Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 90
Текст из файла (страница 90)
Ме|Ьода Ьаче йегеГоге Ьееп деч!аед то епгкЬ еКЬег |Ье агат|!п8 рори1атюп оГ тпКХА шо1еси1еь ог доиЫеа|гапде|1 сРЬ[А ьуптЬеа!тед !готп К Еог вес)иепсеа оЕ !птегеат. ЕппсЬшепт аПочча йе а!те оГ йе сРХА ПЪгагу Со Ъе гедисед апд десгеазеь йе соьт апд !аЪог шчо!чед ш асгееп)п8 Гог йе деягед сРХА с1опея 1пггодисг(оп 11.9 11 ы д!ЕПси11 го оЕЕег арест ци!де!шеа гецагсцпц гЬе с(гсигпяапсеа йаг гес!шге еппсЬ- гпепг ргоседигея Аа а ги1е оЕ гЬитЪ, Егас6опабоп оЕ тКЬ(А ь ргоЬаыу иппесеааагу !Е йе сРЬ(А оЕ шгегеаг ь ехресгед го Ье ргеаепг аг а Егеоиепсу >! ш !0~ ш а ПЪгагу оЕсРЬ)А с!опеа аупгЬеяхед Егогп ипугасг!опасед тКЬ(А. Епг)сЬтепг Ьесотеа пюге агггас6че аа гЬе пшпЬег оЕ с1опеа го Ье асгеепед (псгеааеа аЪоче ! пицюп.
Сопаес)иепг!у, реп деяцп!пц а асЬете го с1опе а арес!Пс сРЬ(А, П ь нпроггапг го )спо~ч гЬе арргохнпасе Егес)пенсу МгЬ хЬ~сЬ йе тК!чА оЕ 1пгегея оссига ш гЬе ЪиПс, ипЕгас6опасед рори1абоп оЕ тК)4А то1еси!еа ияпц опе ог тоге оЕ йе тегЬода девспЪед ргечюгь1у (р1еаае аее гЬе д!асия!оп оп 1пгецг!гу оЕ гЬе тКЬ(А, аЬоче). РгасЕЕопаЕЕоп оЕ тйХА Ьу Яке ТЬе ягпр1ея гпегЬод го епгкЬ ргерагаг!опа оЕ тКЬ(А Еог аеииепсеа оЕ !пгегея Ь го Егасгюпаге йегп ассогсцпц со яке. С!еаг1у, гЬ~а тегЬод ч ог)са Ьеаг Еог тКЬ)Аа гЬаг аге ншсЬ 1агцег ог япаП- ег !п яхе йап гЬе ЬиПс гпКЬ(А оЕ гЬе сеП. ТЬе гпос1а1 а!хе оЕ гЬе тВЛМА рори!а6оп ехггассед Егогп гноя суреа оЕ гпапппа!гап сеца Ь -!.8 )сЬ, апд гпКЬ(Аа япаПег (п яхе йап 700 Ьааеа ог 1агцег гЬап 4 1сЬ сап Ье еппсЬес1 аг 1еая гепЕо!д Ьу а япц!е гоипд оЕ депягу цгасцепг сепгпЕица6оп сагпед ои! ипдег депагиппц сопгПгюпя Ноюечег, П Ь ппроггапг го гететЬег гЬаг и !а по! роя1- Ые со ргесцсг МгЬ сеггашгу йе а!ге оЕ ап тКЬ(А Егот йе яхе оЕ а ргосеш Еог и Ь!сЬ !г сос1ея ТЬеге Ь сопа!дегаЫе чапагюп !п гЬе яхеа оЕ гЬе оп!гана!агед гец!опа оЕ тКЬ(Аа (раг6си1аг1у гЬе 3'-оп!гана!агед гец)опа); гпапу ргоге!па рипйед Егот сеПа аге с!еачаце ргодись оЕ 1агцег ргесигаога апс1 тану ипс1егцо ехгепыче роагггапа!аг!опа! тод!Екаг!оп.
