Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 88
Текст из файла (страница 88)
1972; Чепиа е! а!. 1972). Нотчечег, йе 5(ге оЕ гЬе ша)оп!у оЕ !Ье сРМА ггапасг1рга гчаа сопяг(егаЫу япаПег йап гЬаг оЕ йе сешр!аге гпКМАЬ апд гесЬпщпез Еог аупгЬеяа оЕ аесопйаггапй сРМА тчеге по! уес г)ече!орей Айег йе шегЬогЬ оЕ с!ошпВ ЕгаВ- шеи!а оЕ РМА гп р1аяпЫ чесгогк Ьад Ьееп еагаЫ(йег1 Ьу СоЬеп ап6 Воуег (СоЬеп ес а!. 1973), а пшиЪег оЕ уговора 1пс$ерепс(епг!у аггешрсег( го еагаЫВКЬ шегЬос(5 Еог сРМА с!пиша, апг) гЬе!г геап)га ыеге героггес1 гч!ЕЫп а б-гпопгЬ арап Ьегъчееп 1асе 1975 ап6 шЫ 1976 (Копаеоп ег а1.
1975; Маша!го е! а!. 1976; КаЬЬИга 1976; Копцеоп апг! МасЬ 1976). АП оЕ гЬе еаг1у сРМА с!ошпВ шегЬогЬ паем чаПа6опь оЕ йе ро1у(дА) — ро1у(ПТ) гаП!пВ шегЬод грече!орег! Ъу 1оЬЪап апг! Ка(аег (1973) апг( ешр!оуед Ьу ойег !пчеаг)аагога го шаег! 5Ч40 РМА (!ас)саоп ег а!. 1972) ог Эгогор(6(а Вепош1с РМА (ЪЧепа!п)с е! а!. !974) !псо р!аяпЫ 11.4 С)таргет 11: Ргерага6ои оЕсР)ь(А Ет(тгагтея анд бене Иент|Ясагтоп чес|огя. Коицеоп ес а!. (1975) ияед о1(цо(дТ) то рптпе яуп|Ьеыя оЕ |Ье Кгы ыгапд оЕ сРХА, а|Ыед а ятппц оЕ дТ геяЫиея |о йе 3' епд оЕ йе сРХА ълй |епшпа1 |гапяЕегаяе, апд |Ьеп яуптЬея(хед йе яесопд сР)ь)А я|ганс! ъчКЬ Еяс)тегтс)иа соц Р!ъ(А ро!ушегаяе ! иыпц о1(цо(дА) ая а рпп|ег. ТЬе |1ир1ех сР)ь(А ъчая йеп та|!ед чдй о!(цо(дб) апд )о|не|1 |о а р!аынЫ |Ьа| Ьа|1 Ъееп |а(1ед ъл|Ь о1)цо(дС). Ая йе аийогя ро|пте|1 ои|, йь арргоасЬ цепега|ед оп1у раг6а1 сРХА ньегь, йе сгапяЕогшат(оп Егес)пенсу ъчая чету !оъч, апд оп1у оне оЕ |Ье Кче с1опея оЪ|а!пед сопта|пед а яЬогс сРХА (пяегс (Коицеоп е| а1.
1975). АЫюицЬ тЬ(я ъчог1| |1етпопя|гатед |Ье ЕеаыЪ|1Ку оЕ с!опшц Егацп|епь оЕ сРХА, К дЫ по| ргочЫе а цепега11у ияеуи1 тпе|Ьод Еог сгеа6пц сР)ь)А 1|Ъгапея. А поче1 арргоасЬ дече1оред а| аЬош |Ье яаше |нне ни о1чед |Ье а|Ы|6оп оЕ Ьонюро1у|небс |1Т |а|1я |о йе епдя оЕ а р!аятпЫ чес|от апд йе тье оЕ |Ьеяе та|!я со ргппе |Ье Кгят сР!ъ(А я|гапд яупйеыя Егош шК!ъ(А (КаЬЪ|ть !976). ТЬе геян16пц ню!еси!ея, ъчЬ|сЬ сопта|пед опе сР)ь)А а| еасЬ тегпнпия, ъчеге аца(п |геа|ед ъч!|Ь тепшпа! сгапяЕегаяе со цепегате дТ |аця апд |Ьеп аппеа1е|1 |о а р1аыпЫ сопта|пшц дА |а!!я.
