Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 82
Текст из файла (страница 82)
То Ье гпахипа1)у еЕЕесс)че ая а ргоЬе, сЬе ип)аЪе)ес1 сегпр1асе ясгапс1 пиля! Ъе еЕК- с!епс)у яерагасес) )гот сЬе сотр1етепсагу гагйо)аЬе)ег) ргойкс; осЬеги ье, сЬе сио сотр1етепсагу ясгапбя аппеа1 со еасЬ ойег апб йе ейк)епсу оЕ ЬуЪгЫгхайоп со йе беягеб сагеес яесрлепсе ь гебисеб. Рог о))цопис!еосЫея <30 пис1еосЫея ш !епесЬ, е!ессгорЬогез)з сЬгоиеЬ а 2096 ро1уасгу1апсЫе ее! )я сЬе тоя еЕЕесйче гпесЬос1 со яерагасе йе соляр)егпепсагу ясгапсЬ. ТЬе еЕЕлс!епсу оЕ сЬе яерагайоп )я лтргочеб сЕ сЬе )епцсЬя оЕ сЬе сио Мгапбя аге пос ехасс1у йе яате. чззЬепечег рояяЫе, сЬе ргипег яЬои1б сЬегеЕоге Ье беяепеб яо йас и )з соплр1еспепсагу со сЬе зиЬгегт)ла1 пис1еосЫея оЕ йе сегпр1асе.
)Е сЬе рптег саппос ЬуЬг!б)хе со сЬе сии со сЬгее пис)еосЫея ас сЬе 3' сегпипсь оЕ сЬе сетр1асе, сЬе гагйо1аЬе1ес1 ргос1исс ил11 Ъе яЬогсег йап сЬе ип)аЬе)еб сепср1асе апб яерагасе Егот Ь пюге еЕЕесс)че)у биппе е1ессгорЬогея)я. Ночгечег, ечеп зчЬеп йе)г )епесЬя аге Ыепйса1, йеге )з а еооб сЬапсе сЬас йе сеплр1асе апс1 ргос)исс ясгапбя ил)! яерагасе со яопсе ехсепс биппе е)ессгорЬогез!з япсе йе гасе оЕ т)егасюп оЕ ыпц)е-ясгапбеб пис1ек ас)бя сЬгоицЬ ее)я ь берепбепс пос оп1у оп йе!г !епесЬ, Ьш а1яо оп сЬе)г Ьаяе сотрояйоп апб яес)иепсе. ТЬе ехсепс оЕ яерагасюп сап оЕсеп Ье )псгеаяеб е)йег Ьу рЬозрЬогу)ас)пе опе оЕ сЬе пчо ясгапбя (сегпр)асе ог рппсег) лч!1Ь попгагйоасйче АТР ЬеЕоге яупсЬеяя оЕЕЬе ргоЬе )р1еаяе яее Ргососо1 2) ог Ъу 1еалпВ сЬе б)тесЬохуспсу) игоир ассасЬеб со сЬе 5' сеппспия оЕ сЬе рпспег )Есибепс)с! апс1 ззга))асе 1984).
Весагье сс ь шлрозяЫе со ргегйсс зчЬкЬ лпесЬоб ъч)11 Ъе спояс еЕЕесс)че Еог а е)чеп о!)еопис!еосЫе, сс ь ияла11у песеяяагу со саггу оис а яепея оЕ спа1 ехреп'- гпепь со бесегпипе )п еасЬ саяе сЬе еЕЕсс)епсу илсЬ лчЬ)сЬ ап ехсепбеб ргобисс сап Ье яерагасеб Егосп сЬе сеплр1асе. МАТЕК1А15 САС)Т1ОМ: Р)еаяе яее Аррепб)х 12 Еог арргорпа)е Ьапб!)пе оЕ гпа)ег!а)я гпайеб илй <! >.
