Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 77
Текст из файла (страница 77)
О!!Вилис!еос!с(е е!идол ЬиЕГег 0.5 М апипопшгп асс|иге 10 тМ таВпеышп асе|а|е 5о|пе (ихеъс!Васогь )пс!иг)е 0.1аа (се| х) Ю5 |и йе о)15опис!еосЫе е)шюп ЬиЕЕег. ТЫъ Ь пос адпъаЪ)е )Е йе е1исег) о115опис!еосЫе Ь со Ье рипЕ|ес) Ьу 5ер-Ра)с Сь сЬ|отасоВгарЬу (р!еаъе ъее сЬе посс ас 5|ар 16). ТЕ ГрН 8.0) )ь)ос!е1с Ас14!5 апе! О!коппс!ео6де5 Сгис(е ргерага6оп оГ ъулсЬебс о!|Волос!еос(с(е 5упйес(с о115опис!еосЫеь аге |ьиа11у ъирр1(ег) Ьу йе гпапиГассшег аъ а 1уорЬ(!)хег) росс|)ег а(сег гепсоча! оЕ ргосесВпц цгоирь наес) |п |Ье ъупйеВс геас6о|ь (р1еаъе ъее сЬе |п(огтасюп раис) оп ОЕ1СОЛПЗСЕЕОТ10Е 5ТХТНЕ515).
Е|ергосесаоп гьиа11у )пчо)чеь ЬеаВпВ |Ье ргерагасюп ас 55 С Гог -5 Ьоигь (и сопсепсгасе|1 ъо1ш|опъ оГ ХН,ОН <! >. (5оте тоге гесепс РХА ъупсЬеыь ргососо1ь нъе а йЕ|егепс ргосес6пВ хгоир оп опе ог пюге пис)еоъЫеь (е.В., асесу1-ргосессес) г)С) сЬас сап Ье геточес) (и <10 пшшсеь.) ВеЕоге риг(Еу)пВ ап о115опис!еосЫе, сопапп сЬас сЬе с)ергосесс1оп геасВоп Ьаъ Ьееп сагг)ес) ош. 1Е сЬе оадопис!еосЫе Ь ъирр1)е|) |п ХН,ОН, сгапъЕег 0.5 — 1.0-т) а!19иось со 1.5-т1 писгойВе сиЬеь апд ечарогасе сЬе ХН„ОН со г)гупеьъ оп а сепспйВа1 егарогасог (5ахапс 5реес)Сгас ог |ь е9шха1епс) ас гооп| сеспрега|ше.
Сс|Ьеи орешпВ а сиЬе оЕ сгиде о115опис!еосЫе Еог сЬе Вгъс Вте, анис сЬе сиЬе Ьу ореп1пц и Воа 1у со а11оиг ап|гпоша Ваъ со еъсаре (рге(егаЫу |псо а сЬе|п|са) Гите Ьоог)). ТЬгь гес)исеъ |Ье сЬапсе оГ ъргау- (иВ сЬе о115опис!еопг)е агоип|1 йе гоогп. прес!а! Ес!о! ргпеп1 М|Пех Н)| Ес!(ег (М|!!|роге, 0.45-рт роге ъ!хе) Ргосого! 1: Раппа!(оп оЕ 5упсЬес(с О!18опис!еос(дея Ьу Ро!уасгу!от|де бе! Е!ессгорЬогеягя !О!3 РагаИт ог Е)иогеьсепс йт-!ауег сЬготасо8гарЬЕс р)асе р!асея |пау Ье ригсЬаяес) Его|и Вг(папани )п |Ье Нпаей 5сасея ог !гоги Е. Мега)с |и Еыгоре ая Мегс1| 561|са 8е! Р „, 20 х 20-сш р1асея.
5ер-Ра)с с7аьь(с со)отпь, ьЬоп Ьоду 5ер-ра1| с!ам|с со!шипя (ача|1аЫе Ггош |Ье ЪЧасегя Вп4ыоп оЕ М|11(роге) санса(п 560 |и8(со1ишп оГ а Ьул)горЬоЬк (Сп) гечегяейрЬаяе сЬгошасохгарЬу геып. ТЬе яерагадои рг|ис|р1е ша1|ея ше оЕ сЬе Еас| йас йе о118опис!еос)6е ал)яогЬя со |Ье со1шпп ъчЬеп |Ье ро!агау оГ сЬе яо1чепс а Ь|8Ь (е.8., ациеоия Ьи((егя) аил) е1исея Егоги сЬе геып ъчЬеи сЬе ро1апсу оГ сЬе яо!чепс а гег)исег) (е 8., а пихсше оЕ п|есЬаио) ап|1 Н,О). Опе со1шип Ь ге|)н)гег) Рег 10 ОГЛляа ии)СЯ оЕ о118опис!еоСЫе 1оаг)ел) оиСо сЬе Ро1УасгУ1ашЫе 8е1.
