Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 75
Текст из файла (страница 75)
О|Ьег ЬуЬг)дь, Ъо|Ь реггесл ап|1 $шрегуесс, йа| аге ьсаЫе ип|1ег ьисЬ сопд$- Вопь лч$!1 ЫепНГу адд|допа1 сапдЫа|е с1опеь. 1| $ь еаьу |о са!си!а|е ассига|е1у |Ье Т о$ а регГес|1у п|а|сЬе|1 ЬуЬгЫ гогшед Ьегччееп а яп81е о!|8опис1ео|Ые ап|1 ||ыаг8е| ьел)иепсе. Нолчечег, лчЬеп ияп8 роо!ь ог о118опис!еог)деь ччЬоье п|егпЬегь Ьаче Вгеа|1у д$$уегепг соп|еп|ь оу С4С, Ь 1ь пог уеаяЫе со еыипа|е а сопьепьиь Т . Весаиье Ь $ь $шроьяЫе со )спочг лчЬ)сЬ лпешЬег оК йе роо! лч11! п|а|сЬ |Ье |аг8е| ьесрлепсе реглес|1у, сопд$$$опь пшы Ье иьед |Ьа| а1!олч йе о!$8опис!еог)де тч$|Ь йе 1очнеьс соп|еп| оу С~-С |о ЬуЪг)д)хе ейк)еп|1у. $)ьиа1!у, сопд)г)опь аге сЬоьеп |о Ье 2'С Ье!очл |Ье са!си!агед Т ог'йе пюы А/Т-ПсЬ лпегпЪег ог" |Ье роо! (5и88ь е| а!.
198!а). Нолченег, йе иье оу якЬ ")оънеы сопипоп |1епогпша|ог" сопд$$$опь сап Вепега|е уа1ье роядчеь: М)ьгпагсЬед ЬуЬг)дь Гогшед Ьу о1$8опис1ео|Ыеь оу ЬВВЬег С4С гпау Ъе пюге ыаЫе йап а реглесг!у |па|сЬед ЬуЬпд уогшед Ьу |Ье соггесс о!$8опис1еогЫе. 1п |поы саьеь, |Ь)ь ргоЫеш 1ь пос ьег)оиь, япсе йе пшпЬег оГ роя||не с1опеь оЬга|пед Ьу ьсгеешп8 сРЬ)А 1$Ьгадеь чч$|Ь роо!ь ог пис!ео|Ыеыь с)и)ле шапа8еаЫе. 1| )ь 10.6 С)таргет 10т Мог)стд тчтт)т Бупт)тет!с О1!Вопит!еоттде РгоБет тЬегетоге еаау то д!зт!п8и)хЬ ба!хе роатттчеа тгош сгие роядчеа Ьу апотЬег теы !е.8., РИА аес!иепс!п8 ог ЬуЪт!д)хат!оп чч!тЬ а аесопд роо! оу о!!Вопис1еотЫеа соггеаропд!п8 то апотЬег ае8шепт оуапипо асЫ ает)иепсе).
Я!3АКТЕВЧАКтт Ат КИАММОМ!.)М ЬАП'$ ЪттЬеп тЬе пшпЬег оу аррагепт роыт!чеа 1а ипассерсаЪ|у Ь18Ь, К ь ччогтЬтчЬ!1е ияп8 ЬуЪт)д!хат!оп ао!чепта тЬас сопташ т!иатегпагу а!!су!апппоп)иш за!та аисЬ ав тетгаейу1апппопшпт сЫог)де (ТЕАС!) ог сесгашетЬу!апппопшпт сЫогЫе (ТМАС!) !Ме1сЬюг апд чоп Н!рре1 1973; 1асоЬх ет а1. 1985, 1988; Чтоод ет а!. 1985; 61тасЬ!ег ет а1.
1986; Рй.е!1а апд Чтоо 1987). Ву Ь)пд)п8 Со А/Т- гкЬ ро1ушега !Ятартго ет а1. 1969), с)иатегпагу а!)су!апнпоп!иш ха!та гет1исе йе рте!егепда1 ше1Кп8 оуА:Т четхиа СеС Ъахе райх !Ме!сЬюг апдчоп Н!рре! 1973; Рдссе11! апд Веп!ВЬт 1993). 1п ТЕАС! ог ТМАС1, тЬе Т оГ ап о!18опис!еотЫе-РМА ЬуЬгЫ Ъесошех!егь т1ерепдепт оп Ка Ьаае сошрояКоп апд тпоге дерепдепс оп Къ 1еп8тЬ. Ву сЬоояп8 а ЬуЬПсВтатюп сешрегатиге арргорПате Гог тЬе 1еп8тЬа оГ йе о1т8опис1еоКдех ш а роо!, йе еКесь от' ротепда1 ппяпатсЬех сап Ье ш)пип)хед.
