Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 74
Текст из файла (страница 74)
5!псе попе от" тЬеае аге регтест, тЬе сЬоке апюп8 тЬетп !а 1аг8е1у а шаттег от регаопа! ргетегепсе (тот айй!т!опа) !п(огтпатюп оп са1си!атш8 ше1т!п8 тетпрегагигея р!еаае аее гЬе !птогшатюп рапе! оп а4ЕП!НС т Е!т4- РЕВАт 0865). ТЬе ше1йп8 тешрегатигеь от" еасЬ тпешЪег от" а ргппег:таг8ет йир!ех аЬои!й оЬч(- оиа1у Ье са1си1асей ияп8 тЬе ааше ес)иат!оп.
° Ап ешр!гка1 апй сопчешепт ет!иайоп )тпотчп аз "ТЬе !4та!1асе Ви1е" (5и88а ет а!. !98!Ь; ТЬе!и апй ЪЧа11асе !986) сап Ъе иаей то са1си!асе тЬе Т со регтест йир1ехея 15 — 20 пис1еот!йеа !п 1еп8тЬ, тп ьо1чепта от" Ь!8Ь юпк ягеп8тЬ (е.8., ! Рй ХаС! ог бх 55С) Т (ш 'С) = 2(А+Т) + 4(С+С) тчЬеге (А4Т) !а тЬе яип от" ВЬе А апй Т геа!йиеа !п тЬе о!!Вопис1еот!йе апй (6+С) !а гЬе шиш от" С апй С геа!йиеа !п тЬе о1!Вопис!еот!йе. ° ТЬе ет)иат!оп йепней ог!8!па!!у Ьу Во!топ апй МсСагтЬу (1962) апй 1атег пюй!Втей Ъу Ва1сВпо ет а1. (1989) ргей!ста геааопаЬ!у тче!1 гЬе Т от" о1!Вопис1еот!йея <100 пис1еот!йеа 1оп8, !п сайоп сопсептгат!опт от'0.5 хт ог !еая апй тч!ть а (С+с) соптепт ьеттчееп 3098 апс1 70%. 1т а1ао сошрепаатеа тот тЬе ргеаепсе от" Ьаае-ра!г ш!япатсЬез Ъетъчееп гЬе о1!Вопис!еот!йе апс1 гЬе таг8ет ает)иепсе Т (ш ОС) = 81.5'С+ 16.6 (1о8та[Ыат]) + 0.41(96[6+С]) — 675(п — !.0 тп тчЬеге и !а тЬе питпЬег от" Ьааеа ш тЬе о1!Вопис!еот!йе апй т !а тЬе регсепта8е от Ъаае-ра!г ш!я шассЬея ТЬ!а етртатюп сап а1тю Ъе иаей то са!си)ате гЬе ше1т!п8 тетпрегатиге от ап ашр1!Втей ргойист тнЬоае ает)иепсе апй яке аге ЪотЬ ]споитп.
чттЬеп РСВ ашр!тВсатюп !а сагПес1 оит ипйег атапйагй сопй!т!опя тЬе са1си1атей Т от тЬе ашр1тВей ргойист аЬои1й пот ехсеей -85'С, тЬиа епаиПп8 соптр1есе аерагат!оп от !та атгапйа йипп8 тЬе т!епатигатюп атер. Хите тЬат тЬе йепатигайоп тешрегатиге ш РСВ !а тпоге ассигате1у йейпей аа тЬе тептрегатиге от" !ггенегяЬ!е атгапй аерагайоп от а Ьошо8епеоиа роро!атюп от тпо!еси1ея ТЬе тетпрегатиге от" !ггечега!Ь!е атгапй аерагат!оп !а аечега! йе8гееа ЬтВЬег гЬап гЬе Т (туртса11у, 92 С !ог 13ЫА тчЬоае сопсепт от С+С В 5096) (ЪЧетшиг !991).
