Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 78
Текст из файла (страница 78)
ТгапвЕег сЬе Ве! 51кев со йгее ог Еош ппсгоЕиВе сиЬев. АсЫ ! гп! оЕ 01)цоппс1еосЫе е1шюп ЬиЕЕег со еасЬ сиЬе. СгпвЬ сЬе в! Ыев и6(Ь а йвроваЫе р!Репе Вр, ив!пП а ссгси1аг пю6оп апд ргевв!па (Ье ЕгаПгпепсв оЕ Ве! аВа!пвс сЬе яс1ев оЕ сЬе шЬев. 5еа1 (Ье сиЬев ъче11. 1пспЬасе йе спЬев Еог 12 Ьопгв ас 37"С ш а вЬа1сег лпсиЬасог.
!пс!ыюп оЕ 5Р5 )и йе е!и6оп Ьипег сап воше6шев !еа6 со йе арреагапсе оЕ а иЬ(сыЬ ргес!р)- сасе айег дгу)пц Повчп Егас6опв 2 апд 3 Егош сЬе 5ер-ра)с со1шпп иве6 ш сЬе Ппа1 всаае оЕ й!в ргососо!. ТЬ(в ргес!р!сасе !в пюя П)се!у 5Р5, и ЫсЬ Ь!пй со сЬе со)шпп ап6 е!шев вППЬс!у а(сег сЬе оПаопис!еос)6е Пш!пд ъчавЫпа вч)сЬ шесЬапоЬНлО. Ав )опх ав по 5Р5 Ь ргевепс и!сЬ йе оПцопнс)еосйе (Егассюп !), ЕЬе Песегаепс чаП пос саше ргоЫешв ап6 пзау ипргоче у(е!Пв. Новчечег, !Е ечеп а япаП апюнпс о(5Р5 епбв ир )и сЬе о)сдопис)еосЫе Вассюп, сЬеп )с сап !пЫЪ- Ь внЪвеоиепс епхугпа6с геас6опв (е.П., рЬоврЬогу!асюп ап6 рпгпег ехсеыюп).
!с ы Еог сЫв геаюп йас 5Р5 вЬои)л( пог Ье тс!идес( (и йе е!и6оп Ьиаег. 17. СепспЕиПе йе спЬев ас гпахппшп вреес) Еог 5 пппшев ас гоогп сегпрегаплге !и а гпкгоЕиВе. Роо1 сЬе вирегпаСапЪЪ СгапвЕег йеш Со а 5-сс йвроваЫе вуг!08е ап6 рава йегп СЬгопПЬ а Мс1!ех Н л! В!сег. СоНесс йе еЕВпепс сп а 15-гп! Ро1ургору1епе шЬе. !5о!аИоп ОЕ йупт!ле1!с О!!коппс!ео1!е!е5 Ьу Ьер-Ра34 Сса СЬтоепа1одтарЬу 18. Ргераге а 5ер-Ра1с С„гечегвед-РЬаве со!шпп ав Ео11ои я а. АоасЬ СЬе Ьагге1 оЕа йвроваЫе !О-сс ро!ургору!епе вуг!08е Со йе !ожег епс) оЕ а 5ерРа14 Сп с1авяс со1шпп. Ь. АсЫ 10 сп! оЕ асесоппп1е со сЬе Ьагге1 апс! 51осч1у рпвЬ К йгопВЬ сЬе со1шпп счКЬ йе р1ппВег оЕ сЬе вуппВе.
с. Кеточе йе вуппПеугот йе 5ер-Ра)с со1итп апс) йеп са1се (Ье р1ипцег опс оЕ йе Ьагге!. ТЬ!в ргечепсв а!г Ье!пВ ри11ес1 Ьас1с шсо сЬе со1шпп. КеапасЬ йе Ьагге1 со йе со1шпп. д. АсЫ 10 гп1 оЕ всеп!е Ес!сегес) Н О (М!111-(1 ог ес)и!ча1епс) со сЬе Ьагге1 апс1 в1ои 1у рыЬ лс (ЬгопВЬ (Ье со!шпп ипсЬ йе р1ипВег.