ВогЕег8 апд Ьо!п6оп8 Р1еаяе яее Аррепб)х ! Еог сотропепгя оЕ МосЕ яо)и)юпя, Ьийегя, апс1 геаееп)я. О)!и)е МосЬ яо)гб1опя Со СЬе арргорпа)е сопсеп)гапопя. РогтатЫе )оагуте Ьийег <! > 70х К)елои Ьиууег Епеугпея апс) ВоЕЕег8 К)елоиз Егадтелс оЕ Е. сой ЕлХл) ро1углегаяе 1 Се)8 Оеласигсле ро1уасгу)атЫе де) <1> ТЬе регсзпса8е оЕ ро)уасгу!агоЫз со сЬе зо1осюп изб со Еопо йе Ве1 зоб сЬе сооб)с)ооз ооз)ег и)бсЬ е)ессгорЬогзяз ь саггсеб ош чагу ассогб)п8 со сЬе бы оЕ сЬе о1з8опос)еосЫез зп сЬе геассюо пихсше. ТаЫе 10-4 ргочЫзз мейл) Во Ые1Ыез. Ро!уасгу!агоЫе Ве!з агз изиа11у сззс! и 1х ТВЕ 189 шм Тпз-Ъогасе, 2 шм ЕЕ!ТА), апс1 е1зссгорЬогез)з лз сагпес1 оос ш сЬе залпе ЬнЕЕег. Рог ЕигсЬзг боса!)з оЕ сЬз пниЬобз изеб со сазс апз) Ьапз)!е ро1уасгусашЫе Ве!з, р!еззе зее Ргососо! 1 зов СЬарсег 12, Ргососо1 8.
Ргогосо! 7: !.аЬе!те и!'Буп!Ле!(с О!!Коппс!ео!!е(ея (Ея!пд ЕЛе Ех!епосч Гщтепг о('Е. со1с РЕЕА Роlутегаяе Е 10.33 ТАВЕЕ 10-4 Регсеп1 Ро!уасгу(аш!де Веии!гес( 1о Вези)че О11иопис1ео()с(ез РО1ХАСССУЕАМ!ОЕ (5ч) еемстн ОГ Ое!Оомс)сееот!ое 12 — 15 пис)еоСЫез 25 — 35 пис!еосЫея 35-45 пис)еосЫез 45 — 70 пис1еос(без 20 15 12 10 Мос1е1с Ас1(!5 апе! О!коппс!еобе!еь О!!Еопис!ео(!с(е рпгпег Риг)(у йе рпшег аз с(езсг(Ъес( )и Ргососо( 1.
То епзиге е(6ссепс гайо1аЬебпц, йе рпшег заоиЫ Ье гп сЬгее- со сепЕоЫ пю1аг ехсезз очег сЬе сегпр)асс ОНА ш йе геассюп пихшге. Тетр!а(е о!!копие!ео!!с(е Рип(у сЬе сешр(асс аз с)еясг)Ъес( !и Ргососо1 1. ТЬе зес)иепсе о( сЬе о!фопис)еосЫе сешр(асе йаиЫ Ье йе сотр(етепс о( сЬе с(ез(гес) гасбо!аЬе!ес) ргоЬе. 1еас!1Оас6)ге Соп)рооп(15 (и-ззР!с)А(ТРя <1> То 1сеер сЬе зиЬзсгасе сопсепсгапоп Ь)ЕЬ, рег(опп сЬе ехсепяюп геассюп сп ая зша11 а чо1шпе аз роза)- Ые, ТЬш, сс Ь Ьезс со ые гад)о)аЪе!ес) с)МТРз зиррбеа !и есЬапо!7Н,О гасЬег сЬап сЬозе зиррбес) ш Ьи((егес) ас(иеоиз яоЬеиь.