° Ые!тЬег от" тЬе аЬоне ет]иат!опт та)сеа !пто ассоипт тЬе е(Тест от" Ьаае тес)иепсе (аа орроаей то Ъаае сотпроятюп) оп тЬе Т от о1т8опис!еотЫея А пюге ассигате еат!шаге от тЬе 7' сап Ье оЬтатпей Ьу тпсогрогайп8 пеагеат-пе!ВЬЪог тЬегшойупаш!с йата што тЬе ет)иат!опт (Вгеа1аиег ес а1. !986; Егетег ет а!. 1986; К!етое)с ет а1. 1986; ВусЫЙ ет а1. 1990; тттетшиг 1991; ВусЫЙ !994). А ге)апне!у атга!ВЬттогтчагй ет)иат!оп, йеасПЬей Ъу ЪЧетшиг ( ! 99! ), ь Т (тп 'С) = (Т' АН)т(АНΠ— ЛО'-ч КТО 1п[с]) ~- !66 1о8щ([Ха']т[!От- 07[Ха" ]]) — 269 3 [!ха~] А пшпЬег от тЬе тЬеппойупапис тегша сап Ье арргохппатей: ачега8е пеагезт-пе!ВЬЬог епгЬа!р!ея АН„'„= — 8.0 )сса1тшо1е анега8е пеагеат-пе!ВЬЬог тгее епег8!ея 66;„= — !.6 )сса!lшо1е тчЬеге ттН А Со пп Я 70 пп( вп ол) е (хт дСа ) т АДо + Со тЬе пшпЬег от" пеагеат пе!ВЬЬога (е.8., ! 3 тот а 14-шег) !.99 са1/тпо!е-"К 298.2'К тЬе гота! тпо1аг атгапй сопсептгабоп 1М 10.4 СЬартет 10| ЪСЬт/гтд лч/г/с Бупйебс О1!допит!ео/Ые Рто/гея !пП!а6оп сепп, Лб'.| = +2.2 )сса!/то1е ачегаде дапддпд епд епйа1ру, АН", = — 8.0 )сса1/то1е/епд ачегаде дапдПпд епд угее епегду, ЛС; = — 1 )сса1/то!е/епд ачегаде ппятассЫ!оор епйа1ру, /лН" = — 8.0 )сса1/то!е/ппятассЬ ч Хосе |Ьас Сот еасЬ гшяпассЬ ог!оор, Х„„Ь гедисед Ьу 2.
'|чЬеп йе оПдопис1еос!де Ь ияед ая а ргоЬе, ЬуЪпйга6оп !я ияиаду сап!ед оис ас -5 — 12'С Ъе1очч сЬе са!си1асед Т, апд ясппдепс рояйуЪпйга6оп |чаяЫпд Ь сагпед оис ас -5'С Ъе1олч |Ье Т . ччогЫпд яо с!ояе со йе са!си1асед Т Ьая съчо сопяе|рлепсея !1) 1| гедисея сЬе пшпЬег о/ пияпассЬед ЬуЬгнЬ апд !2) !еяя деягаЫу, и гедисея |Ье гасе ас ччЫсЬ реггесс ЬуЬп|Ь сопп. Рог аП ргасбса! ригрояея, ЬуЬгЫ уоппаг!оп ЬеС|чееп со|пр1егпеп|агу РХА пю1еси1ея >200 пис1еосЫея |п!епд|Ь Ь ап |ггечегяЫе геассюп счЬеп аппеа1тд Ь сагпед оис ас -10'С Ье!очч сЬе са!си1асед Т .
ТЬе сЬапсе сЬас яисЬ а 1опд ясгессЬ оЕ регуесс доиЫе Ьедх ччП! ипчч!пд ипдег |Ье сопйбопя сопчепбопаду иге|1 Гог ЬуЪпдиабоп !68"С апд -1 М [Хая]) Ь япаП, Носчечег, ЬуЪгнЬ !ечеп рег1есс ЬуЪгнЬ) Согтед Ьеслчееп яЬогс оддопис1еос!дея апд йе!г сагдес яес!иепсея ас 5 — 10"С Ье!очч йе Т аге Гаг еаяег со ипчч!пд; сЬия, ЬуЬпйгасюп геассюпя о1й|я суре сап Ье сопядегед гечегяЫе. ТЬ|я ЬеЬачюг Ьая ипрогсапс ргасиса1 сопяег)иепсея.
ТЬе сопсепсгасюп оу оддопис1еос!де !и |Ье ЬуЬпйгасюп геас6оп яЬои1д Ье ЫВЬ !0.1 — 1.0 рпю!е/т1) яо сЬас сЬе аппеа1шд геас6оп гарЫ1у геасЬея е|!шПЬпшп нч|Ып 3 — 8 Ьоигя. РояйуЬпйгасюп ччаяЬ!ид, Ьочтечег, яЬои1д Ье ЬпеГ [1 — 2 ппписея) апд яЬои!д Ъе сагпед оис !и!с!аду ипдег сопйбопя оу 1о|ч яппдепсу, апд сЬеп ипдег сопй6опя ог яппдепсу йас ас !еаяс ес)иа! йояе ияед гог ЬуЬгЫЬа6оп !М|уада апд чЧаПасе 1987). ЕЕМСТН ОГ ОЕ!СОМЕ)СЕЕОТ!0Е РВОВЕй ТЬе 1опдег ап оПдопис!еосн1е, |Ье Ь!дЬег !ь ярес!Псду Сог сЬе сагдес яес!иепсе. ТЬе уодоьчпд ес)иас!опя сап Ъе ияед со са1си!асе сЬе ргоЬаЬсдсу |Ьас а ярес!Пс яег)иепсе аспид о/пис1ео|Ыея ъчП! оссиг ъчсЬ)п а яес)иепсе ярасе [Хе! апд Ы ! 979).
