Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 79

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 79)

>5000 С!Етто!и) !и ас)иеооь ьо!и!гоп <1> 10 ршо!еь оЕ [у-'гр[АТР и гес)и!гес[ со 1аЬе! 10 рпю!еь оГ с[ерЬоврЬогу!асег[ 5' сегпиш со Ь)еЬ ьрес(6с ас6чгсу. То пипспнге ргоЫегпь саиьес) Ьу га6!о!уяь оЕ йе ргесшьог апс[ сЬе ргоЬе, сс Ь Ьеьс, счЬепечег роьяЫе, со ргераге гагио!аЬе!ед ргоЬев оп йе г)ау сЬе [пр]АТР агпчев сп йе 1аЬогасогу.

Ьрес[а! ЕЕ[и[рспепй АГ!сгоуиВе сиЬеь 065 т!) Иасег ЬаЯ ргеьес со 68 С !ч!ЕТНО0 1. Вес цр а геасиоп пцхсцге ш а 0.5-пс! ш!сгоГцие сцЬе соиса[и[иш ьупСЬеСк о115опис)еоСЫе (10 ршо1еь/и1) 10х Ьассег)орЬаее Т4 ро!упис!еосЫе Ыпаье Ьийег [у-вгр[АТР (10 ргпо!еь, вр. асс. >5000 Сипипо!е) Н,О 1 Н) 2 Н) 5 р1 1 1.4 и! Мсх ![се геаВепсь ше11 Ьу Вессс[е Ьис регяьсеис саррша оп ![се оииЫе оГ 11се сцЬе. Р[асе 0.5 40 оГ сЬе геасс[оп ицхсцге сп а сцЬе соисашшВ 10 )с! оГ 10 ш)ч( Тпь-С1 [рН 8.0). Вес аь!де йе сцЬе Еог цье ш 5сер 4.

ТЬе геасйоп сопсаспь е9иа! сопсепсгацопь оЕ [у-'гр[АТР апс[ о1(аопис!еосЫе. Сепега!1у, оп1у 509в оЕ сЬе гагио1аЬе! Ь сгапь(еггег) со сЬе о)[аопис!еосЫе. ТЬе ефс!епсу оЕ ггапвуег сап Ье )шргочег) Ьу [псгеаяпе сЬе сопсешгасюп оЕ о! )аопис!еосЫе си йе геасбоп Ьу а Гассог оЕ 10. ТЫь гпсгеаье гехи!и сп сгапвЕег оЕ -90вув оГ йе гасцо1аЬе! со сЬе о!)еопис!еосЫе, Носчечег, сЬе вресфс асг!ч)гу оЕ сЬе гагпо!аЬе)ес[ Ес)4А ы гес)исег) Ьу а Еассог оЕ -5. То !аЬе! ап о115опис)еосЫе со сЬе Ь)аЬевс ьрессбс асцчау: ° ! псгеаье сЬе сопсепсгаиоп оЕ [у-"Р[АТР сп сЬе геассюп Ьу а Еассог оГ 3 (се., ые 15 и! оЕ гаеио1аЬе! апг) г[есгеаве сЬе чо!шпе оГ Н О со!.4 и1).

° Есесгеаве йе ашоипс оЕ о!15опис1еосЫе со 3 рпю1еь. Ае[Й6опа! КеацепВ 5сер 4 оЕ Ясь ргососо) гес)и(геь Яе гегели Иьсед сп СЬарсег !3, Ргососо[ 7 ог Яе геадепи !!ьсед !и Ргососо! 5 оЕ ЕЬ!ь сЬарСег. Ргойосо! 2г РБокрЬогу!аг)п8 Яе 5' Тегтйп)оу О!18опис1еогггЕек 10.19 й!пбег йЬеке сйгсшнкйаосек, оо!у -10чуо оййе гайойаЪе! Ь ьанкйеггей Ьш а Ы8Ь ргорогбоп оййе о1!8оннс1еойЫе Ьесошек гайо!аЬе1ей !деа!1у, АТР кЬон16 Ье ш а ВчеЕо!6 гпо1аг ехсея очег 1314А 5' енбк, ап6 йЬе сон сепйгайюп оЕ ТййсА йегнной кЬон16 Ье >0.4 Нм.