1т ь ппрогтапт то оЬта!и ап ассигате ехт!шаге от тЬе Т !п ТМАС1 ог ТЕАС1 ЬеГоге ияп8 роо1з оуо!!Вопис!еот!дех то хсгееп сРХА ог Вепопнс 1!Ъгадея )асоЬа ет а!. 11988) тпеааигед йе Т, (тЬе !ггечега!Ые тпе!Кп8 тетпрегатиге) оГ йе ЬуЬгЫ 1отшед Ьетччееп тЬе ргоЬе апд Ка таг8ет аа а ЕтпсКоп от сЬа!и 1еп8й тот а пшпЬег от' о118опис1еот!деа пут)ЬКегепт (С4С) соптепт 1п ао1- чепь соптанпп8 еКЬег ход)иш !опа ог тетгааИту1апппопппп юпя НуЬт)да шчо1чш8 о!т8опис!еотЫеа 16 апд 19 пис1еоКдех ш 1еп8тЬ тпе1т очег а япа!!ег гап8е оГ тешрегатигеа ш зо!чепта сопта!шп8 ТМАС! йап ш ао1чептх сопта!шп8 ход!иш ха!гя рог ехашр1е, 16-шега ше!т очег а 3"С тешрегатиге гап8е !п ао1чепта сопташ!п8 ТМАС!, сошрагед чч!тЬ 17"С 1п 55С. ТЬе ортипа1 тешрегатиге тот ЬуЪг)д!хат)оп ь иаиа1!у сЬоаеп то Ъе 5'С Ье1отч тЬе 7'., 1ог тЬе 81чеп с1та!и 1еп8й.
ТЬе гесопипепдед тептрегатиге уог 17-шега ш 3 тчт ТМАС1 ь 48 — 50'С; Гог 19-тпегя К ь 55 — 57'С; апд уог 20-тпеты К 1а 58-66'С. Ттчо ро!пта аге тчогй ешрЬаях)п8. Е)тат, тЬе Т, от ЬуЪгнЬ 1а иш1опп!у 15 — 20"С Ь18Ьег ш ао1чепЬ сопташш8 ТМАС! тЬап 1п ао!чепта сопта!шп8 ТЕАС1. ТЬе Ь!8Ьег Т, !п ао1чепта сопташ!п8 ТМАС! а1!оччх ЬуЬгЫтхатюп то Ъе регуотшед ас тешрегатигеа тЬас аирргеь попарестКс адхогртюп от" йе ргоЪе то ао!Ы аиррогта ЬшсЬ аа пу1оп шешЬгапеа). 5есопд, ЬуЬт)д!лат)оп зо!чепта сопта!п)п8 ТМАС1 до пот Ьаче а18птйсапт адчапта8ек очег тЬоае сопташш8 ход)иш юпа ипК1 йе !еп8тЬ оГ тЬе о1!Вопис!еотЫе ехсееда 16 пис1еотЫея СЬЕЫМЕКЬ А 8иеаатпег ь а 1ои8 хунт!теде о1т8опис!еотЫе !иаиа11у 30-75 тшс1еотЫех ш !етт8т)т), тч1тоае аес!иепсе соггеаропда Со ап апипо асЫ аес)иепсе оу 15 — 25 геядиея Весаиае от тЬе де8епегасу оГ тЬе ВепеКс соде, шапу тЬоиаапдх от" роаа)Ые пис!еотЫе хет!иепсех сои1д соде 1ог аисЬ а якеаЫе !таст от' атпшо асЫя Уп1еах йе дея8пег ь !псгед)Ыу !ис)су апд сЬооаеа йе соггест содоп ш ечегу яп8!е роядоп, тЬе Виеахшег тч111 пот 1опп а реттест ЬуЬгЫ тчттЬ йе таг8ет депе.