Кереас 5(ер с. Ргогосо! 1: Риг(15саг(оп ол'5уп(Ьег!с О!!Попас!еоги(ев Ьу Ро!уасгу!ат(г(е Се1 Е!есггорЬогев(в 10.15 10.16 Сйаргег 10: ЪМог3сГп8 цай 5упгйегГс О!|йопас!еогГде Ргойел е. АсЫ 2 гп1 оГ 10 гпту апппоппцп асегаСе со СЬе Ьагге1 апс1 рсьЬ Ь а1очч!у СЬгоц8Ь СЬе со1- шпп. Айалп гегпоче сЬе ауппйе, гегпоче йе Ьагге!, апд геассасЬ йе Ьагге! со сЬе со1шпп. ТЬе со1шпп ь посч геас1у Гог иае. 19. АлЫ йе ю1иЬоп сопса|п|п8 сЬе 8е!-рипйес1 о1!8опис1еос!де 1Ггот 5сер 17) со йе Ъагге1 апс1 я1очч!у риаЬ |С йгои8Ь йе со!шпп лч|СЬ СЬе р!ипйег.
Со1!есС СЬе еГЕиепС ш а агег3!е 50-т1 ро1ургору!епе сиЪе. Кереас 5сер ! Зс. 20. АсЫ 10 гп1 оГ Н О со сЬе Ъагге! апд риаЬ лс я!отч1у сЬгоцйЬ сЬе со1шпп чдй сЬе р1цпйег. лсереас сЬ|а лчаяЬ ясер ссч1се тоге. 21. Е1цсе сЬе Ьоцпд о138опис1еос|де Ггот сЬе 5ер-ра1с со1шпп чдсЬ сЬгее айсрлось оГ 1 гп1 оГ тейапоЬН О ао!исюп.
лсереас 5сер 18с арсег еасЬ е!идоп. Со!1есс еасЬ еГГ)цепс ш а яерагасе т|сгойлйе сиЬе. 3сеад сЬе О0 оГ йе ю1идоп лп еасЬ оГ сЬе сЬгее т!сгоГийе сиЪеа, исдп8 сЬе псесЬапоЬН,О ю1идоп аа а ЫапЬ. Моге сЬап 9058 оГ сЬе о1!8опис1еос|де арр11ес1 со йе со1шпп аЬои!д е1исе лп йе Йгяс сгасцоп. 22. Ечарогаге СЬе ао1идоп сопга!и!п8 сЬе о!18опис!еосЫе Со дгупегь ш а сепгглТц8а1 ечарогаСог.
23. 0|аю1че йе оЕ8опис!еоСЫе ш а СоСа1 чо1шпе оГ 200 р1 оГ Н О ог ТЕ (рН 8.0). 24. ТгапяГег 5 р1 оГ СЬе ю!иСЫп Со а сичеССе сопСа|пш8 995 р! оГ Н О. Млх йе сопСепга оГ СЬе сш еце, апс1 геад сЬе О0 оГ сЬе д!1исед аатр1е. Са1си1асе ГЬе атоипс оГ о118опцс1еосЫе ргезепс лп йе соса) ю1и6оп (Егер 23) аа деаспЪед |п 5сер 6 оГ сЬ|а ргососо!. Н$5с|АПк!Ь|С ОПСОЬ30СЕЕОТ30Е5 $3х$ РОЕУАС|хИ.АМ30Е СЕЕ5 Ргерагайогь оГ оййопцс|еос|деа Ила! аге <25 Ьааеа 3п |епййл йепегайу сои!а|о оп|у опе Ьапд СЬас 'ь аггоп8 епоиф со Ье десессег$ Ьу И|игп|пайп8 сЬе 8е| нчИЬ 0Н Ифл.