Ноъчечег, гЬе яге оЕ гЬе ипгпосППед ро1урергЫе сЬа!и ргоч!деа а пнпипа! еянпаге оЕ гЬе иге оЕ гЬе тКЬ(А: ! 0,000 да1- Гопа оЕ ап ачегаце ро1урерГЫе Ь епсодед Ьу -280 Ьазеа оЕ тКЬ(А. Е1ессгорЬогеыа гЬгоицЬ ацагоае це1а ц!чеа гЬе Ъея аерагаг(оп оЕ то!еси1еа оЕ тКЬ)А оЕ д!ЕЕегепг яхея Ьиг гЬе гесочегу оЕ К)4А Егот це1 а1кеа ь цепегаПу роог. 8ед!тепгаг!оп гЬгоицЬ аисгоае цгагПепь Еогтед !и попс1епатппц ао1чепь геаи!га ш цоос1 гесочегу, Ьиг йе ргеаепсе оЕ аесопдагу аггистге !п гЬе КЕ!А оЕгеп сопЕоипда еЕЕесг)че Егас6опагюп. Ап а!гегпа6че Ь аисгоае цгасцепг сепгпЕицабоп гп гЬе ргеаепсе оЕ ап ацепь аисЬ аа гпейу!гпегсигк ЬудгохЫе, ъчЬ!сЬ депагигеа аесопдагу япкгиге (п КЬ(А (8сЬъче!пЕея ег а1.
! 982). ЕасЬ Егасгюп !а гЬеп амауес1 Еог йе ргеаепсе оЕ йе тКЬ(А йаг епсодеа гЬе ге)ечапг ро!урерг!де, Туркацу, ап ажио! оЕ гЬе КЬ(А !п еасЬ Егасг!оп ь !гана!агед !п а се!1 Егее ауагет, апд йе геаи11!пц ро1урергЫез аге апа1ухед Ъу нпнтпоргес)рна6оп апд е1есггорЬогеяа йгоицЬ ро1уасгу1агпЫе це!я А!гегпа6че!у, а!нрюь аге !п1ессед 1пго чеиориг оосугеа (Еог геч!еч, р1еаае аее Ме!гоп ! 987) апс1 йе геаи11!пц ргодись аге аааауед е)йег Еог Ъ!о1оц!са! асг!чну ог Ьу нппплпоргес!рКа6оп апд це! е1есггорЬогеяя ТЬе Егасг!оп йас сцгесь йе аупгЬеаь оЕ йе цгеагеаг агпоипг оЕ гЬе ро!урерг!де ргодисг ь гЬеп гьед аа гЬе яагбпц тагег!а! Еог сопягис6оп оЕ а сРЫА ПЬгагу, А та)ог дгаъчЪас)с оЕ гЬ!а гпегЬод оЕ гпКЬ(А Егасгюпа6оп ь гЬе пеед го ъчог!с сдгЬ гпегЬу1гпегсипс ЬудгохЫе, а ро!аопоиа согпроипс1 оЕ шясцогь гохкну.
Ггас(Еопа1Еоп оЕ СОХА 13п61 йе нид !9808 Егас6опа6оп оЕ тК!ч(А хаа йе гпейос1 оЕ сЬо!се Еог с!отпц тКЫАа гЬаг епсоде 1агце ргогешя Нои ечег, аа тегЬодв Еог гЬе аупгЬеяа оЕ сРЬ)А Ьаче нпргочед, Егасгюпагюп оЕ доиЫе-ягапдед сРЬ(А Ьаа Ъесоте а гпоге ргас6са1 а1гегпабче, апд йеге аге пою гпапу ехатр1еа оЕ ехггете1у!агце сРЬ)Аа гЬаг Ьаче Ьееп с1опед Ъу Егас6опабпц сРЕ4А, гайег йап йе тК!чА Егот юЬкЬ 11 тчаа сор(ей Еог ехагпр!е, Ьшпап Еасгог У!11:С (Тоо!е ег а!.