Нотчечег, Ьесаиае шохт апппо ас!да аге арес)Ктед Ьу содопа тЬат д!Кег оп1у !п тЬе !рдтт! роятюп, ат !еахт ьчо оу тЬе тЬгее пис!еот!дех оу еасЬ сот!оп аге Исе1у со Ье регтест1у тпатсЬет1. 1п адд)т)оп, йе пшпЬег оу шыпатсЬеа !п тЬе й!гд роытюп сап Ье пип!пигед Ьу ае!есбп8 содопа тЬат аге иаед ргетегепт)а1!у Ьу а рагдси!аг ог8агды, ог8апе1!е, от се1! туре. 1п тЬ)а тчау, и 1а роаяЫе то ша)те Виеьяпета оу хитВс!епт 1еп8тЬ ао тЬат тЬе детгипепта! еКесь оуш)япатсЬеа аге оитчче18Ьед Ьу йе хтаЪ)Вту от" ехсепяче !таста от" регтест1у птатсЬет1 Ьааея 1иггодисг(оп 10.7 ТЬеге аге по ги1еа |Ьа| йиагапсее ае1есг!оп оу йе соггес| содоп а| а роя((оп оГ агпЬ|йш|у; пе((Ьег Ы 31 рокяЫе |о ргед(сг Ьоъч тапу со| гес| сйо(сел тиаг Ье таде |о асЬ|ече аиссеяс Оп йе Ьаяа оу гпайегпа|ка1 са!си!аг)опт (Ьа(Ье 1985), а ргоЬе ънои1д Ъе ехрес|ед |о Ьаче а| 1еааг 7698 Ыепшу иг(1Ь 1Ье аи|Ьеп|к йепе ечеп 3Т а11 содоп сЬо(сел |неге гпаде оп а гапдогп Ъаяя 1Е я|Ъ- амшюпа аге сЬоаеп оп |Ье ага|(зг)са1 Ьаял оГ 1|поъчп содоп иаайе ш йе арес)ел оу !плегелг, йе ехрес|ед Ьопю1ойу !псгеааеа |о 829|8 Й г(аеа а(!11 (игйег (|о 8698) 3Т гейдопа!ас)дпй 1еис!пе, аг83- тпе, апд аеПпе аге сЬозеп (еасЬ оу (Ьеае |Ьгее апипо ас!да ы арес!глед Ъу ях содопз).
С1еаг!у, аа йе дейгее оу Ьопю!ойу |псгеавея |Ье йиекяпег Ьесоплел а тоге арес(Ьс ргоЬе Тог |Ье Вепе оу ш|егея апд (оста ЬуЪг!да йас аге агаЫе ип|1ег а ънЫег гапйе оу ЬуЬг(д(хаг)оп сопд)г(опя! Е |Ье аел)иепсеа оГ зе1есгед йепея яксея)811у ьо!а|ед Ьу ргоЪ|пй ън!(Ь йие|ьтегя аге сотрагед ъч!(Ь йе|г соггеаропд!пй йие|ыпег лес)иепсея йе (геарес|Ые) Ьопю!ой(еа гапйе |тот а!о|ч оу 719 н |о а ЬлйЬ оу 97%. ()п1е|ь йе сЬо|се оу содопа ь ехсгете1у ипуог|ипа|е, йиеяяпега сап Ъе деяйпед |чЬо|е Ьопю1ойу ъч!(Ь |Ье|г |агйе| йепез 1(еа пеаг |Ье иррег епд оу й!а гапйе.
Ноънечег, ш адд)- |юп |о очеса(! Ьоп|о1ойу, йе ргеаепсе оу а регуесг!у та|сЬ!пй аел)иепсе оу сопл(йиоиа пис1ео1(дел ъч!й!и йе йие|ыпег гпау а1|ю Ье ипрогсап| !ог аиссеяс А!тозг а1! Вие|ьтега йа| Ьаче Ъееп сьед аиссеалуи1!у соп|аш гей)опа йа| ехас|1у тассЬ лес)иепсеа ш |Ье(г |агйе| йепея А)йоийЬ 3( ь по| роаяЫе со йиагапгее |Ьас а длекяпег ън(11 сопла!и ап ехас|!у гпа|сЬ~пй аел)иепсе, |Ье сЬапсез )псгеаае дгатаг(са11у аз |Ье дейгее оу очега!1 Ьогпо!ойу Паея ОЕЫС)ъ(1)ъ(С А СЕ) Е55МЕР ° Ейгп!пасе содоп сйо(ссыЬа| йепега|е йе лес)иепсе СрС Ье(ънееп содопя ТЬВ д(пис!еойде 'ь а(йп(йсапду ипдеггерге|еп|ед )п гпапипайап ОНА (В)гд | 980), апд СПС оссига а| йе )ипс|юп Ье(ънееп содопа а| айои| опе Ьай о( |Ье ехрес|ед (гес)иепсу ((а(Ье | 985).
° СЬолье йе содоп |Ьа| гпоаг согппюп(у соде| (ог а рагйси)аг агп(по аод (п йе арес)ех ипдег |гиду. Согпргейепхюе Паь о( ге(аиче содоп (гес(иепс(еа )п йепеа Ьаче Ьееп риЫьйед Ьу Хада е| а(. (| 992) ог п|ау Ье (оипд а| ъънъън.(|а|ига.ог)р!содоп (р)еазе аее Арреп|йх 7). ° РегпегпЬег йа| |рес)йс Репе (агой)еа осс|ь)опайу дьр1ау а гпаг1|ед Ь(|ь (ог ог айа! плг сег|а)п содопя Еог ехап|р)е, Ьыопе йепеа |Ьоън а гпаг1|ед рге(егепсе (ог содопл еппсйед )п А апд Т геядиея ънйеге|ь рго|еиь ехрге|ьед аЬипдапду !и уев( аге Ь(ааед |о|наг|3 а лес о( Ь|8Ыу рге(еггед содопа (Веппе|леп апд Най | 982) апд, (ог ехап|р1е, Ьагд)у енег иле йе содопа ОСС апд ОАО (ог ление апд 'ьо(еиапе (Ойдеп е| а).
