Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 89
Текст из файла (страница 89)
Ьосстсе оЕ йе сттйЧА С1еат1у, |Ье Ь|дЬег йе сопсеп1гаНоп оЕ йе яес)иепсея оЕ !псегеяс ш сЬе ясагНпд шКХА, СЬе еаяег |Ье саяЕ оЕ ьо1аНпд ге1ечапс СОХА с!опея. 1с ь сЬегеЕоге ччогсЬ|чЫ1е шчеяопд яотпе еЕЕогс со епяиге йас |Ье псЬеяс яоигсе оЕ шКХА ачадаЫе ь Ьешд |ьей ТЬтя сап Ье асЫечей Еог еха|пр1е, Ъу ргераппд тпКХА Еготп йСТегепс се!1 1шея ог с!яяиея Еог |ье ш се!1-Егее 1гапя1а1юп яуяепь. 1пипипоргес|рйаНоп ь йеп ияет! |о шеаяиге йе ашоипс оЕ ргосеш оЕ шсегеяс яупсЬея(гег! Еог еасЬ яес оЕ |пКХАя.!п ат!йс(оп, яогпе !пчеяс!дасогя Ьаче Еоипг! итауя со !псгеаяе йе сопсепсгасюп оЕ |Ье ге1ечапс шКХА Ьу ияпд с!гида со яе1есс се!1 1шея сЬас очегехргеяя рагдси!аг ргосе!пя. Рог ехашр!е, Ъия)сеу е1 а1.
(1983) т!еяспЪе |Ье пяе оЕ йе г!гид сотпрасНп со г!ече!ор а 1|пе оЕ СЬ|пеяе Ьа|пясег очагу се!15 сЬас Ьаче ип|1егдопе а ! 5-Ео!0 шсгеаяе !п |Ье пшпЪег оЕ депе сор!ея апт! а пшсЬ дгеасет |псгеаяе ш йе агпоипс оЕ шКХА сойпд Еог 3-Ьуг!Тоху-3-шесЬу!д!и!агу! соепгутпе А гет!иссаяе (НМС СоА гет!иссаяе). Ойегя Ьаче са)сеп ат!чаи!аде оЕ сЬе оЬяегчасюп 1Ьас сгеас|пепс оЕ шЕессег! се!!я ълсЬ ~пЫЪ|1огя оЕ ргосе!и яупсЬеяя саияея ехсепт!ет! сгапяспрсюп оЕ 1Ье еаг!у депея оЕ шапппа1|ап ОХА ч!гияея (е.д., р1еаяе яее Реггьоп ес а1. 1981). 1п сЬеяе апт! а пишЬег оЕ яш11аг саяея, !псгеаяег! аЪипг!апсе оЕ ярес|6с с1аяяея оЕ гаге шКХАя дгеас!у Еас|1|- Сате|1 СЬеп. яиЪяет!иепт с1ошпд.
111еаПу, еяНтпасея яЬои11! Ье оЪ|ашес1 оЕ сЬе Егет!иепсу ипсЬ тчЫСЬ йе тпКХА оЕ !псегеяс оссигя ш сЬе ясагНпд ргерагайоп. ТЬЫ Егес)иепсу пос оп!у г!есегпипея сЬе я(ге оЕ сЬе СОХА 1!Ьгагу пеег!ег), Ъис тпау а15о !НЕ!иепсе сЬе шесЬог! ияес! со ясгееп К. ТЬе Етгяс СОХА с!опея со Ье ьо1асес1 |чете с(епчет! !готп аЪипт!апс шКХА5 я|сЬ ая йояе епсойпд 81оЬ|п, пппшпод1оЪи11пя, апт! оча!Ьшпш. !п |Ьеяе саяея, 1Ье КХА ярес|ея оЕ шсегеяс сопясйисея ая тписЬ ая 50 — 90огЪ оЕ |Ье Епсгодиса'оп $ Ь7 соса1 ро!у(А)+ КХА схо!асес1 йош арессйс сурез оЕ сИЕегеп6асес1 сейя Сопаес)цепс!у, по ЕцгсЬег рцпйсасюп оЕ сЬе рагйсц1аг шКМА ь гес)ц(гед ЬеЕоге доцЫе-хсгапдед сРМА $а аупйеа!хед апд с!опед. ТЬе деягед сРМА с1опеа сап еая!у Ъе Ыеп6йед Ъу пцс1е!с асЫ ЬуЬг!д!хас!оп.