Арргорпасе чо1шиез о( сЬе есЬапобс (игор)ВМТРз сап Ье ш(хес) апа ечарогасес) со с)гупезз гп сЬе ш!его(иЕе шЬе сЬас зч)!! Ье изес) со саггу ош йе геаспоп. То пипитпхе ргоЬ1егпз саизес( Ьу гайо1уз(з о( сЬе ргесигюг апс) сЬе ргоЪе, Ь ь Ьезс, чеЬепечег розз)Ые, со ргераге гайо!аЬе!ес( ргоЬез оп сЬе с(ау сЬе (зср)с)МТР агпчез !и йе 1аЬогасогу. А(1ййопа! Кеа~епЬ 5(ер 9 оЕ (Лга ргососо! гес(о(гея геааепся !!з(ес( т СЛар(ег 5, Рго(осо! 72. МЕТНО0 1. ТгапзЕег со а спкгоуиВе сиЬе ЬЬе са!си(асес1 агпоипсз оЕ (а-язр)с(ХТРз песезяагу со асЬйече сЬе с1еяагес1 яресс6с ас6чпу апс1 яиЕ6с(епс со аПои согпр1есе яупсЬеясз оЕ а(1 сетр1асе зсгапс(я (р1еазе яее (Ье (псгос)исс)оп со 166з ргососо1).
ТЬе сопсеппапоп о( с)МТРз зЬои!д пос с)гор Ъе)озч 1 РМ ас аиу зсаае с) иг!па сЬс геассюп. То )сеер йе зиЬпгасе сопсепсгасюп Ь)ЕЬ, сЬе ехсепиоп геасиоп зЬои16 Ье сагпеа ош гп аз зша11 а чо1шпе аз розяЫе. 2. АсЫ со йе сиЬе сЬе арргорпасе апюипсз оЕ 0116оппс1еосЫе рптег апс( сегпр1асе 01(цопис1еосЫе. То епзиге е6)с(епс гайо1аЬе!)па, сЬе ргппег зЬоиЫ Ье ш сЬгее- со сеп(о16 шо!аг ехсезз очег йе сегпр(асс ЕгМА !и сЬе геассюп ппхсиге. прес!а1 Ецо1рп1еМ РЛоярЛогеясеп( ас(Леал е !аЬе!я (ача!(аЬ(е Егот соттегйа! зоигсея) ог ас(Лея(че !аЬе!3 таг(сес( сч(ЕЛ чегу Ло( гасбоас6че (и!с <1> Вабюасс(че ш)с ыпас)е Ьу гп!х!пц а зиса)1 агпоипс о( "Р мчсЬ счасегргооЕ Ыас)с с(гаМпа гпа Рог сЫз ргососо1, йе ш)с зЬои)6 Ье "чегу Ьос" (>2000 срз оп а Ьапс)-Ье!д пипипопссог).
()зе а 6Ьег-ир реп со арр1у сЬе сп1с ю ас(Ьез(че 1аЬеа, АпасЬ гайоасс(че-счагп!пц саре со сЬе реп, апс( зсоге Ь ш ап арргорпр асе р!асс. ВеизаЫе а1сегпаичея со гасаоасс(че (п)с аге сЬешс1шпшезсепс гпаг1сегз ача!1аЫе Егош 5сгасадепе (б!оаоз), ТЬе гпаг)сегз сап Ье ге-изес) псапу сипая Ьис ппгзс Ье ехрозес( со йиогезсепс ВаЬс )ыс ЬеЕоге а пезч гоипс) оЕаисогасбоагарЬу. Яа!ег Ьа!Л ог Леа!(пВ Ыос(с ргеяе( (о 80 С 10,34 Осаргет ) Ог ССгот)гспу сч)ЕЬ Буиг)сессг 0118опиг1еогсссе РтоЬес АгЫ 0.1 чо!шпе оЕ 10х К1епосч Ъийег со сЬе сиЬе. Мсх сЬе геа8епса сче11. АгЫ 2 — 4 ипЬа оЕ СЬе К1епосч Ега8тепг рег 5 р! оЕ геасгюп чосите.