5упп8еь (5-сс апд 70-сс ро(ургору)епе) Оие 5-сс апг) опе 10-сс яупи8е аге гег)шге|С Гог еасЬ о!18опнс1еосЫе со Ье рипйей (77сгач(о)ес )атр (260 пт, Ьапд-Ье)д) <1> ууасег Ьай ог Ьеас(пд Ь)ос!с ргеьес со 55'С Ас!е!!Е!опа! Кеацеп$5 Мерь 7-9 оЕ й|ь ргососо) гес)о(ге сЬе геа8епсь 7|ьсес7 т СЬарсег 72, Ргососо)ь 8 апс( 7 7. МЕТНОФЭ РгерагаЕ!оп оЕ Сгос!е ЬупйеЕ!с О!!коппс!еоЕ!ЕМе5 Еог Се! Е!ес1гор!)оге5!5 1. 1п а ьсеп1е ш)сгоЕи8е сиЬе, ргераге а 10 рм ьо!исюп оЕ сЬе сгш!е о!(цопис!еосЫе |п ьсеп!е, Е|1сегед Н,О (М11!1-( | ог ес)шча!епс). Чогсех сЬе 801исюп сЬогои8Ыу. ТЬе яо!ииои Ь обеп |118!п1у с!пил)у Ьесаияе оГ |Ье ргеяепсе оЕ )пяо!иЫе Ьепгап|Ыея 8еиегасел) л)иг(и8 |Ье яуп|Ьеыя оГ |Ье о118опис!еосЫе.
2. СепспЕи8е сЬе сиЪе ас п|ахппшп ьреед Сог 5 пиписеь ас гоош сеп|регашге (п а ш(сгоЕи8е. ТгапьЕег йе ьирегпасапс со а ЕгеьЬ, пеп1е ш(сгоЕи8е шЪе. 3. Ехсгасс сЬе ьо1ис(оп йгее Синея (п ьиссеььюп ъч)сЬ 400 )с! оЕ и-Ьисапо! (р!еаье ьее Аррепд(х 8). Р(ьсагс( йе иррег (остап(с) рЬаье аЕсег еасЬ ехсгасс)оп. !Е снпе а яЬогс, |Ье ехсгасс!ои ъч)сЬ и-Ъшапо1 сап Ье огшпе|1 ъчссЬоис песешап1у саиып8 ргоЬ- !ешя.
1п |ЬЬ саяе, сепсп6лье йе яо1исюп ас гиахипшп ярее|) Еог 5 инписея ас гооп| се|прегасше (и а шкго6лхе, апг) сгашГ|т йе яирешасапс со а Еге|Ь, ясеп1е пнсго6л8е шЪе. 1оас) 10 — 30 01 оЕ йа яо!ииои оисо еасЬ оЕ ых я1ои (1-сш) оЕ а г)епасиг)п8 ро!уасгу1ап|Ые 8е! ая с)еясг)Ъес( 1асег |п й|я ргососо1.
4. Ечарогасе йе ьо1ис)оп со дгупеья (п а сепспЕи8а! ечарогасог (5ачапс 5реедЧас ог Ьь ес)шча1епс). ТЬе сиЬе ьЬои1д сопсаш а уе!1оъч(ьЬ ре1!ес апд а сгеашу-ъчЬйе роъчдег. 5. Р|ььо1че йе ре11ес апс) роъчдег )п 200 Сс! оЕ ьсеп!е 61сеге|1 Н,О (М1111-О ог ег)шча1епс). 6. Еьсппасе сЬе апюипс оЕ 0118опис1еосЫе |и сЬе ргерагас(оп аь Е01!оъчы А|Ы 1 )л! оЕ йе ьо!исюп со 1 ш1 оЕН,О.
М|хсЬе ьо!ис(оп ъче!1 апд геад йе ОР . Са1си1асе сЬе о!18опис1еосЫе сопсепггагюп. Ашоипи оГ о118опис1еосЫея аге ойеп г)еясг(Ьес) |и ОР ишся. Оие ОО соггеяропг)я |о сЬе ашоипс оЕ о118оиис1еосЫе |п а !-гпс чо!ише сЬас гели!ся |п аи орска! л)сия(су оЕ ! |и а 1-с|п расЬ-1еп8сЬ снчепе. Са!си!асс сЬе пи11нио!аг ехипссюп соеЕ6с(епс оЕ |Ье о118оиис!еоьЯе (е) Егош сЬе Го!!ои сп8 ециадоп: а = А(15.2) е С(12.01) + С(7.05)-|- Т(8.4) ъчЬеге А, С, С, апс) Т а ге сЬе ингиЬег оГ 6 шея еасЬ пис1еосЫе а гергеяепсе|) |п сЬе яег)пенсе оГ |Ье о!18опис1еосЫе.
