Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 96
Текст из файла (страница 96)
ТЬгее зо1и|юпз |о й|з ргоЬ)ет Ьаче Ъееп ГошкЬ ° А Еапи!у оГ оППо|шс!ео|Ыез сап Ье зупгЬеяхед ъчЬ|сЬ соп|а|пз аП розяЫе зеъ!иепсез |Ьа| сап епсоде а 81чеп зеииепсе оЕ апипо асЫз. ТЬе пшпЪег оЕ гпеп|Ъегз ш й|з Еапп1у дерепдз оп |Ье де8гее оГ де8епегасу оГ |Ье содопз Еог |Ье рагдси!аг апипо ас|дя Ноъчечег, япсе аП роз- зЕЬ)е о68о|шс1ео|Ые зег)иепсез аге гергезете|1, а| 1еаз| опе оЕ П|е тешЬел ъчП! та|сЬ регЕес|1у ъч!ГЬ ЕЬе сР!ъ)А с1опе оГ Епъегезъ. То 1|еер |Ье з(хе оЕ еасЬ Гапи!у ъч)ГЬт гпапа8еаЫе ргорогдопз, зЬог| оПВопис1ео|Ыез (14 — 17 пис!ео|Ыез) аге ПепегаПу изед, йе пппипшп яхе ргасдса1 Гог ЬуЪг(д)хагюп. Ойеп, тоге |Ьап опе Еапп!у оЕ оППопис!ео|Ыез ь зуп|Ьеяхед Ьазед оп зерага|е зециепсез оГ апнпо асЫз.
Рог гпоге де|адз, р1еазе зее |Ье зесиоп оп Ре8епега|е Роо1з оЕ 068опис1ео|Ыез 1п йе (п|годисдоп |о СЬар|ег 1О. ° А 1оп8ег (40 — 60-пис1еогЫе) о68опис!ео|Ые оГ ипн)ие зе|!иепсе сап Ье зуп|Ьеягед ияп8 йе пюя сопипоп1у изед со|1оп Гог еасЬ апипо асЫ. АЬпоя сег|аш!у, |Ь|з оППопис1ео|Ые ъчП! пос тассЬ ехасду йе зег)иепсе |и |Ье сР!ъ(А, Ьш П ъчП! ЕП ъчеП епоиВЬ |о Ье де|ес|ед Ьу ЬуЬг)д(хагюп ип|1ег попз|дп8еп| сопд)г(опз.
Рог тоге де|аПз, р1еазе зее |Ье зесдоп оп Сиезяпегз |и СЬар|ег 10. 11.32 С)гаргег 11: Ргерагабоп оГ сР1чА Е)ЬгагГез апгГ бепе 1г)епгфсаг)оп ° Ап о!18опис1еогЫе сап Ье аупгЬеякед гЬас сопса)па а Ьаае аисЬ аа 1пояпе ас роягюпа оГ ЫВЬ рогепба1 бе8епегасу.!пояпе сап рагг ъч)гЬ а!1 Гоиг сопчепгюпа1 Ъааек ъчКЬоиг аепоик1у сопгргопняп8 йе агаЬгрКу оГ йе геаи!6пВ ЬуЬгЫ. Рапи!)еа оГ о!18опис!еогЫеа сап йегеГоге Ье Вепегаъе6 ГЬаъ аге гес1исе6 1п пшпЬег ап6 уеъ аге сараЫе оГ ЬуЪг)6)х)п8 Го мгъиа!1у а11 сП)ь)А с!опеа гЬас сои!6 епсобе йе ргоге)п оГ гпгегеас Рог пъоге с1егаг1я р!еаае аее гЬе кесг)оп оп 1)шчегаа1 Вааеа гп СЬаргег 10. Р)па1!у, гТ йе ачаг1аЫе ргосет аес)пенсе 1а Ггопг йе апнпо гепгнпгь оГ гЬе ргогет, гЬе сП)ь)А 11Ьгагу гЬаг ь го Ье ьсгеепе6 пшя Ье оГ ЬгВЬ с)иа11гу со епаиге гЬас пюя оГ гЬе 5' сегпн'- пиа оГ йе тК)ь)А ь гергезепсей БсгееггГггд сОНА ИЬгагГех Ьу РСЙ РСК гпау Ье гьес1 т аечега! ъчаук го Ыепг)Гу с!опек оГ 1пгегеаг т а сПХА 1гЪгагу.