ТЬе ргоЪеа сопя(хс е!йег оЕ 'ср-1аЪе1ед япВ!е-хсгапдед сРХА хупсЬеяхес$ ш лсго Егош шКХА ргерагас!опа псЬ ш йе аес)цепсеа оЕ шсегея ог оЕ гпКХА йас Ьаа Ьееп раг6айу Егаишепсед Ъу 1цпйес1 айсайпе Ьудго1уа!а апд епс1-!аЪе1ед Ъу рЬоарЬогу1ас!оп. Аз а Вопд арргохппа6оп, йе шКМА аес)цепсеа оЕ !псегеас ич11 Ъе гергеаепсед ш ЬосЬ сЬе ргоЬе апс1 сЬе с!опес1 доцЫе-асгапдед сРХАх ш ргорогпоп со сЬе!г аЬцпдапсе ш сЬе ог)В!па! ргерагасюп оЕ спКХА. 1п сааеа ацсЬ ах В1оЫп, иппшпоВ1оЪц1шя апд оча!Ъшпш, сЬе сЬапсеа аге Ь!аЬ сЬас апу со!опу ЬуЪг!д(х(пВ асгопд1у со йе ргоЬе ъчй1 сопса!и йе деа(гед РМА аес)цепсея А1сЬоцВЬ сьед ехсепяче!у ш йе еаг1у дауа оЕ сРХА с!оп!пи, сЬ!з шесЬод по 1опиег Еспда счЫе арр1касюп, япсе Еечг ауасеша гегпаш ш счЫсЬ !псегевс)пВ цпс!опед шКМАа гергеаепс а ялрйссепс1у ЫВЬ ргорогсюп оЕ сЬе а!асс(пВ рорц1асюп.
КХАа йас гергеаепс <0,59а оЕ сЬе соса1 гпКХА рорц1абоп оЕ сЬе сей аге с1аха!Есед аа "!осчаЬцпдапсе" ог "гаге" шКХАя ТЬе 1ао!ас!оп оЕ сРХА с1опеа Еог шКМАа оЕ сЬ(х суре ргеаепса ссчо гпа)ог ргоЫешя (!) сопасгцсс(оп оЕ а сРХА 1сЪгагу чгЬоае а!хе !а ацЕЕсс(епс со епацге сЬас сЬе с1опе оЕ !псегеас Ьаа а Вопд сЬапсе оЕ Ъе!пВ гергеаепсед апд (2) Ыеп6йса6оп апд Ьо1а6оп оЕ сЬе с!опе(а) оЕ спсегея. !$$1еег!1у оЕ 1!се пчйЧА 5!псе йе сРХА 1сЪгагу саппос Ье Ъессег йап йе гпКХА Егогп и ЬкЬ !с ь депчед, П ь ипрогсапс со сЬес(с йе !псеиг!су оЕ йе ргерагасюп оЕ гпКМА ЬеЕоге П !а сьед аз сЬе сешр1асе Еог аупсЬеяа оЕ сЬе Есгас асгапд оЕ сРХА. ТЬе Еойоъчпй сеаса аге сопипоп1у цаед: ° ТЬе аЬг$1гу оЕгЬе тИХА го гЕЕгесг гЬе зупгЬези о~ЬЕИЬ-то)есиЬсг-сче(ИЬЕ ргосетз т се!1-Егее папа)айоп хузсети дет(чей Егот ге6си!осугея Вц!)с гпКХА рцпйес1 Егош гпапипа1сап сейа айоц!д епсоде а 1агйе пцтпЪег оЕ ро1урерс(деа мчсЬ гпо1еси!аг сче(ВЬь сапа!пВ й.ош <10,000 со ) 100,000.
° ТЬе аЬЕ$1су оЕ ЕЬе тИХА го гИгесг сЬе хупсЬехЬ оЕ ЕЬе ро!урерйде оЕ тгегеаг т а се!!-Тгее хузсет дег$чед Егот гейсн!осугея Ап а1щцос оЕ сЬе сгапа1ас!оп ргос1цсь оЕ сЬе Ьцйс гпКХА 1а апа1ухед Ьу ипшцпоргес(рйа6оп апд 5Р5-ро!уасгу1аш!де Ве1 е1ессгорЬогеяя Айег ашогад!оогарЬу, йе гагйоасссче Ъапд сап Ъе ехсьед Егош йе Ве1 апд соцпсед ш а ас(п6Пас(оп соцпсег.
