Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 92
Текст из файла (страница 92)
ТЬЬ яер сап Ье па)су Ьесап|е |Ье сРХА оЕ ш|егея |ье!Г п|ау Ье с1еачей Ро|еп6а1 теяпсбоп ясса сап Ье рго|есте|$ Ьу п|ейу1асюп оЕ 6оиЫе-астапс$ед сРХА от шсогрога6оп оЕ ше|Ьу1су|ояпе ге|Мисс |1иппц ауп|Ьеяа оЕ Гтгат-атгапс$ сРХА. 1п е!йег таас, а а|гаш оГ Е, соц Пе(ест!че ш |Ье тст геа|пс|юп ауяеш аЬои16 Ье ые6 аа а Ьоат, тст' ягаша ге|спет РХА саггушц |пе|Ьу1су|оыпе ге|Ыиес (Ка1е|цЬ е| а1. 1988; Ъчоодсос)с е| а!. 1989).
ТЬс Ъас)сцгоипд оГ егпр|у с1опеа В цепегацу п|исЬ ЫцЬег |Ьап |Ьа| |и р!аяпЫ-рптпсд шетЬоба. Мо|| сРХА ПЪгапеа сопа|гис|ес1 Ьу оццо(6Т) рппппц аге спг!сЬс6 Гог асс(иепсса |Ьа| 1|е а| |Ье 3' сп6 оГ йе шКХА|. Рпт|ац |ий Рт(тсг-Ат)ар|от| Абчалтацсп цупгЬеа!а оГйе аесоп6 аггап6 сап Ье сагпе6 ош айег |Ье Ьогпоро!утпепсацу |аце6 сРХА Ьаа Ьсеп Пца|ед |о а чсссот. А1|егпа6че(у, аесопд-а|гапд аупгЬсяа сап Ье сагг!ед ош ияпц |Ье СиЫег-Нойпап шсйю6 (СиЫег ап6 Нойгпап 1983; биЫсг 1988). 1п йь саче, сцгессюпа! с1ошпц оГ сЬе сРХА саи Ье асЬьече6 Ьу |Ье иае оЕ а Пп)сег-рпшег апд ап ас$ар|ог Гог йе геа|псбоп епгуше 56! (М|Ы е| а1. 1989).
ТЬе Ьас1|цгоип|$ оЕ егпр|у с!опеа ь цепегацу 1о|чег тч||Ь ргипег-адар|оса сЬап |чКЬ оццо(дТ)-рг)шед аупсЬеа!а о( |Ье Еггат а|гапй Во|Ь р1аяп!6а ап6 Ьас|епорЬаце а чес|ога сап Ье и|е|$. Р)тат)чаптацса Мапу ргососо!а ге|)и!ге |Ьс ецпипа6оп оЕ япаП оццопис!сосЫеа ап6 ипые6 рт!тета Егогп |Ьс 6гя атгап6 оЕ сРХА Ьу е!естгорЬогеа!а |ЬгоицЬ а1Кацпе ацаго|е це1|. ТЬе гесочегу оЕ РХА а| йь а|аце Ь обеп роог. РГаст1|Г-ртЕтс|$ Мст)сот!| Абчаи|ацс|| це)ест| Гог Енц-(епц|Ь ог пеаг1у Еиц-!епцгЬ с!опея регЬара Ъеса|ье 1опц сРХА| аге рте(егге6 аиЪ|тгасеа Еот |егпипа) |тап|Еегаае. Ъ|тЬегеас йе опц!па1 рта|оса! (01сауаша ап6 Вегц 1982) цепега|ес$ ПЬгаг1еа о(пюс$ея сошр1ех(|у споге гесеп| те|яапа аге с1а!ше6 |о Ье ех|геше1у е|ук|еп| ап6 |о цепега|е а!шоя 10| |о 10" с!опеа)цц о( ПпЕег-рпшег РХА (Вецешаге е| а1.
1991; 5р!с)со(с)су ап6 Ма|Во!а)сее 1991). Р(са|$ аи|ацеп ТЬе опццпа1 ргососо) (01|ауагпа ап6 Вегц 1982) счаа сИ6си1с апд !епц|Ьу. Моте гпобегп чегяопа (е.ц., р!еаае асс Вецешаге е| а1. 1991; 5р(с)со(а)су апд Магцо1|1сее 199 Ц аш аццЬПу саяег Ьи| геп|а|п дегпап6!пц. Кеагпсгед со р!аяпЫ чессога. Рпт1лц сч)с)т Лап|Ест Рори1а6аи| ау 01)цап ис!со|Мех Ат) аи|ацс|| Рппипц оГГ|гас-атгап6 сРХА Ьу гапбогп рпкс|а (Сое1ег е| а!.