Рог ехатр1е, роо14 оГ рЬа8егпЫа ог р!аяпЫа Вгоъчгп8 т йе 1п61чЫиа! ъче1!а оГ 96-ъче!1 р!асеа сап Ье асгеепе6 Ъу РСК ияп8 гъчо о118опис1еогЫе рг)тега аресгВс Гог йе беяге6 Вене. Роо1а йас Вепегаге а ргобисг оГ йе арргорпаге яке аге йеп р1аге6 ас !оъчег сопсепггагюп ап6 геасгеепей ТЬ)а ргосеаа ь гереагес1 ип61 Гпб)чЫиа! с!опеа сон!а)п)п8 гЬе беягес1 аециепсе аге Ыеп66ес1 1А1Гапс1а6 апс1 ПагпЬеге 1994; Та1сипн апд ЕодьЬ 1994). РСК ь а!ао гье6 го Гасг1иаге ьо1а6оп оГ а Ги)1-1еп8гЬ сПХА опсе а рпгпагу сПХА с1опе Ьаа Ьееп Ыеппйед Ъу, Гог ехатр1е, ксгееп)п8 Ъу ЬуЬг)61хагюп.
ТЬе П)ъ)А оГ гЬе рпгпагу с1опе 1а гье6 го с1ея8п гъчо аресгТгс о!18опис1еогЫе ргнпегя ъчЬгсЬ аге иве6 !п соп)ипсгюп чбй чесгог-зрес16с рг)тега соггеаропйп8 го аег)иепсеа гЬаг Г!ап)с гЬе 1паегг)оп яге 1КоаепЬег8 ег а1. 1991). ТЬе ргобись оГ йе РСК сап Ъе с!опе6 ап6 гье6 го гесопаггисг а Ги!1-!еп8й сору оГ гЬе сП)ъ)А ог йеу сап Ъе гайо!аЪе1ед апс1 иае6 аа ргоЬеа го геасгееп гЬе 11Ьгагу (Нат)!гоп ег а1. !991; 5ап8 ап6 ТЬотраоп 1994). Ап а!гегпайче тегЬо6 гпау Ъе сьев го агпр1!Гу а аеъ)пенсе ехгеп61п8 Ггогп а роо1 1Г гЬе!1Ьгагу ъчаа пог сопаггисгед Ьу ияп8 йгесгюпа1 с!ошп8. 1п гЫа арргоасЬ, ра)га оГ о!18опис1еогЫе рпгпега соггеаропйп8 со гЬе ВапЫп8 чессог аес)иепсеа ог йе 11п)сег-адар!ига гье6 го еагаЫьЬ гЬе сП)ь)А !гЪгагу сап Ье гье6 1п сотЫпагюп ъч!гЬ роо1а оГ 6е8епегаге о118опис1ео6деа го агпр11Гу апс1 гесочег сП)ь)А с!опеа сон!а)пгп8 зеоиепсеа гЬаг рогепба!!у собе Гог ГЬе деяге6 ргоъе)п Ге.8., р1еаае аее Е)Ьегг еъ а1.
1989; Каяпиааеп еъ а!. 1989; Соорег ап6 1ао!а 1990). Ьсгеетггд Ьу ВтгГГпр Го БресГГГс ЯаггсГ8 ПЕТЕСТ1О)ъ) ОЕ 5РЕС!Е)С А)ъ)Т1СЕ)ъ)5 ЪЧ1ТН 1ММП)ъ)ОСЕОВПЕ1)ъ) РКОВЕ5 сПХА 1гЪгапеа сопаггисге6 гп ехргеаяоп чессога аисЬ аа 18111, 18118-23, ).ХАР, апс1 ).ОКР8 сап Ье ъсгееггеъ) гай апВЬобу сВгесъе6 а8аша| гЬе ргогеш оГ инегеаг. Пъиа!1у, пКгосе11и1оае В!гега нпрппгес1 ъч)гЬ гЬе с1егпггь оГ Ьассепа! 1уяа аге коа)сесе гп а ао!и6оп сопгагпт8 гЬе ап6Ъобу.
