Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 80
Текст из файла (страница 80)
Айег а1! оГ сЬе с1есег8епс Ьав ъбвво1чеь), соо! йе во!ииоп со гоосп сешрегасиге апс) 61сег 1с йгои8Ь а пссгосе1!и!ове 6)сег (0.45-)сш роге яхе). ЕОТА-Тп'в (0.5 м, рН 6.0) АъЫ О.! гпо!е оГ ЕРТА со 60 гп! оГ Н О. Ъйи1е всапп8 сЬе во1исюп, в1оьч!у асЫ ТгЬ Ьаве (роъчс)ег) ип6! йе РН о( йе во1ииоп геасЬев 6.0. Ву йсв вса8е, сЬе сопсепсгасюп оЕ Тгь ъчпИ Ье -1.2 м. Аъ))ивс сЬе чо!- шпе оЕ йе во1ииоп со 200 гп1 ълй Н О. ТЬсв ипсопчепиопа! спесЬос1 оЕ ргерапп8 сЬсв во1шюп спау Ье еяепиа! Гог еГВс!епс ргес(рааиоп оЕ пис1е(с асЫв ълсЬ сасюпк с)есег8епсв (5)Ъасаш 1970). ЕРТА-Тпв-01ччь ю106оп Рью1че сагпег РЕСА (е.8., ва1пъоп врепп Р)4А) ас а сопсепсгасюп оЕ 50 )с8)ш! сп 50 псм ЬРТА-Тга (РН 6.0) ().е., а 1:10 с61исюп оЕЕЬе 0.5 м ЕГ)ТА-Тпв во!исюп).
ТЬе РЫА шей ах сагпег вЬоиЫ Ье оЕ Гасг1у ип(Еогш яге апъ) пос (псегГеге ъч(й сЬе ЬуЪпйгаиоп оЕ йе гаГВо!аЬе!ед пис)е!с асЫ со сь саг8ес Р)4А. Рог пювс ригровев, вошсасеь) ог Егассюпасес) ваЬпоп врепп Р)4А ъчог(ь ъче11 (шика!ей ва1пюп врепп РВА 600 — 5000 Ър Ы 1еп8СЬ и ачабаЫе Егогп РЬаппасса ог гпау Ье ргерагеь) ав с)евсг)Ьес) сп СЬарсег 6, Ргососо! 1О). Е!Иапо) — вог(1ит асеса(е ю)ипоп 8086 (ч(ч) есЬапо! 2096 (ч(ч) восашп асесасе (0.1 м, РН 5.2) ТЕ (рН 7.6) ог ап арргорпасе ргеЬуЬг(гГ(гас(оп ю(ипоп Р!еаве вее Ьгер 8. )х!ос!есс Ас!сГЬ апс! О!коппс!ео64!е8 Маг((о)аЬе)ес) 01(еопис)еопс)е (1> ТЬе всагпп8 спасепа! Еог рипбсаиоп ь сЬе геассюп пах!иге Егопь Ргососо! 2 (еЬЬег 5сер 3 ъп 5сер 5), айег Ь Ьав Ьееп Ьеасеб со 68 С со спас6часе ЬассепорЬа8е Т4 ро!упис!еосЫе Ыпаве.
орес$а! ЕГ!осрГпеп$ Гугу-)се(еГЬапо) Ьай с!> МЕТНО0 1. АсЫ 5-10 но1шиев оГ йе ЕГ)ТА-Тг)в-Е))ъ)А ю!и(юп Со а писгоГиВе СиЬе соп(а(п(пе СЬе ю1исюп оГ гайо!аЬе!ес) о!16опис!еос)6е. Мсх сЬе геаеепсв ъче!!. Рог ргес(р(саиоп со Ье е(6с)епс, Ь св ипрогсапс сЬас сЬе )оп!с согпрояиоп оЕ сЬе 6па) ш!хсиге Ье ргес)ош!паис!у сЬас оЕ сЬе ЕРТАТпв-РХА во1шюп. ТЬе 6па! чо!шпе оЕ сЬе пихсиге апъ) сЬе сопсепсгасюп оЕ сЬе га6)о1аЬе!ес) о118опис!еосЫе ъ)о пос арргес)аЫу аЕ(есс сЬе еЕ6ссепсу оЕ йе ргосес)иге. 2. АсЫ виГВс)епс 1ой СРВ со сЬе сиЬе со Ьг!пе ГЬе сопсепсгасюп оГ йе с)есегеепс сп сЬе пихсиге со 0.1ачо.