ТЬе ишпЬегя ш рагеи|Ьеяея аге сЬе п|о!аг ехдпссюп сое(6с|еии Еог еасЬ |сеохуинс!еосЫе ас рН 8.0. Рог ехашр1е, а 19-шег сонгаюгн8 5 г)А геяднев, 4 Ж гевЫнев, 4 6С геяинев, апг) 6 6Т гевЫиеа июн16 Ьаче а нн!1нно!аг ехинсион соеЕВесенс оЕ 15 х15.2) + 14х 12.01) + 14 х 7.05) +16 х 8.4) =-202.64 шМ еш Са!еи1аге сЬе сопсенггасюп !г) оЕ сЬе инхп!исеа во1нпоп оЕ о118опне)еосЫе Егонг сЬе Ео!1оаг)н8 егСнасюн: с = !ОЕ3яа) !1000))е 7. Роиг а г)епагиг!п8 ро1уасгу1ашЫе Ве! !ав девсг)Ьег) ш СЬаргег 12, Ргогосо! 8) оЕ СЬе аррго- рпаге сопсепСгагюп (ТаЫе 10-2).
ТЬе!оайп8 81оСв сп йе Ве! вЬои1г1 Ъе -1 сш )п!епВСЬ. В. Кип сЬе Ве! ас сопвсапс ъчассаВе (50-70 СЧ) Еог -45 пипшев ог ипс)1 сЬе сешрегасиге оЕ йе Ве! геасЬев 45-50'С. Тигп оЕЕ сЬе роччег вирр!у апг) г)!всоппесс йе е!ессгог)ев. Ргегиншн8 сЬе 8е! )н йь гчау саивев апнпоншгн регги!Еасе го ш)8гасе Егош сЬе гче!1в анг), гноге )шрогсанс1у, гчагшв сЬе 8е! со а сешрегасгюе ориша1 Еог е!еесгорЬогеяв оЕ ЕгМА. 9. 'чЧ!сЬоис г)е1ау, 1оаг1 -2 ОЕ), иппв оЕ о!!Вопис!еосЫе (!и а чо1ипсе оЕ 10 )с! ог!евв Еог шахппшп гево1ис!оп) оп!о опе ог гпоге в!осв оЕ йе Ве! ав Е01!осчв: а. АгЫ ап ег)иа! чо!шпе оЕЕоппашЫе це1-1оайп8 ЬиЕЕег 1асЫп8 г)уев со сЬе 0118опис1еосЫе во1исюп.
Мсх сЬе геа8епсв ъче!1 Ьу чогсех)пВ, апг) сЬеп Ьеас сЬе пихшге со 55"С Еог 5 пиписев со г)!вгирс вееопг)агу всгиссиге. с. 1.оаг1 йе Ьеасег) 01!Вошег шсо сЬе 810~.оад 5 )с! оЕ ЕоппапсЫе-сгасЫп8 г)уе пихсиге шсо ап ипивег) в1ос. Рог ЕнгсЬег г)еса11в он 1оаг))п8 ро1уасгу1ашЫе 8е!в, р!еаве вее СЬарсег 12, Ргососо! 11. 10. Кип йе Ве! ас 1500 Ч ипп1 сЬе 01!Вопис1еосЫе Ьав ш!Вгасег) арргохсгпасе!у ьчо сЬ!гг)в оЕйе 1епВЕЬ оЕ йе Ве!.
ТЬе роысюп оЕ сЬе о!18оннс1еосЫе шау Ье евссшасег) Егош сЬе роя6онв оЕ сЬе сгаеЫн8 г)уев аа беса)1ег) гн ТаЫе 10-3. Мосе сЬас а вупгЬенс о118опнс!еогЫе саггу)н8 а Ьуг)соху! гевЫне ас гь 5' сегшгпы ш)8гасев пюге в1оъч!у сЬгон8Ь а г)епаснг)н8 ро1уасгу1ансЫе 8е1 йап г)оев а РЬоврЬогу!асег) о1г8онне!еосЫе оЕ ег)н)ча!енс 1еп8ЕЬ. РнгсЬеппоге, Еог геавонв сЬас аге нос Ен1!у андегвсоод, йе е)ессгорЬогеис нюЬг1гсу оЕ ан о118опнс1еосЫе Ь 6ерепг)епг оп сса Ьаве сошрояпон апг) веонепее.