ТЬе 61сег ь ъчааЬес1 ап6 гЬеп 1псиЬаге6 ъч)гЬ 5гар)ъу1ососсьь аигеъь ргогет А ог ъчКЬ а аесопс1 ап6- Ъос1у сВгесгес1 а8а)пя йе аресгеа-аресгВс ерКореа оГ гЬе Вгя ап6Ьос1у. 1п гЬе ог181па! 6еаспр6опа оГ ГЬе гпейой йе зесопбагу!18ап6 ъчаа га61о!аЬе!ест чбй '"1 ("гоип8 апс1 Пачь 1983Ъ; НиупЬ ес а1. 1985; 5пубег ег а!. !987). Тос1ау, йе зесоп6агу 1!8ап6 1а соча1епг1у 11п1сес1 го ап епхугпе ъчЬоае ас6чагу сап Ъе дегесгед (е.8., аПса11пе рЬоарЬагаае). ТЬе 1сеу го аиссеаа ъчКЬ гЫыпегЬос$11еа 1п гЬе срла16у оГ гЬе ап6Ьоду. 1г ь еааепг)а! йаг ГЬе ап6Ъобу еГГгс)епъ1у гесо8пгхе ГЬе 6епаъиге6 ргоГе)п !).е., К аЬои!6 ргобисе зъгоп8 я8па1а оп ъчеагегп Ыоь). 5сгеегнп8 ь гпас1е еаяег апд тоге аепя6че гТ, гп ас1йгюп, гЬе ап6Ьо6у Га с1епъеь! Ггопь а ро1ус1опа1 апгьегит оГ Ь)ВЬ гКег.
Весагье аисЬ ап6аега поппа11у геасг ъч)гЬ гпапу ЙГГег- 1итгот(исттои 11.33 епт ербореы йе сЬапсе оЕ т(етест(пц а сР)ь)А с1опе |Ьат ехргеяеа а Етацшепт оЕ |Ье рготеш оЕ !птегеат ь шсгеааей Ро1ус!опа1 апт!лета ойеп соила!п стоя-теас6пц ап6Ъосцеа йат гесоцшге попгесогпЬ(паш согпропепта оЕ |Ье Ъас|епа1 !увале; йеае ишы Ье тешоче6 Ье(оге асгееп!пц ь ипт(егта)сеп. ТЬе Ьас)тцгоипт( оЕ попарес|6с Ь(псцпц ь ишсЬ!оъчет ъчЬеп а пюпос1опа! апт(Ьот!у ь пает! аа а ргоЪе.
Ноъчечег, йе пшпЪег оЕ гесошЪ|папыЬат сап Ъе т!етессет( 1а а!ао гет(исет(, Ъеса|ье еасЬ |псцчЫиа1 июпос!опа1 ап6Ъобу сап геаст ъчттЬ оп!у а ыпц!е ерборе. ТЬе Ыеа1 ииишпо!оц!са! ргоЬе ш(цЬт йегеЕоге сопыат оЕ а сос)стаП оЕ аечега1 т(1 ЕЕегепт тпопос1опа1 ап6Ьосцеы еасЬ оЕ ъчЬ|сЬ геась ягопц!у ъч(тЬ йе с(епатиге|1 тагцет рготе!п. РОРВЕЕ-5ТВА(ъ)РЕР РМА5 А5 РВОВЕ5 сР(ь(А с!опеа епсосцпц рготе(па |Ьат Ь!пт( |о арес!Етс вес)иепсеа оЕ РХА (е.ц., тгапаспртюп Еастога) сап Ъе Ыеп66е|1 Ъу асгеепшц ехргея!оп ПЪгапеа ъч!|Ь |1оиЫе-ыгап|1е|1 Р)ъ(А ргоЬеа сотпрпяпц |Ье Ь|псцпц яте Еог йе Еастог.