ТЬе геяи16пц доиЪ!е р1аынЫ соп|а|п(пц нчо ыпц1ея|гапдед сР)ъ)Ая |чая |Ьеп ияед |о тгапяЕогш Ьас|епа.!п |Ыя саяе, йе яесопд сРХА я|гап|1 |чая яуптЬея!хед |и Ьас|епа. А)|ЬоицЬ сР)ь)А гесошЪ|папь ъчеге оЬта!пед Ьу |Ьь арргоасЬ, пе|йег йе ыхе оЕ йе сР!ъ)А пот |Ье ЕЫе16у оЕ яун|Ьеыя апд ргораца6оп оЕ йе сРХА |чая еча1иатед (КаЪЬ!|ь !976). ТЬе ше|Ьод оЕ сРХА с1опшц гноят ъчЫе!у гьед Еготп 1976 |о 1985 ъчая |1еыцпед ярес(цса!- )у |о яуптЬея(хе ап|1 с1опе Еи11-1енцй доиЫе-ятгапдед сР)ъ)Ая (Мап|ать е| а1. 1976).
ТЬе Кгят я|ер ш еятаЫ!яЬ)пц |Ь!я арргоасЬ |чая |о орт!ш!хе синд(6опя Еог йе яуп|Ьеыя оЕ Еи!1-1епцй ыпц1еыгапде|1 сР)ь(А (ЕЕятга6ад(я ет а!. 1975, 1976). ТЬ|я адчапсе сои!д пот Ьаче Ъееп ас!Кече|1 ъчнЬои| |Ье дече1оршепт оЕ ЫцЬ-геяо!и6оп депа|иппц ро!уасгу!апн|1е це! е!ес|горЬогеыя ап|1 |Ье ача!1- аЪ|11|у оЕ ъчеП-сЬагастепге|1 яупйебс ыпц!е-я|ган|1ед Р!ъ)А я!ге шаг1|егя (Маша|и е| а1. 1975). Опсе й!я яуыеш Ьесап|е ача(1аЫе, |Ье еЕКс(енсу оЕ Ен11-1епцй сРХА яуп|Ьеыя сои!д Ъе нюппоге|1 ассигате1у ипдег а чапе|у оЕ синд(6опя.
Кошше яун|Ьеыя оЕ Ен!1-1епцй сР)ь(А сор|ея оЕ шКХА ъчая КшсИу ас)6|ечед Ьу ышр!е ад)иятшептя |о йе тетпрега|иге ап|1 рН оЕ йе геас|юп апд Ьу ия|пц ЫКЬ сопсеп|га6опя оЕ |1еохунис!еоы|1е |прЬоярЬа|ея (д!ъ)ТРя) (ЕЕятгат!ад(я е| а1. !975). ТЬе я|гатецу та)сеп |о яуптЬея|хе |Ье яесопд сР!ъ)А я|гапд ъчая Ъаяед ш рагс оп еаг1!ег оЪяегча6опя йат |Ье геас6оп рго|Ьтс|я оЕ сРХА яуп|Ьеыя сон|а(п доиЫе-ятгапдед гец(опя (Ьеь апд Нигъч(тх 1972).
А ыцшдсапт рог6оп оЕ |Ьтя доиЫе-ятгапдед Р)ъ)А гарЫ!у геца(не|1 гея(ятапсе |о ыпц!е-я|гапд-ярес|цс пис1еаяея айег депа|ига|юп, !пд(сатшц йе ргеяепсе оЕ (птгая|гапд Ьаяера|ге|1 гец(опя. 1.еь апд Нигъч!тт (1972) яреси1а|е|1 йа| |Ьтя |1ир1ех РХА ъчая рго|1исед Ьу йе цепега6оп оЕ а Ьа|гр(п аттис|иге а| |Ье 3' тегпнпия оЕ |Ье Кы сРХА ятгапд |Ьат сои!д яегче ая а ргнпег Еог яесоп|1-я|гапд яуп|Ьеыя Ьу гечегяе |гапяспрсаяе.