ТЬе соосепйгабоп оЕ АТР гн йЬе геасбон кЬон16 йЬегеЕоге Ье >7 рм, Ьнй йЬЬ Ь гаге!у асрбечаЫе ш ргасбсе. 2. АгЫ 10 ипбк (-1 )41) оЕ ЪасйепорЬа8е Т4 ро1упис1еойЫе Ыпаке йо йе гешайп!п8 геасйюп пихйиге. Мйх йе геа8епйк кче11, апд !псиЬайе йе геасбоп пихшге Еог 1 Ьоиг ай 37"С. 3. Ай йЬе еп6 оЕЕЬе шсиЬайюп регюй р1асе 0.5 йй! оЕЕЬе геасйюп йп а кесоп6 йиЬе сопйаипп8 10 )й! оЕ 10 шм Тпк-С! (РН 8.0). Неай йЬе геша)пбег оЕ ЕЬе геас6оп Еог 10 пипийек ай б8"С йо шасйучайе йе ро!упис1еойЫе Ыпаке.

5йоге йЬе йиЬе сопйашйп8 йе Ьеайеб геасйюп ппхйиге оп ке. 4. Веуоге ргосеейп8, бейегш!пе кчЬейЬег йе 1аЬебп8 геасбоп Ьак кчог)сес! йче11 Ьу гпеакийп8 йЬе Егасйюп оЕ йЬе гасбо1аЬе1 йай Ьак Ьееп йгапкЕегге6 йо йЬе 068опис1еойЫе киЪкйгайе ш а япа6 кагпр1е оЕ йЬе геас6оп пихйиге. ТгапкЕег а кашр1е оЕ йе геасйюп 1ехасй1у 05 )й!) йо а ЕгекЬ шЪе сопйашш8 10 ф оЕ 10 шЬЕ Тпк-С1 (РН 8.0). 1)ке йь кашр1е (а1оп8 ччййЬ йе ййчо а)1с)иойк кей аяг!е ш 5йерк 1 ап6 3) йо шеакиге йЬе ейкйепсу оЕ йгапкЕег оЕ йЬе у-кар 6.ош АТР Ъу опе оЕ йе Е01!окч!68 шейЬодя ° Меакиге йе ргорогйюп оЕ йе гасбо1аЪе1 йЬай Ъ|пбк йо ЕЕЕ-81 61йегк.

068опнс1еойЫек Ь!пс1 6866у йо йе роя6че1у сЬаг8ес1 61йегк, кчЬегеак )Т>пР)АТР боек пой. Рог с1ейа1)к оЕ йЬ)к гпейЬос1, р1еаке кее СЬарйег 13, Ргойосо1 7. ог ° Меакиге йе ейкйепсу оЕ йЬе 1аЪебп8 геас6оп Ьу екйипа6п8 йе Егас6оп оЕ 1аЬе! йай ш18гайек кч)йЬ ЕЬе 0118опис1еойЫе дийп8 яхе-ехс1ияоп сЬгогпайо8гарЬу йЬгои86 5ерЬас1ех 0-15 ог Вю-Кад Р-б0 со1шппк. Рог г1ейабк оЕ йЬ)к гпейос1, р1еаке кее Ргойосо! 5 оЕ йЬ)к сЬарйег. 1п аоше йчаук, йЬ!к Ек йЬе еаяег оЕ ЕЬе ьчо шейЬ065 Ьесаике йе ге!а6че апйоипйк оЕ !псогрогайег) апс! ипшсогрогайе6 га6!оасййчййу сап Ье екйипайед дипп8 сЬгогпайо8гарЬу оп а Ьапб-Ье16 пипппоппог. 5.

!Е йе крес16с асй)ч)йу оЕ ЕЬе о68опис!еой!6е !к ассерйаЫе, риПЕу йЬе гасбо!аЪе1е6 068опи- с1еойЫе ак ЙексПЬе6 йп Ргойосо1 3, 4, 5, ог б. 1ЙЬе крее!Яс асбчййу Ь йоо!оъч, агЫ ап абай!!она! 8 нпгь ой ро1упнс!еойЫе Ынаке, сооионе госнЬабоп йог а ЬгьЬег 30 ошннек ай 37'С !!.е., а йоса! оЕ 90 ннннг.к), Ьеай йЬе геас6оо Еог !О оноосек ай 68'С йо шасбчайе йЬе енгуше, ан6 аоа1уге йЬе ргобнсгк оЕ йЬе геасбоп ахайп, ак бексг!Ьеб !и 5йер 4. 1Е ао агЫ!й!опа! гонп6 оЕ РЬокрЬогу!а6оп Еай!к йо у!е16 ап о!!8опнс1еойЫе оЕ коббкйенй1у Ы8Ь кресйбс ас6чййу Еог йЬе йакйкк ай Ьаой сЬесйс кчЬейЬег йЬе о1!8оннс1еойЫе сопйашк а суконно гекЫне ай йь 5' йегонпнк.