ТЬыесЬпи)ие !а япи!аг !и рппс!Р1е то асгееи!пц ехргея яоп ПЪгапеа ъч(тЬ пппшпоц1оЬи1шы сРХА ПЪгапеа ате сопатгистет( !и ехргея!оп честите аисЬ аа ).цт11 апт( ХХЛР йа| ехргея с1опет( сРХА аетрлепсеа аа 6ляоп ртоте|па ъч!|Ь !3-ца1астоыт$аае айег !пбис6оп ъч(тЬ 1РТС. ТЬе ргосе!па аге йеп тгапаЕеггес( ш яти |о пигосеци1оае апт! РгоЬет( ъч(й ауитЬет!с гасцо1аЪе1е6 с(оиЫе-а!таис(ет( оПцопис!еотЫез сопта|шпц |Ье Ь|псцпц яте оЕ !итегеат. Р1асрлеа ехргея!пц рго|е(п |Ьаг геась ъчеП ъч!|Ь |Ье оПцопис1еотЫе ргоЬе аге рк)сет(, гер1атей апс( театет( аца)п Еог |Ье аЪ|!иу то Ь(пт( то Ъо|Ь ърес|6с апт) попзрестЕтс оПцопис!ео|Ые ртоЬеы ТЬе Еипс6опа1 сЬагассепат!са оЕ а рша6че тгапаспрт(оп Еастог ехргеяе|1 |п а роя6че р!ат)ие шиат ечептиацу Ъе сопбппе|1 !и ЬюсЬеписа! аяауа йат с1етест рготе!п Ь(псПиц то РХА геци1атогу аес(иепсеа апй и!|ииате1у, ш а тгапаспр6оп аяау.
ТЬ(а арргоасЬ Ьаа Ьееп лье|1 яксея6|Пу со с1опе сР)ъ)Аа епсосцпц т(!ЕЕегепт тгапаспрт!оп Еастоя оЕ чапо|я туреа (Еог геч|еьч, р1еаае аее 5!пцЬ 1993). Сипоиа1у, 6 аееша то Ье ратпси!аг!у роъчег(и1 ш йе с1оп|пц оЕ Еассога Ъе1опц!пц то |Ье 1еисше тбррег Еаии!у. Рог детаце6 Пеаспр6оть оЕ |Ье тесЬп!т!ие, р1еаае аее Нагцпе ет а1.
(1992), Соъчец ап|1 Нигат (!993), ап|1 5|ицЬ (1993). Рог 6|гтЬег |1етаца оп асгееп|пц Ьу Ь|псцпц то Пцапс(ы р!еаае аее йе !и|гас)ос|топ со СЬартет !4. С!опЕпд сО(ыА8 Ьу Ехргеияоп 5ечега! шетЬот(а оЕ зсгееп!иц аге Ъаает! оп т!с!ест(оп оЕ |Ье Ью!оц(са) аст!ч!гу оЕ |Ье рготе!п епсот(ес( Ьу йе тагцет сР)ь)А.!п аотпе сааеы тгапаЕестюп ъч)тЬ сР)ь)А ехргея!оп ПЪгапеа сап Ье пает( то асгееп Еог с!пиеа |Ьа| ехргевз рготе!па сараЫе оЕ сошр1етпеп6пц а рагбси!аг цепе6с с!е(ест |п уеаат, тпапипацап сецы ог Е. соП (Еог июге (п(оппа6оп, р1еаае аее Ргососо! 2). А чету !агце яите оЕ Ьотье1|еер|пц ап|1 геци!аготу цепеа ь ротеп6аПу ассея(Ые Ьу йь тпе|Ьой Ноъчечег, )и сааез ъчЬеге тагцет рготеш !а тю арес!ацгет! |Ьат по цепет!с асгееп ь ачаПаЫе, 6 шау печег|Ье!ея Ье роя!Ые то !ао1ате |Ье тагцет сРХА Ьу асгееп(пц ПЬгапеа Еог |Ье ргот!истюп оЕ рготе(п тпо1еси1еа |Ьат с(!ар!ау Ыо1оц!са! ас6нцу.