Мсх ъче!1. 3. Р1асе сЬе сиЬе ш а с!гу-Есе(ейапо! ЪасЬ ип61 сЬе пихсиге ь Ггогеп. Кеточе сЬе сиЬе Ггогп сЬе ЪасЬ, апс) айоъч сЬе пихсиге со сЬачч ас гоогп сегпрегасиге. 10.24 СБаргег 10: ЪзгогЕ1пд гчсгЬ 5упгЬегсг 01уопаг!еогсс1е РгоЬез 4. СепСНТице СЬе зо!иПоп аС тахипшп зреей рог 5 гпшиСез аС 4'С ш а ппсгоуи8е. 11зе а РазСеиг рсрессе ог а т!егор!рессог е<!исррей сч!сЬ а Ыие гПзрозаЫе Пр со геточе аП оу сЬе зирегпаСапг саге6лПу !гпмнп СЬе СиЬе. А И~АССЬ!с!з!С ТЬе зирегпагапг сопга!пз гпозг о1 СЬе ип!псогрогагей [~ згР1АТР РЬозрЬогу!агюп геасСюпз аге оССеп сагг!ей оиС чйСЬ >100 иС! ос гай!о!аЬе!ей АТР зо СЬе сопсепСгаПоп о1 гай!оасг!ч!Су 1п сЬе зирегпагапг шау Ье сопзЫегаЫе.
Ехегс!зе саге апй Ье й!!!аеас аЬоис й!зроза! о1 ип!псогрогаС- ес! гай!пасс!ч!су, р!Рессе с!Рз, апг! ш!сгосице сиЬез. 5. Айй 500 01 оу гПзг1Пей НгО Со СЬе СиЪе, чогсех СЬе пихСиге Тог 20 зесопйз, апй а8а!и сепСН6лце СЬе зо1тюп аз гп 5Сер 4. 6, Кеточе сЬе зирегпасапс Ггогп сЬе сиЬе апй асЫ 500 р! оу сЬе есЬапо1 — зогПипг асесасе зо1иПоп со сЬе реПес. Чогсех сЬе пихсиге Гог 15 зесопйз апй ТЬеп сепсг!ТиПе сЬе зо1исюп ас гпахипшп зреей Сог 2 пипиСез аС гоот Сегпрегагиге ш а писгоСи8е. 7. Кереаг 5Сер 6. 8. СагеуиПу геточе СЬе зирегпаСапС апй зСапй СЬе ореп СиЬе оп СЬе ЪепсЬ ЬеЬгпй а Р!ехса1аз зсгееп ип61 сЬе 1азс чпйЫе сгасез оу есЬапо1 Ьаче ечарогасей. Тусззо1че сЬе ргесср!сасей оПаопис1еосЫе ш 20 — 50 01 оу ТЕ !РН 7.6) ог ш а япаП чо!шпе оу ргеЬуЬгЫгхаПоп зо!шюп 11 гЬе гагПо1аЪе!ей оППопис1еос!йе сз со Ъе изей аз а ргоЬе.
Рго1осо~ 5 Риппсапоп ог Кайо!аЬе!ес! О!~допрос!ео6с!еь Ьу Яке-ехсЫюп СЬгогпа1одгарЬу НЕ!4 КЛОСОСАВЕГЕО ОИСОЫОСГЕОТ!Овв ЛКЕ то ВЕ С)8ЕО !п епгуспаСЫ геасСЫпа апсЬ аа ргппег ехсепяоп, у(гспаВу а11 оЕ сЬе пп(псогрогасес( гайо1аЬе1 гппас Ье гегпочес$ Егот сЬе 011цоппс(еосЫе. Рог сна рпгроае, сЬгоспасоегарЬ!с гпесЬос!а (сЬ18 ргососо1 апс1 Ргососо1 6) ог це! е(ессгорЬогеа!а (еааепс!аИу ак с(ексг(Ьес( сп Ргососо) 1) аге апрег!ог со с11ЕЕегепс(а1 ргес(р(сас!оп оЕ сЬе 01!еоппс1еосЫе слсЬ есЬапо1 ог СРВ. ТЬ!а ргососо1 с(еасг(Ьеа а тесЬос1 со аерагасе гайо1аЬе1ес1 01(поппе!еосЫеа Егот ип!псогрогасес( гайо1аЬе1 сЬас са1сез ас(чапсаее оЕ йЕЕегепсеа сп гпоЬс1ссу Ъессуееп 01!поппе(еосЫеа апс1 гпопопис1еосЫеа сЬлг!па яке-ехс1пяоп сЬгогпасоагарЬу.