1984; гчоод ег а1. 1984), Ьшпап аисгаае-!апта!гаае (Нипхцсег ег а1. !986), апд Ьшпап ПН;гесергог-ге!агед ргоге!и (Негг ег а1. 1988). ргас6опаг!оп оЕ сРЬ(А Ьаа гпа)ог адчапгацея Р!ч(А Ь!еаа аиасер6Ые гЬап тКЕ4А го децгада6оп Ьу сопгат(паг!пц пис1еааея и сап Ъе Егасгюпагед пюге ассигаге1у Ъу е1есггорЬогеа!а йгоицЬ ацагоае це!а ог пеигга1 аисгоае цгасцепь (К!ейег !99!); апд япсе гЬе 11.10 Отартег 11: Ргерагабоп оусРИА !лЬгаПет апт( Сепе!т)ептт)тсат(оп йас6опа|юп сап Ъе сагпед оц| ат а!аге ага8е 6цпп8 йе сР)ъ(А с!оп|п8 ргогосо1, |Ье сЬапсе оЕ |шЬьет)цент ш!аЬарв (ъ ге|1цсе|1 ап6 йе ргоЬаЬ!!!ту оЕ оЬ|а(шп8 а Ец11-1еп8й с!опе оЕ сРХА !а шсгеаьей Ргас|юпа6оп )т цаца!1у сагпе6 оцт айег а11 оЕ |Ье епху|па|к геаст!опз шчо!че6 )и сР)ь(А ьуитЬеяь Ьаче Ьееп сошр!ете6 ап6 )цат ЬеЕоге йе сРХА га )пьегтед !иго а честог.
Еттипо!оеЕса! РигЕЕЕсаЕЕоп оЕ Ро!ухотев Ап а1|егпабче шетЬо6 оЕ епПсЬп|епг, поъч гаге1у етпр!оуей цъеь апт!Ъоб!ез |о рцпЕу ро1угюшеь |Ьа| аге тгарре6 (и |Ье аст оЕ ьуптЬеь!т!и8 |Ье ро1урер|Ые оЕ !итегеат. ТЬе тесЬп)т)це деьспЪед ог)8!па!!у (Ра!асюь е| а!. 1972; ЯсЬесЬ|ег !973), ъчЬ~сЬ !пчо)че6 |Ье нппшпоргес)рйа6оп оЕ ро1у|ютпея ъчог1|е|1 ъче1! Еог шКХАь епсо6(п8 аЬцпдапс!у ьуптЬеяте6 рготешь ацсЬ аь а1Ьцпцп ап|1 нппшпо81оЬц!|и, Ьц| аттешрта со арр!у йе ше|Ьо|1 |о шКХАь оЕ1еыег аЬцпбапсе |чете 8епега1!у 6(ьаррош6п8.
Ноъчечег, йе !птгобцст(оп оЕ !шшцпоаЕЕ|п!ту со!цшпа (ЯсЬцтт ес а!. !977) ап6 р тоге|и А-8ерЬагоье со! цшпа (БЬар!го апд 'тоцп8 198 ! ) !е6 |о а ЬпеЕ геяи8епсе оЕ |Ье тесЬ- п)ъ)це ш йе гиЫ 1980я рог ехагир!е, Когшап ес а!. ( 1982) цаес1 а июпос!опа1 ап6Ьос1у 6(гессед а8ашат |Ье Ьеачу сЬа(п оЕ тЬе Ьцшап Н1А-РК Ь)атосошрат!Ъ!1(ту апт(8еп то Ь!п|1 ро!узотпеь аупйея|йп8 йе паасепг ргосе|п со рготеш А — ЯерЬагоае со1шппя ТЬе ро!уьошеа ъчеге йеп 6)атос)- а|е|1 ъч)тЬ ЕРТА (етЬу1епе6!аш!пететгаасет)с асЫ) ап6 йе шКХА |чав )ао1ате6 Ьу о1|8о(|1Т) сЬготпасо8гарЬу.
ТЬе 1ш|пцпоаЕЕ|п!ту-рцг!Етеб тпК)ъ(А, ъчЬ|сЬ гергеаепгет) оп1у 0.01 — 0.059о оЕ йе то|а1 тпК)ь)А, ъчаз цаед Ьо|Ь то ргераге сРХА ргоЬеь ап|1 то сопя|гост сР)ъ)А с1опея Уа!п8 япц!аг шегЬосЬ ъч(гЬ ро1ус!опа1 апт!аега, Кгаца ап6 КоьепЬег8 (1982) оЪташе6 а 6300-Ео16 рцпйса6оп оЕ |Ье тпКХА ГЬат епсодез тат 1гчег суьтайюп!пе (З-ьуп|Ьаье, ап|1 Китае!! ес а!.