[д/2)и|с х [!1 д)/2)атг счЬеге К Ь сЬе ехрессед Сгес!иепсу оуоссиггепсе чч!сЬ!п |Ье яес)иепсе ярасе, д Ь йе ге1абче О+С сопсепс оГ йе яег)иепсе ярасе, апд О, С, А, апд Т аге |Ье пшпЪег оГ ярес|Пс пис1ео6дея |п |Ье оПдопис!еос!де. Рог а доиЫе-ясгапдед депо|пе о/ яге Х !!и пис1еосЫея), сЬе ехрессед пшпЪег !и) оГ ясея сотр1етепсагу со йе оддопис!еос!де Ь и = 2ХК. ТЬеяе ес)иас!опя ргейсс йас ап оПдопис1еосЫе о/ 14-15 пис1ео|Ыея ячои1д Ье гергеяепсед оп1у опсе !и а таиппаПап депо|пе счЬеге Х Ь -3.0 х 1ОЯ.
1п йе саяе оГ а 1б-тег, йеге Ь оп1у опе сЬапсе т сеп |Ьас а сурка1 и|апипаПап сРХА ПЬгагу !согпр1ехпу -1Ог пис1ео6дея) лчП! Согсшсоия1у сопсат а яе|!иепсе сЬас ехасс1у тассЬея сЬас оГ йе оПдопис!еосЫе. Ночтечег, |Ьеяе ея6- тасея аге Ъаяед оп йе аяшпрбоп йас сЬе д!ясг!Ьис!оп оГ пис1еосЫея |п |папипаПап депотея Ь гапдот. !)пгопипасе!у, й|я Ь пос йе саяе, |Ьле со Ь~ая 1и содоп ияаде !1.асЬе 1985) апд Ьесаияе а ядшдсапс ггасс!оп ог" сЬе депоте Ь сотрояед оГ гере66че РХА яес!иепсея апд депе Гаиидея.
Весаияе оусЬе ргеяепсе ог |Ьеяе е1етеппд по тоге йап 8598 о/йе |папипаПап депоп|е сап Ье сагдесед ргесЬе!у, ечеп Ъу ргоЪея апд ргипегя йас аге 20 пис!ео|Ыея т 1епдй !Вашя 1994). То пппипие ргоЫе|пя о1 попярес|Пс ЬуЬпйгасюп, П адччяаЫе со ияе оддопис!еос!дея !опдег йап йе ясас|якаПу !пйсасед иипипшп. Апу с1опея йас йеп ЬуЬпйге со йе ргоЬе аге !Псе1у со Ье депчед Сгот |Ье депе ог !псегеяс. Веаг )и пппд |Ьас ччЬеп а сРХА ПЪгагу Ь ясгеепед !пггодисг/оп $0.5 чн$|Ь ап о!18опис!еог)де ргоЪе, по ге1адопьЬ|р ех)ыь Ьеглчееп |Ье оЬьегчед пшпЬег ол роядче с1опеь апд |Ье|г $гел)иепсу ргед)ссед Ьу ыаг)ы)сь. Рог ехашр1е, 1$ Ьу сЬапсе йе о1$8опис1еог)де ьЬои1д |пассЬ ап ехргеььед ье|)иепсе |Ьа| |ь аЬипдап|1у гергеьеп|ед $п шКЬ)А, йе пшпЬег оу с1опеыЬа| ЬуЬг)д)хе |о йе ргоЪе лч$!1 Ъе пшсЬ 1аг8ег йап |Ьеогу ргед)сгь.
