Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 85
Текст из файла (страница 85)
То г[есегш!пе |Ье Т оЕ РХА загпр!ез гив шн[ег ойег за1| сопйсюпз, изе |Ье гпоге депега! е|!иасюп; (2) Т = 81.5чС+ 16.6!одщ [М~] + 0.41(ч [С+С]) гчЬеге [М ] Ь |Ье и|опоча1епс сабоп сопсепсгасюп Еог Мч <0.5 счс. Мо!оси!аг НуЬг!6]ха(!оп ТЬе шо1еси!аг ЬуЪпйхасюп сесЬп!с)иез г[ече!орег( |п йе 1960з сопсшие со Ье зои|е оЕ сЬе шозс изе|Ы соо!з оЕ сЬе |по1еси!аг Ыо!од(зс. ТЬе|г яи|р!|сВу ап|1 зепябчЬу Ьаче Ье!ре|1 со |1гйе а гечо1ибоп ш оиг ипс!егзсапдшд оЕ депе ягиссиге, депе ехргезяоп, апг[ депогпе огдашхасюп. ТЬезе сесЬпщиез Ьаче а1зо Ьееп аг!арсе|! аз йадпозбс соо!з |п с!|шса!!аЬогасопез ап|1 рЬаппасеис|са! согпрашез. ЕзсаЫЬЫпд орсипа! сопйсюпз Еог ЬуЬпйхасюп оЕ а пис1ек асЫ ргоЪе ап|1 [сз сагдес зес)иепсе ге|!шгез )спосч!ес)де оЕ |Ье Т оЕ |Ье сагдес;ргоЬе с)ир!ех, А1йоидЬ ипс[ег югпе сисшпзсапсез, йе Т сап Ье ехрепшепса!1у десегш!пес) (р!еазе зее Ргососо1 9 оЕ СЬ|з сЬарсег), и ыпоге со|и|поп со са!си1асе |Ье Т .
А чапесу оЕ ес)иас)опз Ьаче Ьееп г[епче|! йас сап Ье изес( со ез6гпасе |Ье Т оЕ а сагдес:ргоЬе с(ир1ех ипг[ег а гапде оЕ сопйсюпз. Ас сЬе Т, |чЬеп |Ье ргоЬе ап|1 сагдес аге ЪосЬ ро!упис1ео|Ыез, сЬе шо1еси1ез сопсаш зсгессЬез оЕ пасйе 6ир!ех зерагасес( Ьу с(епасигес( сед[паз. ТЬе сгапясюп |Ьеп Егогп ЬеЬх со со|1 Ь шсгаию1еси1аг ап|1 йы Ь сп|1ереп|1епс оЕро1упис!ео|Ые сопсепсгасюп (ЪС|есшиг 1991). ТЬе Т Ь ауипссюп оЕЬазе соп|роясюп, зоЬепс согпроя6оп, с(ир1ех )епдй, ап|1 ехсепс оЕ Ьазе раи ииз|пассЬез (На!! ес а1. 1980; чСгаЫ ес а!. 1987; Ва1йпо ес а1.
1989). Рог РХА г]ир!ехез, Ециасюп 2 Ьаз Ьееп |поййе|1 Ьу ччесшиг (199Н со регпис ЬуЬпйгас!оп ш за1с ир со 1 хс НаС!: (3) Т = 81.5 -г 16.6!одю ([Ыач]7[1.0+ 0.?[На ]]) 9 0.41(9о[бчС]) — 500!и — Р— Р |чЬеге и Ь йе!епдй оЕ |Ье г(ир1ех, Р Ь сЬе сегпрегасиге соггес6оп Сог |Ье регсепс иияпассЬ оЕ Ьазе ра(гз гчЬкЬ Ь сурка[!у 1 С рег !а иияпассЬ, ап|1 Р Ь 0.63 С рег 1з ЕоппагпЫе.