ТЬе)г Ьуро|Ьеыя оЕ яе!Е-рптпе|1 яунйеыя ъчая сопЕ|гшед Ьу яЬочдпц |Ьат |Ье ргодись яунтЬея(хед диппц йе яесопд-я|гатк1 геас6оп сопя!ятед 1агце1у оЕ ыпц!е-я|гандед сР)ъ(Ая |тасе йе 1епцй оЕ йе ог!ц!па! |ешр1а|е шК!ъ)А (ЕЕятгат(ад!я ет а!. 1976). А 1|еу а|1чапсе ъчая |Ье Етпд(пц йат йе Ьа)грш 1оор )о|шпц |Ье Кгя| ап|1 яесонд сР|ъ|А ятгапдя сои!|1 Ье ярес!цтса!!у д!цеятед ъч!|Ь пис1саяе 51 (ЕЕятгат!ад(я е| а!. 1976). ТЬе доиЫе-1епцй сРХА сои1д |Ьия Ъе сопчегсед то дир1ех сРХА.
Рета|!ед сЬагассег(хат!оп оЕ |Ье дир!ех сР!ъ)А чдй геыгк6оп епгушея |1егпопя|га|ед сопчшсшц1у йат Еи11-!епц|Ь доиЫеятгапдед Р!ъ)А сор(ея оЕ шК)ь(А соиЫ Ье ргодисед ш лтго (ЕЕятгат!ад!я е| а!. 1976). С1оп|пц оЕ |Ье й|р1ех сР)ь(А ъчая яооп ассошр1ьЬед иыпц |Ье ро1у(|1А) — ро1у(дТ) та(!шц тпетЬод (Маша|и е| а1.
1976). ТЬе и616у оЕ й|я арргоасЬ то сР)ь)А с1оп!пц ъчая сопцгшед яЬогду тЬегеаЕтег Ъу Н!цисЬ! е| а1. (1976). А| йе 6тне, |Ьеге ъчая сопсегн аЪоит йе Кде! Ку оЕ |п яд|го сРХА яуп|Ьея|я апд тЬе ЕаКЬЕи1 ргораца6оп оЕ с1опед сРХАя !п Е. со)т'. АЬпоя| по|Ьшц |чая 1|поъчп аЬои| йе Кде!ну оЕ !п чнго яуп|Ьеыя оЕ йе Кгя| сРХА ыгапд Ъу гечегяе тгапяспртаяе, пот оЕ йе яесопд сРХА я|гапд Ьу Е. со)т' Р)ъ!А ро1ушегаяе 1.
ъчЬетЬег сР)ь(А яеср|епсея сои!д Ъе Еа)йци1!у гер!ка|ед !п Ьас|епа яеетпед |о Ье а ро|епба11у ыцп!Ксан| ргоЫетп сопыдеппц |Ьас а!1 оЕ |Ье еаг1у сРХА с!оп|пц 1пттот)исттоп 11.5 шетЬосЬ 1пчо1че6 тгапатогша6оп чбтЬ сопатгиста тЬат гет)ц)гед Вар 61!ш8 апд тЬе 8епегат)оп от с!оаес1 с)гси1аг РМА 1п чтчо. ОЬчюца1у, а)шопот апу 1ече1 оу Ьаае ацЬа6ти6оп дипп8 ауптЬеы апт1 ргора8а6оп от" с1ир!ех сРХА лнои!6 Ьаче течете!у Ьашреге6 йе цае оу тЬ)а с1опш8 шетЬот1. 1т чнаа тЬеге!оге я8п)Всапс тЬат йе РХА ает)цепсе от тЬе Вгат Ел!1-!еп8тЬ 81оЬ)п сР!ч!А с1опе лчаа 16епт)са! то йе ает)иепсе рге61стед тгогп тЬе апппо ас16 ьет)цепсе от" тЬе рготеш апд тЬе ает)цепсе от К!ч)аде Т! о118опис1еот16еа оу тЬе шКЬ!А (Етатгат)аб)з ет а!.
!977). ВиЬаес)цепт Р!ч!А аетрлепсе апа1уаеа оуЬипдгесЬ оу сРХА с!опек япсе тЬас типе Ьаче гечеа1ет) тЬат ш)ага)сеа 1п ьуптЬеяь апт1 ргора8ат)оп от" сРХАа аге ехсеейп81у гаге. ТЬе ргоЫеш оу Влбе!)ту оГ сРХА с!опек Ьаь аг)аеп а8а)п гесепт1у аа а сопает)иепсе оГ тЬе 1птгобист)оп от" ро1утпегаье сЬаш геас6оп (РСК)-Ьааед тпетЬоба то с1опе сР)ч)Аа тготп пппите атпоиптк оу тпКЬ!А (е.8., р1еаье аее Епп)а ет а1. 1990).