ТЬь 3а Ьесаиае йе ей|с|епсу оГ еасЬ соирйп8 алер Гп СЬе аупйеа|а 3а гегпаг1саЫу ЫИЫиюайу > 95ч'! |и ргеаепС дау аигогпалед 0ХА аупСЬеаЫегк ТгцпсаСес| оййопис|еоС|деа тау Ье ч|а|Ые И йе ейк|епсу оГ соирйпй десгеааеа Ъе|онч 80;4 аг опе ог гпоге игера сйлпп8 СЬе аупсЬеаиц Ьесаияе оГ геайепс сопсагп|пайоп, а Ыос$с |и опе оГ сЬе дейчегу 33пеа, ехЬаиас|оп оГ а рагйсц|аг пис|еойс$е рЬоарЬогагпкйге, ог ап ипсьиа$ аесопдагу асгцссиге $п йе оййопис|еос|де. Ргодисса оГ |псогпр|еСе аупйеыа аге деСесСес$ ав Гаагег-ш38гаС|п8 арес|еа, лчЬоые Зепи соггеаропд Со СЬе аупйейс агер аС иЫсЬ д|йки|лу ъчаа епсоигиегес$. Оссааюпайу, а атай пиплЬег оГ ГааСег-пз$8гаг|п8 ргодцсга аге л|егес|ед нчЬоае аЪюгЪапсе 'ь ос|па! Со ог йгеалег СЬап йе Гцй-!епйсЬ аупСЬебс ргодцсс.
Ргоч|дед епоиф Гцй-|епйсЬ ргодцсс 'ь г$есессег|, сЬе аЬопег ргодисса сап Ье $8погес|. |Г пос, йеп |агйег атоипса оГ йе 0ЫА ргерагасюп гпиаС Ье сьед Со рипсу СЬе оййопис!еойде оГ 3плегеаС. Ргерагас|опа оГ чеу |оп8 о!38опис!еоС|деа гпау сопСл|п а |аддег оГ ргешаилге|у Сгипсагед арес|еа ехсепд3п8 ирчнагг! Ггогп -50 пис|еоС|деа $п аЬе. ТЬе а|ончеаС-гп|8гайп8 ареп|еа 3а иаиайу СЬе деа|гед рплдисС Негу оссаа|опайу, Лочнечег, ап оййопис|еойс$е гпау пийгасе апоша!оца!у, сганейп8 йлпйег сЬгоиф йе 8е! йап йа аЬогсег а|Ы! пйк Кеер |и гп|пд сЬас яег|иепсе д|ГГегепсеа Ьеичееп сЬе шегпЪега оГ роо| а оГ гесйлгк|агп оййопис|еос|деа сап сацае |пгйчк|ца| 0ЫАч со ш$8гасе ас а!38Ьс|у с3ййегепс гасеа, 83ч|п8 г|ае со а а|п83е Ъгоад Ьапг! ог со а с|сьсег оГ с3оае|у арасед Ьапдк |и йеае а|сиасюпк нчЬеп сЬе арас|п8 оГ Ъапда 'ь апогпа|ош, ог СЬе ЬапсЬ аге ашеагед, И 'ь ЪеаС со са|се а сопаегнайче арргоасЬ Ьу ехсгасйпй ай с|оае|у арасед Ъапда Ггопз сйе ге3ечапс ге8|оп цГ йе 8е!.