ТЬе ргорогсюп оЕ йе соса! гасйоас6чйу сопсашед сп сЬе Ъапд (а ап еасппасе оЕ йе ге1айче сопсепсгабоп оЕ сЬе гпКХА оЕ !псегеас. ° ТЬе х(ге оЕ гЬе тИХА. 1Еа ацЕйссеш срлапйу оЕшКХА !а ачайаЫе, йе шКХА аЬоц!д Ье Егас6опасед Ьу Ве1 е1ессгорЬогеяа апд аса!пед ичсЬ есЫд!цш ЬгоспЫе (р1еаае аее СЬарсег 7, Ргососо1 о). ТЬе гпКХА аЬоц1д арреаг аа а япеаг Ьессчееп -500 Ъааеа апд 8 $сЬ. ТЬе Ьц!)с оЕ сЬе гпКХА аЬоц1д Пе Ъессчееп $.5 1сЬ апс1 2 1сЬ.
ТгапаЕег оЕ йе шКХА со а гдсгосейц!озе ог пу1оп шегпЪгапе Еойожед Ьу ЬуЪгЫ(ха6оп сч!сЬ сопсго1 сРХА ргоЬеа !а ап асЫсйопа1 сЬес1с оп сЬе !шейгиу оЕ сЬе гпКХА ргерагайоп. ° ТЬе аЬЕИсу оЕ ЕЬе ЬиИс тИХА ргерагаг$оп со сйгесг ЕЬе хупсЬеяз оЕ Еощ то)еси$еи оЕфгхсхсгассд сРХА. сРХА аупсЬеа!гед Егош шапипа1сап гпКХА аЬоц1д гцп оп ап айсайпе айагоае Ве1 аа а сопс!пицца япеаг Егогп -500 Ъааеа со )5 $сЪ. ТЬе Ьц!)с оЕ сЬе гасйоас6чйу зЬоц1д Пе Ьессчееп $5 1сЬ апд 2 1сЬ, апс1 по арес!Есс Ьапда оЕ сРХА аЬоц!д Ье ч!а(Ъ|е цп1еы сЬе шКХА счаа ргерагес1 Егогп сейа сЬас ехргея !агйе с)цапс(с)ез оЕ арес(Есс гпКМАя !п адд!с!оп, сЬе ашоцпс оЕ гагйоасспйсу шсогрогасед шсо сЬе Есгвс асгапд оЕ сРХА айоц1д Ье а6шц!асед ас 1еаас 20-Ео1д Ъу о1сйо(с1Т)„ь рппсегя ЕЕйссепс сРХА аупсЬеа(в ш сЬе аЬаепсе оЕ аддед 11.8 С)тттртег 11| Ргерагапоп о1 сР)чА Г,!Гтгагтет алд Сепе Гдептфсат!оп ргппег !а а я8п |Ьат йе тпКХА ртерагадоп тпау Ъе соптапипатед чч!|Ь Гга8шепта оЕ Р)ч)А ог КХА йа| сап Ъ|пд то тпКЬ!А ат гапдош а!теа апд ьегче аь ргппегя!Г песеааагу, тЬеье Ега8- шепта сап Ъе теточед Ъу депа|ипп8 йе шКХА [100"С Еог 30 аесопда ш Н 0), сооИп8 т!и!сК[у ш ке ччатег, апд ипшесИате1у те!ест!п8 ро!у[А)+ К!ч)А Ьу сЬготпато8гарЬу оп о68о[дТ)-сеПи!оае.
Ме1[|ос[ь оЕ Епг!с[|тпеп1 А сурка1 |папппаИап сеП сои!а!пь Ъет|чееп !0,000 апд 30,000 д!ЕГегепт сгапаспЬед те9иеисет (Рач!двоп !976; 'чтте!аЬ ет а1. 1990). Но|чечег, |Ье пшпЪег оГ шКХА трескает рег сеП шау Ъе ппкЬ 8геатег Ьесаиае оГ д!ЕГетепт!а! ьр1к!п8. Хот аИ оГ тЬеае тгапьспЬед вес)иепсеь ате гергеаептед ес)иаПу ш йе атеаду-ьтасе роро!адоп оГ шКХА шо!еси!ея!патеад, |Ье ргорогт|опа! гергеаепсатюп оЕ еасЬ вес)иепсе дерепда оп Пь тате оЕ ауп|Ьеяя Ьа1Е-Не, ап|1 растегп оЕарИс!п8: лепет |Ьат аге аст!че1у тгапьспЬед |пто яаЫе шКХАа гпа1се а 8геасег соп|НЬи6оп то йе роо! оЕ шКХА шо!еси1еь йап 8епез |Ьат аге тгапвспЬед а!и88!ьЫу шсо 1еаа ьтаЫе шКЬ)Ая 5отпе уеага а8о, ХПИаша [!981) де|егпппед йе пшпЪег оГ с1опеа песеааагу |о сопьтгист а со|пр1ете сРХА ПЬгагу Гготп а Ьшпап 6ЬгоЫавт сеП йат соптапы -12,000 д|ТЕегепт тгапьсНЬед кеср|епсея Кате шКХАа [(14 сор!еь1сеИ) соприте -3098 оЕ |Ье п|КХА, ап|1 -11,000 |НЕегепт тпК)ч!Аа Ъе1оп8 то тЬ)а с!аая ТЬе пипппшп пшпЪег оГ сРХА с1опеа гет!и)гед то оЬ|а[п а сотпр1есе гергеаептат!оп оГ тпКХАа оГ тЬ!ь с1ааа !а йегеГоге 11,000)ОЗО ог 37,000.