(1983) )то!атей сР)ь(А с1опет Еог |Ье Ьотйпе 1очг-с1епяту 1|рорго|еш гесер|ог, ъчЬоае шКХА !а ргеаепт ат -80 сор!еьтсе11 !и Ьочше абгепа! се1!я А1|Ьоц8Ь а роъчегуц1 тесЬшт)це, нппшиоай)пйу рцпйса6оп оЕ ро!узотпеа саппот Ье арр1!е6 цп!четка!1у. Р!гът, й с!еаг!у ъч111 по| ъчог1| цп!ея а ге!|аЫе яшгсе оЕ тпатепа! )а ача|!аЫе Еготп ъчЬкЬ то !ао1ате Ецпсбопа1 ро1уаотпея ТЬ(а !а пот айчауз роаяЫе, еврее)а1!у ъчЬеп йе атагт1п8 шасепа1 )а а т)яше ог ог8ап |Ьас )а пот сопцпоп!у ача)!аЫе.
Яесопй й Ьаь по| уе| Ьееп ьЬоъчп |о ъчогК Еог шКХАыЬа| аге ех|гегие!у гаге (! шо1есц1етсе11 ог 1еы). Ецг|Ьегтпоге, гЬе тиссен оЕ йе тпейо|1 с1ерепсЬ епбге1у оп |Ье арес(Е|с)ту, ачЫйу, ап|1 фуре оЕ |Ье раг6сц!аг цпишпо8!оЬц1ш, ап6 йе геац1га оЬ|аше6 ъч(тЬ опе ап6Ъо|1у саппот а!ъчауа Ье стана!атей 6!тест!у то апойег. Р(па1!у, йе шетЬо6 тес)ц)ген йе цае оЕ ге1атп е!у!аг8е т)цап66еь оЕ ап6Ъобу. Раг|1у Ьесацье оЕ тЬезе 6!ЕЕ|си!т!ея цппшпоайшйу рцпйса|юп оЕ ро!уьошеа Ьаз Ьееп ацрегьес1ед Ьу |1ече1ортпепт оЕ сР)ъ)А ехргея)оп честить (е.8., Л8|!1 апд ЛИАР!1) |Ьас а1!оъч йе 6(тест )ао1атюп оЕ сР)ъ(А с!опт епсо61п8 арес|йс ап68епя БиЬЕгасЕЕче Оотпд 1| !а печет еаъу то Ыепт!Еу сР)ъ)Аа соггеароп6!п8 |о шКХАа |Ьас аге ехргеые|1 |п!оъч аЬцпдапсе. Ноъчечег, |Ье ргоЫеш Ьав Ьееп аде!югате6 Ьу 1шргочетпепта !п шетЬобь цьей |о сопягцс| |шЬ- |гас|ей сРМА!!Ъ|апея ТЬе анп оЕзцЬ|гаст|че с1ошп8 (а |о гетиоче тес!цепсеь йат аге оЕ по !и|егер| Егоп| йе сРХА ргерага|юп ЬеЕоге сопягцстш8 а 1|Ьгагу.
1Е ечегуй|п8 ъчог)са ъче!1, гЬ(а геац1та ш ап еппсЬ|пеп| оЕ |Ье гаг8е| ае|)цепсея Кетпоча! оЕ ни|чанге|1 аеоцепсеа (а асЬ|ече|1 Ьу ЬуЬг!6)т!п8 а!п81е-атгапс1- ей сР!ъ(А ргераге|1 Егош тпК)ъ(А ех|гасте|1 Егоп| |Ье т)яше оЕ )птегеат то а 10 — 20-Ео!Й ехсеаа оЕ Р)ъ(А ог К)ъ)А (|16чег) ргераге|1 Еготи апойег яшгсе йа| 6оеь пот ехргея йе 8епеь оЕ штегеьг. Айег ЬуЬ|Ыь соп|ашш8 |Ье сР)ъ)А Ьаче Ьееп гешочей |Ье геябца1 сРХА шо1есц1еь аге с1опе|1.
()пт!! гесеп|1у, ацЪтгас6че с1оп)п8 !пчо1че6 цяп8 чету!аг8е атпоцптз оЕ ро1у(А)' К)ъ)А то 66че япа!1 ашоцпгь оЕ сРХА |иго ЬуЬ|16я ТЬе РХА-К)ъ(А ЬуЬг)сЬ ъчеге |Ьеп ьерагасе6 Еготп цпЬуЪг)6(теб сРМА Ьу Ьу|1гохуара|йе сЬгошато8гарЬу (е.8., р1еаае аее Яаг8епт ап|1 РаъчЫ !983; !пттодист|оп 11.11 Неъ1Нс1с ет а1. 1984; 8аг8епт 1987; Тгачта ет а!. 1987; Тгачь апд 8итс!|ЕЕе !988). !ъ(оъчат1ауя ЬастегюрЬа8е рготпотега сап Ье иаед то 8епегате КХА дпчега Еготп рори1ат|опа оЕ с1опед сР)ъ(Ая РСК сап Ъе иаед то 8епега|е Р!ъ)А с|пчега (ТипЫш ес а1. !990) Егогп сР!ъ(Аа с1опед !п яп81езтгапдед честить (Ри8иЫ ет а!.