ТЬеге )а по ЙоиЬт йат сРХА с!опек Вепегатет1 Ъу атапдаг6 РСК атпр1тВсабоп оу доиЫе-ьтгап6е6 сРХА сопса)п а Ь18Ьег питпЬег от' шцтат)опт йап тЬоае Вепегатес1 Ъу тпоге тга616опа) тесЬп)с)иея Еппта ет а1. ( ! 990) еа6шате йат ап ачега8е от' ! пис1еот)6е ш -!500 )а шигалева ш сРХАа тЬат Ьане Ъееп с1опе6 Ьу РСК ашр!1Влсабоп. лчЬеп еггог та!ел аге тЬ)а ЬтВЬ, К ъчоц16 Ье уоо11аЬ то ге1у оп тЬе пис!еот16е ьет)иепсе оу апу яп81е с1опе. То оЪташ а лчог)саЫе сопьепьца ьет)цепсе оу тЬе саг8ет сРМА, К 1а цаца!!у песеааагу со ает)иепсе Ъетлчееп йгее апс1 ях шс$ерепбепт сРХА с!опея Веиег а!сегпат)чек аге ( 1) то тезисе тЬе пшпЬег оу еггога 6ипп8 РСК Ъу ияп8 а сос)с!а!1 оу тЬегшоьтаЫе ро1утпегавеа (р1еаае аее йе аестюп оп тЬетшоатаЫе Р!ч)А ро1утпегааеь тп тЬе шсгос1цс6оп то СЬартег 8) ог !2) то иае тЬе РСК-8епегате6 сРМАь аа ргоЪеа то асгееп а аерагате сР)ч)А!1Ъгагу сопьтгисте6 чбтЬош тЬе а)6 оу акр!16тсат)оп.
Ночтечет, тЫа орьоп )а пот а!лчауь ача11аЫе чнЬеп тЬе т)иап66еа оГ шКХА аге 1)ш)тш8. ЬТКАТЕС!ЕЬ РОК с0МА СЕОММС Аа а сопает)иепсе от а чн)6е гап8е от тесЬп)са1 апт) тЬеоге6са1 абчапсея сР!н)А с1оп)п8 та полн чне11 чбйш йе гап8е оу апу сошретепт 1аЪогатогу. СошргеЬепяче сРХА!1Ъгапеа сап Ье гоц6пе1у еяаЫ)вЬет1 угош япа11 т)цап66ез от" шКМА, ап6 а чат)ету от ге!таЫе шетЬосЬ аге ачал!аЫе то 16епНу сРЬ!А с1опез соггеароп6)п8 то ехтгетпе!у гаге прес)еа от шК)ч)А.
Аа тЬе епхуша6с геас6опа иье6 то аупйеыхе сРХА Ьаче ппргочет1, йе яхеа оу с!опес1 сРМАа Ьаче шсгеааес1, апт1 К та почч роаыЫе то 1ао!ате тц11-1еп8тЬ сР!ч)Ав соггеароп61п8 то а!1 Ьцт тЬе 1аг8еьт тпКХАя Ве1оге ешЪаг)с)п8 оп тЬе ауптЬеа)а ап6 с1ошп8 оу сР!ч)А, К та еааепт)а) со сопки!ег сагеуц!1у чтЬ~сЬ аоигсе тпасепа1, тпетЬодя чессотя апт! ксгееп)п8 ргосебигеа отлет тЬе Ьеьт сЬапсе от ацссеая ТЬе Кетп от" Гогешовт сопсегп 1а тЬе тпетЬо6 тЬат лч111 Ье цае6 то асгееп йе 11Ьгагу.
ТЬе ргосеаа оГ зсгееп)п8 )а 6)ссате6 сЬ)ейу Ьу йе штогшатюп апт! геа8епта тЬас аге ача11аЫе — Еог ехаплр1е, чнЬетЬег йе лет!цепсе от" тЬе рготетп та )споънп ог сап Ье оЬташед, лчЬетЬег ац)таЫе ап6Ъот)1ев аге ачат!аЫе, ог ччЬетЬег а гоЬцат апт! аепмт)че Ь)о1о81са! аааау ех)ага то белеет тЬе тат Вет рготеш ехргеааед угош а с!опт сРХА. ТЬе сЬо)се от честит, тЬе клера )пчо1че6 )п !тЬгагу сопьтгист)оп, апс1 тЬе шетЬо6 Ьу лчЬ)сЬ тЬе сРХА шо1еси1еа аге шаегтес1 )пто тЬе честог аге а!1 гас!ига йат ч6!1 Ье Ьеачт1у 1пйиепсес1 Ьу тЬе шетЬос1 тЬат ч611 Ье иае6 то асгееп тЬе 11Ьгагу.