Веуоге ьупйея|дп8 ап о1$8опис!еодде ргоЬе ог рПшег, Ь 1ь адч)ьаЫе |о ьсап Р)ч)А да|аЬаьеыо епьиге |Ьа| йе ргороьед ьес)иепсе оссигь оп!у 1п йе деяге|$8епе апд пос $п чес|огь, ипдеыге|1 Вепеь, ог гереддче е1ешепгь (е.8., р1еаье ьее М)гьиЬаьЬ$ е| а!. 1994). ТЬе е)Тес! ог'ЬуЬг)д)хаг)оп Ъеглчееп $шрегуес|1у ша|сЬес1 ьесрлепсеь саппо| Ье еая1у срлапНВед, япсе д)В:егепл |уреь оГ пияпассЬ|п8 (ш)ьра)г)п8 Ьегънееп яп81е Ьаьеь, 1оорои|ь оп е)йег ыгапд, пш1Нр!е пияпассЬеь, лчЬейег с!оье1у ог сВыап|!у ьрасед) Ьаче д$$уегепг еггесгь оп йе ыаЬ|1Ьу ог' доиЫе-ыгапдед РЬ)А. гог еха|пр1е, а яп81е пняпа|сЬ |п |Ье сеп|ег оу а ьЬог| о1$8опис!ео|Ые (о$ -16 пис1ео|Ыеь ш 1еп8|Ь) лч$1! |1еяаЪ|1)хе йе ЬуЪгЫ Ьу -7'С ('ччегшиг 1991) апд, сопьел)иепг!у, шау аиепиа|е йе ЬуЬг)д)хагюп я8па1 со а гегу сопыдегаЫе де8гее.
Оп йе ойег Ьап|1, а пияпа|сЬ а| йе 3' еп|$ оу а ргоЪе нч111 Ьаче 1$$$1е ейесл оп ЬуЪг)д)гаг)оп я8па1 $!Ьлга е| а!. 1987) Ъи| ън$11 Вгеа|1у д)пшиьЬ йе аЬ|1Ьу оГ ап о!18опис!еог)де |о ргипе РХА ьупйеяя 0ЕСЕ!ЧЕ$4АТЕ РООЕЬ ОГ ОЕ$СО)Ч$.)С$.ЕОТ$0ЕБ 1п пю!еси!аг с!ошп8, йе я|иа|юп ггес)иеп|1у апьеь ънЬеге а ьЬог| ьес)иепсе оу апипо асЫь Ьаь Ъееп оЬга)пед Ъу ьел)иепс)п8 а рипВед рго|е)п. Весаиье оу |Ье де8епегасу ог йе Вепег)с соде, |папу д$$$егепг о1$8опис1еог)деь сап ро|епда!1у соде гог а 81чеп |гас| оу апипо асЫя рог ехашр1е, 64 роьяЫе 18-шегь сап соде Гог |Ье ьел)иепсе Аьп РЬе Туг А1а Тгр Ьуь.
Ноччечег, оп!у опе оГ |Ьеье о1$8опис!еог)деь чч1!1 ехасс!у шассЬ гЬе сод)п8 ье|рлепсе иье|$ $п |Ье Вепе оГ $п|егеы. Весаиье йеге |ь по лчау |о )сполч а ргюп' ччЫсЬ ог" йеье о!$8опис1еог)деь Ьаь Ьыгие соип|еграг| $п |Ье Вепе, роо1ь ог" о1$8опис!еог)деь соп|а|шп8 а11 ро|еп||а! сод)п8 сошЬ)па|юпь аге ьупйеяхед апд иьед аь ргоЬеь. Ререпд)п8 оп йе !еп8|Ь оГ йе апипо асЫ ьел)иепсе апд |Ье агпоип| ол де8епегасу а| еасЬ роядоп, роо!ь сап соп|аш ир |о ьенега1 Ьипдгед о1$8опис!еог)деь. !$ ЬуЬгЫ)хадоп сопд)г)опь сап Ье Гоипд ипдег лчЬ)сЬ оп1у ремесл!у ша|сЬед ьес)иепсеь $огш ыа- Ь)е дир1ехеь, с1опе|1 сор)еь о$ |Ье Вепе ол ш|егеьг сап Ье геад$1у $ьо1агед |гпмнп Вепопис ог сРЬ)А 1|Ъгапеь (е.8, р!еаье ьее Сое|Ые1 е| а!.
1980; АВаглча1 е| а1. 1981; 5оод е| а!. 1981; 5и88ь ес а1. 1981Ь; ЪЧа1!асе ес а1. 1981; Тоо!е е| а1. 1984; !асоЬь е| а!. 1985; 1.ш ес а1. 1985). Роо!ь ог де8епега|е о1$8опис!ео|Ыеь аге 8епега!1у иьед |о ье!ес| а ьепеь оу сапдЫа|е с1опеь |Ьа| сап |Ьеп Ье апа1ухед $иг|Ьег |о Ыепдуу |Ье |гие |аг8е|. То епьиге йа| |Ье |аг8е| с1опе |ь гергеьеп|ед ш йе $п$$$а1 Вгоир оу сапдЫа|еь, ьсгееп)п8 сопгВ|юпь аге иьиа11у сЬоьеп йа| а11оън десесг)оп оу регуесг ЬуЬпдь гогшед Ьеглчееп йе пюы А/Т-НсЬ о1$8опис1еог)де ш |Ье роо! ап|$ $|ь ро|еп||а! саг8е|.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