Мсх сче!1. 1псиЪаСе йе геасссоп Еог 2-3 Ьоига ас 14'С. СЕ 8еыге8, сЬе рго8гея ос йе геасиоп тау Ъе тои)ситес) Ьу гегпоч)п8 ыпа)! 10. с и)) а!Сг)иось аигС псеасипи8 сЬе ргорогсюп оЕ гауиоас6чису йас Ьас Ьесоте ргес)р1саЫе юиЬ )0% спсЫогоасес)с асЫ ЕТСА) Ср!гасе сее Аррепгрх 8). 13!1исе сЬе геасс!оп пихсиге счссЬ ап ес)иа! чо1шпе ос ЕогпсагпЫе-1оаг)108 Ьисуег, Ьеас сЬе пих- сиге со 80'С Еог 3 т!пшея апг) !оасС йе епс!ге аатр1е оп а г)епасигсп8 ро!уасгу!атЫе 8е1. Ро!1осчш8 е1ессгорЬогеяя г)ссаяегпЫе сЬе е!ессгорЬогеяа аррагашя 1еачсп8 сЬе ро1уасгу1апсЫе 8е1 ассасЬег) со опе оЕ сЬе 8!ая р!асес !Еог г1есас!я р!еаае аее СЬарсег 12, Ргососос 11).
А ЪЧАКЬ)! ЬСС С)п)псогрогасег) са-яр]сПМТРа гпау Ьаче гп)8гасег) )псо йе )осчет Ьиссег геаегчо)т, та)г)п8 0 гаг))оасг)че. Тгеаг СЬе 8е1, 8!ааа р!агея Ьи0етя апг) е)есггорЬогеа)а арратагиь аа рогепиа) а)геь ос гаг))оас6н)су. НапгИе йегп арргорпасе!у, ЬеЬ)пс) а Р)ех)8!аа аЬ)еЫ. Ссггар сЬе 8е1 апг1 сса Ьае)ссп8 р1асе ш 5агап ЪСггар. Хосе йе роясюп оЕ сЬе сгасЫп8 г)уеа апг) исе а Ьапг)-Ье!0 пипипопЬог со сЬессс сЬе атоипс оЕ гаг)соасссч!су сп сЬе героп оЕ йе 8е1 сЬас аЬои10 сопсаш сЬе 0118опис1еосЫе. АиасЬ а аес оЕ агСЬеасче с!ос!аЪе1я тат)гегС ъчсй есйег чету Ьос гас)со арче !п)г ог рЬокрЬогеасепс арося агоипгс йе ег)8е оЕ сЬе аатр1е оп йе 5агап ССггар. Сочег йе гаг)!оасссче г)оса счпЬ 5еоссЬ Таре со ргечепс еопсапипа0п8 сЬе Ит Ь01дег ог спсепасууспц аегееп счссЬ сЬе гаг)соасссче ш1с.
Ехрозе йе 8е! со аисогаг)108гарЬ1с 6!т (р1еаае аее Аррепйх 9). Сссиа)су, сЬе ап1оипс оЕ гаг))оасс1ч)су Спгогрогасег) гасо сЬе ргоЬе Ь ао 8геас сЬас сЬе сапе пее4егС со оЬса)п ап ипахе оп 6)гп Ь по пюге сЬап а Еею сесопоы АЕсег г)ече1орш8 йе 61т, а118п сЬе ппа8еа оЕ сЬе гас)!пасс!че сп1с ъчссЬ сЬе гаг)соасссче тат)гс оп сЬе 1аЪе1я апг) 1осасе сЬе роясюп оЕ сЬе ргоЬе сп сЬе Ее1. Ехс!ае сЬе Ьапг) апг1 гееочег сЬе гаг)!пасс!че 0118опис1еосЫе аа г)еасг)ЬесС ш СЬарсег 5, Ргососо! 12. 10.36 СЬаргег 10г Ног)с!пе гч)ГЬ Яуп(Ьес!с О!Ееопис!еос!г)е РгоЬег 90 во о 70 б бо 40 20 40 ВО 90 100 Сепвсб(ПР) Е!СС))сЕ 10-2 Еас)шас!пВ Т сп ВиЕГега Сопса101пе 3.0 м ТМАС1 ТЬе ВгарЬ дерк(в йе !псгеаае !п йе Т„аа а Гипс6оп о( ргоЬе!епВ(Ь.