1982; В!ппа с| а1. 1985) сап тешет(шее 'ипргоче |Ье еЕ6- с|епсу оЕ с!опшц 5' асс)испсеа оГ а рапки!аг шКХА. Р||аачаи|ацс|| сРХА| цепегате6 Ьу гапдогп рп|шпц сеп6 со Ье япац ап6 пшя Ье сагеЕицу Егассюпа|е|$ ассогсцпц |о яге |о ецпипа|е |Ье иае1ем рори$а6оп оЕ 6пу пю1еси!ея Капдош Ьехашега аге миацу тешоче6 Ъетсчееп ауп|Ьея| оЕ Ест|с апд аесопц сРХА а|гапсЬ. КТ-РСК Мст)го|1| А|)чаитацся еНпЫег|а! ргипега" и|ау Ье иае6 Гог агпрИса6оп оЕац шКХАА гецагд!сто(йе|г асс)иепсе (р!саче аее йе 1пЕоппа6оп рапе! оп РХ!|тЕК5АЕ РК!МЕК5 |и СЬар|ег 8).
ТЬсае аге шс6 |о цепега|е сРХА ПЬгапеа счЬеп оп1у |шац ашоипь оЕ ро1у(А)' КХА (<200 пц) аге ачацаЫе. 0|Ьсг РСК рготосо1а ге1у оп цепс-срес|Т|с рпшега йа| аге иш9ие |о от ае(ест(че Гог раг|ки!аг |агце| сРХА| (РгоЬшап с| а!. 1988). Рог еха|пр!е, |Ье 5' ВАСЕ ше|Ьо6 ацо|ча агпр66са6оп оГ |Ье 5' еп6 оЕ гпКХАа Гог тчЫсЬ |оп|с сециепсе пеаг |Ье 5' еп6 (а )спо|чп (р!таас асс СЬарсег 8, Рта|оса! 9). Рцат)чаптацся С1опеа цепега|ес( Ьу агапка|6 РСК ап|РИса6оп аге П)сс!у |о соп|аш а ЫВЬег пшпЬет оЕ пипа6опа |Ьап |Ьоае ргодисед Ьу ойег гпеапя Ме|ЬосЬ тЬа| тес)шге ип!Пие рпп|сг асс)иепсеа сап Ье иае6 оп1у |Т |Ье раг6а1 ае|(иепсе оГ а сРХА ог ||а соцпа|е ртосеш ы а(|сабу ачацаЫе. 11.16 СЬаргег 11г РгерагаЯоп ог сРТчгА Т.г!ггаггеь апс! Сеие Иепгг)!гас!оп с1ошп8 1оп8ег сРХАв гпау Ъе гтргочес) (О!сауата апс! Вег8 1982; СиЫег апс1 Нойтап 1983; Р'А1еввю апс) бегагс! 1988). Ргес!иеп11у, Т4 РХА ро1угпегаве ог а йегтовгаЫе ро!угпегаве висЬ ав Р~и !в асЫес! аг 1Ье епс! ог 1Ье весопс)-вггапс) геасг!оп го ро11вЬ йе гегппш оЕ 1Ье согпр!егес) с!оиЫе-вггапс)ес) Ров.
Ноъчечег, 8епегаг)п8 Ыипг епс)в гп 1Ь!в Еайюп вотег!тев геви11в !п 1овв ог" 5'-1епшпа! вес!иепсев во 1Ьаг йе геви11!п8 сРХА с!опев аге 5-30 пис1еог)с)ев вЬоггег йап йе ог!8!па! тКЫА (Сгегагс! апс) Р'А1еввю 1993). Яерlасетеп1 БупЯге515 о1 ТЬе оесоггд Мгаггд оГ сОНА 1п й|в тегЬой ччЬгсЬ гчав !пггос)исес) Ьу 01сауата апс1 Вег8 !1982) апс) тос)!ггес! Ьу биЫег апс! Нойпап (1983; СиЫег 1988), йе ргос1исг оГ Йгвг-вггапс1 вупгЬеяв — а сРМА-тКМА ЬуЬг!с!— ге ивес1 ав а гегпр1аге уог а и!с1с-ггапв!агюп геас1юп (р1еаве вес р!8иге 11-4).