И а Ьгоас$ ьгпеаг оГ Ьапда оГ арргох|гпасе|у ел|па! 3псепа|су ь ргог|исес$ счЬеп ри псу|ой ап о3|8опис|еойс|е оГ цп|с|ие аес|иепсе, И 'ь Ъеаг Со геаупСЬеаЬе йе оййопис|еоС|де. |и йь саче, йе есйс|епсу оГ соир|в8 сап ютеС|гпеа Ье сЬес$сес| Ъу геасйп8 СЬе сопсепСгаСюп оГ СпСу| 8гоира аС д|ГГегепг агайеа оГ Иле аупСЛейс геасСюп. $3оцленег, Ьесаиае оГ СЬе |агйе пигпЬега оГ ойдопис|еобс$еа ргосйлсег|, пюаС соге Гас|333|ох до пог !леер гесогсЬ оГ сЬе !псу! сопсепсгас|опа ечеп сйоиф йе аупйеыгег гпау Ье ес|ц|рред ихй ап |и-йпе гпеаюг|п8 дечке.
Е|пайу, 1сеер 3п го|од СЬаС СЬе г$еСес|юп йш|С Гог 0Н йфС аЬадоих|п8 ь — 0.5 О0 оп|С. й апюипЬ оГ оййопис|еоск|е |его сЬап йь г|иапс|су аге со Ье рипйед (е.8., илЬеп риг|Гу|п8 оййопис|еойдез >у0 Ъаьеа), сопа|дег гагйо|аЪейп8 йе ргерагайоп Ьу рЬоарЬогу|аС|оп аа деасг|Ъед $п РгоСосо! 2.
Рго1осо! 2 РЬоьрйогу! айпи йе 5 Тегт~п~ о1 О!~цопис!еобдеь чнтнрт|с ог|сомисн от|088 гяск гноя нлтг ско|798 а| |Ье)г 5' |егппш ап|Е |ЬегеЕоге аге еая Пу га|11о1аЬе!ег! Ъу |гапаЕегпп8 |Ье Т-"Р 1гогп [т-ЯР) АТР ш а геас6оп саса1угег1 Ъу Ьас|епорЬа8е Т4 ро!упис1ео|Ые Папахе. 068опис1еоСЫеа гагПо!аЬе1е|1 |п гЬ18 тчау аге иаег) аа ЬуЪ|1йгабоп ргоЪея РНшега Еог Е|Ь)А аег)иепс)п8 ап|Е 5'-епс! шаррш8 оЕ гпКХАя ап|Е рг1шегь Еог апа1уяа оЕ ро!ушогрЬ|с писгоаа|еППе шаг1сега 1п шапипаПап ОНА.
'у!|Ьеп |Ье геас6оп 18 сагпе6 ош ипг!ег агап|1агг) сопсП|юпя >5058 оЕ йе о68опис1ео|Ые шо!еси1еа Ъесогпе гагПо!аЬе1ед. Но|чечег, Еог геа|юпа |Ьас аге ип)спо|чп, |Ье еЕ6с)епсу оЕ гас)1о1аЪе!ш8 оЕ о68опис1еогЫеа череп|!а оп |Ье аег!иепсе оЕ |Ье о68опис1еогЫе Ечап Нои|еп ес а1. 1998). ОП8опис!еосЫеа |ч1|Ь а су|ояпе гея|1ие а| |Ье)г 5' |егппш аге 1аЬе!е|Е ЕоигЕо16 1еаа еЕЕгс)еп|1у |Ьап о68опис!еосЫеа Ъе81пп)п8 гч1|Ь А ог Т, ап|1 яхЕоЫ 1еаа еЕ6с|еп|1у йап о68опис1еогЫеа Ье81пп)п8 |91|Ь С. Ъ!|Ьеп дея8п)п8 о68опис!еосЫе ргоЬея и с!еаг1у раух |о епаиге йа| |Ье 5'-|епшпа1 роя6оп 18 по! оссир)е|1 Ьу а су|ояпе гея|1ие. ТЬе геас6оп деасг)Ье|Е Ьеге |а г)ея8пес! |о 1аЬе! 10 рпю!ез оЕ ап о68опис1еосЫе |о Ь~ПЬ прес)Е|с асичпу. ЬаЬеПп8 оЕ с1ПЕегеп| ашоипга оЕ о68опис!ео|Ые сап еая1у Ье асЬ)ече|Е Ьу 1псгеаяп8 ог |1есгеаяп8 |Ье яае оЕ йе геас|юп, |чЬПе )сеер1п8 йе сопсеп|га6опа оЕ аП согпропепга сопя!ап!.