А вег!еа оГ аПс(носа о( рВРЗ22 РЫА счаа с(е1!чегес) (врос!ее() опсо п(сгосеПи(оае гпегпЬгапев, ЬуЬп0!хес( аВа!паС рВК322-с!егина ргоЬев о( чагЫив (епВ(Ьб, апс( ччааЬес( )п 3 м ТМАС1. ЪЧааЬев оГ сЬе с(ирПсасе ароса счеге сагг!ег) оис ас ЗоС )п(егча!в. ТЬе ргоЬеа ччеге глас!е Ьу ЙВеабпВ рВКЗ22 РЫА чмй 6аиЗА, сгеас(пВ сий аПсаПпе рЬоарЬасабе, апс( (аЬеПпВ !п а геасбоп солса!п)пВ Т4 ро!упис)ео((де Ыпаае апс( [у-агр)АТР ТЬе )аЬе)ес( ГгаВшепсв счеге рипГгес( Ьу е(ес(горЬогевВ СЬгоиВЬ а ро1уасгу(агпЫе Ве!, гесочегег) Ггогп йе Ве1, апс! ЬОПес( Ье(оге ЬуЬп6!хасюп. Раса ОЬса(пес! Егогп ап аисогагПОВгагп о( йе ЬуЬгЫ!хес) гпегпЬгапеб ччеге ивед со с(есепп)пе сЬе Т Гог еасЬ ГгаВшепс (орел с)гс!еб).
ТЬе гпе!ПпВ с(а(а аге 96оип Гог ЬуЬпс)сеа6оп о( ОПВопис!ео(Ыеа (п Ме4ЫС1 (орел сг)алВ!еб). (Ас(ар(ес(, чмй реггпьаюп, сгогп Иоог! е1 а!. 1985.) ТЕАС! счавЬ во)и0ол 2.4 м ТЕАС! 50 гпм ТгиеС! (рН 8.0) 0.2 шМ ЕРТА (РН 7.б) 1 ш8)ш! 505 С)ае сЬ!а счааЬ ао!шюп Еос ргоЬеа 50 — 200 пис1еос(беа 1п 1еп8сЬ. 1с ь еыеп6а! со счапп ап а!щнос о( Йе ао1ипоп со йе с)еа!гес( сепсрегаснге ЬеЕоге ше (р1еаае аее 5сера б апс( 7). ТМАС! Г5 м) ог ТЕАСГ ГЗ м) Ргераге а 5 м ю!ибоп о( ТМАС! ог а 3 м ао1нбоп оЕ ТЕАС! сп Н,О.
ТМАС) Ь иьег) аЫсЬ ргоЬеа Йас аге 14-50 пнс!еосЫеа ш !епвсЬ, чгЬегеаа ТЕАС! Ь наес( п(сЬ о!свопие1еосЫеа сЬас аге 50-200 пис1еосЫеа сп )епвсЬ. Вой сЬегпкаЬ аге ачас1аЫе Егош АЫпеЬ. То сЬе ю!ис!оп оЕ ТМАС1 ог ТЕАС1, ай1 асбчасес1 сЬагсоа! со а 6па) сопсепсгасюп оЕ -1098 апсс асп Еог 20-30 пипшеа. АПоьч сЬе сЬагсоа! со ьесс1е, апг( сЬеп 61сег Йе ао!ис!оп о( с)насегпагу аПсу1апппошиш аа10 Йгон8Ь а ЪЧЬасшап Хо.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