1988; КиЬепате!и ет а1. 1990), апс1 ЬуЬт|да сап Ъе сартигес| Ьу Ьют|п:ачЫ)п аЕЕтп|ту сЬгошато8гарЬу (Ри8шд ет а1. !988; КиЬ|патеш ет а1. !990) ог оп!атех Ьеада (Нага ет а1. 1991). рог а 8оод 8епега| геч)еъч, р!еаае аее 8а8егатгош ет а1. (1997). С|)тъКЕМТ МЕТНООЬ ОГ ЬУМТНЕ$!Х!МС СОМА ТЬе Ьаяс атгате8у Еог епхутпат|с сопчегаюп оЕ тпК!ъ(А то сРХА Ьаа сЬап8ед 1811е япсе йе тпЫ 1970я Ъит йеге Ьаче Ьееп 8геат ппргочетпепь то тЬе еЕЕтс!епсу оЕ йе епт|ге ргосеяи !п атЫЫоп, тЬеге |а поъч а сЬоке апюп8 аечега! епхушеа ат тпапу атеря ЬупФЬе8!8 оЕ Е|г8|-8|гапг! СОМА ТЬе Етгат атгапд оЕ сРХЛ ь ауптЬеягед Ъу ап К)ъ(А-дерепдепт РХА ро!ушегаае гечегае тгапаспртаъе ияп8 ро!у(А)ъ К!ъ)А (ог шК!ъ(А) аа а тегпр1ате апс| ргппед Ьу е!йег о1т8о(дТ) ог гапдотп о118опис!еотЫе ргипегя ттеттегве Тгапьегтргаие 8ечега! д|ЕЕегепс Еогша оЕ течеье сгапвспртаае аге ачат!аЪ|е сошгпегс|а11у; ° Ач!ап течете тгатттсг!рттье, ъчЬ|сЬ |а рипйес1 Егош рагт|с1еа оЕ ап ач!ап 1еи)сепиа ч|гиа (АЕАт).
° Мит|тте геъ егте тгаитспртате, ъъ ЬтсЬ |а |ао1атед Еготп а атга|п оЕ Е, со1т йат ехргеяеа а с1опед сору оЕ тЬе гечегхе тгапаспрсаае 8епе оЕ тЬе Мо!опеу атгаш оЕ пшппе!еи)тепла ч!тих (Мо-МЕЛт). Сопипегс!а! ргерагат|опа оЕ Ъой А| ът апд Мо-МЕУ аге поъч геааопаЫу Егее оЕ соптапипатш8 Крахе, ъчЫсЬ, !п тЬе рахт, ъчаа а ша)ог |шред!тпепт то тЬе ауптЬеа|а оЕ 1аг8е сРХА. Ноъчечег, аоше ргерагатюпа оЕ тЬе ач|ап епхутпе аге сопсапипатед Ъу ап епдопис!еаае тЬат с!еачез Р)ъ(А, а!|Ьои8Ь тЬ|в |а!ея оЕ а ргоЫетп тодау тЬап и ъчаа !п йе еаг!у !980я ТЬе агдап епхуше сопяаь оЕ ьчо попЫепт|са! ро1урертЫе зиЬипгь тЬат саггу аечега! ептушат|с аст|ч|т|ея К!ъ)А-дерепдепт ауптЬеяа оЕ Р!ъ(Л (гечегае тгапаспртаае), епдопис!ео1утк с1еача8е оЕ РХА (шсе8гаае), апд епдопис!ео!ут|с апас1с оп тЬе К!ъ)А тпо|ету оЕ Р|ъ(А-К)ъ)А ЬуЬт|да Ео!1оъчед Ьу ргосезяче ехопис|ео!уттс гепюча! оЕ г)ъ(ТРа (Крахе Н) (Еог гегдеъчя р1еаае ъее СЬашроих 1993; Ргааад 1993; ЯсаПса 1993).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