ОЕ соигае, Ьесаиае оЕ аатпр1ш8 чапатюп апд!ог ртеГегепда1 с!ошп8 оЕ сегташ тес)иепсея а пшсЬ 1аг8ег пшпЬег оЕ гесо|пЬ|папга тпиат Ъе оЬ|а!пед то шсгеаае |Ье сЬапсе |Ьат апу 8)чеп с!опе ччП! Ье гергеаептед ш йе ИЪгагу. ТЬе пшпЬег оГ с!опеа тес!и!гед то асЫече а 8!чеп ргоЬаЬППу |Ьат а !очч-аЬипдапсе шК)ч)А |чП! Ъе ргеаепт ш а сРХА ИЬгагу !я я и — Р|~ 1п[1 — [1Гп!) ччЬеге Х )а |Ье пшпЪег оГ с!опеа тес!и!гед, Р |а |Ье ргоЬаЫП|у деяге|1 [иаиаПу 0.99), апд !Ги !а |Ье Егасдоп оЕ йе тота1 гпКХА |Ьат !а гергеаептед Ьу а яп8!е туре оЕ гаге шКЫА.
ТЬегеГоге, то асЬ|ече а 9998 ргоЪаЬ|1|ту оЕ оЬ|а!п)п8 а сРЫА с!опе оГ ап шК)ч!А ргеьепт !п Ьшпап 6ЬгоЫаьп ат а Ггет!иепсу оГ -14 тпо!еси1еь1сеП: Р = 0.99 1! и = 1/37,000 М = 170,000 РпГогтипасе1у, тпапу шК)ч!Аа оЕ пнегея аге ргеаепт ат ечеп 1очтет \ече[а [1 п|о1еси1е!сеП |а по| ипиаиа1 [Тоо!е ес а1. 1984; аоод ет а1. 1984! ). Риг|Ьегшоге, К !а ойеп песеааагу то с1опе сРХАа 6.о|п рори1адопа оЕ шКХАа [ао1атед Егош т!ааиеа йа| сопяьт оЕ зечега! сеП сурея 1п аисЬ сааея |Ье Ггет!иепсу ат ччЫсЬ |Ье ьет!иепсеа оГ !птегея аге гергеаептед ш |Ье ш|па1 ргерагапоп оГ шК)ч)А шау Ье тедисед ьт61 Гиг|Ьег, апд К |Ьеп Ьесошеа песеааагу то сопягист апд ьсгееп ИЬгапез |Ьас соп|аш ьечега! пиПюп ш|1ереп|1епт сР!ч!А с!опек 5!псе 1985, йе ейк|епсу ъчКЬ |чЬкЬ сР!чА сап Ъе ауптЬеяаед апд с1опед Ьаа !псгеааед яеас61у то |Ье ропп ччЬеге сРХА ИЬгапеь оГ |Ьта яае сап Ъе 8епегате|1 гошше1у Еготп 1 — 5 р8 ог!еаа оГ ро1у(А)" п|КХА. Гп рппс|р1е, йеге 1а по а ргюп' геааоп |чЬу ечеп йе тпоат |Н6си!т сР)ч)А с!опек — тЬоае соггеаропсИп8 то а чету гаге шК!ч)А оГ 1аг8е яае — саппот Ъе !депт|Т|ед ш |шсЬ сотпргеЬепяче ИЬгапея Но|чечег, асгеешп8 1аг8е пишЪегь оГ сР)ч[А с1опеа |а Ьой тед!оиа апс1 ехрепяче.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
