г)сарове о! йе Ьа8 т СЬе Ьагагбоы |чанге. МеЕЕлосЕ 2 ТЬе ЕоПоччсп8 тесЬод !а Егот Вепааигсе (1988). 1. АгЫ 100 т8 оЕ ролчг)егер асС)часег) сЬагсоа! Еог еасЬ 100 гп1 оГ ьо!исюп.
2. 5соге сЬе ю1и6оп Гог 1 Ьоиг ас гоогп сетрегасиге, яЬаЫп8 и Гпсегтсссепс!у. 3. ЕПсег йе |о)исюп сЬгоиВЬ а ллллЬастап Ь)о. ! 61|ег, апд ссллсагс) сЬе П!|гасе. 4. 5еа1 йе 61сег апсс асс|часе6 сЬагсоа1 т а р1аьск Ъа8, апгс г)!кроле оГ |Ье Ьа8 Гп сЬе Ьахагссоиа лчаясе. Ь!ОТЕ5 ° Тгеас|пепс оГ гП1исе ю1исюпз оЕ ейЫппп Ъгоп|Ые лчсй ЬуросИогпе (ЫеасЬ) ь пос гесотгпепгсег) аз а тесЬог) оЕ ссесопсатспа6оп. 5исЬ сгеасгпепс гег!осев йе пшсаВепк асс!ч)су оГ есЬ!61шп ЪгогпЫе т |Ье 5асгглогле11а/ткгоюгпе азяау Ьу -1000-Го!6, Ьис П сопчегь йе гсуе шсо а сотроипг) СЬаС са ппл|а8епк сп йе аЪ|епсе оЕ тссгоютез ГОш11агдег апг) НоЕпип8 1988). ° В|Ь~|Пшп ЬготЫе с)есотрояея ас 262"С апс) са ипП)ге)у со Ье Ьахагс)оиь аГсег спсспега6оп ипс!ег ьсапгсагд сопгП|юпз.
° 51 игпи оЕ АгпЬег1Пе ХАР-16 ог асс!часед сЬагсоа! сап Ье иле|с со г)есопсат!пасе аигЕасеа сЬас Ъесоте сопсат)пасес1 Ьу е|Ь|гПшп ЬготЫе. Сошгпегс1а! 0есоп1асп!па!1оп К|15 5ечега1 сотп|егсса1 согпрапсез ьеП Печлееъ со ехсгасс есЫеПи|п ЪгогпЫе Ггогп ю1иссопа лчссЬ |Ье гпшипшп оЕ Еиа| апгс ЪосЬег. ТЬеье г)ечкеь спс!иде йе В|Вг бгееп Ва8 1О В)ОВепе) апг) йе Е1птипасог Руе Веточа1 5ухсет (5сгаса8епе). Се)-Яггаг!оп СЬготаго8гарЬу А8.29 СЕ):НЬТКАТ!ОХ СНКОМАТОСКАРНУ САОТ!О)х): Р!еаае нее АррепгПх 12 Еог арргорпаге Ьапсп!пд оЕ гпа)епа1а шаг)сес) нч!СЬ < ! >.
ТЬ!а сесЬпн!ие, снЬ!сЬ егпр1оуа Ве1 61сгасюп со аерагасе Ь!ВЬ-гпо1еси1аг чче!ВЬс Е)ХА Егош яиаП- ег ию1еси1ея !а иаес) шоас обеп со аерагасе шипсогрогасес1 !аЬе1ес1 с)Ь)ТРа Егош Е)!)А сЬас Ьаа Ьееп га6!о1аЬе!ес). Ноннечег, К ь а1ао иаес) ас аенега! асаВеа с1ипп8 сЬе аупсЬеяя оЕ с)оиЫе-асгапс)- ес) сс)Ь)А, с)иппц адсПСюп оЕ ПпЬега Со Ыипг-епс)ес) ОМА, Со гегпоче о1сВопис1еосЫе рпшега 6от ро1ушегаае сЬа)п геасиоп !РСВ), апс1, !и Вепега1, ннЬепечег П ь песесьагу со сЬап8е сЬе согпроя6оп оЕ йе ЬиКег сп тнЬ!сЬ Е))н)А В 6!сьо!нес). Тнно гпесЬоба аге анас!аЫе: сопчепсюпа1 со1шпп сЬгогпасоргаРЬ, нчЬ!сЬ !а чье юЬеп Ь !а песеааагу со соПесс Егасс!опа йас сопса!п сошропепса оЕ ЙПЕегепс яхея ап6 сепспри8асюп сЬгоиВЬ Ве) таспсеа рас)сес) сп йарохаЫе аупп8ея нгЬкЬ !а а гарЫ шесЬос) иаес) со Сгее ОНА 6от япаПег гпо!еси1ея ТЬе пно шохс сопипоп1у чье Ве1 шаспсеа аге 5ерЬадех апс) Вю-Се!, ЬосЬ оЕ ннЬкЬ аге ачас)аЫе ш аечега! рогоябея 5ерЬас1ех С-50 апс1 Вю-Се1 Р-60 аге Ыеа1 Еог рипЕу!и8 Е)Ь)А 1аг8ег сЬап 80 пис1еос!без !и 1еп8й.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