ТЬнв, йеге шау нос Ье ан ехасс соггевронг)енсе Ьеьчеен йе ргегпепЫ анг) оЬвегче6 рояиопв оЕ сЬе о!18онае1еосЫе ю сЬе ро1уасгу1аюЫе 8е!. 11. ) ау сЬе Ве1 шо10 Е)ас оп р!авс)с-Ъас)гег) ргосесс!че ЬепсЬ рарег сч)сЬ сЬе япа!1ег (поссЬег)) р1асе иррепповс. АПосч йе ае! со соо! со (37'С ЬеЕоге ргосеег)1п8. 12. Кепюче апу геша!пш8 р!есев оЕ е!ессгйа! саре. с)ве а врасег ог а р1асе-верагас)п8 соо1 со в1осч1у апг) Кепс!у ргу арагс сЬе р1асев оЕ йе гпо1д. ТЬе 8е! вЬои!д гегпасп ассасЬег) со йе 1опВег (попа!1!гоп)хег)) 81авв р!асе.
яг САЕАКМ!МС 'ччеаг васесу 8!аваев. Ссавв р!асев пзау сЫР г)нг)п8 ЕЫв ргосег)нге. ТАВЕЕ 10-2 Каппе оЕ Кево1иооп оЕ Се!в Синга!псп8 О)ЕЕегепС Сопсепсгаоопв оЕ Асгу!атЫе АсаъсАмсое ! /о) 5!хе Ог Оооомиссгогсоев !см ВАвев) 10.14 СЬаргег 10: Игог)г)иг ной Яупйепе О!г8оинг)еноте РгоЬев Рог!Е!са6оп оЕ Ьупйебс О!фопссс!ео$!е!е8 1.)5!щ Се! Е!есЕгор!соге5!ь Ь. Р)ивЬ ош йе игеа Егош йе иеИв иг!ЕЬ! х ТВЕ. 20-30 15-20 13-15 10-13 8 — 10 6 — 8 2 — 8 8 — 25 15 — 35 35-45 45 — 70 70-300 ТАВЕЕ 10-3 Арргох!спасе ЕепП(Ьв оЕ О1!Поппс1ео(Ыев Сот!Вгас!пВ ипй ТгасЫпд Руев РОСЧАСаЧГАМСПЕ (ув) Хусейне СТАмос ЕГ Ваоморнепос Вгое 20 (5 12 22 30 40 9-10 -15 !Е сЬе ае! аПЬегев со ЬосЬ р1асев, гор!асс йе рагбаПу йв!о6дей япаПег ог поссЬе6 р!асс Ъас)с оп йе ае), )нчегс сЬе р1асев, апд сгу ааа(п.
13. Р!асе а р!есе оЕ 5агап ллггар оп сЬе Ве1, шгп йе В!авв р1асе очег, апс) сгапвЕег сЬе де! со йе 5агап лАггар. Р!асе а р!есе оЕ РагаВЬп ог а йиогевсепс (Ьш-1ауег сЬготпасодгарЫс р!асе ипдег сЬе Ве! вчЬеге (Ье о!!Вопис1еос!6е !в ргейссей со Ье. 14. (1ве а Ьапд-Ье16 (Лг 1ашр Со ехапппе йе Ве! Ьу сПшпшапоп 1гогп аЬоче а( 260 пш. ТЬе РЪЛА ш сЬе ае! аЪвогЬв сЬе Рлг гайабоп ап6 арреагв ав Паг)» Ыие Ъапбв аПа!пвс а ип!Еопп Пиогевсепс Ъас)гагоип6 сопспЪисе6 Ьу сЬе рагаП)гп ог сЬгогпасоцгарЬ!с р1асе. 1( сЬе Р)(А Ь йЕП- снИ со чаиа1сае, са)ве сЬе ае! шсо а даг)сепе6 гоогп апд сПшшпасе сс часЬ сЬе ЬапйЬе!6 СЛЧ )агпр. 15.
Кесочег СЬе с)ев!ге6 01!Коппс!ео(Ые, лчЬ!сЬ аЬои16 Ье йе в!оъчевг-сп!Вгаг!08 Ьапс1 (л.е., с1ов- ея со сЬе сор оЕ (Ье Пе1), Ьу ехс!в!пц еасЬ Р)в)А Ьапс! сч!(Ь а йагр, с1еап вса1ре1 ог гаког Ыас1е. АчоЫ са)с!пП (Лг-аЬвогЫпВ шасепа1 япа1!ег лп 1епВ(Ь йап сЬе с)ев!гес) 01!Коппс!ео(Ые. рог а66)с(опа) шгоггпасюп оп ехснПпц ЕЬе Пев(ге6 Ъапб оЕ РЫА, р1еаве все сЬе ране! оп Св)5РАР св.!ЬСС ОЕ!СОЬСРСЕЕОТ!РЕ5 !ЬС РОР!АСКУСАМ!РЕ СЕЕ5 ас сЬе еп6 оЕ йлв ргососо1. 16.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