|984). ° О!йегепг п|агпп|айап й|ьиез дйр(ау д)йегепг рапегпз о( содоп и|айе (е.й., р)е|ье аее Неънйагд е| а1. | 986). 1| |ноиИ |Ьеге1оге Ье ъноПЬънЫ!е Со де|еггп)пе |Ье со|3оп ихайе )п апу йепеа |Ьа| Ьаче а)геаду Ьееп с)опе|1 ап|3 аге )июънп |о Ье ехрге|ьед (п |Ье загпе |еьие аъ йе депе о( )плесе|1. ° А| роя!Попа ънйеге |Ье сйо!се ь Ьепнееп С апд Т апд йлеге 'ь по в1гопй содоп рге(егепсе, сйосье Т. ТЬВ ги3е 'ь хйй |огпеънйа| соп|гочегяа(. ТЬеге 'ь 8 юд еч(депсе )п|йсайпй йа| |С|гО )лазе ра(га аге гпоге злаЫе |Ьап гАгС Ьаае ра)га (ОЫепЬес(с е| а(. | 97| ). Ноъчечег |Ье ех(епяоп |о дСдТ Ьаае ра!гз (Х|л | 972) Ьль Ьееп Ьой сйайепйед (5гп)дл 1983) апд ирЬе(д (Мап)п е| а1. | 985).
° Ехапйпе |Ье аейиепсе о( дле ргоровед пис(ео|к|е (ог гей(опа о( (п|егг|а) согпр)егпеп|ап|у |Па| гп(ВЫ ге|Елее ЬуЬгЫ)гайоп е(йс(епсу. ХЬегечег роля!Ые, ачоЫ асс(иепсеа йа| сои!д Топп ЯаЫе дир(ехел ипдег йе сопд)Попа лье|1 (ог ЬуЬпд(гайоп. ° Епя|ге йа| |Ье 5 '-|еггп)па( роя|юп о( йе оййопис(еойде ь по| оссир)ед Ьу а су|ояпе ге|Мое. Еог геа|юп| длаг аге ип1|поънп, |Ье ей)с!епсу о( гад)о!аЬейпй о( оййопис)ео|Ые| дерепда оп |Ье лсх)иепсе о( |Ье оййопис(еойде (нап Нои|еп е| а(. |998). Оййопис(еог)дел ълй а су|ояпе геядие а| йей 5' геггп)п) аге )айе)ед (оиг(о)д (еах еТйс!епг(у йап оййопис(ео|Ые| Ьей(пп!пй ън)(Ь А ог Т, апд я!х(о)д )е|ь ей(с)епйу |Ьап оййопис(еойдеа Ьей(пп(пй чд|Ь С. 1| ь еоп|е|ипеа роаяЫе со луп(Ьеяхе а япа!! роо1 соп|ашшй |ъчо |о е)8Ь( 8иезяпега |Ьа| )пс1идеа а11 роаяЫе со|1оп сЬокеа ас сег|аш апппо асЫ роя((опя ТЬ)а Ыпд оу !пп||ед аиЬлг(ги|юп Ы то|1 ихеуи! ъчЬеп ап а|пшо асЫ, ъчЬозе содоп Ы Ь(8Ыу дейепега|е, аерагагеа пно |гася !0.8 СБарсег 10| М~ог)г!п8 лч|й Бупйе6г О!!8опиг)еосЫе Ргобек сопла!и!п8 оп1у а Ее|ч росеп6а1 т!япассЬек.
1п |Ьь лчау, В |пау Ье рокк!Ые со 8епегасе а сопл!ииоик ке<)иепсе лч!сЬ!и |Ье 8иеккп|ег йас Ь а регЕесс тассЬ Еог йе саг8ес 8епе. Нолчечег, лчЬеп цяп8 а пихсиге оЕ 8иекяпегк ак ргоЬек, сЬе ксгеп8й оЕ |Ье ЬуЬг!6!гас!оп ы8па! Вепегасед Ьу йе "соггесс" ргоЪе ь цаца!1у гедисед. Рог 8иеяп|егк !аЬе1ед Ьу рЬокрЬогу1а6оп ог Ъу 611ш8 оЕ гесеяе|1 епл!к, ап е!8Ь|Ео16 гебисс!оп !п я8па1 ксгеп8|Ь сурка!1у вацек пос со|пргогпЬе йе Ыеп66сабоп оЕ с!опек оЕ шсегекс.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