1Е ко, сопкЫег гадок!8ойн8 йЬе о118оонс!еой!де ко йЬай !й сон!айна а С, А, ог Т гекЫне ай гь 5' еп6 !Р1еаке кее йЬе йнйгобнсй!он йо йь ргойосо!). А!гегпа6че1у, йгу рнпйу!н8 йЬе ог!8!на! ргерага6оп оЕ о!!8оонс1еой!6е Ъу 5ер-Райк еЬгогнайохгарЬу йРгойосо! 11, ао6 йЬео гереай йь ргойосо!. РГО1ОСО! 3 Рипйса6оп о1 Кайо!аЬе! ес1 О!~допис1еобдеь Ьу Ргес~рйайоп ЫЙ ИЬапо! | Р кло!оглвняэ ог1сомг7сееот1ое5 лке то ве 175ео оял л5 Рковев 1п ЬуЬНйаагюп ехрептепьь ЕЬеп согпр1еге геточа1 оЕ итпсогрогагед гайо!аЬе1 га 8епега11у по! песеааагу. Нохечег, го гедисе Ьас)свгоипд го а пппипшп, гЬе Ьи1)с оЕ гЬе ипшсогрогагед гайоасдчпу аЬои1д Ье аерагагед Егогп гЬе гайо!аЬе!ед о!!8опис!еогЫе.

Моаг оЕ гЬе геа(диа1 гайоасг!че ргесигаога сап Ъе гепгочес1 Егогп гЬе ргерагаг(оп Ьу д!ЕЕегепг!а! ргес!Рпадоп чг(гЬ егЬапо1 (Е гЬе о1!8опис1еог!де га тоге гЬап 18 пис1еог!деа ш 1еп8(Ь ((ЬЬ ргогосо1) ог гч(гЬ сегу1рупйптпг Ьгоппде, гевагд1еаа оЕ ЕЬе 1епвгЬ оЕ гЬе о1!8опис1еог(де (Ргогосо1 4). !Е согпр! еге гепюча1 оЕ йе ипшсогрогагед гайо1аЬе1 (а гег)и(гед (е.8., ъчЬеп гЬе гайо!аЬе!ед о!18опис1еог!де ъч!11 Ье пасс! ш рпгпег ехгепаюп геасг!опа), гЬеп сЬготаговгарЬЫ тегЬода (Ргогосо15 5 апс1 6) ог 8е! е1есггорЬогеяа (еааепг!а11у аа деасНЬед 1п Ргогосо1 1) аЬои1д Ъе иаед.

МАТЕИАсй СА()Т!ОХ: Р!еаае аее Аррепйх 72 Еог арргорпа!е Ьапд!!пк оЕ та(еда!а таг)сед мл(Ь < 1>. ВпЕЕегь апг! йо!п6опь Р!еаае аее Аррепйх 1 Еог согпропеп(а оЕ а!ос(с ао!и!юпа, Ьи((ега, апд геакеп!а. 01!и!е а!ос)с ао1ипопа Го ГЬе арргорпа!е сопсепггабопа. Аттопгит асегаге (70 м) ЕгЬапоl ТЕ (рн 7.6) Ммс!е!с АСЫв апг! О!коппс!еоЕЫев Каг)(о!аЬе)ес( о)гкопис)еосгс(е < ! > ТЬе агагвпк гоасепа! Еог ропксавоп ь гке геасггоп ггпхгоге (гого Ргогосо! 2 (е!гвег 5гер 3 ог 5гер 5), а(гег К Ьаа Ьеео Ьеагед го бкеС го !пас!)часе ЬасгепорЬаке Т4 ро!упос!еогЫе х(оаае.

!о.го Рго1осо! 4 Рипйсайоп ог Кас1ю!аЬе!ед О1~допис!ео6деь Ьу Ргес~рйа6юп ЫЙ Сну!рупйпшгп ВготМе т нь Рвотосот гтгвсв!вгв тнг ьнлклт!оя ог влтт!отлввтво опсогтттстготювв Етош ипшсогрогагет1 гайо1аЪе1 Ьу с)иап6та6че т)1ЕЕегепг!а) ргестрЬа6оп оЕ тЬе о1!Вопис1еотЫеа ъчпЬ тЬе са6ошс т)етег8епт сету1руг!т)1ппнп ЪгошЫе (СРВ). ТЬе тпейоъ1, ъчЬтсЬ ъчаа огт8тпа11у т)ечтает! то гесочег Е)т )А е1итег) Етош Ьут)гохуарат(те со1ишпа тп РЬоарЬате Ъийега (Сес)с апт( )ъ(ааг 1983), сап а!ао Ье наес) то ргестриате тат)!о1аЬе1ет) пис1ек аснЬ, !пс1ит)!п8 о!твопис!еотЫея Егош 1аЪе1- !п8 геас6опя ТЬе пис1етс асЫа аге Вгат ргестрКатед Еготп ат)пеон ао!ит!оп ъч!тЬ СРВ. ТЬе т1етегцепс Ь тЬеп геточе6 Еготп йе ргес!РЬате ъч!тЬ ейапо1 (ш ъчЬ!сЬ тЬе пис1етс асЫа аге !пао!иЫе), апъ) йе пис1ек асЫь аге ВпаИу ъ)!ъао1чет) тп тЬе ЬиЕЕег оЕ сЬоке.