Рог ВХА Йир!ехея т = 78 4 16 6!одю ([на']7[! О + О 7[ыа'] Н 4 О 7(98[сч с]) — 500!и — Р- Р (4) ъчЬеге Р Ь 0.35'С рег 196 Еогшаш!6е. Рог ЬуЪгЫз оЕ ВЬСА апг( РЫА; ?' = 67 4 16.6!одщ ([Ыач]г[1.0 4 0.7[Ха']]) + 0.8(9о[С4С]) — 500)п — Р— Р (5) |чЬеге Р |з 0.5"С рег 19а ЕоппашЫе. Чаг!асюпз оп Ес)иа6опз 4 апс( 5 Ьаче Ьееп г(ег!чес[ Ьу Ваап ав|1 Кпи|Ьоп (1985) ап|1 Сазеу ап|1 РачкЬоп (1977), гезрес6че!у.
70.48 СЬартет 10: Иот)сто илй Буийебс 0118опис)еотЫе РтоЬеь СС|Ьеп сЬе ргоЬе Ь ап о!18опис1еосЫе, ас сЬе Т, Ьа!Кот" сЬе с)ир!ехеь Ьаче ьерагасед. ТЬе стапя6оп стоп| Ье1)х со со(! Ь шсегшо!еси!аг, ап6 |Ьиь |Ье Т„, Ь стерео|)епс оп |Ье о118опис!еоск1е сопсепсгасюп (Хесшиг 199 Ц, аь чье!1 аь сЬе о!18опис1еосЫе ье|р|епсе апс) сЬе сотпроя6оп о( йе ьоЬ епс.
А)|ЬоиКЬ чати регпшса6опь о( Е|!иа6опь 3 |ЬгоиВЬ 5 аге тгет)цепс!у пьем, сЬе иье от" %(С-тС) Ь пос шГВс|епс со ргейсс йе Т . А пюге ассигасе еьснпасе от" Т сап Ъе оЬ|а)пес) ггош а пеагеьс-пе)8ЬЬог шойе) Йас репшя йе )псогрота6оп от" ьес)иепсе-ге1асе6 сЬегшо6упаш)с дага (Вгеь!апет ес а!. 1986; рте(ег ес а!. 1986; К|егхе)| ес а!. 1986; ЕусЫ))с ес а1. 1990; Ъатесшиг 1991; ЕусЫ))с 1994). Опе е|!иа6оп бепчед тгош ьисЬ а пю|1е! |ь: 7' (ш С) = (Т'АН )7(АН вЂ” Аб +7(7'1п[с)) + 166 1о8, ([Ма')7[10+ 07[Ма'))) — 2693 (б) счЬеге АН' АС пп )с Е (Х АН ) тп77 -ьАН йе писпЬег о( пеагеЯ пе(8ЬЬоть (е.8., 13 (ог а 14-тпег) 1.99 са1Йпо!е-"К 298.2 К сЬе соса! п|о1аг астап|1 сопсепсгабоп 1М с [Мае) А пшпЬег о( |Ье сЬегшос)упаш)с сегшь сап Ье арргох|шасей ачега8е пеагеь|-пе(8ЬЬот епйа!р|еь, АН' = — 8,0 1|са!Йпо!е ачега8е пеагеь|-пе|8ЬЪог тгее епег8)еь, Аб'„„= — 1.6 )сса1/шо)е шйабоп сетш, АС'.| = +2.2 )сса!Йпо1е ачега8е дап8!ш8 епс! еп|Ьа!ру, А7~, = — 8.0 )|сампо!е)епс) ачега8е с)ап81ш8 еп6 тгее епег8у, Лб; = -1 )сса!йпо!е(епс) ачега8е пияпассЬЛоор еп|Ьа1ру, АН' = -8.0 )сса!)шо!ейп)ьшассЬ т Мосе йас тот еасЬ пиьгпассЬ ог 1оор, М„„)ь гебисе6 Ьу 2.
Ас йе орроьЬе еп|1 от" йе сошр1ехЬу ьресспип Ь |Ье ес!иасюп: Т = 2(А4Т) е 4(64С) (7) |чЬеге (А+Т) Ь йе пшпЬег оГ ас)епшеь апс) сЬупипеь ш |Ье о!18опис!ео|Ые апс) (С+С) Ь йе пшпЬег от" 8иашпеь апс) сусояпеь ш сЬе о!|8опис!ео|Ые, ччЬьсЬ стог)сь тот ьЬогс о118опис1еосЫеь йас регтесс1у шассЬ сЬе|г саг8ес ьет(иепсе (5и88ь ес а!. 1981Ь).