Рог ехатпр!е, тп тбтго аяауа Ьаче Ьееп илес( то !с!епт!Еу сРХЛ с!опт йат ехргея |Ье Ьшиап 1уп|РЬоЫпе со1опу-ат(пил!а|(пц Еастог апт( !птег!еийп-3 !и си!титеа оЕ гпаиипацап сеца (Уътопц ет а1. !985; Уапц ет а!. 198б); |гапаЕес6оп оЕ сР)ъ(Аа Ьаа Ьееп пает( то ьо!ате сРХА епсосцпц сеПышг(асе гесертоя (Мипго ап|1 Мап(ат(а !989; К!ихеп ет а1. !992); ап|1 ш(сто!п)естюп оЕ ауп|Ье6с КХАа тгапаспЬет( Еготп сРХА с1опеа Ьаа Ъееп |ьед то !ао1ате сР)ъ(Аа епсойпц Хеиорит поццбп (5ии|Ь апт( Наг1апт( !992). ТЬь арргоасЬ ь тьиацу ипт(егта(сеп ъчЬеп по ойег гпетЬос(а оЕ асгееи(пц аге ачацаЫе апт( ъчЬеп йе рготе|п ргойк| ь ыпаП епоицЬ со ц!че геатюпаЫе аяигапсе |Ьат |Ье сР)ь)А ПЬгагу ъч61 соила!п 6лП1епцй с1опеы То !псгеаае йе аепа!т(ч(ту оЕ |Ье аяау, |Ье сР)ь)А Ь |ьиацу т)(чЫес( што а пшпЬег 11.34 Огартег 11: Ргерагадоп оГсРХА Г.)Ьгаг)ея аттд Сеие Гдептфсагйп оГ роо!я, еасЬ сопбя6п8 оГ Ъетъчееп 10 апд 100,000 с!опея.
ТЬеяе роо1я аге тЬеп теятед Гог ехргеяя)оп оГ йе яес)цепсе оГ штегеяг. ТЬе 1оъчег согпр1ех)ту оГ еасЬ роо1 аПоъчя шегЬодя йат аге ге1аттче1у иьепятгче со Ъе арр1гед го а сошр1ете сР!ъ)А ПЪгагу. АГтег а роо1 ь Ыеп6Пед гЬас ясогея роя!!)че1у, П ь яцЪгПчЫед !пто яцссеяяче!у япаПег апд ягпаПег роо1я, еасЬ оГ ъчЬкЬ Гя гетеягед цп! П йе сРХА с1опе оГ 1пгегеят !я 1яо1асед. ТЬе ргосеяя оГ 6Ь яе1есг!оп апд апа!уяя сап яогпегппея Ье регГогшед гпоге гарЫ!у !Г дцпп8 яцЪсПчгяоп оГ тЬе !и!6а1 роо!, тЬе !пгПчЫиа1 с1опея аге ая68пед то гЬе)г яцЪроо!я !п а тпагпх Гоппат ('чъгоп8 ег а!. 1985).
ТЬь ехрапдя тЬе пшпЬег оГ яцЪроо!я Ьу а Гас!от оГ 2 от 3, Ьш П оГтеп!еадя гПгесг!у со йе Ыеп6Псагюп оГ йе с!опе оГ тптегеяп МеГ1ъосЬ Го ЧаИа$е С!опе8 оГ сРМА сР!ъ)А ПЪгапея аге цяцаПу р!атед ат ЫПЬ депя!Гу Гог ясгееп!п8 ъч)ГЬ ап6Ъоду ог пцс1е)с асЫ ргоЪея, апд апу с1опея тЬас геаст роя6че1у ш тЬе Пгяг гоцпд гет)ц)ге яечега1 адсП6опа1 сус1ея оГ р1ат)п8 апд ясгееп)п8 ЬеГоге йеу сап Ье сопядегед риге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