ТаЫе !1-! ргеьепта а Вц)т!е со йе орт)опт тЬат аге !гет)иепт!у цае6 то сопатгцст апт1 ьсгееп сРХА 1тЬгапея РКЕРАКАТ1ОМ ОГ лллК)ЧА РОК с0МА СЕОММС Р)асиааед Ье1олч аге аечега1 сопяйега6опь то Ье та)сеп што ассоипт тот тЬе ргерага6оп от' Ь18Ь- т!иа1пу шКХА Гог цае ш сРХА с!оп)п8 апд ье1естюп. 11.6 СЬартег !1: Ргерагайол оЕсОХА 1лЬгаг!ея апг) Селе Иептт)тсат(оп ТАВЕЕ 11-1 51гатед!ея Еог СОХА 61оп!пд !меокмхт|ом Амо!Ок КЕАОЕМТ5 АчАИАВ|Е АВОстт тне ТАкоет РВОте1м КЕСОММЕМОЕО МЕТНОО ОЕ Е|ВВАкч СОН5ткост|ом КЕСОММЕМОЕО МЕТНОО ОЕ 5СКЕЕМ!МС КЕСОММЕМОЕО С|ЕСТОКа Хис!е!с асЫ ае9иепсе оЕ а СОХА епсойпд а Ъопю!одопа рго|еш апу атапт(аг|С р!аяпЫ, РЪадепий ог Ъас|егюрЪаде Л чессог биЫег-Нойиап ргосет(иге (биЫег апт( Но((шап 1983; биЫег 1988) ЪуЪпйгадоп со ауп|Ъедс о!!8опис!еос!т(еа ог 1о яедшепт о( РХА ЪуЪпйга|юп |о а ауп|Ъедс диеяяпег ог МОРАС ргоЪе Рго|еш яе9иепсе о( а| !еаяс 13 сопддиоия апппо асЫ геа!т(иея апу агапа(агт( р!аяпЫ, РЪадешЫ, ог Ъас|епорЪаде Л чессог биЫег-Нойпап ргосе|(иге (биЫег апс( Нойпап 1983; биЫег 1988) Ргосе!и ае9иепсе о( <13 соп1|диоия апипо асЫ геаЫиея апу агап|)аг8 р!аяпЫ, РЪадеп|Ы, ог Ъас|епорЪаде Л чес|ог ЪуЪпйгадоп со яупсЪедс о!!Вопис!ео1!т(еа биЫег-Нойпап ргосег(иге (биЫег ап|С Нойпап 1983; биЫег 1988) Апт!Ъот(у |о |агде| рго|еш йгес|юпа! с!оп!пд иыпд |Ъе рг!апет-1ш)гег тпоййсадоп о( |Ъе биЫег-Нойпап ргосет(иге (СиЫег апт) Ной|пап 1983; биЫег 1988) апу Ъас|епорЪаде Л ехргеяюп чес1ог ог р1аяпЫ ехргеаяоп чессог апс!Ъот(у-апс!Веп гесодпиюп апт( сошр1ейпд Аяау Еог ехргеаяоп о( |агдес ргосе(п йгесдопа) с!ошпд ияпд 1Ъе ргппег-!!п1сег пюйдса|юп о( |Ъе биЫег-Нойпап ргосет(иге (биЫег апг( Нойпап 1983; биЫег! 9888 ог р!аяпЫ рппипд о( дага|-астап|( сс)ХА ехргеыюп чапо| та!!иге|С |о Йе рагдси1аг аяау; е.д., аяауя Еог Ыо!од(са! асдчду о( рго|е1па аупсЪея!гет( а(сег сгапа(есс!оп о( сРХА с!опеа шсо шапипа1|ап се1!а гег!шге йа| йе 1|Ъгагу Ъе сопятгиссет) ш ап арргорпа1е шапипа1|ап ехргеяюп чес1ог апа1уяЬ о( роо!я о( с1опеа Ъу Ыо!од!са! аяау 'Рог а 1ш о! чее|ога, р|еаае аее Арреайх 3.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