Моте ргесЬе!у, й|ь ет)иа6оп ргес)(ссь сЬе 6)ььос(асюп сетпрегаСиге (Та) от" ап о!18опис!еоСЫе ЬуЬпйхе|1 Со а Саг8еС ьес!иепсе йаС Ь Ъоип|1 со а ьо!Ы я|ррог|. Рог а беса)!ес) йьсиыюп о( Т„, р!еаье ьее СС есгпиг (199 Ц. ТЬе 61)уегепсеып са!си1асес( Т сап Ье я8п(8|саит. Рог ехашр1е, |Ье рге6(ссес) Т тот ЬуЬгЫиасюп, ш 0.5 М МаС1, от" а 14-Ьр о!!8опис1еос)с)е ргоЬе Йас реттесс1у тпассЬеь а ьес)иепсе (чбй а %[СеС) = 50) ш Йе саг8ес )3МА ч611 Ье 59 С ияп8 Еср|а6оп 3, 55'С ияп8 Ет)иас)оп 6, апс) 42 С ияп8 е9иас(оп 7.
МЕТНОО$17$ЕЕ) ТО Р(3Р!ЕТ ЬУЯТНЕТ!С ОЕ1СОЫ1)СЕЕОТ10ЕЯ Рипйсасюп от ьупйеск о118опис!еосЫеь шау Ье тес)и)тес) (о!!осч)п8 ьуп|Ьеяь ог атсег епху|па6с пю618са- сюп от" сЬе о!18опис1ео6|)е, ьисЬ аь гайо!аЬе1ш8. А1сЬои8Ь ри66саиоп ы пос аЬчауь песеяагу (р!еаье ьее Ргососо! Ц, Ь сап, 11 ге|рше|1, Ье асЬ)ече6 Ьу опе от" ьечега1 гпесЬо|Ь. О11еопис1еоС)с)еь ЕасЬ!ое Тг)(у) Сгоирь ° Тсепатит(п8 ро1уасту1атЫе 8е! е!естторЬотеыя )3епасиг)п8 ро!уасгу!ашЫе 8е! е1ес|торЬотеяь (РАСЕ) Ьаь а ша)ог ас)чапса8е очег о|Ьег шесЬос)ь оГ рипйсасюп:!с гею1чеь о!18опис1еосЫеь ассогйп8 со сЬе|г яхе ап|1 сЬегеЬу а!!оччь (и!1-!еп8|Ь ргобися со Ье ьерагасе|1 тгогп ьЬогсег шсошр1есе тпо!еси1еь (Абс)пьоп ап6 5писЬ 1984).
ТаЫе 10-6 ргеьепя |Ье сопсепсгасюпь от" асгу1агпЫе гет)и(тес) тот ор6|пц|п геьо1и6оп о( ьупсЬе6с о118опис!еосЫеь от' с)1(Уегепт ягеь. Айег е!ессгорЬогеыычЬьсЬ |ь авиа!!у сатт|ед ои| чбй аС !еаьС 1 ш8!!апе от" ьупсЬе6с о118опис!еоСЫе, йе Ьапс)ь аге !осасес! Ъу СЛт-ьЬабосч)п8, апд йе о!18опи- 1п~оттапоп Рапе!ь 10.49 ТАВОТЕ 10-6 Капде оЕ Кеьо1иС!оп оЕ Ое!ь Сои!а)п1пд РВНегепС СопсепСга6опз оЕ Асгу1ашЫе АсачсАмсое (";о) 5схе ОГ Осссомистеогсоеь (см ВАьеь) 20-30 15-20 13-15 2 — 8 8-25 15-35 35-45 45-70 70-300 10-13 8 — 10 6 — 8 О!!Коппс!еос[йеь Сои(а[и[пи ТПЕу! Стоирь ° Нтд)т-рет)оттапсе !и(иЫ с)гтотатодтар)суг О)сдопис1ео6йеь саггуспд а сгиу! дгоир гпау Ье Егассюпасег1 Ьу НРЕС ассогсПпд со сЬесг Ьус1горЬоЬссПу. РЕ Арр!сес1 В!озузсешз зирр1сеь 1оъч-ргеяиге, гечегзес1- РЬазе сагсгЫдез сЬас зрес(6саПу теса)п спсу1асей одопис!еосЫез, ТЬе тесашей оПдопис!еосЫез аге те!еазей Егош сЬе(г сгПу1 дгоирь, е1исег1 и!сЬ асесопКп1е, апс1 сЬеп йпей со а роьчйег.