МАТЕИАЕЬ СА()Т!ОН: Р!еаае аее Аррепйх 12 Еог арргорпате Ьапг!!!пе оЕ тагес!а!а таг(сес! ичСЬ < 1>. ВоЕЕегв апд Ьо1оЕ1опв Р!еаае аее Аррепйх ! Еог сотропеппе оЕ атос(с ьо!01!опа, Ьи((егя апг! геааеп(я О!!и(е а!ос!с ао!иоопа Со СЬе арргорпасе сопсеп(гаоопя СЬ)ого(огт <1> Орвопа(, р!еаае аее всер 7. ЕТ)ТА (0.5 м, рН 8.0) ЕСИапо! РЬепо(ссЬ!огоуогт < ! > Орвопа(, р!еаае аее Яер 7. 5осбигп асесасе (3 М, рН 5.2) Орсюпа(, р!еаае аее Яер 7. ТЕ (рН 7.6) Тпа-С! (7 М, рН 8.0) Орсюпа(, р!еаае аее всер 7. Тг(е>Ю5 сЬготасоегарЬу ЬиЕЕег 10 спм Тпа-С! (рН 8.0) О.сея (ее)г) 808 Нос!е1с Ас1418 апг! О!коппс!еоЕ1дев Каг((о)аЬе(ег! о!копие!еос(г(е <! > ТЬе асагс!пв гпасепа! Еог ропвсавоп ы све геассюп освссоге !сосо рсососо! 2 (ессвег всер 3 ог Бсер 5), авег !с Ьаа Ьееп Ьеасес( со 68'С со !пасвхасе ЬассепорЬаве Т4 ро!упос!еоссс(е )с!пасе.
! 0.25 10.26 СЬаргег 10: Игог!с)п8 и |ЕЬ $упйепс О!!Попас!еог(г(е РгоЬег прес!а! Ее! о 1ргпеп1 Се! Ег!ГгаГ(ои геяп (е.д., Вю-Се! Р-60 Е(пе-Пгаг(е ог 5ерЬаг(ех С-! 5) Вю-бе) Р-60 (Ппе Вгаг(е) и|ау Ье рнгсЬааег( Ьогп Вю-паг), 5ерЬадех б-15 |а ачаааЫе Ггогп гпохг |шрРПега оЕ !аЬога|огу сЬеш(са1а (е.8., 5!Вша). Вю-бе( Р-60 ышррПе|1 аа а рге-х|чоаеп ПеЬ 5ерЬаг(ех б- 15 шнхг Ье аггоаеп апг) ецшПЬга|еП ЬеЕоге нхе. С!ахх |чоо! ЪЧгар а ашаП агпонп| оЕ 8!ам |чоо1 |п а(нпппнш Гоа апг( ан|ос1аче |Ье рас1|а8е а| 15 ра( (1.05 1|8)сгп ) Гог 15 пнин|ее оп |чгарреП Пеп| сус1е. АЕ(сгоЕ08е гиЬех РЬ5 гиВ |и а гасИ ог !гас!(ои соПесгог ()ьег) Еог |Ье соПессюп оЕ гаспо1аЬе!ед оПВопнс1ео||аеа е!нпп8 Егоп| |Ье со1шпп.
Раяеог ргреое АеЫ111опа! КеацепЕ5 51ер 6 оЕ йгх ргососо! гпау гес(и|ге ЕЬе геа8еи15 !Ехсес( !и СЬарсег !3, РгоГосо! 7. МЕТНО0 1. АсЫ 30 !|1 оЕ 20 шм ЕРТА (РН 8.0) !о йе сиЬе синга(п(п8 |Ье гас)10!аЬе1ег! 0118опис!еогЫе. 5гоге |Ье во1ипоп аг Оаб ччЬ11е ргераг!и8 а со!шпп оЕ яхе-ехс1ияоп сЬготаго8гарЬу геяп. Рог сопчеп|епсе, В(о-бе1 Р-60 ы наес( |ЬгонПЬош |Ых ргогосо! аа ап ехап|р1е оЕ а енпаЫе гех(п. Ночгечег, |Ье ше|Ьог! |чог1|а егр|апу |чеП ча|Ь 5ерЬаг)ех б-15. 2. Ргераге а Вю-Се1 Р-60 со1шпп !и а асеп1е Рахгеиг р!Регге. а.
Егри1|Ьгаге йе з1иггу оЕ Вю-Се1 Р-60 вирр!!ее( Ъу йе гпапиЕас(игег !и 10 чо1шпеа оЕ Тпя5Р5 сЬгогпаго8гарЬу ЬиКег. 1Е а сепсиГн8а1 ечарога|ог (5ачапс 5реедчас ог (и еошча1епс) ы ачаааЫе, |Ье Вю-бе1 Р-60 со!шпп и|ау Ье ронгег( апг) гнп ш а ао!нПоп оЕ 0.1а ашшопшгп Ь(сагЬопаге. ТЬе роо1ег) Егас|юпа сон|а|и(п8 |Ье гаг))о!аЬе!ег( оПВопнс1еос(г(е (р1еахе хее яер 6) сап |Ьеп Ье ечарогасег( |о с(гупехх |п а сепгг)Ен8а! ечарога|ог, |ЬегеЬу еПпппаг)п8 сЬе пеег( Еог ех|гас|юп оГ сЬе оППопнс1ео||ае ргерага6оп |чпЬ ог8ап(с ю1чепь апг) ргес|раапоп |чпЬ е|Ьапо!. Ь.