Клаве Н ргос!осев пк)св апс) 8арв 1п 1Ье тВХА вггапс! ог йе ЬуЬг!с), сгеаг!п8 а вепев оу гс1чА рПпгегв 1Ьаг аге овес) Ьу Е. соЯ РХА ро1утегаве 1 с)иг)п8 йе вупгЬеяв ос йе весопс) вггапс) оусРХА. ТЬе геасгюп Ьав йгее тагп гчггиея ° 11 1в чегу ейк!еп1. ° 11 сап Ье сагггес1 оиг с!!гесс!у ияп8 1Ье ргос1исгв о1йе Ягя-вггапс1 геасгюп, ччЬ!сЬ пеес1 по гиг- йег 1геагтеп1 ог риПВсагюп. ° И е1итппагев 1Ье пеес1 го иве пис1еаве 51 го с!еаче 1Ье в!п81е-вггапс)ес) Ьа!гр!и!оор !п йе с)оиЫе-вггапс)ес! сРХА, а геасг)оп йаг !в с)1йки11 го сопгго1 апс! Тгес)иепг!у геви11в гп а Вгеаг !овв ог сРХА. "горио течесве сгапвсппе вудро г 1геаг чгггП ПНаве Н апб ОНА рогугпегаве ! гарро и — -ь- -и-- ТТТТТТ 1геа1 чгПП Т4 ОНА рогугпегаве ТТТТТТ Г!СРКЕ 11-4 5сЬета1!с Тог Вав!с СиЫег-Нойтап 51гаге А вепев о1 йгее епгутаг!с геасгюпв !в овес! 1о 8епегаге с)оиЫе-вггапс)ес! с0!9А.
Г!гвг-всгапс! вупгЬев!в !в !и!1!агес! ив!п8 ро!у(с!Т), 1Ье тйгНА гегпр!а1е !в геточес! Ьу 1геа1гпеп1 ъч!1Ь КЫаве Н, апс! весопс)-вггапс! вупгЬев!в !в сагпед ои1 ияп8 0ХА ро!угпегаве ! апс! Т4 0ЙА ро!упгегаве. ТЬе геви!1ю8 с)оиЫе-вггапс)ес! сРМА ргодис1 !в !ей гп а Ыипг-епс)ес! вга1е, сопчеп!епг 1ог виЬвесргеп1 аиасЬгпеп1 о1 !!п!сегв ог адаргогв 1о 1ас!!!1а1е с!опгп8. !пттодиспст 11.17 А1йоиВЬ шоат сРХА ПЬгапеа аге поън сопягиссед ца!п8 а гер!асетпепт теасдоп то зуптЬеа!ге тЬе аесопд ягапд оЕ сРХА, йе геасдоп т1еьспЬед Ьу Сиыег апд НоЕЕшап (1983) ргеаепта тЬгее ротеп6а1 ргоЫешя (1) Еи)тагуот(с гпК!ъ)Аа саггу "сар" атгистигеа ас йе(г 5' сегппш, апд В тх пот с1еаг Ьоъч тЬехе сара аге гешочет! ао йат йе доиЫе-атгапдед сРХА сап Ъе (паегсес1 !пто а рго1сагуодс чессог; (2) тЬе гер!асептепс геастюп )а шсараЫе оЕ ауптЬеясдп8 тЬе зесопд хтгапд оЕ сРМА соггезропсПп8 то йе 5'-тепшпа! геВдоп оЕ йе шКХА; апд (3) Ьатгрш рппип8 оЕ аесопд-атгапд хуптЬеяз тпау в66 оссиг дипп8 тЬе гер1асетпепт геасдоп тЕ Крахе Н ейк)епт!у гегпочет тЬе шК)ъ)А вет)иепсех тпппесПате!у ад)асепт то тЬе сар а!гостите.
1п ргастке, Ьоънечег, тЬехе т1тхатЬ апсаВеа тигп оит пот то Ъе аепоия ТЬе ргодцста оЕ йе гер!асетпепс геастюп сап Ье еЕ6с(етп1у )пьегтед (пто рго1сагуодс нес!ига ъч(тЬоит таЫп8 апу арес!а! зтера то гегпоче тЬе сар а!гостите; йе гехи!т(п8 сРХАа аге ойеп негу пеаг!у ЕцП-!еп8й, 1асЫп8 оп!у а Ееън пис1еотЫеа соггеаропгПп8 то йе 5' тетю(пца оЕ тЬе шК)ъ)А; апд хе!Е-рппип8 иаиаПу ассоипта Еог <1098 оЕ тЬе зесопд-хтгапд аупйеяя О!теопис!еоЕЕЕЕе-рпптесЕ БупйехЕь оЕ ЕЕте оесоптЕ ЯгаптЕ оЕ сО(ъ)А Вот гоидпе сопатгисдоп оЕ сРХА ПЬгапея тЬе ятпр1е гер1асешепт геасдоп дехспЪес1 Ъу СиЫег апд НоЕ6пап (1983) !а регЕесду адет!пате.