!УпИсе йепасиппд РАСЕ, йезе сагспйдез йо пос геиюче зЬогсег, шсогпр1есе о!сдопис!еосЫез Егош сЬе ргерагасюп. ° О!(допит!еотЫе ритфсат(ои саттт(йдеьг РЕ АРРПей Вюьуыешз а1зо гпапи(асшгез а Ыс сЬас сап Ье изей со йеьа1с оПдопис!еосЫеь апй/ог со рипЕу гарЫ!у оПдопис!еосЫез ьупсЬез)аей иыпд сЬе йипейохуспсу! ЫосЫпд дгоир. ТЫь дгоир, ьчЬ)сЬ )з ассасЬег1 со сЬе 5'-Ьуйгоху! Кгоир оЕ пис1еояйез аййей со сЬе дгочйпд о!сдопис!еобйе сЬаш, В поггпаПу геисочес1 Ьу ТСА с1иппд гои6пе зупсЬезеь (р!еазе зее йе сп!оппасюп рапе! оп ОПСОХОСЕЕОТ1РЕ 5тЫТНЕ515). Носчечег, )Е йе ТСА сус1е оп сЬе!азс зсер оЕ а зупйеыь В огписей, йе гею!сшд оПдопис!еосЫе гесаспь а сПтпесЬохуспсу1 дгоир ас Пз 5' еий.
О!сдопис1еосЫе рипбсасюп сагсгЫдеь (ОРСь) сопсаш а геып х(сЬ а ЫКЬ айшПу Еог сЫз ЬиПсу Ьус1горЬоЬк дгоир аис1 сап Ье изей со зерагасе йе сопср!есе оПдопис1еосЫе сЬаш Егоис спсоиср1есе!у зупсЬеятей оПдопис!еосЫеь сЬас с1о пос сопсаш сЬе с)ипейохусгПу! Вгоир. ТЬе Ыс сопсаспь йесаПей спзсгиссюпь Еог сЬе изе оЕ ОРСь.
ТЬеге аге сто геассюпз ш счЫсЬ оПдопис1еосЫез рипбес1 Ьу сЫз гпейой аге 1ея шеЕи! ог соп- сгаштПсасесЬ аь рпспегз ш РХА зес)иеис!пд геасбопз апй аь ргоЬеь (айег аппеаПпд) ш де1-гесепсюп аяауз. Рзе оЕ ОРС-рип6ей оПдопис!еосЫез аз ргипел ш РХА-ьеииепс!пд геассюпз геьи16 ш а Ьас1сдгоипй ыпеаг ас сЬе Ьоссосп оЕ сЬе де! сЬас сап оЬзсиге сЬе геасПпд оЕ 10-25 пис1еосЫеь игипесПасе1у ай)асепс со йе рпгпег.
5)пи!аг1у, ш де!-гесепбоп амауз, аппеа!ес( ОРС-рипбес( оПдопис1еосЫеь ргойисе япеагз ас сЬе Ьоиосп оЕ йе де!. !Е ап оПдопис!ео6йе (ь со Ье шее( !от есйег оЕ сЬеье арр!сса6опз, йеп сче гесогписепй сЬас йе РНА Ье рипбей Ьу де! е!ессгорЬогеяь апг1 гечегзег1-РЬазе сЬгошасодгаРЬу аз йезспЬей ш Ргососо! 1. с!еосЫе оЕ сЬе сотгесс яке В сис Егош сЬе де1. ТЬе оПдопис!ео6йе )ь сЬеп гесочегей Егогп сЬе де! аь йезспЪес) сп Рготосо! 1 оЕ СЬсь сЬарСег (АС)сшзоп апг1 5пий 1984).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