Татр а яеп1е 8!ага |чоо1 р1и8 |иго йе Ъопогп оЕ а вгеп1е Раз(еиг р|ре(ге. и 81ая сара!агу шЬе |чог)сх |чеП аа а сагир|п8 г)ечке. с. ггг)!Ь гЬе р!08 Еир1асе, роиг а япа11 апюипг оЕТпяВР8 сЬгогпаго8гарЬуЬиКег |иго |Ье со1шип апг( сЬес)с |Ьаг |Ье ЬиКег Вонга ас а геааопаЫе гаге (опе с(гор ечегу Ее|ч аесоис15). д.
Р!11 ГЬе р|регге нг(ГЬ йе Вю-Се1 Р-60 51иггу. ТЬе со!шпп Гога гарЫ!у аа !Ье Ве) п|аспх аеп1еа ип|1ег Пгач(!у апг) йе ЬиКег г(прь Его|и йе р)реЕ(е. А|Ы а|ЫКюпа! з1иггу ипп! йе рас)сес( со1шпп 0115 йе р(регге Еготп |Ье р1и8 оЕ 81ая гчоо1 со |Ье сопаггкпоп пеаг йе гор оЕ |Ье р|репе. е. ЧааЬ ГЬе со1шпп чч(ГЬ 3 гп1 оЕ Тг!х-5Р5 сЬго|паго8гарЬу ЪиЕЕег. аг !МРОПТА)г(Т Оо пог аПоъч |Ье со1ип|п со гип г)гу. И песеххагу, хеа! |Ье со)нтп Ьу гчгарр!08 а р!есе о( Рагай)гп агонп|1 |Ье Ьоиоп| оГ Епе р)реие.
3. (Ле а р!Реяе Со гепюче ехсеаа ЬиКег Его|и ГЬе Сор оЕ ЕЬе со!шпп, апг( йеп гарЫ1у 1оас( !Ье га|1ю1аЬе1е|1 0118опис1ео(!сне (!и а чо!шие оЕ 100 ф ог 1еы) оп|о ГЬе со1шпп. 4. !пппейасе!у айег ГЬе аатпр!е Ьаь еп|еге|1 !Ье со!шип, а|Ы 100 Ес! оЕ ЬиКег Го ГЬе Гор оЕ ГЬе со1шпп. Аь аооп аа ГЬе ЬиКег Ьаа епсегес! ГЬе со!шпп, В!! ГЬе р!Ресге ъчКЬ ЬиКег. Вер1еп(аЬ Ргогого15: Риг!гггаг|оп о) Яаг(|о!аЬе!ег( О118опиг!еобг(ег Ьу 5|ге-ехг!из(оп Сйготасойгарйу 1027 1О. сЬе Ъиггег аь песезяагу во йас П сопс!пипия!у Ппра Сгот сЬе со!шпп.
13о пос аПосч сЬе со1- шпп Со гип с!гу. (Ле а Ьапс|-Ье16 ппшпюпйог со соПосч сЬе рго8геаа ог" йе гасПо1аЬе!ес1 оПЕопис1ео6де. ЪЬеп сЬе гас)|оасс|ч!су Его асагса со е!исе ггот сЬе со1шпп, Ьей|п соПессш8 ссчо-с|гор сгассюпа спсо т!егоси8е сиЬеа. А сагАКьс сьсС Весаияе рйоарйогу!ас!оп геасс!опа аге о(сеп сагг!ед оис сч!сй >100 сгС! о1 гасйо!аЬе!ед АТР сйе агпоипс о1 га6!пасс!ч!су !и йене со|игпп 1гасг!опт гпау Ье сопа!6егаЫе.
Ехегс!ае саге ап6 Ье 6!68епС аЬоиС 6!ероха! о1 ип!псогрогагес$ гасйоасйч!Су, р!репе С!ра, апс! писго!ийе СиЬеа. Ъй~еп пеаг1у аП ог" йе гаейоас6чйу Ьаь е1исес| Сгогп сЬе со1шпп, иге а 1п|шс1 вссп6Пасюп соипсег со теааиге сЬе гаойоасспйсу !п еасЬ (гас!!оп Ъу Сегеп)соч соипбп8 (р!еаае атее Аррепйх 8). !г' сЬеге са а с|еап яерагасюп ог сЬе гаасег-т!цгас|п8 реа1с (сЬе гагйо1аЬе!ес| оПВопис1еосЫе) Сгот сЬе а1оъчег реа)с ог" ишпсогрогасес1 [7-'гр)АТР, роо1 сЬе аатр1ея сопСашшй СЬе гасПо1аЪе1ес| о1сйопис!еоСЫе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