Ноъчечет, (Е тЬе Воа1 ь то ехтаы(аЬ ехргезяоп !тЬгапех (ънЬкЬ гет)ц(ге ЕиП-1еп8й сРМАа) ог то с!опе йе 5'-тегпцпа! ьет)иепсех оЕ ец)сагуотк шКМА ън(тЬ ЬтВЬ еЕ6с!епсу, йе шетЬодх оитПпет1 Ье!оъч оЕЕег хоше атЬ апта8ея ° Айег сошр!ебоп оЕ Етгат-атгапд аупйеяя сегпппа1 тгапаЕегаае сап Ье цаед то атЫ Ьотпоро!угпепс таПа оЕ дС геаЫиех то 1гее 3'-Ьут1гоху! Вгоирь (КоиВеоп ес а1.
1975; 1.апд ес а!. 1981). ТЬ!а тат1 В йеп ЬуЪг!д!хед то о1т8о(дС), ъчЬкЬ аегчеа ах а рпшег Еог ауптЬех!а оЕ тЬе аесопд атгапд оЕ сРМА (р!еаье хее р!Вите 11-5). ТЬе ейк!епсу оЕ тЬ(а тпетЬод хееша то дерепд оп йе рагтки!аг тпКХА ипдег а!иду. 1п тЬе Ьеат сааех (е.8., сЬ(с1сеп 1уаохуше шК)ъ)А (1.апт1 ет а1. 1981)), ЕцП-!еп8тЬ с1опеа оЕ сРХА сап Ье оЪсашед ън(тЬ ЫВЬ ейктепсу; отЬег шК1чАВ Ьоъченет, Ьаче ргочЫед тпоге чапаые гехи!та (КоиВеоп ет а!.
1975; Соо1те ет а1. 1980), регЬарь гебесдп8 йе ге1адче еЕВс(епс(еа ън(тЬ ъчЬ!сЬ тепп(па1 !тапа(егаае иаеа йе 3' тегппп! оЕ д(йегепс Етгат-хтгапд сРХАа аь ацЬатгатех Еог Ьогпоро1утпепс таПш8. ТЬе ргеьепсе оЕ о68огпет(с таПа ат еасЬ епд оЕ тЬе Етгат-атгапд сРМА ргочЫеа ап оррогтиппу то аптрПЕу йе сРЬ)А ш ч(тго Ъу РСК (Ве1уанх)су ет а1.
1989; Татп ет а1. 1989; ъъте!аЬ ет а!. 1990). ТЬ(а (х цхеЕц1 ъчЬеп йе агпоипт оЕ ачаПаые тпКХА ь тоо япаП Еог ргодцс!п8 сР)ъ)А Ьу яапдагд ргоседигея Ноънечег, Ъесацхе РСК агпр66садоп оЕ 1оп8 сРМАх ы !пеЕЕтс(епт, тЬеге (а а ьтгоп8 ае!есдоп а8а!пхт 1агВе сРХАя ° О)сауатпа апд Вег8 (1982) цхед а Ега8шепт оЕ р!аяпЫ РХА саггу(п8 а йогт таП оЕ дб геядиеа аь а рптпег тот хесопд-ьтгапд хуптЬеях (БВиге 11-6). ТЬе дб гехЫиеа аге аппеа!ед Со а Ьогпоро!угпепс !таст оЕ дС геьЫиеа йат Ьаа Ьееп атЫет1 то йе 3' тегпипиь оЕ тЬе Етгат ьтгапд оЕ сРМА Ъу тегпппа! тгапаЕегаае.