ТЬе шегЬог) га ехтгетпе1у тарЫ, ейктепг, апг) ъчог)та ъче!1 !п а чапе!у оЕ стгсишатапсеа, Еог ехашр!е, КМА Вепегагет) Ьу ш чттго тгапаспр6оп геаст)опа ъч!1Ь ЬастепорЬаВе ро1утпегааеа апс1 оВ8опис1еотЫеа Егош РЬогрЬогу1а6оп геас6опя Ноъчечет„тЬе сесЬпи)ие аийегз Еготп опе розяЫе с)!аат)чапта8е — тЬе пееъ) то иге сагпег РХА го тпсгеаае тЬе еЕВстепсу ъч!й ъчЬ!сЬ тЬе 1аЬе1ет) о1!Вопис1еог!деа аге ргес!Рттасет( Ьу СРВ. Рог шоат ригроаеь, йе ргеаепсе оЕ йе ип!аЬе1ет) сагпег ТтХА !п тЬе Впа1 ргерага6оп оЕ гайо1аЪе1ег1 о!!Вопис1еотЫе !а еиЬег !гге1ечапт ог ап ас1чаптаве (е.8., !Е тЬе тат)!о1аЪе1ет! о1!Вопис1еотЫе )а со Ье пает) аа а ргоЪе).

Ноъчечег, ш сегташ арес)а))гет) сааеа (е.8., ъчЬеп а га6!о)аЪе1ет) о!!Вопис!еотЫе !а со Ье пает) ш ргипег-ехтепыоп геаст!опа ог РХА ает)иепс!п8 геаст!опа), йе ргеьепсе оЕ сагпег РХА тпау саиае соптр!ка6опя 1п тЬеае саъея ъче гесопппепс) йат тЬе о1!Вопис!еот!т!е Ъе рипйе6 Ъу е1естгорЬогеа!а тЬгоиВЬ а 2098 ро1уасгу!ашЫе Ве! (еааеп6аПу аа ЙеаспЬе6 ш Рготосо1 1), Ьу сЬготпатовгарЬу йгоиВЬ Вю-Се1 Р-б0 (Рготосо) 5), ог Ьу Яер-Ра)т со!шпп сЬгошато8гарЬу (Рготосо1 б).

ТЬе Ео11оьч!п8 рготосо!, ргочЫег) Ьу Кау МасРопа!6 апъ1 Са!ч!и 5ъчтЕт (()отчета!ту оЕ Техаа БоитЬъчеатегп Мет)тса! Септег, !За1!аа), тг а шоъ(тЕтсат!оп оЕ тЬе ог!8!па! тпетЬот( оЕ Нес(с апс) ааааа ( 1983). 10.22 Ргососо) 4: Рит((ссас!оп о('йасГ(о)аЬе!есГ 01(еопис)еогсс(ев Ьу Ргепр(гаг(оп сч(ГЬ СРВ 10.23 МАТЕК!АЕБ САГ)Т1О(ъ)с Р)еаве вее Аррепс()х 12 Еог арргорпасе Ьапс(1)пе оГ та1епа18 таг!сес( ччп1Ь <1>.

Войег8 апс! 5о!66оп8 р1еаве вее Аррепс(!х 1 Гог сотропепсв оГ всос1с во)и6опв, Ьи((егв, апс) геаеепсв. 01ЬПе всосЬ вопаюпв !о йе арргорг1асе сопсепсга6опв. Се!у1рупс(т(ит ЬготЫе (СРВ) (7 чл и(ч) Раю!че 1 8 оГ СРВ (5!Вша) сп 100 гп) оЕ Н О. То вреед савво1шюп, Ьеас сЬе во)исюп оп а Ьос р!асе чали!е а8!сас)п8 и ъчиЬ а ша8пеис вспгег.

Характеристики

Список файлов книги