51пп1аг геас|юп сопг66опа сап Ье иве|! |о асЫ а попгайо!аЬе1ег! РЬоарЬаге |о |Ье 5' еп|Е оЕ а ьупйе6с о68опис1еосЫе ЬеЕоге Па иае |п яге-г!1гесге|Е шига8епеяа (р!еаае аее СЬар|ег 13, Ргогосо18 2 — б). МАТЕВ!АЕ6 СА!7Т1ОХ: Р!еаае аее АррепсПх 12 Еог арргорпа!е Ьапг)Ппц оЕ ша!ег)а18 шагЬе|1 и1!Ь <1>. ВоЕЕег8 алс! 6о!оЕ1ог|8 Р!еаае атее АррепгПх 1 Еог сошропеп!8 оЕ ь!осЬ ао1иоопь, ЬиЕЕегя ап|1 геа8епгя 0Пи!е ь!ос1с ьо!и6опь !о йе арргорпа!е сопсеп!гаоопя 70х Вас|епорЬа8е Т4 ро)упис)еоГ!г)е Ег!пахе Ьиууег тг!тисl 17 44, рн В.О) Еокугттеь а|тс! ВоЕЕег8 ВасгепорЬаВе Т4 ро1упис!ео|1г)е Ьпаье ЧЧ|!д-гуре ро1упцс!ео|Ые к!паве ы а я-рЬоьрЬо|гап|уегаве ап|! а 3срЬо|рЬа|а|е ! Рере|ч апс! со|юге!!! |974; ягоиао е| а!.
|978). Ноюечег, |погап! Еогп|г оу |Ье еогу|пе 1е.8., р!еа|е ьее Сагоегоп е| а!. |978) 10.17 10.1В СЬаргег 10: )(гог)с!пе ипй 5упйепс О[!Вопис!еог(де РгоЬеь аге соиипегс[а!1у ачаааЫе (е.а., ВоеЬг(иаег МаппЬеип) сЬас 1ас)с сЬе РЬоьрЬасаье асс1чау Ьнс геса!и а Ги11у Гипс6опа[ РЬоврЬосгапьГегаье. Сие гесошшепс) йас йе гпшапс Еогш оЕ сЬе еигуше Ье тес[ Еог 5' !аЬе1!п5 счЬепечег роя)Ые; 10-20 ипаь оЕ сЬе епгупге аге гес)шге6 со саса1уге сЬе РЬоьрЬогу[аиоп оГ 10-50 рпю!еь оГ с[ерЬоьрЬогу1асес[ 5'-ргосгиГВпх сегпип). йь 1МРОКТАЬСТ Ве аиаге йаС ргерагаСюпь о( ро!упис!еоСЫе Ыпаье ьоЫ Ьу д)6егепС тапи(ас- сигегь Ьаче Ьееп герогсед со чагу ччЫе!у !и йе!г аЫ!!су со сага!уге йе рЬоьрЬогу!аиоп о( йе 5' сегобп) о( ь)пВ!е-ь(гапдед ьупсЬеис о!!Вопис!еос!деь (чап Нои(еп ес а!. 1998). [х[ис[е[с АснЬ ап4! О[[еопис!ео64[е5 ОВВопис)еоиде То асЬгече шах)шипв еЕ6сгепсу оГ 1аЬе1)пх, рип(у сЬе о!15опис!еосЫе Ьу гечегьейрЬаье сЬгошасоегаРЬу аь г[еьсг)Ьес) си Ргососо! 1.
Сгис[е ргерагасюпь оЕ о
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