А!тЬоцВЬ йе рготосо! ВепегаПу ъчог)сх ънеП, В (х 1аЬот(оця гет)ц(т(п8 гехтпстюп епдопис!еахе гПВеатюп оЕ йе шКХА:сРХА дир1ех, ЕоПоънед Ьу йе атЫгдоп оЕ а Ега8шепт таПед ъчВЬ дб со рпгпе йе аесопд-атгапд гера(г геасдоп. 5ечега! пюд(Етсат!опт Ьаче Ьееп т1еаспЪед йас аипрПЕу йе с1ошп8 ргоседцге Ъу ош(тт(п8 йе пеед 1ог тЬе херагате иратгеаш!ш)сег тЬат (х цаед то ргипе ьесопд-хтгапд ауптЬеяа апт1 то )ош йе т1оиЫеатгапдед сРХА то йе р1аяпЫ. ТЬеае пюс66садопз шс!иде: ТЬе изе оЕ хуптЬет(с рптег-адартогх тЬат саггу ЬотЬ Батора!утелс тат)х Еог рг(ш(п8 тЬе хуптЬеях оЕ йе Етгвт апд аесопд зттапдх оЕ сРХА апд геатпсдоп ятеа Еог с!ошп8 (пто р!аяшда (Со1ес1оцВЬ апд ЕгПтх 1985) апт! ЬастепорЬа8е )ъ нес!ига (Кгаъч(п)се! апд ХоеЬе1е(п 1986; Нап ет а1.
1987). ТЬе ихе оЕ рпгпег-адартога Ьаа йгее адчапта8ея Е)тат, 11.18 О!ар(ег 111 Ргерага(гоп оЕ сР)чу йг)ггаггеу апг( Сепе Иеп(фса((оп югбррр иве о!где(бТ)-абер!о! 1 апб гечегвв 1гапвоггр1аве 1о вупяевае Огв1-в1гапб СОМА гп7611 1 гегпоче ЯМА апб ипивеб о!(до(бТ)-абер!о! 1, иве !епп!па! 1гап1егаве 1о абб 'попюро)угпепо 1аг!в 1о Гпе 3' епб о1 СОМА ео, ео, ч ТТТТТТргппег-абаргог 1 666666 ! ргвпе вупупевв ог веоопб-в1гвлб ООМА чч)!П а 1)пвег-абер!о! 1 рпгпег-абар1ог 2 СССССС 666666 ТТТТТТ ргипег-аба 91ог 1 ! сопггпие е!опда!юп ог веоопб-в1гапб СОМА рпгпег-абар1ог 2 СССССС рпгпег-абар1ог 2 666666 ААААААрг!грег-абар1ог 1 ТТТТТТ рпгпег-абаргог 1 ° йй СССССС 666666 Е(в 1)КЕ 11-5 Ноторо!угпег!с РПпипд о15есопг(-в(гапг) СОМА йе пшпЬег оЕ егере !ино)нег1 ш (Ье вуп(Ьев!в апг) с!оп!О5 оЕ сРХА Рв гег(исег(.
Рог ехашр1е, ш (Ье рго1осо! г(евсг!Ьег) Ъу Нап ег а1. ( ! у57), (Ье сР)ч)А-шК)н)А ЬуЬгЫ !в аггасЬес1 го а ЪасгеПорЬа5е ). чесгог Ъу вуп(Ьегк аг(ар!ига ЬеЕоге вупйеяв оЕ йе весопг( вггапг) оЕ сРХА. ТЬ!в е1!ш!пагез венега! яерв йас аге ге!риге!( тчЬеп г(оиЫе-аггапг1ег( сРХА !в с! опег( Ьу аг(йг!Оп оЕ вуп(Ьег!с 1!п1сегя 5есоий, ТЬе !псгеавег( ейк!епсу оЕ рПиип5 оЕ весопг(-вггапг( вуп(Ьеяв у(е1й!(ЪгаПев (Ьаг сопсаш а сошрагаг!не!у Ь!5Ь ргороггюп оЕ 6111- 1епцгЬ сР)н)А шо1еси!ев.
ТЬ!Тг(, 1Ье шегЬог) сап Ье а11арге11 го а11оьч йе агпр1!Е!саг!оп оЕ Еггв(-вггапг( сР)н)А Ъу РСгс. Ногчечег, (Ьеге аге а!во воше йвадчапга5ев! А11 оЕ йе с1опев 5еиегагег( Ьу Ьогпоро1ушегк рПиип5 оЕ аесопг(-вггапг) вуп(Ьеяв саггу а !гас! оЕ г)СЫС гевЫиев ипшег!!асе!у ирвггеаш оЕ йе вег)иепсев соггевропйп5 го йе шК)ч)А гегпр!аге. ТЬе ргевепсе оЕ (Ьеве агЫЬюпа! вег)иепсеа гпау шЬ1Ь!г ггапвспргюп оЕ РХА Ьой ги чино апс1 ш чЬго.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
